DNA重组技术的基本工具[下学期]
文档属性
| 名称 | DNA重组技术的基本工具[下学期] |  | |
| 格式 | rar | ||
| 文件大小 | 277.5KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（新课程标准） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2006-04-03 13:05:00 | ||
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文档简介
课件13张PPT。DNA重组技术的基本工具工欲善其事,
必先利其器.想一想:获得转基因抗虫棉需要做哪些工作呢?
实现这一精确的操作过程的工具是什么呢? DNA重组技术的基本工具1.手术刀(基因的剪刀)------准确切割DNA2.缝合针(基因的针线)-----将DNA片段再连接起来3.运输工具(基因的运载体)------将体外重组好的 DNA导入受体细胞分子手术刀------限制性核酸内切酶(限制酶)A.来源:主要从原核生物中分离纯化想一想:
这类酶在原核生物中起什么作用?
为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？
B.作用:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开.C.识别序列的组成:大多数由六个核苷酸组成D.切割后产生的DNA片段末端的形式黏性末端平末端DNA连接酶-------“分子缝合针”分类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶差别: E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接; T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低.想一想:DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?答：不是一回事。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？
（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。
（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。
此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。
巩固练习总结规律限制酶所识别的序列有什么特点？
无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。
限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：
(1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC…
?? …G??????????? …TG??????? CG…（4） …G????? (5)????G…? (6) …GC
????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG
(7) GT…???????(8)AATTC…
???? CA…????????????? G…
你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？
基因进入受体细胞的载体------“分子运输车”A.为什么称为“分子运输车”?B.分类质粒λ噬菌体的衍生物动植物病毒1.一种裸露的,结构简单独立于细菌染色体
之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA
分子.2.有一至多个限制酶切割位点3.有特殊的遗传标记基因C.想一想:天然的DNA分子可以直接用作基因工程载体吗?4.必须是安全的,大小要合适2、下列说法正确的是：（ ）
A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列
B、质粒是基因工程中唯一的运载体
C、重组技术所用的工具酶是限制酶、
连接酶、运载体
D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因
进行大量复制的过程可称为“克隆”
审题3、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的
是（ ）
A、①② B、①③ C、①④ D、②③T C G
A G C T T A AA G
G T T C C AA G C T T C
A G A A T T C
G③①②④4、下列哪一种酶是基因工程的工具酶（ ）
A、DNA连接酶 B、DNA酶
C、RNA酶 D、运载体记住了1.原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。
2.迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵.
必先利其器.想一想:获得转基因抗虫棉需要做哪些工作呢?
实现这一精确的操作过程的工具是什么呢? DNA重组技术的基本工具1.手术刀(基因的剪刀)------准确切割DNA2.缝合针(基因的针线)-----将DNA片段再连接起来3.运输工具(基因的运载体)------将体外重组好的 DNA导入受体细胞分子手术刀------限制性核酸内切酶(限制酶)A.来源:主要从原核生物中分离纯化想一想:
这类酶在原核生物中起什么作用?
为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？
B.作用:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开.C.识别序列的组成:大多数由六个核苷酸组成D.切割后产生的DNA片段末端的形式黏性末端平末端DNA连接酶-------“分子缝合针”分类E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶差别: E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接; T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低.想一想:DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?答：不是一回事。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键（在相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟基之间形成），那么，二者的差别主要表现在什么地方呢？
（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。
（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。
此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。
巩固练习总结规律限制酶所识别的序列有什么特点？
无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。
限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：
(1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC…
?? …G??????????? …TG??????? CG…（4） …G????? (5)????G…? (6) …GC
????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG
(7) GT…???????(8)AATTC…
???? CA…????????????? G…
你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？
基因进入受体细胞的载体------“分子运输车”A.为什么称为“分子运输车”?B.分类质粒λ噬菌体的衍生物动植物病毒1.一种裸露的,结构简单独立于细菌染色体
之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA
分子.2.有一至多个限制酶切割位点3.有特殊的遗传标记基因C.想一想:天然的DNA分子可以直接用作基因工程载体吗?4.必须是安全的,大小要合适2、下列说法正确的是：（ ）
A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列
B、质粒是基因工程中唯一的运载体
C、重组技术所用的工具酶是限制酶、
连接酶、运载体
D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因
进行大量复制的过程可称为“克隆”
审题3、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的
是（ ）
A、①② B、①③ C、①④ D、②③T C G
A G C T T A AA G
G T T C C AA G C T T C
A G A A T T C
G③①②④4、下列哪一种酶是基因工程的工具酶（ ）
A、DNA连接酶 B、DNA酶
C、RNA酶 D、运载体记住了1.原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。
2.迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为微生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，对于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵.