人教版选修1 专题2 微生物的培养与应用（答案带解析）

人教版选修1 专题2 微生物的培养与应用
一、单选题
1.将大肠杆菌接种到适宜的细菌培养基上，加盖后，以不同的方式处理，并放置在不同的温度环境中，培养24小时后，所得结果如表：

根据上述实验结果所作出的判断，错误的是(　　)
A． 编号a和f比较可知，有大肠杆菌培养基的表面会变浑浊
B． 根据编号b和c的观察结果，可知抗生素Y比抗生素X的杀菌能力强
C． 将编号e和a的结果比较可知，0 ℃的环境不适合大肠杆菌生长
D． 若揭开编号f的盖子，24小时后培养基表面会出现浑浊
2.脲酶能够将尿素分解为氨和C02，其活性位点上含有两个镍离子，在大豆、刀豆种子中含量较高，土壤中的某些细菌也能够分泌脲酶。实验室从土壤中分离得到了能够分解尿素的细菌M，并分别研究了培养液中Ni2＋、Mn2＋和尿素浓度对细菌M脲酶产量的影响(说明：研究某一项时其他条件相同且适宜)，结果如下表。下列说法正确的是(　　)

A． 所有脲酶都在核糖体上合成且在内质网上加工使其与镍结合才具有活性
B． 实验表明培养液中Ni2＋和Mn2＋对脲酶的影响为低浓度促进，高浓度抑制
C． 细菌M合成脲酶需要尿素诱导，尿素的最适诱导浓度在0.4%－0.8%之间
D． 凝胶色谱法分离脲酶时，脲酶比其他小分子蛋白质在凝胶柱中移动更慢
3.下列关于分离纤维素分解菌的实验的叙述，错误的是(　　)
A． 经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
B． 选择培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少
C． 经稀释培养后，用刚果红染色
D． 对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上
4.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是(　　)
A． 操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
B． 将称好的牛肉膏用玻璃棒从称量纸上挑取放入烧杯
C． 待培养基冷却至40 ℃左右时进行倒平板
D． 培养基倒入培养皿后，立即将平板倒过来放置
5.加工橘子罐头，采用酸碱处理脱去中果皮(橘络)，会产生严重污染。目前使用酶解法去除橘络，可减少污染。下列生长在特定环境中的4类微生物，可以大量产生所用酶的有(　　)
①生长在葡萄上的酵母菌　②生长在酸奶中的乳酸菌　③生长在棉籽壳上的平菇　④生长在木屑上的木霉
A． ①②
B． ③④
C． ①③
D． ②④
6.下列关于倒平板的叙述，错误的是(　　)
A． 右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近
B． 倒平板整个过程应在火焰旁进行
C． 完全打开培养皿皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖
D． 为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置
7.下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是(　　)
A． 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B． 取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上
C． 将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时
D． 确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
8.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是(　　)
A． 平板上的一个菌落就是一个细菌
B． 菌落中的细菌数是固定的
C． 此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D． 此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同
9.焦化厂活性污泥中富含难降解的有机物苯甲酰肼，是当前焦化行业环保治理的难点。某同学通过查阅资料发现可通过微生物降解方法处理焦化厂污染物。下列有关分析错误的是(　　)

A． 应该从农田土壤中筛选目的菌
B． 配制以苯甲酰肼作为唯一碳源的选择培养基进行筛选
C． 利用平板划线法可以对初步筛选出的目的菌进行纯化
D． 逐步提高培养基中苯甲酰肼的浓度可以得到能高效降解污染物的优质菌株
10.下列生物能分解纤维素的是(　　)
①人　②兔　③牛　④蘑菇　⑤纤维杆菌
A． ①②③④⑤
B． ②③⑤
C． ②③④⑤
D． ③⑤
11.三个培养皿中分别加入10ml不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36小时后，计算菌落数，结果如下表．下列选项正确的是(　　)

A． 该实验采用的是液体培养基
B． 该实验采用平板划线法接种
C． Ⅰ和Ⅲ对照；说明大肠杆菌的生长不需要生长因子
D． Ⅱ和Ⅲ对照，说明大肠杆菌的生长需要糖类
12.MS培养基与微生物培养基相比，需要提供的是(　　)
A． 无机营养
B． 有机营养
C． 甘氨酸和维生素
D． 植物激素
13.在分离分解纤维素的微生物的实验中，为了判断选择培养基是否起到了对纤维素分解菌的选择作用，需要设置的对照是(　　)
A． 未接种的只有纤维素为唯一碳源的培养基
B． 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C． 接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
D． 接种了的只有纤维素为唯一碳源的培养基
14.下列关于实验方法或原理的叙述正确的是(　　)
A． 实验操作过程中漂洗的目的均为洗掉浮色便于观察
B． 可用洋葱鳞片叶为实验材料提取胡萝卜素和叶黄素
C． 各种实验中均需要设置空白对照组，确保单一变量
D． 生长在麦麸上的黑曲霉或生长在木屑上的木霉均可分解纤维素
15.下列有关微生物培养与应用的叙述，正确的是(　　)
A． 同一种物质可能既作为碳源又作为氮源，所有碳源都能提供能量
B． 接种前需对培养皿、接种环进行灭菌处理，对操作者的双手等进行消毒处理
C． 培养不同的微生物，用同种成分的培养基即可
D． 微生物生长不可缺少的微量有机物有氨基酸、维生素和蛋白胨等
16.下列关于平菇(所需碳源为纤维素)培养的操作程序，正确的是(　　)
A． 配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养
B． 配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养
C． 配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养
D． 配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养
17.使用液体选择培养基培养纤维素分解菌的目的是(　　)
①用液体选择培养基可获得大量纤维素分解菌　②用液体培养基便于稀释涂布平板　③纤维素分解菌只能在液体培养基中生长　④用液体培养基可鉴别纤维素分解菌
A． ①②
B． ①③
C． ②④
D． ③④
18.以下分离纤维素分解菌的实验过程中，操作有误的是(　　)
A． 选择倒平板时就加入刚果红的染色法，需用1 mol/L NaCl溶液处理15分钟
B． 选择培养时用液体培养基，并振荡培养1～2 d
C． 经稀释涂布培养后，鉴定的过程需要用到鉴别培养基
D． 为确定得到纤维素分解菌，需要进行发酵产纤维素酶的实验
19.要将能分解纤维素的细菌从土壤中分离出来，应将它们接种在(　　)
A． 加入伊红—美蓝的鉴别培养基上
B． 含有蛋白胨的固体培养基上
C． 只含纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上
D． 含四大营养要素的培养基上
20.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出(　　)
①大肠杆菌　②霉菌　③放线菌　④固氮细菌
A． ④②③
B． ①②③
C． ①③④
D． ③④①


二、非选择题
21.回答下列有关微生物的问题，下表为一种培养液的配方，试根据表中内容作答。

(1)若用于培养微生物，该培养液中有________类营养物质。
(2)若用来培养固氮微生物则应除去的成分是______，应加入的物质是____________。若用来培养金黄色葡萄球菌并观察其菌落的形态，还应加入____________。
(3)用来鉴定饮水中的大肠杆菌是否超标，除32题已加入的物质外，还应加入________________。如呈现________________现象，则有大肠杆菌。
(4)在分离分解尿素细菌的实验时，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一个同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种实验结果差异产生的原因可能有________(填序号)。
①由于土样不同 ②由于培养基污染
③由于操作失误 ④没有设置对照
22.我国现己成为世界上第三大生物乙醇生产国和应用国。根据原料不同，生物乙醇可分为以淀粉类物质为原料的第1代生物乙醇和以秸秆等纤维素为原料的第2代生物乙醇。两者的生产过程都需要多种微生物参与，且在较高温度下反应能提高产率。
(1)生产第1代生物乙醇时，首先利用微生物或酶将淀粉材料彻底水解为________________，才能利用。酵母菌在___________条件下将其转化为乙醇。
(2)生产第2代生物乙醇时需要纤维素分解菌，为此，小明同学设计了两种培养基。甲培养基含纤维素粉5 g、酵母膏0.5 g、水解酪素0.5 g、无机盐适量；乙培养基含CMC－NalOg、 酵母膏1 g、琼脂15 g、土豆汁100 mL、无机盐适量。
①在上述__________(填“甲”或“乙”)种培养基上能够筛选出纤维素分解菌的单菌落，另外一种培养基的作用是_____________。
②为防止杂菌污染，除要对培养基进行____________灭菌外，还需要对操作者的双手进行清洁和___________。
③筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供_________________条件。
23.有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如下图甲、乙所示。


(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、__________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是__________________。
(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和________，这些植物激素一般需要事先单独配置成______保存备用。
(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是________。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________，___________________。
(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是______________________________________________，该实验设计是否合理？为什么？_________________________________________________。
24.在生物技术上常利用大肠杆菌制成“工程菌”。某生物小组的同学，利用实验室提供的大肠杆菌品系及其他必要材料，对该品系大肠杆菌进行了培养。请分析回答下列问题：
(1)微生物在生长过程中对各种成分的需求量不同，故制备培养基时各成分要有合适的__________。培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为微生物提供__________________。
(2)配制培养基时，各种成分在溶化后分装前必须调节_____，接种前要进行_____处理。
(3)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是______________________________________。
(4)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板_________放置，这样做的目的是防止皿盖上的水珠落入__________而造成污染。
(5)甲同学采用平板划线法接种，获得单个菌落后继续筛选，在每次划线之前都要灼烧__________，他这样做的目的是__________________________________________________。在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？_________，为什么？________________。
(6)实验结束时，使用过的培养基应进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是_______。
25.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下所示，实验步骤

如下图所示。请分析回答下列问题；

将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL
(1) 培养基中加入尿素的目的是_________，这种培养基属于____________培养基。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的___________和___________，实验需要振荡培养，原因是_______________。
(3)转为固体培养时，常采用_________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。
(4)下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。需要灭菌的是：________；需要消毒的是：________。(填序号)



答案解析
1.【答案】B
【解析】a、f的区别在于是否接种了大肠杆菌，有大肠杆菌培养基的表面会变浑浊，A正确；将含有抗生素的纸片覆盖在大肠杆菌的培养基上，可根据培养基表面的浑浊程度判定此种抗生素对大肠杆菌的杀菌能力，可知抗生素X的杀菌能力强于抗生素Y的杀菌能力，B错误；e、a形成对照，其变量是温度，可知0 ℃不适合大肠杆菌生长，C正确；f暴露在空气中后，会自然接种菌种，形成菌落，使培养基表面出现浑浊，D正确。
2.【答案】C
【解析】由题意可知，土壤中的某些细菌也能够分泌脲酶，由于细菌是原核生物，故不存在内质网和高尔基体，A错误；由图表可知，Ni2＋和Mn2＋对脲酶的影响促进作用，低浓度促进作用随浓度的增加逐渐增强，高浓度促进作用减弱，B错误；凝胶色谱法分离脲酶时，脲酶比其他小分子蛋白质在凝胶柱中移动更快，D错误。
3.【答案】A
【解析】经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。
4.【答案】A
【解析】制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A正确；将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热，B正确；待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，C正确；待平板冷却凝固约5～10min后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，D错误．
5.【答案】B
【解析】橘络的主要成分是纤维素，要将其分解需用纤维素酶，棉籽壳、木屑的主要成分也是纤维素，生长在它们上的平菇、木霉肯定能产生纤维素酶，所以可以利用。
6.【答案】C
【解析】C项应是用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全打开，以防杂菌污染。
7.【答案】D
【解析】本题考查的是土壤微生物总数的计数，所以培养所使用的培养基就应该是标准培养基，并要经过高压蒸汽灭菌处理；涂布时要对样本的水溶液进行稀释，一般选取104、105、106倍的土壤稀释液各0.1 mL进行涂布，为了检查平板培养基是否制备合格，要同时把一培养基接种少量无菌水，以作空白对照；培养一段时间后，如果平板上菌落个数在30～300之间，即可把该组所有平板的菌落计数，然后取其平均值，即可计算出土壤细菌的总数。而D项是菌落数在300以上，故D项错。
8.【答案】C
【解析】用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，由于一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，所以通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，故C项正确；由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而样品稀释度无论多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上，所以此方法只能估算出样品中的活菌数，统计的菌落数只是比较接近活菌的实际数，而不一定与活菌的实际数相同，D项错误；菌落是指单个或少数细菌或真菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，所以A、B项错误。
9.【答案】A
【解析】能降解焦化厂污染物的细菌生物应生活在有焦化厂污染物的环境周围，故应从焦化厂活性污泥(焦化厂污染物)中筛选，A错误；培养基中应用苯甲酰肼为唯一的碳源，作为选择培养基，B正确；利用平板划线法可以对初步筛选出的目的菌进行纯化，C正确；若要选出高效降解污染物的优质菌株，可采用逐步提高苯甲酰肼浓度逐步筛选，培养出的目的菌经稀释涂布分离后得到单一菌落为纯化的细菌，可用做鉴定，D正确。
10.【答案】C
【解析】兔、牛为食草动物，其肠道内有分解纤维素的微生物，蘑菇、纤维杆菌能分泌纤维素酶分解纤维素；而人不能消化纤维素。
11.【答案】D
【解析】该培养基加入了琼脂，故为固体培养基，A错误；对微生物进行计数，应采用稀释涂布平板法接种，B错误；Ⅰ与Ⅲ对照，说明大肠杆菌生长需要葡萄糖，但不能证明是否需要生长因子，C错误；Ⅱ和Ⅲ对照，自变量是有无葡萄糖，说明大肠杆菌的生长需要碳源如葡萄糖，D正确。
12.【答案】D
【解析】MS培养基与微生物培养基都含有无机营养、有机营养、甘氨酸和维生素，区别是MS培养基中常常添加植物激素，微生物培养基中不需要，故ABC错误，D正确．
13.【答案】C
【解析】
14.【答案】D
【解析】有丝分裂试验中漂洗的目的是洗去解离液，便于染色，A错误；洋葱鳞片叶中无胡萝卜素和叶黄素，B错误；有单一变量才能起到对照的作用，但不一定是空白的，必须是单一的变量，C错误；麦麸中含有大量纤维素，生长在麦麸上的黑曲霉，能以麦麸中的纤维素为碳源，因此可以产生纤维素酶，D正确。
15.【答案】B
【解析】同一种物质可能既作为碳源又作为氮源，如牛肉膏，但自养型微生物利用的无机碳源不提供能量，A错误；培养皿、接种环等需要进行严格的灭菌处理，而操作者的双手需要进行消毒处理，B正确；培养不同的微生物，所用培养基的成分往往也有所不同，C错误；微生物生长不可缺少的微量有机物主要包括氨基酸、维生素等，D错误。
16.【答案】D
【解析】培养微生物的正确操作流程应该为：配制培养基→灭菌→接种→培养，平菇的碳源为纤维素，所以富含纤维素的棉子壳适于用作平菇的培养基。
17.【答案】A
【解析】使用液体选择培养基培养纤维素分解菌，一方面可以获得大量纤维素分解菌，另一方面便于稀释涂布平板，①②正确；纤维素分解菌也可以在固体培养基上生长，③错误；鉴别纤维素分解菌使用的是固体培养基，④错误。因此，正确的是①②，故选A。
18.【答案】A
【解析】若在倒平板时加入刚果红，不需用1 mol/L NaCl溶液洗去浮色，A错误；选择培养时用液体培养基，并振荡培养1～2 d，B正确；经稀释涂布培养后，鉴定的过程需要用到鉴别培养基，C正确；为确定得到纤维素分解菌，需要进行发酵产纤维素酶的实验，D正确。
19.【答案】C
【解析】要把纤维素分解菌从土壤中分离出来，就要选择使纤维素分解菌能生存，但其他微生物不能生存的选择培养基进行培养，其选择条件是以纤维素粉作为唯一碳源，在该培养基上，只有能分解纤维素的细菌能够生存，其他微生物因不能利用纤维素而不能生存。
20.【答案】A
【解析】固氮细菌不需要专门添加氮源，在缺乏氮源的培养基上可从多种细菌中分离得到自生固氮细菌④；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长，从而可以分离出霉菌②；10%酚可以抑制细菌和霉菌，但放线菌③可生存，故选A。
21.【答案】(1)五
(2)(NH4)HCO3　 有机物　必需的矿质元素不含琼脂
(3)伊红、美蓝　紫色
(4)①②③
【解析】(1)碳酸氢铵提供碳源、氮源； 磷酸二氢钾、硫酸钙、氯化亚铁提供无机盐；维生素提供生长因子、水；若用于培养微生物，该培养液中有5类营养物质。
(2)固氮微生物能够固定氮元素，培养基中不用提供氮源；若用来培养固氮微生物则应除去的成分是(NH4)HCO3，应加入的物质是有机物。
(3)大肠杆菌代谢产物与伊红和美蓝结合，使聚落呈深紫色，并带有金属光泽。
(4)土样不同、培养基污染、操作失误均可能导致计数误差。
22.【答案】(1)葡萄糖　无氧
(2)①乙　增加纤维素分解菌的浓度
②高压蒸汽　消毒　③高温
【解析】(1)第1代生物乙醇是以淀粉类物质为原料，淀粉彻底水解的产物是葡萄糖，酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸，将葡萄糖转化为乙醇。
(2)①甲培养基为纤维素分解菌的选择培养基，乙培养基为鉴别纤维素分解菌的培养基，富含CMC－Na(羧甲基纤维素钠)，因此乙种培养基上能够筛选出纤维素分解菌的单菌落，另外一种培养基的作用是增加纤维素分解菌的浓度。②为防止杂菌污染，除要对培养基进行高压蒸汽灭菌，还需要对操作者的双手进行清洁和消毒。
③依题意“在较高温度下反应能提高产率”可知：筛选符合生产要求的高产率菌种还需要提供高温条件。
23.【答案】(1)氮源和无机盐　只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖
(2)细胞分裂素　母液
(3)接种环　接种环灼烧后未冷却　划线未从第一区域末端开始
(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质　不合理　缺少空白对照
【解析】(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质包括碳源、水、氮源和无机盐四类；选择培养基只允许特定种类的微生物生长，又能抑制或阻止其他种类微生物生长，因而必须以苯磺隆为唯一碳源，只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖。
(2)植物组织培养过程中启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素是生长素和细胞分裂素；为了避免每次配制时都要称量，可将植物激素先单独配制成母液保存备用。
(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是接种环(或接种针)；接种环在平板内的每一次划线前，都要先灼烧灭菌冷却后再划线，而且要从上一次划线末端而非空白处划线。第二划线区域只有第一条线无菌落，而其他的划线上却有菌落，很可能是因为接种环在灼烧后末冷却，第一次划线时将菌种烫死，而后接种环冷却，能正常划线；也可能是第一次划线时划线未从第一区域末端开始，使接种环上无菌种。
(4)图乙实验为取得菌种培养液过滤后离心上清液中加入蛋白酶溶液，测得其对苯磺隆的降解率。蛋白酶是用于水解上清液中的某蛋白质的，由此可判定实验假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质，若用蛋白酶处理后，可使该蛋白质分解，苯磺隆降解率下降，则假设成立；但是尚需设置不加入蛋白酶的空白对照组实验，否则没有说服力，因而不合理。
24.【答案】(1)浓度和比例　氮源和碳源、碳源　(2)pH　灭菌　(3)高压蒸汽灭菌　(4)倒过来　培养基　(5)接种环　杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种　需要　防止接种环上残留的菌种对环境造成污染或感染操作者　(6)防止污染环境
【解析】(1)培养基中各成分要有合适的浓度和比例，保证微生物有充足的营养，又不会因外界浓度过大而失水。淀粉提供碳源，而蛋白胨含C、N等元素，既能提供碳源，又能提供氮源。(2)各种成分溶化后分装前要调节pH，接种前对培养基灭菌，防止杂菌污染。(3)培养基灭菌用高压蒸汽灭菌法。(4)倒平板时，平板冷凝后应倒置，否则皿盖上的水珠会落入培养基造成污染。(5)每次划线前都要灼烧接种环，将上次划线残留的菌种杀死，使细菌尽快分散成单个。操作结束后灼烧接种环是为了防止残留的菌种污染环境或感染操作者。(6)使用过的培养基要彻底灭菌后再倒掉，否则培养基中的微生物会污染环境。
25.【答案】(8分)(1)筛选目的菌　选择
(2)尿素　葡萄糖　为目的菌提供氧气
(3)涂布平板(划线法)
(4)①和②　③
【解析】(1) 依题意，能分解尿素的细菌才能在以尿素为唯一氮源的培养基中生长，而不能分解尿素的细菌因缺乏氮源则无法生长繁殖，据此可推知，加入尿素的目的是筛选能高效降解尿素的细菌(目的菌)；从功能上看该培养基是选择培养基。
(2) “目的菌”生长所需的氮源来自培养基中的尿素，所需的碳源来自培养基中的葡萄糖。由于分解尿素的细菌的代谢类型是异养需氧型，因此实验中的振荡培养，可为目的菌提供氧气。
(3) 欲获得单菌落，常采用涂布平板法(划线法)进行接种。
(4)在该实验中，培养细菌用的培养基与培养皿、玻棒、试管、锥形瓶和吸管，即①和②都需要灭菌，而实验操作者的双手，即③则需要消毒。