课件68张PPT。血红蛋白的提取与分离2 用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？二实验操作 用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。二实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：1. 样品处理样品处理——粗分离
——纯化——纯度鉴定二实验操作血液有哪些成分？血液血 浆水分其他 物质血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血 细
胞白细胞血小板红细胞
(最多)血红蛋白
(90％)两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团血液有哪些成分？血红蛋白①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色五倍体积①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色五倍体积生理盐水初次离心后的结果3次洗涤后的结果 加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放 加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放原血液甲苯磁力搅拌器蒸馏水 将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层:(3)分离血红蛋白溶液有机溶剂 无色透明的甲苯层脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液 红色透明液体红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物分离血红蛋白溶液(4)透析 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。除去样品中分子量较小的杂质透析袋磷酸缓冲液7.0缓冲液(4)透析1利用透析袋透析2. 凝胶色谱制作1）凝胶色谱柱的制作 ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。②底塞的制作：
②底塞的制作：
打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
③顶塞的制作：④组装：⑤安装其他附属结构。 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。注 意2）凝胶色谱柱填料的处理2）凝胶色谱柱填料的处理计算凝胶量配置凝胶悬浮液装填洗涤平衡 凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意装配好的凝胶柱 在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？思考 在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。思考 你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考3）样品加入与洗脱50cm高3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高②加透析样品注意正确的加样操作：
①不要触及破坏凝胶面
②贴壁加样
③使吸管管口沿管壁环绕移动注 意3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高③样品渗入凝胶床：④洗脱：
⑤收集：②加透析样品收集得到的纯化后的蛋白AVSEQ08.DAT 1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三实验结果分析与评价 观察你处理的血液样品离心后是否分层？如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三实验结果分析与评价 2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 1.在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？思考 让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持结构和功能。 1.在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？思考 2.与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？思考 2.与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？ 血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 思考3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？ 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是
A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质
B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质
C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质
D.二者根本无法比较 1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是
A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质
B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质
C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质
D.二者根本无法比较√ 2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于
A. 电荷的多少
B. 分子的大小
C. 肽链的多少
D. 分子形状的差异 2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于
A. 电荷的多少
B. 分子的大小
C. 肽链的多少
D. 分子形状的差异√ 3. 在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是
A. 调节pH
B. 维持红细胞的能量供应
C. 防止微生物生长
D. 防止血液凝固 3. 在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是
A. 调节pH
B. 维持红细胞的能量供应
C. 防止微生物生长
D. 防止血液凝固√ 4. 一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是
A. 4、2
B. 4、4
C. 2、1
D. 1、1 4. 一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是
A. 4、2
B. 4、4
C. 2、1
D. 1、1√ 5. 记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是： 5. 记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是：有机溶剂——脂类物质——血红蛋白溶液——红细胞破碎物沉淀课件38张PPT。血红蛋白的提取与分离22）凝胶色谱柱填料的处理计算凝胶量配置凝胶悬浮液装填洗涤平衡 凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意装配好的凝胶柱 在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？思考 在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。思考 你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考3）样品加入与洗脱50cm高3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高②加透析样品注意正确的加样操作：
①不要触及破坏凝胶面
②贴壁加样
③使吸管管口沿管壁环绕移动注 意3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高③样品渗入凝胶床：④洗脱：
⑤收集：②加透析样品收集得到的纯化后的蛋白AVSEQ08.DAT 1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三实验结果分析与评价 观察你处理的血液样品离心后是否分层？如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三实验结果分析与评价 2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 1.在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？思考 让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持结构和功能。 1.在分离血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？思考 2.与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？思考 2.与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？ 血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作。 思考3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？3.你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？ 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是
A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质
B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质
C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质
D.二者根本无法比较 1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是
A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质
B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质
C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质
D.二者根本无法比较√ 2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于
A. 电荷的多少
B. 分子的大小
C. 肽链的多少
D. 分子形状的差异 2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于
A. 电荷的多少
B. 分子的大小
C. 肽链的多少
D. 分子形状的差异√ 3. 在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是
A. 调节pH
B. 维持红细胞的能量供应
C. 防止微生物生长
D. 防止血液凝固 3. 在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是
A. 调节pH
B. 维持红细胞的能量供应
C. 防止微生物生长
D. 防止血液凝固√ 4. 一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是
A. 4、2
B. 4、4
C. 2、1
D. 1、1 4. 一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是
A. 4、2
B. 4、4
C. 2、1
D. 1、1√ 5. 记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是： 5. 记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是：有机溶剂——脂类物质——血红蛋白溶液——红细胞破碎物沉淀课件142张PPT。血红蛋白的提取与分离一基础知识㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：一基础知识㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶： 一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）一基础知识㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：1、凝胶： 一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛）2、概念： 根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。一基础知识凝胶色谱法分离蛋白质的原理3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快3、原理：
当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。4、具体过程相对分子质量较小较长较慢相对分子质量较大凝胶外部较短较快凝胶色谱柱的装置示意图缓冲溶液操作压㈡ 缓冲溶液：1、概念： 在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：1、概念： 在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：2、作用：
能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。1、概念： 在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：2、作用：
能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱1、概念： 在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。㈡ 缓冲溶液：2、作用：
能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。外界的酸或碱PH值3、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。3、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。1－23、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。1－2使用比例3、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。1－2使用比例在不同PH范围内说出人体血液中缓冲对。思考说出人体血液中缓冲对。NaH2PO4 / Na2HPO4H2CO3 / NaHCO3思考 在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？思考 在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性）思考㈢电泳：㈢电泳：1、概念：
指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团一定的PH2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电一定的PH2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极一定的PH2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异一定的PH2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小一定的PH2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小形状的一定的PH2、原理：
许多重要的生物大分子，如( )等都具有( ) 在( )下，这些基团会带上( ) 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其( ) 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子( )以及分子本身( )、( )的不同使带电分子产生不同的( )，从而实现样品中各种分子的分离。多肽、核酸可解离的基团正电或负电所带电荷相反的电极带电性质的差异大小形状的迁移速度一定的PH 聚丙稀酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N′-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂(过硫酸铵）和催化剂（四甲基已二胺）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶 测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳分类： 聚丙稀酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N′-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂(过硫酸铵）和催化剂（四甲基已二胺）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。 测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳分类： 聚丙稀酰胺凝胶：是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N′-亚甲基双丙烯酰胺在引发剂(过硫酸铵）和催化剂（四甲基已二胺）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。 测定（ ）通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳蛋白质相对分子质量分类： 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带静电荷的多少以及分子的大小等因素。 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。SDS 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。SDS单条肽链的分子量 为了消除静电荷对迁移率的影响可以在凝胶中加入( )。SDS能使蛋白质发生完全变性。由几条肽链组成的蛋白质复合体在SDS的作用下会解聚成单条肽链，因此测定的结果只是( )。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于( )。SDS单条肽链的分子量分子的大小电泳检测PCR结果电泳检测PCR结果琼脂糖凝胶电泳电泳检测PCR结果琼脂糖凝胶电泳AVSEQ08.DAT ⑴用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？二实验操作 ⑴用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。二实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：1. 样品处理样品处理——粗分离
——纯化——纯度鉴定二实验操作血液血 浆水分其他 物质血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血 细
胞白细胞血小板红细胞
(最多)血红蛋白
(90％)两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁红素基团⑵血液有哪些成分？血红蛋白 每个肽链环绕( ),此基团可携带( ).血红蛋白因含有( )而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。 每个肽链环绕( ),此基团可携带( ).血红蛋白因含有( )而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。一个亚铁血红素基团 每个肽链环绕( ),此基团可携带( ).血红蛋白因含有( )而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。一个亚铁血红素基团一分子氧或一分子二氧化碳 每个肽链环绕( ),此基团可携带( ).血红蛋白因含有( )而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。一个亚铁血红素基团一分子氧或一分子二氧化碳血红素①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色烧杯①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色烧杯五倍体积①目的：去除( )
②方法：
( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入( )，再加入用( )的( )质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色烧杯五倍体积生理盐水⑥重复4、5步骤( )次，直至上清液中已没有( )，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。⑤低速离心（低速短时间）⑥重复4、5步骤( )次，直至上清液中已没有( )，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。三⑤低速离心（低速短时间）⑥重复4、5步骤( )次，直至上清液中已没有( )，表明洗涤干净。利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少。三黄色⑤低速离心（低速短时间）初次离心后的结果3次洗涤后的结果 加( )到( )体积，再加40％体积的( )( 溶解细胞膜) ，置于( )上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放原血液甲苯磁力搅拌器蒸馏水 将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层:(3)分离血红蛋白溶液第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层无色透明第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层无色透明脂溶性物质第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层无色透明脂溶性物质白第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层无色透明脂溶性物质白血红蛋白第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层无色透明脂溶性物质白血红蛋白红色透明第1层（最上层）：
（ ）甲苯层第2层（中上层）：
（ ）的沉淀层，
（ ）色薄层固体第3层（中下层）：
（ ）的水溶液层
（ ）的液体 第4层（最下层）：
其它杂质（ ）的沉淀层无色透明脂溶性物质白血红蛋白红色透明暗红色红细胞的洗涤有机溶剂 无色透明的甲苯层脂类物质 白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液 红色透明液体红细胞破碎物沉淀 暗红色沉淀物分离血红蛋白溶液 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。(4)透析1 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。透析袋(4)透析1 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。透析袋磷酸缓冲液(4)透析1 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。透析袋磷酸缓冲液7.0(4)透析1 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。除去样品中分子量较小的杂质透析袋磷酸缓冲液7.0(4)透析1 取( )ml的血红蛋白溶液装入( )中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的( )中，pH为( )，透析12小时，目的是( )或用于更换样品中的( )。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。除去样品中分子量较小的杂质透析袋磷酸缓冲液7.0缓冲液(4)透析1利用透析袋透析2. 凝胶色谱制作1）凝胶色谱柱的制作 ①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。②底塞的制作：
打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔；
b、在橡皮塞顶部切出锅底状的( )，在0.5ml的( )头部切下( )长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。②底塞的制作：
打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔；
b、在橡皮塞顶部切出锅底状的( )，在0.5ml的( )头部切下( )长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。凹穴②底塞的制作：
打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔；
b、在橡皮塞顶部切出锅底状的( )，在0.5ml的( )头部切下( )长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。凹穴移液管②底塞的制作：
打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔；
b、在橡皮塞顶部切出锅底状的( )，在0.5ml的( )头部切下( )长的一段，插入橡皮塞孔内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。凹穴移液管5cm 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。注 意c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面100目c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面100目上部c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面100目上部出口部位c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面100目上部出口部位尼龙管c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面100目上部出口部位尼龙管打开与关闭c.剪尼龙网小圆片覆盖在( )上，用( )的尼龙纱将橡皮塞( )包好，插到玻璃管一端。
d.色谱柱下端用移液头部做( )，连接一细的( )，并用螺旋夹控制尼龙管的( )，另一端放入收集( )的收集器内。橡皮塞的凹面100目上部出口部位尼龙管打开与关闭色谱流出液⑤安装其他附属结构。③顶塞的制作： 插入安装了玻璃管的橡皮塞④组装： 将上述三者按相应位置组装成一个整体。2）凝胶色谱柱填料的处理(1)凝胶的选择：
( )(G-75)
“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。
75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5克。2）凝胶色谱柱填料的处理(1)凝胶的选择：
( )(G-75)
“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。
75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5克。交联葡聚糖凝胶（2）方法：
配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于( )中充分溶胀后，配成( )。（2）方法：
配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于( )中充分溶胀后，配成( )。蒸馏水（2）方法：
配置凝胶悬浮液：计算并称取一定量的凝胶浸泡于( )中充分溶胀后，配成( )。蒸馏水凝胶悬浮液①固定：将色谱柱处置固定在支架上②装填：
将( )一次性的缓慢倒入( )内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。（3）凝胶色谱柱的装填方法①固定：将色谱柱处置固定在支架上②装填：
将( )一次性的缓慢倒入( )内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。（3）凝胶色谱柱的装填方法凝胶悬浮液①固定：将色谱柱处置固定在支架上②装填：
将( )一次性的缓慢倒入( )内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。（3）凝胶色谱柱的装填方法凝胶悬浮液色谱柱 凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意③洗涤平衡
装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在( )高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液(pH为7.0)充分( )12小时。③洗涤平衡
装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在( )高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液(pH为7.0)充分( )12小时。50cm③洗涤平衡
装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在( )高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液(pH为7.0)充分( )12小时。洗涤平衡50cm 液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意装配好的凝胶柱答案见教参P47页，请打出最后一段。 你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考邓老师，我没有教参3）样品加入与洗脱①加样前打开下端出口，使柱内凝胶面上的( )缓慢下降到与( )平齐，关闭出口。50cm高3）样品加入与洗脱①加样前打开下端出口，使柱内凝胶面上的( )缓慢下降到与( )平齐，关闭出口。缓冲液50cm高3）样品加入与洗脱①加样前打开下端出口，使柱内凝胶面上的( )缓慢下降到与( )平齐，关闭出口。缓冲液凝胶面50cm高②加透析样品①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集吸管①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集吸管透析液①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集吸管透析液顶端①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集吸管透析液顶端样品完全进凝胶层①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集吸管透析液顶端样品完全进凝胶层红色的蛋白质①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用( )将1ml( )的样品加到色谱柱的( )
③样品渗入凝胶床：( )
④洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待( )接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每( )收集一试管连续收集吸管透析液顶端样品完全进凝胶层5ml红色的蛋白质注意正确的加样操作：
①不要触及破坏凝胶面
②贴壁加样
③使吸管管口沿管壁环绕移动注 意收集得到的纯化后的蛋白
