生物三轮体系实验复习：叶绿体色素的提取和分离

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实验八 叶绿体色素的提取和分离　　P97
一、实验原理：
1．叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、乙醇等能提取色素。常用无水乙醇（酒精）来提取色素。
2．层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析法来分离四种色素。常用丙酮或93#汽油作为层析液来分离色素。
二、实验材料：幼嫩、鲜绿的菠菜叶
三、实验步骤：
步骤 注意问题 分析
1．提取色素5克绿叶剪碎，放入研钵，加SiO2、CaCO3和5mL丙酮（或10mL无水乙醇）迅速、充分研磨。（若没有无水乙醇，也可用体积分数为95%的乙醇，但要加入适量的无水碳酸钠，除去水分） 加SiO2加CaCO3加丙酮迅速 加SiO2为了研磨得更充分。加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。因为叶绿素含镁，可被细胞液中的有机酸产生的氢代替，形成去镁叶绿素，CaCO3可中和液泡破坏释放的有机酸，防止叶绿体被破坏。叶绿体色素易溶于丙酮等有机溶剂。减少研磨过程叶绿素的分解，减少有毒性的丙酮挥发。
2．收集滤液漏斗基部放一单层尼龙布，研磨倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，用棉花塞塞住试管口。 尼龙布起过滤作用。试管口用棉花塞塞紧是为了防止丙酮（无水乙醇）挥发。
3．制备滤纸条将干燥的滤纸，顺着纸纹剪成长10cm，宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并在距这一端1cm处划一铅笔线。 干燥顺着纸纹剪成长条一端剪去二个角 可吸收更多的滤液。层析时，色素分离效果好。可使层析液同时到达滤液细线。
4．划滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线，干后重复三次。 滤液细线越细、越齐越好。重复三次。 防止色素带之间部分重叠。增加色素在滤纸上的附着量，实验结果更明显。
5．纸层析法分离色素将3mL层析液倒入烧杯中，将滤纸条（划线一端朝下）插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。 层析液不能没及滤纸条。烧杯要盖培养皿盖。 防止色素溶解在层析液中，层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发。
6．观察实验结果 结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色（胡萝卜素）、黄色（叶黄素）、蓝绿色（叶绿素a）、黄绿色（叶绿素b）。扩散最快是胡萝卜素，扩散最慢是叶绿素b，含量最多的是叶绿素a。 四种色素之所以能被分离，是因为四种色素随层析液在滤纸上的扩散速度不同。
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胡萝卜素（橙黄色）
叶黄素（黄色）
叶绿素b（黄绿色）
叶绿素a（蓝绿色）
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