（浙科版）2019-2020学年高中生物选修三第2章《克隆技术》第3节——动物的克隆（教学课件）共70张PPT（共70张PPT）

(共70张PPT)
第5课时　动物的克隆(Ⅰ)
选修3　第二章　克隆技术
XUE XI MU BIAO
学习目标
1.简述动物细胞、组织培养。
2.说出动物组织培养技术的发展历程；描述细胞系及细胞株的含义。
3.简述动物的克隆培养法。
NEI RONG SUO YIN
内容索引
新知导学
一、动物细胞、组织培养与动物组织培养技术的发展
1.动物克隆的技术基础： 。
2.动物细胞的培养
(1)动物细胞培养的原理是 。
(2)培养过程
动物的细胞和组织培养
细胞增殖
接触抑制
机械
胰酶
①选取幼龄动物的组织、器官作为材料的原因：幼龄动物的组织、器官，其细胞的分化程度较低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。
②培养前要将动物组织分散成单个细胞的原因：分散后细胞能与培养液充分接触，更易进行物质交换。
③放入CO2培养箱中保温培养的原因：动物细胞培养过程中通入CO2的目的是调节pH。
特别提醒
(3)培养瓶内细胞生长特点
①贴附在瓶壁上，称为 生长。
②接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞 的现象。
(4)原代培养与传代培养
①原代培养：从 立即进行的细胞、组织培养为原代细胞。
②传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续 。
细胞贴壁
停止分裂增殖
机体取出后
生长、增殖
3.动物组织培养
(1)概念：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或 特性。
(2)结果：由于细胞的运动、变化和培养物的组织成分发生变化，长期的培养结果最终成了简单的 。
(3)在广义的组织培养中还包括器官培养，即 、器官的一部分或_________在体外和人工控制的条件下得以保存、生长，在此过程中保持器官的结构、功能及 能力。
生长
细胞培养
器官的原基
整个器官
分化
例1　下列关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，正确的是
A.动物细胞培养和植物组织培养所用培养基成分不同，但能源物质相同，都是
葡萄糖
B.植物组织培养无需添加抗生素，动物细胞培养过程中必须添加抗生素
C.通过烟草叶片细胞离体培养能产生新个体，可获单倍体烟草植株
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
√
解析　植物组织培养所用培养基中能源物质为蔗糖，A错误；
动、植物组织培养过程中，都需要加入适量的抗生素，B错误；
烟草叶片细胞离体培养获得的是正常植株，花药离体培养得到的才是单倍体植株，C错误；
动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖细胞几乎不含病毒，可通过植物组织培养获得脱毒幼苗，D正确。
例2　如图是动物细胞培养的基本过程示意图，请据图回答：
(1)动物细胞培养的理论基础是
A.细胞分化
B.细胞增殖
C.细胞全能性
D.细胞膜流动性
解析　动物细胞培养的理论基础是细胞增殖。
√
(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是_________，然后用_______酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是______________________。
解析　在进行培养时应尽量使细胞分散，便于与培养液充分接触进行物质交换，使其分散需要用胰蛋白酶处理。
剪碎组织
胰蛋白
使细胞与培养液充分接触
(3)培养首先在B瓶中进行。在此瓶中培养一段时间后，细胞出现接触抑制现象，到这时的培养称为__________。
解析　培养的过程分为原代培养和传代培养两大阶段。
原代培养
(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用__________处理，然后配制成____________，再分装。
解析　用胰蛋白酶处理使细胞从玻璃瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液继续培养。
胰蛋白酶
细胞悬浮液
(5)在C瓶中正常培养细胞的过程称为_________。
解析　在C瓶中的培养属于传代培养。
传代培养
植物组织培养与动物细胞培养的比较
方法技巧
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
理论基础 细胞的全能性 细胞的增殖
培养基 类型 固体或半固体培养基 液体培养基
成分 水、矿质元素、维生素、蔗糖、琼脂、植物激素 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清
取材部位 植物幼嫩部位或花药 动物胚胎或幼龄动物器官和组织
对光的需求 再分化阶段需光 不需光
过程








结果 获得植株新个体或获得大量的细胞和细胞产物 只能获得大量细胞或细胞产物，不能得到生物个体
用途 ①植株快速繁育；②脱毒植物的培育；③制造人工种子；④生产药物、杀虫剂等；⑤转基因植物的培育 ①蛋白质生物制品的生产；②皮肤移植材料的培养；③检测有毒物质；④生理、病理、药理学研究
共性 ①都需无菌条件，培养基中含有有机物和无机物等营养物质；
②都是细胞有丝分裂过程
二、细胞系、细胞株与克隆培养法
1.细胞系和细胞株
(1)细胞系：可 的细胞。原代培养物在首次传代时就成为细胞系，能连续培养下去的细胞系称为 细胞系，不能连续培养下去的细胞系称为____细胞系。二倍体细胞通常为有限细胞系。连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系，大多数具有 。有的连续细胞系是 ，具有异体致瘤性；有的连续细胞系获得了不死性，但保留 现象，不致癌。
(2)细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的______________的细胞称为细胞株。细胞株一般具有恒定的 、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。可以连续多次传代的细胞株称为______细胞株，传代次数有限的细胞株称为有限细胞株。
连续传代
有限
异倍体核型
恶性细胞系
接触抑制
具有特殊性质
染色体组型
连续
连续
2.克隆培养法(或细胞克隆)
(1)概念：把一个 从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的__________的技术。
(2)结果：经过克隆以后的细胞的后裔细胞群，由于来源于一个共同的祖细胞，所以称为 ，也就是克隆。
(3)基本要求：所建成的克隆来源于 。
(4)提高细胞克隆形成率的措施：
①选择适宜的培养基；
②添加 ；
③以 支持生长；
④ 刺激；
⑤使用 培养箱、调节pH等。
单细胞
细胞群体
纯系
单个细胞
血清(胎牛血清最好)
滋养细胞
激素(胰岛素等)
CO2
1.判断细胞株和细胞系的方法
(1)细胞系是可以传代的细胞，分为两种类型：有限细胞系(细胞系的生存期有限)和连续细胞系(大多具有异倍体核型)。
(2)细胞株是通过一定的纯化或选择法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，分为两种类型：连续细胞株和有限细胞株。
(3)细胞系所有细胞都能传代培养，却不一定具有相同的特征，不能称为细胞克隆；而细胞株是具有特殊性质的细胞系，一个细胞株就是一个细胞克隆。
归纳总结
2.克隆的类型
例3　下列有关动物细胞培养的叙述，错误的是
A.细胞克隆需要滋养细胞支持生长
B.长期动物组织培养最终会成为简单的细胞培养
C.细胞系在连续传代过程中遗传性状始终保持均一
D.细胞株是从原代培养物或细胞系中选择出的具有特殊性质的细胞
√
解析　提高动物细胞克隆形成率的措施有：选择适宜的培养基、激素刺激、添加血清及以滋养细胞支持生长等，A正确；
动物组织培养过程中，长期的组织培养最终会成为简单的细胞培养，B正确；
细胞系在连续传代的过程中大多数会发生遗传物质改变，而具有异倍体核型，C错误；
细胞株是从原代培养物或细胞系中经过选择或纯化，获得的具有特殊性质的细胞，D正确。
例4　不属于细胞株特点的是
A.不具有恒定的染色体组型 B.具有同功酶类型
C.具有病毒敏感性 D.具有生化特性
解析　细胞株的特点是具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性。
√
例5　实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如图所示。下列叙述错误的是
A.甲过程需要对实验小鼠进行消毒
B.乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化
C.丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型
D.丁过程得到的细胞可能具有异质性
√
解析　进行细胞培养前需要对提供实验材料的动物进行消毒，A正确；
进行培养的组织需先用胰蛋白酶处理，使其消化分散成单个细胞，B正确；
丙过程属于原代培养，细胞的核型稳定，C错误；
丁过程属于传代培养，期间部分细胞会出现异质性，D正确。
学习小结
单个细胞
人工控制
生长、分裂(繁殖)乃至接触抑制
有规
律的衰老、死亡
生活状态
组织分化
学习小结
原代培养
达标检测
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1
1.判断正误：
(1)在人工控制的培养条件下，动物细胞培养的细胞能无限增殖(　　)
(2)细胞培养中，原代培养是指第一代细胞的培养(　　)
(3)从原代培养物中获得的细胞叫细胞株(　　)
(4)动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶(　　 )
×
×
×
×
6
2.下列有关动物细胞培养的说法中，正确的是
A.通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系，证明了动物体细胞也具有全能性
B.癌细胞培养到一定时期不传代培养也能无限增殖
C.动物细胞培养时必须使用相关的酶才能使细胞分散成单个细胞
D.动物细胞培养时应置于CO2培养箱中，使培养液的pH保持相对稳定
√
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解析　通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系，但没有形成完整个体，因此不能证明动物体细胞具有全能性，A错误；
癌细胞具有无限增殖的能力，只有在适宜的环境和营养条件下才能无限增殖下去，B错误；
动物细胞培养时，经过机械消化或胰酶消化使细胞分散成单个细胞，C错误；
动物细胞培养时应置于CO2培养箱中，使培养液的pH保持相对稳定，D正确。
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解析　在培养基中加入胰岛素可提高动物细胞克隆形成率，A项正确；
细胞克隆即克隆培养法，是将单一细胞从细胞群体中分离出来单独培养形成纯系的技术，从普通细胞系中分离出单个突变细胞即可采用这种方法培养成细胞系，B项正确；
连续细胞系被认为是发生了转化的细胞系，大多具有异倍体核型，C项错误；
连续细胞系增殖能力更强，更易克隆，D项正确。
3.(2018·鄞州中学测试)下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是
A.在培养基中加入胰岛素可提高动物细胞克隆形成率
B.细胞克隆可以从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系
C.连续细胞系可认为是发生了转化的细胞系，大多数具有二倍体核型
D.连续细胞系比有限细胞系更容易克隆
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4.下列关于细胞系和细胞株的说法中，正确的是
A.细胞系有分裂次数的限制，细胞株可连续传代
B.细胞系的遗传物质没有变化，细胞株的遗传物质也没有改变
C.细胞系是原代培养建成的，细胞株是传代培养建成的
D.细胞系是可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系
解析　细胞系是指可连续传代的细胞，分为有限细胞系和连续细胞系，连续细胞系是发生转化的细胞，遗传物质已经发生变化；从细胞系中选择出的具有特殊性质的细胞是细胞株。
√
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6
5.(2019·台州高二检测)根据所学知识回答下列问题：
(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面_________时，细胞会停止分裂增殖，此时，瓶壁上形成的细胞层数是____________。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是__________。
解析　动物细胞培养过程中当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制，此时，瓶壁上形成单层细胞。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用胰蛋白酶处理。
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相互接触
单层(或一层)
胰蛋白酶
(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现_____________的细胞，但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成__________________细胞，这种细胞的粘着性______，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量______。
解析　随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现衰老甚至死亡，但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成无限增殖的细胞，该种细胞的粘着性降低，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量减少。
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衰老甚至死亡
不死性(或无限增殖)
降低
减少
(3)现用某种大分子染料，对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不被染色，原因是_________________________________________________
___________________________________________________________________________________________。
解析　用大分子染料对细胞进行染色时，活细胞不被染色，原因是活细胞的细胞膜具有选择透性，大分子染料不能进入活细胞内。
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活细胞的细胞膜具有选择透性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色(或死细胞的细胞膜丧失了选择透性，大分子染料能够进入死细胞内而着色)
(4)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到____
(A.有丝分裂前期　B.有丝分裂中期　C.有丝分裂后期　D.有丝分裂末期)的细胞用显微镜进行观察。
解析　检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到有丝分裂中期的细胞用显微镜进行观察，因为有丝分裂中期的染色体形态稳定、数目清晰，便于观察。
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B
(5)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了免疫排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作______进行攻击。
解析　给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了免疫排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作抗原进行攻击。
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抗原
6.某医院病理室为确诊患者的肿瘤是良性还是恶性，切取一小块肿瘤组织进行培养。请回答下列问题：
(1)实验中所用的细胞培养液中，除水之外通常需要维生素、无机盐、葡萄糖和______________等。
解析　动物细胞培养所需营养物质有糖类、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，另外还需加入血清、血浆等一些天然成分。
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氨基酸、血清
(2)若开始培养时取一滴培养液观察有100个肿瘤细胞，经24 h培养后，取一滴稀释100倍后再取一滴(设三次“一滴”等量)观察，发现有64个肿瘤细胞，此肿瘤细胞的细胞周期约为__ h。
解析　由2n＝6 400/100＝64，可得n＝6，即24小时分裂6次，一个细胞周期为4 h。
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(3)与正常细胞相比，在显微镜下可见明显增多的细胞器是_________________
___________________。
解析　肿瘤细胞能无限增殖，在分裂时要进行DNA的复制和有关蛋白质的合成，因此线粒体、核糖体等细胞器较多。
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(其他正确答案也可)
线粒体、核糖体
(4)某科研单位研制出一种新型药物X，据说对此类肿瘤有较好的疗效，请你设计一个方案加以验证。写出你所设计的实验步骤：
①__________________________________________________________________。
②____________________________________。
③_________________________________________________。
解析　设计实验要注意控制无关变量，即遵循单一变量原则。
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6
将相同的培养液分为相等的两份，一份(A)加入药物X，另一份(B)不加药物X
将等数量的肿瘤细胞置于两份培养基中
放在相同条件下培养，定期取样观察肿瘤细胞生长情况
(5)设计表格记录实验结果。
答案　实验结果如表所示
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项目 培养液A 培养液B
4 h ? ?
8 h ? ?
12 h ? ?
… ? ?
课时对点练
题组一　动物细胞培养和动物组织培养
1.下列关于动物细胞和组织培养的叙述，错误的是
A.动物细胞和组织培养是动物克隆技术的基础
B.用于培养的细胞最好取自健康动物体内的组织细胞
C.动物细胞培养是将所取的组织先用胰蛋白酶进行处理，使其分散成单个细胞
D.动物细胞、组织通过培养最终在体外能发育成一个新个体
解析　动物细胞的全能性随分化程度的提高而受到限制，分化潜能变弱。动物细胞和组织在体外不能发育为成熟的动物个体。
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对点训练
2.下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是
A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞
B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变
C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的
D.恶性细胞系的细胞可进行传代培养
解析　动物细胞在培养过程中有接触抑制现象，细胞在培养瓶中会贴壁生长，形成一层细胞，相互接触后停止生长，A错误；
克隆培养法培养过程中，仅有极少数细胞的基因型会发生改变，B错误；
二倍体细胞的传代培养一般传至10代后就不易传下去了，C错误；
恶性细胞系的细胞具有不死性，可以进行传代培养，D正确。
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3.(2019·舟山高二检测)某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行培养，下列叙述正确的是
A.制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理
B.肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸
C.为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素
D.甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象
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解析　制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胰蛋白酶处理，使组织细胞分散开，A项错误；
肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2维持培养液pH，不是刺激细胞呼吸，B项错误；
抗生素可以杀死细菌，而干扰素对病毒起作用，因此，为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素，C项错误；
甲(肝肿瘤细胞)失去接触抑制，而乙(正常肝细胞)具有接触抑制现象，因此甲、乙细胞在持续的原代培养过程中，乙会出现停止增殖的现象，D项正确。
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题组二　原代培养与传代培养、细胞系和细胞株
4.动物体内的细胞不易受到外界细菌、病毒等微生物的感染，原代培养的细胞
A.对微生物有一定的防御能力
B.细胞培养的环境中可以有一定量的微生物
C.对微生物已失去了防御能力
D.刚离体的细胞必须生活在无菌条件下，以后的培养对无菌条件要求不严格
解析　动物体具有一定免疫力，是因为动物体具有非特异性免疫系统和特异性免疫系统，对各种病原微生物有一定的防御能力，而离体的动物细胞失去了对各种微生物的防御能力，因此，动物细胞培养的环境中不能存在微生物，否则，动物细胞就会死亡。
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5.动物细胞培养中，出现遗传物质改变的细胞是
A.连续细胞系 B.细胞株
C.原代细胞 D.传代细胞
解析　连续细胞系被认为是发生转化了的细胞系，大多数具有异倍体核型。
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6.下列有关克隆技术的叙述正确的是
A.动物细胞培养时，保留接触抑制的连续细胞系获得不死性，但不致癌
B.由于植物细胞具有全能性，水稻等在多次传代培养后，细胞全能性的表达能
力不变
C.从个体中分离出单个组织进行培养是细胞克隆最基本要求
D.原生质体的获取需在较低渗透压的环境下进行
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解析　动物细胞培养时，保留接触抑制的连续细胞系获得不死性，但不致癌，A正确；
植物细胞具有全能性，水稻等在多次传代培养后，细胞全能性的表达能力越来越小，B错误；
从个体中将细胞分散成单个，制成细胞悬浮液，是动物细胞克隆最基本要求，C错误；
原生质体的获取需在0.5～0.6 mol/L较高渗透压的甘露醇溶液中进行，D错误。
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题组三　动物细胞培养与植物组织培养的比较
7.动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于
A.培养基不同
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
解析　动物细胞培养与植物组织培养所用的培养基不同，动物细胞一般用液体培养基培养，而植物细胞一般用固体培养基培养；与植物组织培养的培养基相比，动物细胞培养的培养基中还要添加动物血清等；它们都是在无菌条件下培养的。
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8.(2018·温州高二检测)下表是有关动物细胞培养与植物组织培养的比较，错误的是
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选项 比较项目 动物细胞培养 植物组织培养
A 原理 动物细胞核的全能性 植物细胞的全能性
B 培养基 液体培养基 固体培养基
C 主要过程 原代培养，传代培养 脱分化，再分化，形成植株
D 主要应用 获得大量细胞或细胞产物 植物快速繁殖、获得脱毒苗等
解析　植物组织培养的原理是植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理是细胞增殖，A项错误；
动物细胞培养使用液体培养基，制成细胞悬浮液，植物组织培养一般使用固体培养基，B项正确；
动物细胞培养的主要过程是原代培养和传代培养，植物组织培养的主要过程是脱分化，再分化，形成植株，C项正确；
动物细胞培养的主要应用是获得大量细胞或细胞产物，植物组织培养的主要应用是植物快速繁殖、获得脱毒苗、制备人工种子等，D项正确。
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9.(2018·义乌高二检测)下列关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是
A.动物细胞培养中用于培养的细胞多取自动物胚胎或幼龄动物
B.动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶
C.烟草叶片离体培养能产生新个体，动物细胞可离体培养增殖
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒
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解析　动物细胞培养中一般选择幼嫩的细胞，如胚胎细胞或幼龄动物的细胞，A项正确。
动物细胞培养需利用胰蛋白酶将动物组织分散成单个细胞再进行培养，植物组织培养中不需要将细胞分离为单个细胞，B项错误。
叶片细胞高度分化，但仍具有全能性，可以通过植物组织培养形成新个体；动物细胞可离体培养增殖，C项正确。
有毒物质会影响动物细胞正常的生命活动，故可根据动物细胞在培养过程中生命活动的变化情况检测有毒物质；植物茎尖细胞分裂较快，细胞中几乎无病毒，故可用茎尖通过植物组织培养形成脱毒苗，D项正确。
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10.动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。如图是血清对正常细胞和癌细胞培养的影响实验结果。从该图提供的信息获得的结论，不正确的是
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综合强化
A.正常细胞与癌细胞的增殖速率相同
B.有无血清对正常细胞培养的影响不同
C.培养基中补充血清有助于正常细胞的培养
D.培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大
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解析　动物细胞培养时通常要在培养基中加入血清等物质。从图示中可看出，癌细胞与正常细胞的增殖速率不同；有血清时正常细胞增殖快，而有无血清对癌细胞的培养影响不大。
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11.(2018·乐清高二检测)请回答下列有关动物细胞培养的问题：
(1)在动物细胞培养中，通常在合成培养基中加入一定量的抗生素，其目的是______________。
解析　通常在动物细胞培养基中加入一定量的抗生素，以防止培养过程中的杂菌污染。
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防止杂菌污染
(2)在使用合成培养基时，通常需加入血清等一些天然成分，作用是________________________。
解析　在动物细胞体外培养过程中，在使用合成培养基时通常需加入血清等天然成分，补充培养基中缺乏的物质。
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补充培养基中缺乏的物质
(3)在细胞培养过程中，通常在_____________________条件下保存细胞。
解析　通常在冷冻(或超低温、液氮)条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中酶的活性降低，细胞代谢速率降低。
冷冻(或超低温、液氮)
(4)若在营养全面的动物细胞培养液中不慎混入了一种细菌，结果所培养的细胞全部死亡。从科学严谨性的角度考虑，能不能直接认为这些细胞的死亡就是该种细菌导致的？________，理由是____________________________________
_________________________。
解析　从科学严谨性的角度考虑，这些细胞的死亡可能是该种细菌导致的，也可能是环境中其他因素或操作错误或取材不当导致的。
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不能
也可能是环境中其他因素或操作错误或
取材不当导致了细胞的死亡
12.动物器官的体外培养技术对于研究器官的生理、病理过程及其机制意义重大。如图是一个新生小鼠的肝脏小块培养装置示意图。请回答下列问题：
解析　将肝脏切成小薄片，有利于肝脏细胞透过滤纸从培养液中吸收营养物质。同时有利于与外界进行气体交换和自身代谢废物的排出。
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(1)将肝脏切成小薄片，这有利于肝脏细胞_______________________________。
吸收氧气和营养物质、排出代谢废物
(2)气室中充入5% CO2气体的主要作用是_____________________。
解析　组织培养时5% CO2有维持培养液pH的功能。
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维持培养液适宜的pH
(3)如果经细胞培养形成的皮肤组织移植给患者，培养的细胞来源最好是___________________，以避免移植后发生排斥现象。
解析　皮肤克隆就是皮肤细胞进行有丝分裂增殖，其遗传物质没有改变，培养的细胞来源最好是患者本人的健康皮肤，以防移植后发生排斥现象。
患者本人的健康皮肤
13.下图为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线(图中B、E两点表示经筛选后继续培养)，请据图回答下列问题：
解析　动物细胞10代以内的培养都可以称为原代培养，培养过程中由于存在接触抑制，会出现增殖停止现象，此时需要用胰蛋白酶处理使细胞分散开来，进行传代培养。
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(1)OB段的培养称为_______培养，AB段可能发生了_________现象，需要用_______酶处理使组织细胞分散开来，分装到多个卡氏瓶中进行______培养。
原代
接触抑制
胰蛋白
传代
(2)上述动物细胞培养过程中有很多重要的现象，下列叙述正确的是________。
A.E点以后的细胞大多数具有二倍体核型
B.培养过程中某些细胞癌变后能在合适条件下逆转为正常细胞
C.由B点后筛选出多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆
D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状
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√
解析　E点以后的细胞可以无限增殖，大多数具有异倍体核型，A错误；
癌细胞在适宜的条件下可以逆转为正常细胞，B正确；
由B点后筛选出1个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆，C错误；
未经克隆化的细胞系具有异质性，D错误。
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(3)动物细胞培养一般放在__________培养箱中，提高培养成功率还可在培养基中添加一些物质或细胞，加入滋养细胞的目的是_________。
解析　动物细胞培养一般放在CO2恒温培养箱中，为提高培养成功率，培养基中还需加入滋养细胞以支持生长。
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CO2恒温
支持生长