DNA 重组技术的基本工具(广东省潮州市湘桥区)
文档属性
| 名称 | DNA 重组技术的基本工具(广东省潮州市湘桥区) |  | |
| 格式 | rar | ||
| 文件大小 | 579.1KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（新课程标准） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2008-03-03 09:32:00 | ||
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文档简介
课件27张PPT。专题１基因工程该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。（一）基因工程的概念基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平定向地改造生物的遗传性状，产生人类需要的基因产物剪切→ 拼接→ 导入→ 表达基因重组(二）基础理论和技术的发展催生了基因工程转基因抗虫棉抗虫棉普通棉基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接
导入棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列；并在特定切点切割．一. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1．１ DNA重组技术的基本工具 1、来源：2、种类：3、作用：主要是微生物4000种。4、结果：要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端。 被同一种限制酶切断的几个来源不同的DNA是否具有相同的黏性末端？二个不同的ＤＮＡ的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。被同一种限制切断的几个DNA具有相同的黏性末端。二. DNA连接酶——“分子缝合针”１、作用：把两条ＤＮＡ末端之间的缝隙“缝合”起来２、种类：DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。课后练习2和7能连接形成…ACGT…
????????????? …TGCA…；
4和8能连接形成…GAATTC…
???????????? …CTTAAG…；
3和6能连接形成…GCGC…
???????????? …CGCG…；
1和5能连接形成…CTGCAG…
???????????? …GACGTC…。三、基因进入受体细胞的运载——”分子运输车” １、作用：将外源基因导入受体细胞２、特点（条件）1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存2、具有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接3、具有标记基因，便于进行筛选３、常用的运载体：质粒（最常用）、λ噬菌体和动植物病毒等在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ）
Ａ．同种限制酶 B. 两种限制酶
Ｃ．同种连接酶 D. 两种连接酶练习Ａ注意：要用同一种限制酶切取目的基因和运载体，并用DNA连接酶连接。不属于质粒被选为基因运载体的理由是
A、能复制 （ ）
B、有多个限制酶切点
C、具有标记基因
D、它是环状DNAD练习双基练习：一、基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外____和____等技术,赋予生物以心得遗传特性,创造出符合人们的需要的新的____和____.又叫做DNA的重组技术 .
二、DNA重组技术的基本工具
1.限制性核酸内切酶-----”分子手术刀”
(1)主要来源:从____生物中分离出来的.
(2)特点:能够识别DNA特定的核苷酸序列,切开 两个____之间的_____ .
(3) DNA末端:限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式:______和_______.
2. DNA连接酶----”分子缝合针”
(1)作用:将双链DNA____,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的______.
(2)种类:
①E.coli DNA连接酶:只能缝合DNA的_____
②T4 DNA连接酶:既可缝合DNA的_____,又可缝合双链DNA的_______. 3.基因进入受体细胞的载体----”分子运输车”
(1)载体的种类
①质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并能够自我_____能力的双链______ DNA 分子;②______的衍生物;③________.
(2)载体的特点
①能够在细胞内_______;②有一个或多个____切割位点,便于供源DNA的插入. ③具有_____基因,供重组DNA的鉴定和选择.－ＣＣＣＧＧＧ－切割位点Ｇ和Ａ之间Ｃ和Ｇ之间未端类型平末端粘性末端－ＣＴＴＡＡＧ－－ＧＧＧＣＣＣ－－ＧＡＡＴＴＣ－假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？
作为载体没有切割位点将怎样？
目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？
如果载体对受体细胞有害将怎样？如果不能分离会怎样？
思考：对受体细胞无害，易分离．
导入棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列；并在特定切点切割．一. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1．１ DNA重组技术的基本工具 1、来源：2、种类：3、作用：主要是微生物4000种。4、结果：要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端。 被同一种限制酶切断的几个来源不同的DNA是否具有相同的黏性末端？二个不同的ＤＮＡ的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。被同一种限制切断的几个DNA具有相同的黏性末端。二. DNA连接酶——“分子缝合针”１、作用：把两条ＤＮＡ末端之间的缝隙“缝合”起来２、种类：DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。课后练习2和7能连接形成…ACGT…
????????????? …TGCA…；
4和8能连接形成…GAATTC…
???????????? …CTTAAG…；
3和6能连接形成…GCGC…
???????????? …CGCG…；
1和5能连接形成…CTGCAG…
???????????? …GACGTC…。三、基因进入受体细胞的运载——”分子运输车” １、作用：将外源基因导入受体细胞２、特点（条件）1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存2、具有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接3、具有标记基因，便于进行筛选３、常用的运载体：质粒（最常用）、λ噬菌体和动植物病毒等在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ）
Ａ．同种限制酶 B. 两种限制酶
Ｃ．同种连接酶 D. 两种连接酶练习Ａ注意：要用同一种限制酶切取目的基因和运载体，并用DNA连接酶连接。不属于质粒被选为基因运载体的理由是
A、能复制 （ ）
B、有多个限制酶切点
C、具有标记基因
D、它是环状DNAD练习双基练习：一、基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外____和____等技术,赋予生物以心得遗传特性,创造出符合人们的需要的新的____和____.又叫做DNA的重组技术 .
二、DNA重组技术的基本工具
1.限制性核酸内切酶-----”分子手术刀”
(1)主要来源:从____生物中分离出来的.
(2)特点:能够识别DNA特定的核苷酸序列,切开 两个____之间的_____ .
(3) DNA末端:限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式:______和_______.
2. DNA连接酶----”分子缝合针”
(1)作用:将双链DNA____,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的______.
(2)种类:
①E.coli DNA连接酶:只能缝合DNA的_____
②T4 DNA连接酶:既可缝合DNA的_____,又可缝合双链DNA的_______. 3.基因进入受体细胞的载体----”分子运输车”
(1)载体的种类
①质粒:是一种裸露的,结构简单,独立于细菌染色体之外,并能够自我_____能力的双链______ DNA 分子;②______的衍生物;③________.
(2)载体的特点
①能够在细胞内_______;②有一个或多个____切割位点,便于供源DNA的插入. ③具有_____基因,供重组DNA的鉴定和选择.－ＣＣＣＧＧＧ－切割位点Ｇ和Ａ之间Ｃ和Ｇ之间未端类型平末端粘性末端－ＣＴＴＡＡＧ－－ＧＧＧＣＣＣ－－ＧＡＡＴＴＣ－假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？
作为载体没有切割位点将怎样？
目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？
如果载体对受体细胞有害将怎样？如果不能分离会怎样？
思考：对受体细胞无害，易分离．