第三节动物的克隆课件
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课件40张PPT。第三节 动物的克隆植物的克隆的技术手段有哪些？植物组织培养植物体细胞杂交动物的克隆技术： 植物的克隆技术：1.动物细胞培养2.动物细胞融合3.单克隆抗体制备4.胚胎移植5.核移植动物的克隆繁殖技术一、动物细胞的培养和克隆形成1、广义的动物组织培养(组培)包括：2、动物组织培养技术的发展：1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。 1903年，皮肤及白细胞培养于腹水及血清中，存活1个月。 1907年，美，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，观察到细胞的阿米巴运动，创立了悬浮培养法。细胞培养、组织培养和器官培养。3、动物细胞培养：⑴过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官消化处理单个细胞加培 养液制成细胞悬液细胞系细胞株原代培养传代培养←筛选①②③④⑤⑥⑦⑴过程：3、动物细胞培养：注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强3、动物细胞培养：注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞3、动物细胞培养：③细胞悬液：有利于细胞培养注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强3、动物细胞培养：②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞③细胞悬液：有利于细胞培养注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强④原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养3、动物细胞培养：②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强⑤传代培养：从1个培养瓶中转移或移植到另一 个培养瓶的培养3、动物细胞培养：③细胞悬液：有利于细胞培养④原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞⑥细胞系：原代培养的细胞在首次传代时就成 为细胞系，泛指可传代的细胞。注意事项：连续细胞系有限细胞系致瘤性不死性3、动物细胞培养：⑦细胞株：具有特殊性质的细胞系。一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。⑥细胞系：原代培养的细胞在首次传代时就成 为细胞系，泛指可传代的细胞。注意事项：连续细胞系有限细胞系致瘤性不死性连续细胞株有限细胞株3、动物细胞培养：⑵动物细胞培养条件①无菌、无毒
②营养及
激素：
③温度：
④PH=
⑤气体环境：O2和CO2（95%空气+5%CO2）葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长
因子、微量元素和动物血清等。36.5+0.57.2~7.4二氧化碳培养箱主要是为了维持PH的稳定注意：3、动物细胞培养：获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清
促生长因子蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基（半）固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目⑶植物细胞和动物细胞培养的比较3、动物细胞培养：⑷动物细胞培养技术的应用①生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰 素、单克隆抗体等。③用于检测有毒物质。②获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。④用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据。3、动物细胞培养：⑸克隆培养法：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术①定义：未经克隆的异质性细胞系纯系：克隆经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞。②结果:细胞遗传性状均一、表现的性状相似③细胞克隆的基本要求:必须保证所建成的克隆来源于单个细胞3、动物细胞培养：单细胞不如群体细胞
原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞④克隆对象的选择依据：选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。⑤提高细胞克隆形成率的措施选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱、调节PH⑥细胞克隆的用途从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系，方便科学研究3、动物细胞培养：二、动物的细胞融合技术及其应用诱导方式物理法：离心、振荡、电融合技术化学法：聚乙二醇生物法：灭活的仙台病毒1、细胞融合与细胞杂交：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通，细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞2.杂交瘤技术和单克隆抗体制备：(1).传统抗体生产方法：抗原动物体内抗体(抗体不纯)筛选单一效应B细胞不能增殖，产生大量抗体特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏。(2).单克隆抗体制备过程：设计方案：一个B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞杂交瘤细胞+化学性质单一、特异性强的抗体。特性：1、绵羊“多莉”克隆过程：三、动物的克隆繁殖细胞核移植多莉羊的培育过程1、绵羊“多莉”克隆过程：三、动物的克隆繁殖2、动物细胞全能性的表现程度： 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。
癌细胞仍能逆转为正常细胞。 无论是分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性并没有改变。3、动物难以克隆的根本原因： 基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。 一类基因是维持生存的；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。如：哺乳动物的红细胞只 有少量的线粒体。4、克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 重组细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。5、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖：胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。6、体细胞克隆成功的意义：1、证明了高度分化的细胞经过人为处理，也可以回复到类似受精卵时期的功能。2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。7、应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。细胞工程常用的技术手段小结：植物组织培养植物体细胞杂交动物的克隆： 植物的克隆：1.动物细胞培养2.动物细胞融合3.单克隆抗体5.胚胎移植4.核移植6.胚胎分割移植4、克隆动物的研究意义1.用于生物学和医学研究的实验动物
2.改良动物品种 3.治疗人类疾病
4..保护濒危动物6.世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：⑴写出 ａ、ｂ所指的细胞工程各称：ａ ｂ 。
⑵实施细胞工程ａ时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是： 。
⑶多莉面部的毛色是 ，判断依据： 。
⑷继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有 。
⑸请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义： 。 1、正常情况下哪种细胞存在着潜在的分化能力 --------------------（ ）
A．红细胞 B．神经细胞
C．效应细胞毒T细胞 D．B淋巴细胞2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ ）
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植 D.动物细胞培养 AD3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （ ）
A.容易产生各种变异
B．具有更强的全能性 C.取材十分方便
D．分裂增殖的能力强D 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（ ）
A.培养基不同；
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培
养成植株。A核移植细胞融合接触抑制 (contact inhibition) 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。Normal cell 培养器皿动物细胞培养瓶内表面为什么
要光滑、无毒？
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞3、动物细胞培养：③细胞悬液：有利于细胞培养注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强3、动物细胞培养：②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞③细胞悬液：有利于细胞培养注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强④原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养3、动物细胞培养：②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞注意事项：①：这些细胞生命力旺盛，分裂能力强⑤传代培养：从1个培养瓶中转移或移植到另一 个培养瓶的培养3、动物细胞培养：③细胞悬液：有利于细胞培养④原代培养：从机体取出后立即进行的细胞培养②机械消化和胰酶消化：
胰蛋白酶的作用：使动物细胞间的 胶原纤维和细胞外其他成分酶解，获得单个细胞⑥细胞系：原代培养的细胞在首次传代时就成 为细胞系，泛指可传代的细胞。注意事项：连续细胞系有限细胞系致瘤性不死性3、动物细胞培养：⑦细胞株：具有特殊性质的细胞系。一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。⑥细胞系：原代培养的细胞在首次传代时就成 为细胞系，泛指可传代的细胞。注意事项：连续细胞系有限细胞系致瘤性不死性连续细胞株有限细胞株3、动物细胞培养：⑵动物细胞培养条件①无菌、无毒
②营养及
激素：
③温度：
④PH=
⑤气体环境：O2和CO2（95%空气+5%CO2）葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长
因子、微量元素和动物血清等。36.5+0.57.2~7.4二氧化碳培养箱主要是为了维持PH的稳定注意：3、动物细胞培养：获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清
促生长因子蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基（半）固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目⑶植物细胞和动物细胞培养的比较3、动物细胞培养：⑷动物细胞培养技术的应用①生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰 素、单克隆抗体等。③用于检测有毒物质。②获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。④用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据。3、动物细胞培养：⑸克隆培养法：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术①定义：未经克隆的异质性细胞系纯系：克隆经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞。②结果:细胞遗传性状均一、表现的性状相似③细胞克隆的基本要求:必须保证所建成的克隆来源于单个细胞3、动物细胞培养：单细胞不如群体细胞
原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞④克隆对象的选择依据：选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。⑤提高细胞克隆形成率的措施选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱、调节PH⑥细胞克隆的用途从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系，方便科学研究3、动物细胞培养：二、动物的细胞融合技术及其应用诱导方式物理法：离心、振荡、电融合技术化学法：聚乙二醇生物法：灭活的仙台病毒1、细胞融合与细胞杂交：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通，细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞2.杂交瘤技术和单克隆抗体制备：(1).传统抗体生产方法：抗原动物体内抗体(抗体不纯)筛选单一效应B细胞不能增殖，产生大量抗体特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏。(2).单克隆抗体制备过程：设计方案：一个B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞杂交瘤细胞+化学性质单一、特异性强的抗体。特性：1、绵羊“多莉”克隆过程：三、动物的克隆繁殖细胞核移植多莉羊的培育过程1、绵羊“多莉”克隆过程：三、动物的克隆繁殖2、动物细胞全能性的表现程度： 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。
癌细胞仍能逆转为正常细胞。 无论是分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性并没有改变。3、动物难以克隆的根本原因： 基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。 一类基因是维持生存的；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。如：哺乳动物的红细胞只 有少量的线粒体。4、克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 重组细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。5、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖：胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。6、体细胞克隆成功的意义：1、证明了高度分化的细胞经过人为处理，也可以回复到类似受精卵时期的功能。2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。7、应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。细胞工程常用的技术手段小结：植物组织培养植物体细胞杂交动物的克隆： 植物的克隆：1.动物细胞培养2.动物细胞融合3.单克隆抗体5.胚胎移植4.核移植6.胚胎分割移植4、克隆动物的研究意义1.用于生物学和医学研究的实验动物
2.改良动物品种 3.治疗人类疾病
4..保护濒危动物6.世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：⑴写出 ａ、ｂ所指的细胞工程各称：ａ ｂ 。
⑵实施细胞工程ａ时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是： 。
⑶多莉面部的毛色是 ，判断依据： 。
⑷继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有 。
⑸请举例说明克隆绵羊培育成功的实际意义： 。 1、正常情况下哪种细胞存在着潜在的分化能力 --------------------（ ）
A．红细胞 B．神经细胞
C．效应细胞毒T细胞 D．B淋巴细胞2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ ）
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植 D.动物细胞培养 AD3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （ ）
A.容易产生各种变异
B．具有更强的全能性 C.取材十分方便
D．分裂增殖的能力强D 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（ ）
A.培养基不同；
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；
D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培
养成植株。A核移植细胞融合接触抑制 (contact inhibition) 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。Normal cell 培养器皿动物细胞培养瓶内表面为什么
要光滑、无毒？