考点17 生物技术实践
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专题八 生物技术实践与现代生物科技
考点l7 生物技术实践
超级预测
知识预测
1．“微生物的培养与利用”考点无疑是选修1中近三年新课标高考的最大热点，如2009宁夏理综40、2009安徽理综9、2008山东理综第34(2)(4)、2008广东生物38、2007江苏生物22和2007宁夏理综32(1)(2)等都考查了微生物的分离和培养技术，2010年高考，该考点出现的可能非常大。21世纪教育网
2．“酶的应用”考点，特别是联系生产生活实际的考题在2007--2009高考中频繁出现，2009江苏生物3考查固定化酶和固定化细胞的区别；2008江苏生物34考查了加酶洗衣粉的
洗剂效果的探究；2007山东理综第34(1)(2)(4)题考查了果胶酶在果汁生产中的应用研究，预计2010年高考该考点的考查还会持续。21世纪教育网
3．从已考过的三年新课标考题可以看出来，生物技术在食品加工及其他方面的应用考点在2010年高考出现的概率很大，如2009浙江自选17考查食醋和泡菜的制作；2008江苏生物19考查了果酒和果醋的制作方法与应用；2008江苏生物l7考查了腐乳的制作原理与操作。
能力预测
生物技术实践的考题大都和生产生活实际相联系，或与实验结合，考查考生的综合运用能力和实验操作技能。
赋分预测
2007--2009年新课标高考各考卷中，“生物技术实践”的三年赋分分别是40分、45分和74分，但每份考卷的平均分值始终在8—15分，预计2010年高考，这种赋分趋向还会存在。21世纪教育网
题型预测
由于各省份考试说明大都规定选修内容的考查方式主要为简答题，故生物技术实践试题以选做简答题为主，选择题较少出现。
超值预测
知识能力储备
一、微生物的培养与利用知能储备
1．微生物的培养和分离技术[实验与探究·2009宁夏理综40；2008山东理综34(2)(4)；2008广东生物38；2007江苏生物22；2007宁夏理综32(1)(2)·2010高考预测指数：★★
★★★]
(1) 生物的营养21世纪教育网
营养要素 来源 功能
碳源 无机碳源 C02、NaHC03、CaC03等含碳无机物 ①构成细胞物质和一些代谢产物；
有机碳源 糖、脂、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等 ②既是碳源又是能源
氮源 无机氮源 NH3、铵盐、硝酸盐、N2等 将无机氮合成含氮的代谢产物
有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物
生长因子 维生素、氨基酸、碱基 ①酶和核酸的组成成分；②参与代谢过程中的酶促反应
(2)培养基的制作是否合格的验证21世纪教育网
如果未接种的培养基在恒温箱中保温l—2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。21世纪教育网
(3)无菌技术操作的方法21世纪教育网
①灭菌与消毒是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。
②灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物污染。21世纪教育网
③灭菌的方法与原理
器具：高压蒸汽灭菌器（锅）
a.高压蒸汽灭菌法 适用范围：培养基、无菌水等的灭菌
使用条件：恒温121.3℃，维持20min
器具：干热灭菌箱21世纪教育网
b. 干热灭菌 适用范围：玻璃器皿等耐热器具的灭菌
使用条件：l60℃，维持2 h或170℃，维持l h
c．酒精灯灼烧法：适用于操作时试管口及接种环的灭菌。
以上三种高温灭菌的原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。
④消毒的方法
a．煮沸消毒法：100％煮沸5—6 min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，可用于培养器皿的消毒。
b．巴氏消毒法：80℃中15 min或70～75％中30min，实际生产中常用于鲜奶的消毒。
c．70％乙醇消毒法：70％乙醇杀毒能力最强，常用于实验时操作者手臂的消毒。
(4)微生物的纯培养技术：自然环境中微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用方法将单个的细胞与其他细胞分离开，进而提供细胞合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。21世纪教育网
微生物的分散主要采用稀释的方法，而固体培养基由于能够使分散的细胞固着于一定的位置，与其他的细胞分离，从而生长成为一个单细胞来源的群体，即纯培养。
①平板划线法：将合适的无菌培养基倒人无菌培养皿中，冷却后制备成平板。乎板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中，产生的与
扭胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。
②涂布乎板法：21世纪教育网
该法在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，最常用的液体稀释方法为10倍系列稀释，随着稀释程度增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。
将灭完菌冷却到50～55℃的培养基倒入无菌培养皿中冷却形成平板，然后选择细胞得以分散的合适稀释度的菌悬液加到平板中央，以三角刮刀将之均匀地涂布于整个平板上，培养即可。
2．特定微生物的数量的测定[实验与探究·2009安徽理综6；2007宁夏理综32(3)·2010高考预测指数：★★★]
(1)测定微生物数量的方法21世纪教育网
①直接计数法：常用的是显微镜直接计数法，该方法所需设备简单、可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察所研究微生物的形态特征。但死细胞与活细胞不能区分，细胞密度低于l06个／mL便不能保证视野中能见到所有细胞，难以计数微小的细菌。
②间接计数法：常用的是稀释平板计数法，这种方法在样品中含菌数较少的情况下，也可以完成计数，注意该方法需要将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，应用该种方法可以推算出检测样品中的活菌数。
(2)测定微生物数量方法的实际应用21世纪教育网
①土壤中好氧型细菌的计数21世纪教育网
a．制备土壤稀释液：取土壤表层3～5cm处的土样；制备系列稀释液。
b．取样及倒平板：该实验的接种方法是稀释混合平板法。21世纪教育网
c．培养。
d．观察记录结果：每克土壤样品菌数=某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数／涂布平板时所用稀释液的体积。
②检测天然水源中细菌总数和大肠杆菌菌落数
细菌总数通常是指lg或1mL检测样品中所含细菌菌落数。大肠杆菌菌落数通常是指每l00g或100 mL检测样品中所含细菌的实际数值。21世纪教育网
③检测某种食品中的细菌总数和大肠杆菌菌落数
一般说来，大肠杆菌菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差
④土壤中分解尿素细菌的计数21世纪教育网
某些细菌中含有尿素分解酶，能将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚酞指示剂呈现红色。21世纪教育网
(3)制备系列稀释液的方法21世纪教育网
将1g土样放人99 mL无菌水中，制成102倍的稀释液，用1mL无菌移液管吸取上述浓度的溶液0.5mL，移入装有4.5mL无菌水的试管中，即配制成103倍的稀释液，用同样的
方法可以配制成104、105、106倍的稀释液。将待测样品进行稀释的目的是使微生物细胞分散开，使实验结果更接近真实值。
3.研究培养基对微生物的选择作用[实验与探究·2008山东理综34(3)；2007山东理综34(3)；2007宁夏理综32(3)·2010高考预测指数：★★★★★]
(1)分离微生物的方法
从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：21世纪教育网
①利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。21世纪教育网
②利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。
(2)选择培养基及应用实例21世纪教育网
①选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。
②选择培养基应用实例21世纪教育网
培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。
当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。
改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。21世纪教育网
二、酶的应用知能储备21世纪教育网
1．加酶洗衣粉的洗涤效果的探究(综合运用·2008江苏生物34·2010高考预测指数：★★★)
(1)加酶洗衣粉中酶制剂的种类与功效21世纪教育网
①加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
②碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污渍从衣物上脱落。脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能分别将大分子的脂肪、淀粉和纤维素水解为小分子物质，使洗衣粉具有更好的去污能力。21世纪教育网
(2)加酶洗衣粉的洗涤效果的探究
①判断加酶洗衣粉洗涤效果的方法：可在洗涤后比较污物的残留状况，如已消失、颜色变浅、面积缩小等。
②加酶洗衣粉的洗涤效果的探究方法：实验设计遵循的原则是对照原则和单一变量原则，如探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果有何不同时，以控制洗衣粉的种类为变量，其他条件完全一致；同时，普通洗衣粉处理污物与加酶洗衣粉处理污物形成对照实验。21世纪教育网
③变量的分析和控制：影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素有水温、水量、水质、洗衣粉的用量、衣物的质料、衣物大小、浸泡时间、洗涤的方式和洗涤的时间等。在选择适宜的变量作为探究课题的时候，考生应注意切合实际，如选择水温时，我们可以选择一年中冬季、春季、秋季和夏季的实际常温5℃、15℃、25℃和35℃进行实验。
2．果胶酶在果汁生产中的应用研究[实验与探究．2007山东理综34(1)(2)(4)·2010高考预测指数：★★★] 21世纪教育网
(1)果胶的成分构成与果胶酶的作用
果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水。
在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁浑浊。果胶酶能够分解果胶，变成可溶性的半乳糖醛酸，也使得浑浊的果汁变得澄清。21世纪教育网
(2)果胶酶的种类21世纪教育网
果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
3．直接使用酶、固定化酶和固审化细胞催化的比较(实验与探究·加09江苏牛物3：枷7广东牛物40·加09高考预测指数：★★★)
直接使用酶 固定化酶 固定化细胞
制作方法 化学结合法固定化、物理吸附法固定化 包埋法固定化
是否需要营养物质 否21世纪教育网 否 是
催化反应 单一或多种 单一 一系列
反应底物 各种物质(大分子、小分子) 各种物质(大分子、小分子) 小分子物质
缺点 ①对环境条件非常敏感，易失活；②难回收，成本高，影响产品质量 不利于催化一系列酶促反应 反应物不易与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率下降
优点 催化效应高、耗能低、低污染 ①既能与反应物接触，又能与产物分离；②可以重复利用 成本低、操作容易
三、生物技术在食品加工及其他方面的应用知能储备
1．果酒、果醋、腐乳与泡菜的制作(实验与探究·2009浙江自选17；2008江苏生物l7；2008江苏生物l9·2010高考预测指数：★★★) 21世纪教育网
果酒和果醋的制作 腐乳的制作 泡菜的制作
主要菌种 果酒：酵母菌果醋：醋酸茵 毛霉等 乳酸菌
原理 ( http: / / www.21cnjy.com ) ( http: / / www.21cnjy.com ) 乳酸菌发酵产生乳酸
实验流程 挑选葡萄↓冲洗↓榨汁↓酒精发酵→果酒↓醋酸发酵→果醋 让豆腐上长出毛霉↓加盐腌制↓加卤汤装瓶↓密封腌制 ( http: / / www.21cnjy.com )
注意的问题 1．材料的选择与处理；2．防止发酵液被污染；3．控制好发酵的条件 1．控制好材料的用量；2．防止杂菌污染 1．泡菜坛的选择；2．腌制的条件
2．植物有效成分的提取与分离(理解能力·2009海南生物25；2008宁夏理综37·2010高考预测指数：★★★)
提取方法 实验原理 方法步骤 适用范围
水蒸气蒸馏 利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来 1．水蒸气蒸馏；2．分离油层；3．除水过滤 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油
压榨法 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 1．石灰水浸泡、漂洗；2．压榨、过滤、静置；3．再次过滤 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取
有机溶剂萃取 使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可获得芳香油 1．粉碎、干燥；2．萃取、过滤；3．浓缩 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡有机溶剂中
3．植物组织培养技术和花药培养技术(理解能力·2008宁夏理综37·2010高考预测指数：★★★)
植物组织培养技术 花药离体培养技术
相同点 理论依据 植物细胞的全能性
基本过程 外植体 脱分化 愈伤组织 再分化 丛芽 诱导 生根移栽；无菌技术及接种操作基本相同
影响因素 选材、营养、激素、pH、温度、光照等
不同点 选材 体细胞 生殖细胞(精子)
生殖方式 无性生殖 有性生殖
4．PCR技术的原理与操作技术[实验与探究·2009广东生物(3)·2010高考预测指数：★★★]
(1)细胞内DNA复制与PCR技术扩增DNA
细胞内DNA复制 PCR
不同点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80～100℃高温解旋，双链分开
酶 DNA解旋酶，DNA聚合酶 TaqDNA聚合目
引物 RNA DNA或RNA
温度 体内温和条件 高温
相同点 ①需提供DNA复制的模板；②四种脱氧核苷酸作原料；③子链延伸的方向都是从5′端到3′端；④都需要酶的催化
(2)PCR的反应过程
①变性：90℃以上时，双链DNA解旋为单链。
②复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互对方式与两条单链DNA结合。
③延伸：温度上升到72℃左右，溶液中四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成DNA链。
方法技巧储备
不同物质的提取分离方法比较(理解能力·2009海南生物25；2008宁夏理综37·2010高考预测指数：★★★) 21世纪教育网
提取物质 提取方法 提取原理 步骤
DNA 盐析法21世纪教育网 ①在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；②不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精 ①溶解在2 mol／L的NaCl溶液中；②NaCl溶液加水稀释至0.14 mol／LDNA析出、过滤；③加入冷却酒精析出
血红蛋白 凝胶色谱法、电泳法 ①根据相对分子质量的大小；②各种分子带电性质差异以及分子本身大小、形状的不同 ①样品处理；②粗提取；③纯化；④纯度鉴定
玫瑰精油 水蒸气蒸馏法 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 ①水蒸气蒸馏；②分离油层；③除水过滤
橘皮精油 压榨法 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 ①石灰水浸泡、漂洗；②压榨、过滤、静置；③再次过滤
胡萝卜素 萃取法 使提取物溶解在有机溶剂中，蒸发后得到提取物 ①粉碎、干燥；②萃取、过滤；③浓缩
[典题]在植物有效成分的提取过程中，常用萃取法、蒸馏法和压榨法，下列关于这三种方法叙述错误的是 ( )
A．蒸馏法的实验原理是利用水将芳香油溶解下来，再把水蒸发掉，剩余的就是芳香油
B．压榨法的实验原理是通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油
C．萃取法的实验原理是使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发掉溶剂后就可获得芳香油
D．蒸馏法适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油
[解析]蒸馏法是利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油；压榨法是通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油，适用于柑橘、柠檬等易焦煳原料的提取；萃取法使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发掉溶剂后就可获得芳香油，它的适用范围广，要求原料的颗粒尽可能细小，能充分浸泡在有机溶剂中。
[答案]A
易混易错储备
一、易混知识点储备
1．消毒与灭菌
(1)消毒与灭菌的不同
项目 消毒 灭菌
条件 使用较为温和的理化方法21世纪教育网 使用强烈的理化因素
结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等
常用方法 煮沸消毒法(如100％，5～6 min)，巴氏消毒法(80℃，15 min)，酒精、氯气、石炭酸等化学药剂消毒法 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
(2)高温加热灭菌，其原理就是使细菌体内蛋白质变性，而达到杀灭细菌的目的。
(3)化学药剂的灭菌消毒方法，其作用原理也是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。
(4)体积分数为70％的乙醇杀菌效果最强，其原因是浓度过低，杀菌力弱，浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，因此杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿，则可选择75％的酒精进行消毒。
(5)灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
(6)培养基的制作是否合格的验证：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
2．常用几种发酵菌种的比较
酵母菌 醋酸菌 21世纪教育网毛霉 乳酸菌
生物学分类 真核生物 原核生物 真核生物 原核生物
代谢类型 异养兼性厌氧 异养需氧 异养需氧 异养厌氧
繁殖方式 适宜条件下出芽生殖 二分裂 孢子生殖 二分裂
生产应用 酿酒 酿醋 制作腐乳 制作泡菜
发酵条件 前期需氧，后期不需氧 一直需氧 一直需氧 不需氧
3．果酒、果醋与腐乳制作过程注意点比较
果酒、果醋制作 腐乳制作
(1)葡萄的冲洗与去梗：应先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。对于果酒的自然发酵，冲洗不要反复进行，使酵母菌数量减少，发酵周期加长，产生酒精含量下降；(2)为防止发酵液被污染，发酵瓶要用70％的酒精消毒；(3)葡萄汁装入发酵瓶时，要留1／3的空间；(4)制作葡萄酒时将温度严格控制在18～25℃之间，时间控制在10～20天，要对发酵情况及时进行检测和调控；(5)制葡萄醋时，将温度严格控制在30～35℃之间，时间控制在7～8天，并注意适时通过充气口充气 (1)腐乳的制作所需豆腐的水量以70％为宜，毛霉是异养需氧生物，若含水量过高，影响毛霉的有氧呼吸，含水量过少，不利毛霉的生长。(2)配制卤汤时酒量应控制在12％左右。加酒的目的之一是杀死微生物，过少达不到目的，过多，则抑制酶的活性，影响腐乳的成熟。(3)越接近瓶口，杂菌污染的可能性越大，因此要随着豆腐层的加高增加盐的用量。(4)豆腐及腐乳的营养成分不同：豆腐由大豆直接磨制而成，主要有机成分是蛋白质和脂肪；腐乳是豆腐在毛霉的发酵下形成的。毛霉产生的蛋白酶和脂肪酶，可将豆腐中的蛋白质和脂肪分解成肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等小分子物质，所以其味道鲜美，易于消化吸收
二、典型易错题点拨
1．混淆果酒与果醋的制作条件
[易错典题l]果酒制作过程中，操作有误的是 ( )
A．将消毒过的葡萄汁装满发酵装置
B．将温度严格控制在18～25℃
C．榨汁机要清洗干净，并晾干
D．将冲洗除梗的葡萄放入冲洗晾干的榨汁机榨汁
[解析]葡萄酒的自然发酵过程中起作用的野生型酵母菌附着在葡萄果皮表面，消毒会失去菌种，无法达到发酵目的。
[答案]A
[错因分析]在学习过程中会产生一种观点，只要发酵就必然灭菌消毒，但我们应该注意，果酒的发酵一般属于自然发酵，即葡萄的冲洗不可反复进行，防止葡萄果皮上的酵母菌数
量减少，发酵周期加长，产品酒精含量下降。21世纪教育网
2．混淆消毒与灭菌
[易错典题2]细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 ( )
A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅
[解析】高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。
[答案]C
[错因分析] 考生容易将消毒与灭菌的适用范围混淆。一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅
指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，操作者的手臂、鲜奶在饮用前需要消毒。
3．不能正确认识“不同种类培养基的作用不同”
[易错典题3]不同物理形态的培养基其作用不一样，用于菌种分离、鉴定时可选用 ( )
A．液体培养基 B．固体培养基21世纪教育网
C．半固体培养基 D．以上都可以21世纪教育网
[解析] 固体培养基是不流动的，接种后的微生物在固体培养基上可以形成菌落，用于微生物的鉴定、纯化，在选种、育种、微生物计数上应用很广。液体培养基用于大规模培养和工业生产。半固体培养基用于观察微生物的运动、对微生物进行
趋化性研究等。
[答案】B
[错因分析] 固体培养基、液体培养基和半固体培养基都可以培养细菌，但在实际生产中，为了不同的需要，三种培养基还有各自的使用范围，考生一定要注意这一点。
种
菌
项
目
21世纪教育网 www.21cnjy.com 精品试卷·第 2 页 （共 2 页）
21世纪教育网 www.21cnjy.com 精品资料·第 6 页 （共 11 页） 版权所有@21世纪教育网
专题八 生物技术实践与现代生物科技
考点l7 生物技术实践
超级预测
知识预测
1．“微生物的培养与利用”考点无疑是选修1中近三年新课标高考的最大热点，如2009宁夏理综40、2009安徽理综9、2008山东理综第34(2)(4)、2008广东生物38、2007江苏生物22和2007宁夏理综32(1)(2)等都考查了微生物的分离和培养技术，2010年高考，该考点出现的可能非常大。21世纪教育网
2．“酶的应用”考点，特别是联系生产生活实际的考题在2007--2009高考中频繁出现，2009江苏生物3考查固定化酶和固定化细胞的区别；2008江苏生物34考查了加酶洗衣粉的
洗剂效果的探究；2007山东理综第34(1)(2)(4)题考查了果胶酶在果汁生产中的应用研究，预计2010年高考该考点的考查还会持续。21世纪教育网
3．从已考过的三年新课标考题可以看出来，生物技术在食品加工及其他方面的应用考点在2010年高考出现的概率很大，如2009浙江自选17考查食醋和泡菜的制作；2008江苏生物19考查了果酒和果醋的制作方法与应用；2008江苏生物l7考查了腐乳的制作原理与操作。
能力预测
生物技术实践的考题大都和生产生活实际相联系，或与实验结合，考查考生的综合运用能力和实验操作技能。
赋分预测
2007--2009年新课标高考各考卷中，“生物技术实践”的三年赋分分别是40分、45分和74分，但每份考卷的平均分值始终在8—15分，预计2010年高考，这种赋分趋向还会存在。21世纪教育网
题型预测
由于各省份考试说明大都规定选修内容的考查方式主要为简答题，故生物技术实践试题以选做简答题为主，选择题较少出现。
超值预测
知识能力储备
一、微生物的培养与利用知能储备
1．微生物的培养和分离技术[实验与探究·2009宁夏理综40；2008山东理综34(2)(4)；2008广东生物38；2007江苏生物22；2007宁夏理综32(1)(2)·2010高考预测指数：★★
★★★]
(1) 生物的营养21世纪教育网
营养要素 来源 功能
碳源 无机碳源 C02、NaHC03、CaC03等含碳无机物 ①构成细胞物质和一些代谢产物；
有机碳源 糖、脂、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等 ②既是碳源又是能源
氮源 无机氮源 NH3、铵盐、硝酸盐、N2等 将无机氮合成含氮的代谢产物
有机氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物
生长因子 维生素、氨基酸、碱基 ①酶和核酸的组成成分；②参与代谢过程中的酶促反应
(2)培养基的制作是否合格的验证21世纪教育网
如果未接种的培养基在恒温箱中保温l—2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。21世纪教育网
(3)无菌技术操作的方法21世纪教育网
①灭菌与消毒是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。
②灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物污染。21世纪教育网
③灭菌的方法与原理
器具：高压蒸汽灭菌器（锅）
a.高压蒸汽灭菌法 适用范围：培养基、无菌水等的灭菌
使用条件：恒温121.3℃，维持20min
器具：干热灭菌箱21世纪教育网
b. 干热灭菌 适用范围：玻璃器皿等耐热器具的灭菌
使用条件：l60℃，维持2 h或170℃，维持l h
c．酒精灯灼烧法：适用于操作时试管口及接种环的灭菌。
以上三种高温灭菌的原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。
④消毒的方法
a．煮沸消毒法：100％煮沸5—6 min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，可用于培养器皿的消毒。
b．巴氏消毒法：80℃中15 min或70～75％中30min，实际生产中常用于鲜奶的消毒。
c．70％乙醇消毒法：70％乙醇杀毒能力最强，常用于实验时操作者手臂的消毒。
(4)微生物的纯培养技术：自然环境中微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用方法将单个的细胞与其他细胞分离开，进而提供细胞合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。21世纪教育网
微生物的分散主要采用稀释的方法，而固体培养基由于能够使分散的细胞固着于一定的位置，与其他的细胞分离，从而生长成为一个单细胞来源的群体，即纯培养。
①平板划线法：将合适的无菌培养基倒人无菌培养皿中，冷却后制备成平板。乎板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中，产生的与
扭胞在培养基表面生长的后代就是纯培养物。
②涂布乎板法：21世纪教育网
该法在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，最常用的液体稀释方法为10倍系列稀释，随着稀释程度增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。
将灭完菌冷却到50～55℃的培养基倒入无菌培养皿中冷却形成平板，然后选择细胞得以分散的合适稀释度的菌悬液加到平板中央，以三角刮刀将之均匀地涂布于整个平板上，培养即可。
2．特定微生物的数量的测定[实验与探究·2009安徽理综6；2007宁夏理综32(3)·2010高考预测指数：★★★]
(1)测定微生物数量的方法21世纪教育网
①直接计数法：常用的是显微镜直接计数法，该方法所需设备简单、可迅速得到结果，而且在计数的同时能观察所研究微生物的形态特征。但死细胞与活细胞不能区分，细胞密度低于l06个／mL便不能保证视野中能见到所有细胞，难以计数微小的细菌。
②间接计数法：常用的是稀释平板计数法，这种方法在样品中含菌数较少的情况下，也可以完成计数，注意该方法需要将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，应用该种方法可以推算出检测样品中的活菌数。
(2)测定微生物数量方法的实际应用21世纪教育网
①土壤中好氧型细菌的计数21世纪教育网
a．制备土壤稀释液：取土壤表层3～5cm处的土样；制备系列稀释液。
b．取样及倒平板：该实验的接种方法是稀释混合平板法。21世纪教育网
c．培养。
d．观察记录结果：每克土壤样品菌数=某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数／涂布平板时所用稀释液的体积。
②检测天然水源中细菌总数和大肠杆菌菌落数
细菌总数通常是指lg或1mL检测样品中所含细菌菌落数。大肠杆菌菌落数通常是指每l00g或100 mL检测样品中所含细菌的实际数值。21世纪教育网
③检测某种食品中的细菌总数和大肠杆菌菌落数
一般说来，大肠杆菌菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差
④土壤中分解尿素细菌的计数21世纪教育网
某些细菌中含有尿素分解酶，能将培养基中的尿素分解成氨，该物质的水溶液会使酚酞指示剂呈现红色。21世纪教育网
(3)制备系列稀释液的方法21世纪教育网
将1g土样放人99 mL无菌水中，制成102倍的稀释液，用1mL无菌移液管吸取上述浓度的溶液0.5mL，移入装有4.5mL无菌水的试管中，即配制成103倍的稀释液，用同样的
方法可以配制成104、105、106倍的稀释液。将待测样品进行稀释的目的是使微生物细胞分散开，使实验结果更接近真实值。
3.研究培养基对微生物的选择作用[实验与探究·2008山东理综34(3)；2007山东理综34(3)；2007宁夏理综32(3)·2010高考预测指数：★★★★★]
(1)分离微生物的方法
从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：21世纪教育网
①利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。21世纪教育网
②利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。
(2)选择培养基及应用实例21世纪教育网
①选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。
②选择培养基应用实例21世纪教育网
培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。
培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。
当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。
改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。21世纪教育网
二、酶的应用知能储备21世纪教育网
1．加酶洗衣粉的洗涤效果的探究(综合运用·2008江苏生物34·2010高考预测指数：★★★)
(1)加酶洗衣粉中酶制剂的种类与功效21世纪教育网
①加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。目前常用的酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
②碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污渍从衣物上脱落。脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能分别将大分子的脂肪、淀粉和纤维素水解为小分子物质，使洗衣粉具有更好的去污能力。21世纪教育网
(2)加酶洗衣粉的洗涤效果的探究
①判断加酶洗衣粉洗涤效果的方法：可在洗涤后比较污物的残留状况，如已消失、颜色变浅、面积缩小等。
②加酶洗衣粉的洗涤效果的探究方法：实验设计遵循的原则是对照原则和单一变量原则，如探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果有何不同时，以控制洗衣粉的种类为变量，其他条件完全一致；同时，普通洗衣粉处理污物与加酶洗衣粉处理污物形成对照实验。21世纪教育网
③变量的分析和控制：影响加酶洗衣粉洗涤效果的因素有水温、水量、水质、洗衣粉的用量、衣物的质料、衣物大小、浸泡时间、洗涤的方式和洗涤的时间等。在选择适宜的变量作为探究课题的时候，考生应注意切合实际，如选择水温时，我们可以选择一年中冬季、春季、秋季和夏季的实际常温5℃、15℃、25℃和35℃进行实验。
2．果胶酶在果汁生产中的应用研究[实验与探究．2007山东理综34(1)(2)(4)·2010高考预测指数：★★★] 21世纪教育网
(1)果胶的成分构成与果胶酶的作用
果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水。
在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁浑浊。果胶酶能够分解果胶，变成可溶性的半乳糖醛酸，也使得浑浊的果汁变得澄清。21世纪教育网
(2)果胶酶的种类21世纪教育网
果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
3．直接使用酶、固定化酶和固审化细胞催化的比较(实验与探究·加09江苏牛物3：枷7广东牛物40·加09高考预测指数：★★★)
直接使用酶 固定化酶 固定化细胞
制作方法 化学结合法固定化、物理吸附法固定化 包埋法固定化
是否需要营养物质 否21世纪教育网 否 是
催化反应 单一或多种 单一 一系列
反应底物 各种物质(大分子、小分子) 各种物质(大分子、小分子) 小分子物质
缺点 ①对环境条件非常敏感，易失活；②难回收，成本高，影响产品质量 不利于催化一系列酶促反应 反应物不易与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率下降
优点 催化效应高、耗能低、低污染 ①既能与反应物接触，又能与产物分离；②可以重复利用 成本低、操作容易
三、生物技术在食品加工及其他方面的应用知能储备
1．果酒、果醋、腐乳与泡菜的制作(实验与探究·2009浙江自选17；2008江苏生物l7；2008江苏生物l9·2010高考预测指数：★★★) 21世纪教育网
果酒和果醋的制作 腐乳的制作 泡菜的制作
主要菌种 果酒：酵母菌果醋：醋酸茵 毛霉等 乳酸菌
原理 ( http: / / www.21cnjy.com ) ( http: / / www.21cnjy.com ) 乳酸菌发酵产生乳酸
实验流程 挑选葡萄↓冲洗↓榨汁↓酒精发酵→果酒↓醋酸发酵→果醋 让豆腐上长出毛霉↓加盐腌制↓加卤汤装瓶↓密封腌制 ( http: / / www.21cnjy.com )
注意的问题 1．材料的选择与处理；2．防止发酵液被污染；3．控制好发酵的条件 1．控制好材料的用量；2．防止杂菌污染 1．泡菜坛的选择；2．腌制的条件
2．植物有效成分的提取与分离(理解能力·2009海南生物25；2008宁夏理综37·2010高考预测指数：★★★)
提取方法 实验原理 方法步骤 适用范围
水蒸气蒸馏 利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来 1．水蒸气蒸馏；2．分离油层；3．除水过滤 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油
压榨法 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 1．石灰水浸泡、漂洗；2．压榨、过滤、静置；3．再次过滤 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取
有机溶剂萃取 使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可获得芳香油 1．粉碎、干燥；2．萃取、过滤；3．浓缩 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡有机溶剂中
3．植物组织培养技术和花药培养技术(理解能力·2008宁夏理综37·2010高考预测指数：★★★)
植物组织培养技术 花药离体培养技术
相同点 理论依据 植物细胞的全能性
基本过程 外植体 脱分化 愈伤组织 再分化 丛芽 诱导 生根移栽；无菌技术及接种操作基本相同
影响因素 选材、营养、激素、pH、温度、光照等
不同点 选材 体细胞 生殖细胞(精子)
生殖方式 无性生殖 有性生殖
4．PCR技术的原理与操作技术[实验与探究·2009广东生物(3)·2010高考预测指数：★★★]
(1)细胞内DNA复制与PCR技术扩增DNA
细胞内DNA复制 PCR
不同点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80～100℃高温解旋，双链分开
酶 DNA解旋酶，DNA聚合酶 TaqDNA聚合目
引物 RNA DNA或RNA
温度 体内温和条件 高温
相同点 ①需提供DNA复制的模板；②四种脱氧核苷酸作原料；③子链延伸的方向都是从5′端到3′端；④都需要酶的催化
(2)PCR的反应过程
①变性：90℃以上时，双链DNA解旋为单链。
②复性：温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互对方式与两条单链DNA结合。
③延伸：温度上升到72℃左右，溶液中四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成DNA链。
方法技巧储备
不同物质的提取分离方法比较(理解能力·2009海南生物25；2008宁夏理综37·2010高考预测指数：★★★) 21世纪教育网
提取物质 提取方法 提取原理 步骤
DNA 盐析法21世纪教育网 ①在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；②不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精 ①溶解在2 mol／L的NaCl溶液中；②NaCl溶液加水稀释至0.14 mol／LDNA析出、过滤；③加入冷却酒精析出
血红蛋白 凝胶色谱法、电泳法 ①根据相对分子质量的大小；②各种分子带电性质差异以及分子本身大小、形状的不同 ①样品处理；②粗提取；③纯化；④纯度鉴定
玫瑰精油 水蒸气蒸馏法 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 ①水蒸气蒸馏；②分离油层；③除水过滤
橘皮精油 压榨法 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 ①石灰水浸泡、漂洗；②压榨、过滤、静置；③再次过滤
胡萝卜素 萃取法 使提取物溶解在有机溶剂中，蒸发后得到提取物 ①粉碎、干燥；②萃取、过滤；③浓缩
[典题]在植物有效成分的提取过程中，常用萃取法、蒸馏法和压榨法，下列关于这三种方法叙述错误的是 ( )
A．蒸馏法的实验原理是利用水将芳香油溶解下来，再把水蒸发掉，剩余的就是芳香油
B．压榨法的实验原理是通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油
C．萃取法的实验原理是使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发掉溶剂后就可获得芳香油
D．蒸馏法适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油
[解析]蒸馏法是利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油；压榨法是通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油，适用于柑橘、柠檬等易焦煳原料的提取；萃取法使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发掉溶剂后就可获得芳香油，它的适用范围广，要求原料的颗粒尽可能细小，能充分浸泡在有机溶剂中。
[答案]A
易混易错储备
一、易混知识点储备
1．消毒与灭菌
(1)消毒与灭菌的不同
项目 消毒 灭菌
条件 使用较为温和的理化方法21世纪教育网 使用强烈的理化因素
结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等
常用方法 煮沸消毒法(如100％，5～6 min)，巴氏消毒法(80℃，15 min)，酒精、氯气、石炭酸等化学药剂消毒法 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
(2)高温加热灭菌，其原理就是使细菌体内蛋白质变性，而达到杀灭细菌的目的。
(3)化学药剂的灭菌消毒方法，其作用原理也是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。
(4)体积分数为70％的乙醇杀菌效果最强，其原因是浓度过低，杀菌力弱，浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，因此杀菌效果受影响。对刚洗刷后未干的器皿，则可选择75％的酒精进行消毒。
(5)灭菌的目的：无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
(6)培养基的制作是否合格的验证：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
2．常用几种发酵菌种的比较
酵母菌 醋酸菌 21世纪教育网毛霉 乳酸菌
生物学分类 真核生物 原核生物 真核生物 原核生物
代谢类型 异养兼性厌氧 异养需氧 异养需氧 异养厌氧
繁殖方式 适宜条件下出芽生殖 二分裂 孢子生殖 二分裂
生产应用 酿酒 酿醋 制作腐乳 制作泡菜
发酵条件 前期需氧，后期不需氧 一直需氧 一直需氧 不需氧
3．果酒、果醋与腐乳制作过程注意点比较
果酒、果醋制作 腐乳制作
(1)葡萄的冲洗与去梗：应先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。对于果酒的自然发酵，冲洗不要反复进行，使酵母菌数量减少，发酵周期加长，产生酒精含量下降；(2)为防止发酵液被污染，发酵瓶要用70％的酒精消毒；(3)葡萄汁装入发酵瓶时，要留1／3的空间；(4)制作葡萄酒时将温度严格控制在18～25℃之间，时间控制在10～20天，要对发酵情况及时进行检测和调控；(5)制葡萄醋时，将温度严格控制在30～35℃之间，时间控制在7～8天，并注意适时通过充气口充气 (1)腐乳的制作所需豆腐的水量以70％为宜，毛霉是异养需氧生物，若含水量过高，影响毛霉的有氧呼吸，含水量过少，不利毛霉的生长。(2)配制卤汤时酒量应控制在12％左右。加酒的目的之一是杀死微生物，过少达不到目的，过多，则抑制酶的活性，影响腐乳的成熟。(3)越接近瓶口，杂菌污染的可能性越大，因此要随着豆腐层的加高增加盐的用量。(4)豆腐及腐乳的营养成分不同：豆腐由大豆直接磨制而成，主要有机成分是蛋白质和脂肪；腐乳是豆腐在毛霉的发酵下形成的。毛霉产生的蛋白酶和脂肪酶，可将豆腐中的蛋白质和脂肪分解成肽和氨基酸、甘油和脂肪酸等小分子物质，所以其味道鲜美，易于消化吸收
二、典型易错题点拨
1．混淆果酒与果醋的制作条件
[易错典题l]果酒制作过程中，操作有误的是 ( )
A．将消毒过的葡萄汁装满发酵装置
B．将温度严格控制在18～25℃
C．榨汁机要清洗干净，并晾干
D．将冲洗除梗的葡萄放入冲洗晾干的榨汁机榨汁
[解析]葡萄酒的自然发酵过程中起作用的野生型酵母菌附着在葡萄果皮表面，消毒会失去菌种，无法达到发酵目的。
[答案]A
[错因分析]在学习过程中会产生一种观点，只要发酵就必然灭菌消毒，但我们应该注意，果酒的发酵一般属于自然发酵，即葡萄的冲洗不可反复进行，防止葡萄果皮上的酵母菌数
量减少，发酵周期加长，产品酒精含量下降。21世纪教育网
2．混淆消毒与灭菌
[易错典题2]细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 ( )
A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环
C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅
[解析】高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。
[答案]C
[错因分析] 考生容易将消毒与灭菌的适用范围混淆。一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅
指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，操作者的手臂、鲜奶在饮用前需要消毒。
3．不能正确认识“不同种类培养基的作用不同”
[易错典题3]不同物理形态的培养基其作用不一样，用于菌种分离、鉴定时可选用 ( )
A．液体培养基 B．固体培养基21世纪教育网
C．半固体培养基 D．以上都可以21世纪教育网
[解析] 固体培养基是不流动的，接种后的微生物在固体培养基上可以形成菌落，用于微生物的鉴定、纯化，在选种、育种、微生物计数上应用很广。液体培养基用于大规模培养和工业生产。半固体培养基用于观察微生物的运动、对微生物进行
趋化性研究等。
[答案】B
[错因分析] 固体培养基、液体培养基和半固体培养基都可以培养细菌，但在实际生产中，为了不同的需要，三种培养基还有各自的使用范围，考生一定要注意这一点。
种
菌
项
目
21世纪教育网 www.21cnjy.com 精品试卷·第 2 页 （共 2 页）
21世纪教育网 www.21cnjy.com 精品资料·第 6 页 （共 11 页） 版权所有@21世纪教育网
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