专题五 课题3
一、选择题
1．凝胶色谱法是根据( B )分离蛋白质的有效方法。
A．分子的大小 B．相对分子质量的大小
C．带电荷的多少 D．溶解度
[解析] 由凝胶色谱法分离蛋白质的原理可知，凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持( B )基本不变
A．温度 B．pH
C．渗透压 D．氧气浓度
[解析] 缓冲物质能维持pH的相对稳定。
3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷( B )的电极移动
A．相同 B．相反
C．相对 D．相向
[解析] 许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。故选B。
4．在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是( D )
A．洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐
B．洗涤时离心速度过低，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果
C．洗涤过程选用0.1%的生理盐水
D．透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质
[解析] 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，A错误；洗涤时要低速短时离心，以防止白细胞沉淀，B错误；洗涤红细胞选用0.9%的生理盐水，C错误；透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质，D正确。故选D。
5．蛋白质的分离与提纯技术是蛋白质研究的重要技术，下列有关叙述不正确的是( A )
A．根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同蛋白质分离
B．根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小，可通过电泳分离蛋白质
C．根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质
D．根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质
[解析] 蛋白质分子不能透过半透膜，据此可利用半透膜除去样品中相对分子质量小的杂质，而不是分离样品中的蛋白质；根据蛋白质的带电荷性质，可通过电泳分离蛋白质；根据蛋白质的相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质；根据蛋白质的分子大小、密度不同，可用离心沉降法分离蛋白质。
二、非选择题
6．红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带O2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：__样品处理__、__粗分离__、__纯化__和__纯度鉴定__。
(2)实验前取新鲜的血液，切记要在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。
①加入柠檬酸钠的目的是__防止血液的凝固__。
②以上所述的过程即是样品处理，它包括__红细胞的洗涤__、__血红蛋白的释放__、收集血红蛋白溶液。
(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。
①透析的目的是__除去相对分子质量较小的杂质__。
②透析的原理是__透析袋能使小分子物质自由进出，而大分子物质被保留在袋内__。
(4)纯度鉴定时最常用的方法是SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳。
①样品纯化的目的是__通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去__。
②血红蛋白有什么特点__血红蛋白呈现红色__。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？__在用凝胶色谱法分离时可以通过观察颜色来判断什么时期应该收集洗脱液；同时通过观察颜色使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作__。
[解析] 本题主要考查蛋白质提取和分离的相关知识，具体分析如下：
专题五 课题3
一、选择题
1．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入下列哪一种抗凝血剂( D )
A．NaCl B．甲苯
C．蒸馏水 D．柠檬酸钠
[解析] 采集到新鲜的血液时，要加入柠檬酸钠，目的是防止血液凝固。
2．将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是( C )
A．无色透明的甲苯层
B．脂溶性物质的沉淀层
C．血红蛋白的水溶液
D．其他杂质的暗红色沉淀物
[解析] 分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层。
3．红细胞的洗涤过程错误的是( C )
A．低速短时间离心，如500r/min离心2min
B．离心后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆
C．将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的蒸馏水
D．直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净
[解析] 红细胞的洗涤过程中，采用低速短时间离心，如500r/min离心2min，故A正确；红细胞离心后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，故B正确；红细胞的洗涤过程应该用生理盐水洗涤，不能用蒸馏水洗涤，故C错误；红细胞的洗涤过程中，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净，故D正确。
4．在装填凝胶柱时，不得有气泡存在的原因是( A )
A．气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果
B．气泡阻碍蛋白质的运动
C．气泡能与蛋白质发生化学反应
D．气泡会在装填凝胶的时候，使凝胶不紧密
[解析] 装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，因为气泡会扰乱洗脱液中蛋白质中的洗脱次序，使得到的红色带区歪曲、散乱，降低分离效果。
5．下列有关，“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中，正确的是( D )
A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白
B．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质
C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂
D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构
[解析] 红细胞的洗涤应用生理盐水，其目的是去除血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化，而不是洗去细胞表面的杂蛋白，A项不正确。将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，B项不正确。血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放，而不是溶解血红蛋白，C项不正确。整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构。D项正确。
6．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊5种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是( A )
A．若将样品以2 000r/min的速度离心1.0min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中
B．若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快
C．将样品装入透析袋中透析12h，若分子丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内
D．若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁形成的电泳带相距最远
[解析] 分子丙的相对分子质量大于戊，所以，在离心时戊存在于沉淀中，丙也一定在沉淀中，A项正确。用凝胶色谱法分离蛋白质时，甲相对分子质量最小，容易进入凝胶内部，则移动速度最慢，B项错误。分子丙的相对分子质量大于乙，则丙保留在袋内，乙可能在袋外也可能在袋内，C项错误。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速度完全取决于分子的大小，因此，分子甲与丙形成的电泳带相距最远，D项错误。
二、非选择题
7．凝胶色谱技术不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。下图甲为凝胶色谱柱分离蛋白质的示意图，图乙为几种被分离蛋白质相对分子质量大小与洗脱液的洗脱体积的关系，请据图分析回答：
(1)图甲a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是__a__，原因是__a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快__。
(2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由__尼龙网和100目的尼龙纱__替代。
(3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是__气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果__。
(4)若图乙被分离的蛋白质混合液中含有肌红蛋白(相对分子质量为16 900)、血清蛋白(相对分子质量为68 500)、牛乳球蛋白(相对分子质量为35 000)、牛胰岛素(相对分子质量为5 700)，则图乙中A、B、C、D代表的物质依次是__牛胰岛素、肌红蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白__。
[解析] (1)由于不同蛋白质的相对分子质量不同，相对分子质量较大的蛋白质不能进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程短，速度快，易洗脱；相对分子质量较小的蛋白质则进入凝胶内部通道，路程长，速度慢。(2)凝胶色谱柱的制作：底部橡皮塞的凹穴上覆盖尼龙网和100目的尼龙纱，相当于多孔板。(3)凝胶色谱柱的装填：装填时尽量紧密，不能有气泡存在，因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。(4)据图可知，四种蛋白质的相对分子质量逐渐增大，因此图乙中A、B、C、D代表的物质依次是牛胰岛素、肌红蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白。
8．如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题。
(1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，它在红细胞中的作用体现了蛋白质具有__运输__功能。
(2)甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是__磷酸缓冲溶液__；乙装置中，C溶液的作用是__洗脱血红蛋白__。
(3)甲装置用于__透析(粗分离)__，目的是__去除样品中相对分子质量较小的杂质__。用乙装置分离蛋白质的方法叫__凝胶色谱法__。
(4)用乙装置分离血红蛋白时，待__红色的蛋白质接近色谱柱的底端__时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。
[解析] (1)红细胞中含有血红蛋白，血红蛋白可以运输氧，其在红细胞中的作用体现了蛋白质具有运输功能。(2)由血红蛋白提取和分离的实验原理可知，甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是磷酸缓冲液，抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定；乙装置中，C溶液的作用是洗脱血红蛋白。(3)甲装置用于透析，目的是去除样品中分子量较小的杂质。用乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，分子量大的，流动快。(4)用乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。
课件42张PPT。专题五DNA和蛋白质技术课题3 血红蛋白的提取与分离自 主 学 习一、凝胶色谱法
1．概念：也称做______________，是根据____________________分离蛋白质的有效方法。
2．原理
当________________不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程________，移动速度________，而相对分子质量________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在____________移动，路程______，移动速度______，从而使________________不同的蛋白质分子得以分离。分配色谱法 相对分子质量大小 相对分子质量 较小 较大 较慢 较大 凝胶外部 短 快 相对分子质量 二、缓冲溶液
1．作用：在一定范围内，抵制________的__________对溶液pH的影响，维持pH____________。
2．配制：由________种缓冲剂溶解于______中配制而成，通过调节缓冲剂的____________就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。外界 酸和碱 相对稳定 1～2 水 使用比例 三、电泳
1．概念：指____________在电场的作用下发生的________的过程。
2．原理：在一定的______下，________、________等生物大分子的可解离基团会带上________或________，在________的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷________的电极移动。
3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子____________的差异及分子本身的________、________的不同，使带电分子产生不同的____________，从而实现样品中____________的分离。
4．方法：
常用的电泳方法有__________________和______________________。
测定蛋白质分子量时通常使用___________________________。带电粒子 迁移 pH 多肽 核酸 正电 负电 电场 相反 带电性质 大小 形状 迁移速度 各种分子 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胺电泳 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 四、实验操作
蛋白质的提取和分离一般分为四步：
____________、__________、________和____________。
1．样品处理
(1)红细胞的洗涤：目的是______________。采用______________离心，吸取血浆后加____________洗涤，直至上清液中没有________，表明红细胞已洗涤干净。
(2)血红蛋白的释放：在__________和________的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定 去除杂蛋白 低速短时间 生理盐水 黄色 蒸馏水 甲苯 (3)分离血红蛋白溶液：把混合液离心后，将试管中的液体用滤纸过滤，除去________________，于分液漏斗中静置片刻后，分离出下层的________________。
(4)透析：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。脂溶性沉淀层 红色透明液体 2．凝胶色谱操作
(1)凝胶色谱柱的制作：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱。
(2)凝胶色谱柱的装填。
(3)样品的加入和洗脱。其基本过程是调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。至此，血红蛋白即可得到粗分离。
3．纯度鉴定：
在鉴定的方法中，使用最多的是___________________________。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 五、操作提示
1．红细胞的洗涤：____________、____________与____________十分重要。洗涤次数过少，无法除去____________；离心速度________和时间________会使__________等一同沉淀，达不到分离效果。
2．色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在__________中膨胀，可以将加入其中的湿凝胶用______________，加速膨胀。
3．凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不能有________存在。因其能搅乱洗脱液中蛋白质的____________，降低分离效果。
4．蛋白质的分离：如果__________________________，说明色谱柱制作成功。洗涤次数 离心速度 离心时间 血浆蛋白 过高 过长 白细胞 洗脱液 沸水浴加热 气泡 洗脱次序 红色区带均匀一致地移动
红细胞破碎后混合液中含有什么成分？
提示：红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白，而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯等。1．相对分子质量较大的蛋白质，无法进入凝胶内部的通道，移动速度较慢。( )
分析：相对分子质量较大的蛋白质，无法进入凝胶内部的通道，移动速度较快。
2．在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。( )
3．电泳法分离样品只取决于蛋白质的相对分子质量大小。( )
分析：电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。判断题× √ × 4．红细胞的洗涤是为了彻底除去杂蛋白，应快速高速离心。( )
分析：红细胞的洗涤目的是除去杂蛋白，离心的目的是使红细胞沉淀，而杂蛋白等均在上清液中，应低速缓慢离心，如果高速离心则会导致白细胞等一起沉淀，起不到分离的效果。
5．纯化蛋白质的原理是根据不同蛋白质之间以及蛋白质与其他分子之间存在电荷差异进行的。( )
分析：纯化蛋白质的方法是凝胶色谱法，利用的是不同蛋白质之间以及蛋白质与其他分子之间存在分子大小的差异进行的。
6．样品处理和粗分离的目的都是除去相对分子质量较小的杂质。( )
分析：样品处理的目的是除去相对分子质量较大的杂质。× × × 7．透析袋是一种选择透过性膜。( )
8．SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的依据是蛋白质分子相对分子质量和带电性质的差异。( )
分析：SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂——十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的电荷量，消除了不同蛋白质间的电荷差别，使蛋白质分子电泳迁移率完全取决于相对分子质量的大小。√ × 新 知 解 读1．依据蛋白质的特性的差异
蛋白质的理化性质(如形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等)千差万别，由此可提取和分离各种蛋白质。
2．蛋白质的分离方法：凝胶色谱法
(1)概念：凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。知识点1 血红蛋白提取和分离的方法(2)原理：大多数凝胶由糖类化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。
3．缓冲溶液
(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。
(2)配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。4．电泳
(1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
(2)原理：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定pH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 电泳利用了除哪些性质外使样品中各种分子分离( )
A．带电性质差异 B．分子的大小
C．分子的形状 D．分子的变性温度
[解析] 电泳是指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程，带电性质不同、分子的大小和形状不同都会影响带电粒子在电场中的迁移速度。D 〔变式训练1〕 利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来( )
A．相对分子质量大的 B．溶解度高的
C．相对分子质量小的 D．所带电荷多的
[解析] 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。A 知识点2 提取和分离血红蛋白的实验操作2．凝胶色谱操作的主要步骤3．纯度鉴定——SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳
判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。鉴定的方法中，使用最多的是SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．结果分析与评价 蛋白质提取和分离分为哪几步( )
A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳
B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化
C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定
D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定
[解析] 蛋白质的提取和分离分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步。A中凝胶色谱操作及SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳为实验操作过程中的技术。C 〔变式训练2〕 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为下图中哪一个( )
[解析] 本题考查对凝胶色谱法分离蛋白质原理的理解，蛋白质相对分子质量越大，越容易通过凝胶间隙而先被洗脱，蛋白质相对分子质量越小则易进入凝胶内部而后被洗脱。B 指 点 迷 津聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的区别
1．聚丙烯酰胺凝胶电泳
(1)凝胶的格子是带有酰胺侧链的碳一碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电泳作用比较小，不易和样品相互作用。
(2)由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成不同程度的交联结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据需分离物质的分子大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性能。
(3)在一定浓度范围内聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。
(4)丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。2．琼脂糖凝胶电泳
(1)琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理。
(2)琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大，近似自由电泳，样 品扩散较自由，电流对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。
(3)琼脂糖透明，无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外灯检测及定量测定。
(4)电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。 下列关于电泳的说法，正确的是( )
A．电泳是指不带电的分子在电场的作用下发生迁移的过程
B．电泳的过程要在一定的pH下，所以一定要使用缓冲液
C．葡聚糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法
D．聚丙烯酰胺凝胶电泳中，溶液中加入SDS，电泳的迁移率主要取决于分子所带电荷的多少和分子相对分子质量的大小B [解析] 电泳的过程实质上是带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，A项错误；最常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，C项错误；聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，为了消除电荷对迁移率的影响，可在凝胶中加入SDS，SDS可以与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质之间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小，D项错误；电泳过程要在一定的pH条件下进行，所以要在溶液中加入缓冲液，以维持溶液pH的稳定，B项正确。核 心 素 养 以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是( )
A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂
B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少
C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测
D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比相对分子质量较小的杂蛋白移动慢
[思维过程] A项，思考生理盐水的作用；B项，思考选用猪成熟红细胞的目的；C项，如何监测凝胶色谱法的分离过程；D项，分离过程中，明确相对分子质量的大小与移动速度的关系。D [解析] 生理盐水为猪体细胞的等渗溶液，所以在洗涤红细胞时，使用生理盐水可维持红细胞的正常形态，A项正确；由于哺乳动物成熟的红细胞缺少细胞核和各种细胞器，所以提纯时杂蛋白相对较少，B项正确；如果凝胶色谱柱装填得很成功，分离操作也正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出，所以血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测，C项正确；当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，后洗脱出来，D项错误。
[规律总结] (1)血红蛋白的收集：利用血红蛋白的颜色，当红色的蛋白质接近色谱柱底端时，就要收集流出液。(2)其他无色蛋白质的收集：可以在实验时加入指示剂以掌握样品的移动位置，确定最佳的收集时机。问 题 释 疑教材P70“旁栏思考题”
凝胶实际上是一些微小的多孔球体，小球体内部有许多贯穿的通道。相对分子质量较大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程较短，移动速度较快；相对分子质量较小的蛋白质分子比较容易进入凝胶内部通道，通过的路程较长，移动速度较慢。因此，样品中相对分子质量较大的蛋白质先流出，相对分子质量中等的分子后流出，相对分子质量最小的分子最后流出，从而使各种相对分子质量不同的分子得以分离。如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，从而影响分离的效果。知 识 构 建
