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第一节 基因工程的原理
【教学目标】
知识与能力方面:
简述基因工程所需三种基本工具的作用。
简述基因工程的原理及基本操作程序。
过程与方法方面:
尝试运用基因工程原理,提出一解决实际问题的方案。
情感态度、价值观方面:
关注基因工程的发展。
【教学重点】
基因工程所需三种基本工具的作用。
基因工程操作程序。
【教学难点】
基因工程操作程序。
【教学方法】
学生分组讨论展示与教师总结归纳相结合,将知识化整为零逐一解决。
【教学课时】
1课时
【教学过程】
(导入新课)师:观看课件所列两种普通玫瑰与“蓝色妖姬”的图片,思考培育“蓝色妖姬” 的方法?
生:可以通过基因工程。
师:“蓝色妖姬”最早来自荷兰 ( http: / / baike. / view / 6323.htm" \t "_blank )是一种加工花卉。它是用一种对人体无害的染色剂和助染剂调合成着色剂,等白玫瑰 ( http: / / baike. / view / 817931.htm" \t "_blank )(或白月季)快到花期时,开始用染料浇灌花卉,让花像吸水一样,将色剂吸入进行染色。 据花卉 ( http: / / baike. / view / 8660.htm" \t "_blank )专家介绍,目前世界上极少有自然生长的蓝色玫瑰花,现在市场上出售的“蓝色妖姬”都是人工染色后的产物。比较正规的“蓝色妖姬”是在花卉的成长期开始染色,颜色能均匀地附着在花瓣上,看上去比较自然;部分商贩直接将普通的白玫瑰花采摘后染成蓝色,颜色不自然,也容易掉色。2008年11月1日闭幕的东京国际花卉博览会上,全球首批真正的蓝玫瑰首次在公众面前亮相。这种蓝玫瑰是转基因玫瑰,被植入三色紫罗兰所含一种能刺激蓝色素产生的基因,花瓣因而自然呈现蓝色。
(提出问题)1.基因工程得以实现的条件是什么?
2.限制性内切酶有何特点?
3.DNA连接酶有何功能?
(学生活动)仔细阅读探究活动“走进基因工程”,分组讨论展示所得答案。
(总结归纳)1.限制性内切酶——“基因手术刀”
①来源:有大肠杆菌等微生物体内提取而来;
②特点:识别特定的脱氧核苷酸序列,并在特异的位点上切割磷酸二酯键从而把双链DNA分子切开;限制酶识别的序列大多数为回文对称结构,切割位点在 DNA 两条链相对称的位置,如下图
该种限制性内切酶特异性识别GAATTC并在GA之间进行切割,切割后产生的参差不齐的末端称为粘性末端。
3.DNA连接酶——“基因缝纫针”
连接被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,使被同一种限制性内切酶切割的粘性末端重新连接成DNA双链。
(提出问题)基因工程的操作程序如何?
(学生活动)仔细阅读课本,小组协作绘制基因工程的流程图。
(总结归纳)1.基因工程的概述
①概念:按照人们的意愿,将一种生物的基因在体外剪切,并与特殊的运载工具进行重新组合,然后转入另一种生物的体内进行扩增,并使之表达产生所需蛋白质的技术。
②意义:能够打破生物种属的界限,在分子水平上定向改造生物的遗传特性。
2.基因工程的一般程序
目的基因的获得→重组载体的构建→重组载体的转化和筛选→目的基因的表达和鉴定
3.获取目的基因的方法
①目的基因:基因操作的外源基因
②获取方法:直接分离法和人工合成法
直接从基因组中获取最常用的方法是“鸟枪法”,即用限制酶将完整的DNA随机切成许多片段,然后用某种检测方法挑选出所需要的基因。如用“核酸探针法”,核酸探针是用放射性同位素标记的DNA单链,具有非常特异的脱氧核苷酸序列,能与DNA互补链结合。
人工合成法主要有两种反转录法和化学合成法。反转录法流程为:mRNA→单链DNA→双链DNA(目的基因);化学合成法流程为:氨基酸序列→基因序列→合成目的基因。
4. 构建重组载体的运载工具——载体
①条件:能在受体细胞中复制;具适宜的限制酶切割位点,供外源DNA片段插入;具有标记基因,便于选择含有载体的细胞;对受体细胞无害。
②类型:质粒、噬菌体或其它一些病毒,最常用的是质粒。
5. 重组载体的构建
用限制性内切酶对质粒切割,从而产生一个切口,用同一种限制性内切酶切割目的基因,以产生相同的粘性末端,再通过DNA连接酶连接,就可以形成重组载体。
6. 重组载体的转化和筛选
①转化方法:基因枪法、显微注射法和花粉管通道法。
受体是动物细胞时最常用的是显微注射法,是植物细胞时常用基因枪法。
②筛选:利用载体上的标记基因,借助选择培养基进行筛选。
7.目的基因的表达和鉴定
①基因工程成功的标志:目的基因表达,进而产生相应的性状。
②鉴定:检测转化的生物有没有显示出目的基因控制的性状,如鉴定转基因抗虫棉是否成功,可以直接让害虫吞噬转基因棉花的叶片,如果害虫死亡则操作成功,否则操作失败。
8.探究活动:尝试DNA的提取与鉴定
①实验原理:DAN不溶于酒精溶液,但细胞中的许多其他物质可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以提取出含杂质较少的DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
②实验程序:
材料准备(新鲜菠菜和体积分数为95%的酒精溶液,冷冻处理)→研磨(冰上操作)→过滤→离心→加冷酒精→鉴定(沸水浴)
【板书设计】
限制性内切酶:来源、特点
所需工具
基 DNA连接酶
因 概念:定向改造 直接分离法——鸟枪法
工 目的基因的获得
程 人工合成法——人工合成法、反转录法
的 重组载体的构建——载体(条件、类型)
原 操作程序 基因枪法
理 重组载体的转化和筛选——转化方法 显微注射法
花粉管通道法
目的基因的表达和鉴定——鉴定方法
【随堂练习】
1.有关基因工程的叙述正确的是 ( )
A.限制酶只在获得目的基因时才用
B.重组质粒的形成是在细胞内完成的
C.质粒都可作为载体
D.蛋白质的结构组成为合成目的基因提供资料
2.基因工程是在DNA分子水平上进行设计,在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的是 ( )
A.人工合成目的基因 B.目的基因与运载体结合
C.将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测表达
3.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是 ( )
A.限制酶和DNA连接酶 B.限制酶和水解酶
C.限制酶和运载酶 D. DNA连接酶和运载酶
3.下图所示为限制酶切割某DNA分子的过程,
从图中可知,该限制酶能识别的碱基序列及
切点是 ( )
A.CTTAAG,切点在C和T之间
B.CTTAAG,切点在G和A之间
C.GAATTC,切点在G和A之间
D.GAATTC,切点在C和T之间
4.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件 ( )
A.具有某些标记基因 B.决定宿主细胞的生存
C.能够在宿主细胞中复制 D.有多个限制酶切点
5.1979年,科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组,并且在大肠杆菌体内表达成功。请根据图回答问题:
(1)此图表示的是采取____________合成基因的方法获取______________基因的过程。
(2)图中①DNA是以______________为模板,___________形成单链DNA,在酶的作用下合成双链DNA,从而获得了所需要的基因。
(3)图中②代表的是_____________,在它的作用下将质粒(________DNA)切出__________末端。
(4)图中③代表______________________DNA,含______________________。
(5)图中④表示将__________________。⑤表示_________________DNA随大肠杆菌的繁殖而进行__________________。
答案:1.D 2.C 3.C 4.B
5.(1)人工 原胰岛素目的
(2)原胰岛素mRNA 逆转录
(3)特定的限制性内切酶 环状 黏性
(4)重组 原胰岛素基因
(5)将目的基因导入受体细胞 重组 扩增
【布置作业】
完成学案及课本练习题
【教学反思】
基因工程在必修中已近有所体现,学生已有初步的认识,在学习中应以学生自学讨论为主,大胆放手给学生,学生兴趣高涨,学习积极性很高,效果较为理想!
w.w.w.k.s.5.u.c.o.m
www.
G A A T T C
C T T A A G
G
C T T A A
G
A A T T C
③
胰腺
反转录酶
质粒
②
⑤
① DNA
大肠杆菌
原胰岛素信使RNA
④
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