(共31张PPT)
动物细胞培养
动物细胞融合
单克隆抗体技术
动物细胞核移植
动物细胞工程常用技术
其他动物细胞工程技术的基础
如果一个大面积烧伤的病人,自体皮肤有限,其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤?
一、动物细胞培养
动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.
细胞增殖
2、原理
1、概念
细胞悬浮液
胰蛋白酶
10代细胞
原代培养
传代培养
无限传代
单个细胞
加培养液
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
传代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。
细胞株:
细胞系:
细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在
培养条件下可
以无限制传代,
这种传代细胞
为细胞系。
剪碎
接触抑制
1、无菌、无毒的环境
2、营养(与体内基本相同)
3、温度和PH
4、气体环境:
保证细胞顺利的生长增殖
无菌处理、添加一定量的抗生素,定期更换培养液
葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、动物血清、血浆等。
36.5+(-)0.5度, 7.2~7.4
O2:细胞代谢所必须
CO2:主要维持培养液的PH
(95%空气和5% CO2 )
5、动物细胞培养的条件
6、动物细胞培养技术的应用
生产蛋白生物制品:病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等
健康细胞培养:如获得大量自身的皮肤细胞,用于植皮。
用于检测有毒物质
用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据
将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体。
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
核移植
(难度高)
受体细胞:MⅡ期的卵母细胞
细胞分化程度低,恢复全能性容易
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1、概念:
2、分类:
动物细胞的全能性特点
动物细胞特点:
分化潜能变窄:随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能变窄,这是指整体细胞而言。
细胞核仍具有全能性:细胞核,它含有保持物种遗传性所需的全套基因,而且并没有因细胞分化而丢失基因,因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性
3、过程
供体细胞(供核)
细胞培养
体细胞
卵母细胞
( MⅡ中期:供质)
去核
无核卵母细胞
注入
细胞融合
杂种细胞
构建重组胚胎
胚胎移植
代孕母体
新个体(与母体基本相同的个体)
杂种细胞
核移植
胚胎移植
思考:你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么?
克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA,即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。
此外,即便动物的遗传基础完全相同,还与所处环境有很大关系.
细胞质
细胞核
细胞核移植
4、多莉羊的培育过程
6、体细胞核移植技术存在的问题
1、成功率低
2、存在健康问题
(如异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等)
3、克隆动物食品的安全性也存在争议
4、克隆动物的各个环节也有待改进
温故而知新:
哪种植物细胞工程技术可以突破不同生物之间的生殖隔离,克服远缘杂交不亲和的障碍,培育出新的作物类型?
植物体细胞杂交技术
你能回忆出植物体细胞杂交的过程吗?
杂合的原生质体
杂种细胞
愈伤组织
杂种植株
回顾:植物体细胞杂交过程
动物细胞融合过程
实例1:自然条件
一.动物细胞融合
实例2:人工诱导
1.定义:
指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
2.结果:
形成含有两个或多个细胞遗传物质的单核杂交细胞
3.融合原理:
细胞膜的流动性
4.诱导方式:
物理法:离心、振动、电激
化学法:聚乙二醇(PEG)
生物法:灭活的病毒
一.动物细胞融合
动物细胞融合过程
问题:诱导融合后的细胞一定具有双方的遗传信息吗?
不一定,诱导A、B两种细胞融合,融合后可能有A、B未融合细胞及AA、AB、BB等多种细胞,因此细胞融合后需要进行筛选。
5.过程:
动物细胞A
动物细胞B
诱导 融合 筛选
杂交细胞AB
膜融合 质融合
核融合
一.动物细胞融合
6.意义:
广泛应用多个领域:研究细胞遗传、细胞免疫、
肿瘤和生物新品种培育等
重要用途:制备单克隆抗体
突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交
(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。
7.应用:
任务二 阅读教材P52小字,了解动物细胞融合技术的发展简史
二.单克隆抗体
1.图中是哪种免疫?
2.抗体由哪种细胞产生?
3.抗体主要分布在哪里?
4.阅读教材52页,了解传统的抗体生产方法及缺陷是什么?
体液免疫
主要在血清
产量低、纯度低、特异性差
抗体与相应抗原特异性结合
抗体1
抗体2
抗体3
怎样才能获得大量的单一抗体?
体外培养时,一个B淋巴细胞不能无限增殖
科学家发现:1.体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上
2.每个B细胞只分泌一种特异性的抗体
单
克 隆
抗 体
克隆
一个
B淋巴细胞
细胞群
抗体
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞(癌细胞)能无限增殖
杂交细胞
动物细胞培养
1.原理
动物细胞融合
单克隆
抗体
既能迅速大量增殖,
又能产生专一抗体
杂交瘤细胞
2.概念:用单个B淋巴细胞进行无性增殖(扩增),也就是通过克隆,形成细胞群,这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体 ——单克隆抗体
BB 、B瘤 、瘤瘤 (B、瘤)
(一选)选择性培养基:只有杂交瘤细胞才能存活
获得产生相应抗体的B细胞
(二选):选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞
√
体外培养
小鼠腹腔内培养
杂交瘤细胞特点:既能产生特异性抗体,又能大量增殖。
小鼠腹水中提取
细胞培养液提取
2、制备过程
主要涉及技术
动物细胞融合、动物细胞培养
原理
细胞膜的流动性、细胞增殖
单克隆抗体的优点
特异性强
灵敏度高
可大量制备
杂交瘤细胞特点
既能大量繁殖,又能产生专一抗体
单克隆抗体制备过程
3、单抗隆抗体的应用
(1)作为诊断试剂
用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定,纯度高、特异性强,具有准确、高效、简易、快速的优点。
原理:抗原-抗体杂交
新冠肺炎的检测?
试剂盒?新冠病毒?
单抗 抗原
(2)定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
利用同位素标记单抗,在特定组织成像
单抗
放射性同位素
(3)用于治疗疾病和运载药物
①特异性强、灵敏度高
生物导弹——单克隆抗体+抗癌药物
单抗导向,药物为弹头
②疗效高、毒副作用小
作用位置准确,不损伤正常的细胞 ,癌症的靶向治疗