人教版高中生物选修1 专题2 第1节 课题1 微生物的实验室培养 （共39张ppt）

(共39张PPT)
大肠杆菌
葡萄球菌

导入新课
在缤彩纷呈的生物界，微生物似乎显得过于微小与沉寂。然而，它们在自然界却作用非凡。微生物有哪些种类呢？
放线菌
真菌
青霉菌
黑曲霉
酵母菌
想一想
这些肉眼看不到的微生物是怎样获得呢？
课题1
微生物的实验室培养
专题2 微生物的培养与应用
一、基础知识
二、实验操作
三、结果分析与评价
四、课题延伸
了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。

教学目标
无菌技术的操作。
熟练掌握无菌技术的操作。
1. 课题重点
2. 课题难点

重点与难点
一、培养基
1、培养基的定义：
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质。
培养基一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、水。
注意
碳水化合物—糖类（葡萄糖、果糖、蔗糖等）
有机氮源—花生饼粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨等
无机氮源—氨水、铵盐和硝酸盐。
归纳
2、培养基分类：
（1）液体培养基：配置成的液体状态的基质。
（2）固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂
琼脂配制成的固体状态的基质。
你知道固体培养基的来历吗？
为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在橘子皮或土豆上一样。最初，德国医生罗伯特·科赫此试着用明胶作培养基的凝固剂。 但是，人们很快发现，明胶在20 ℃以上就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。而大多数细菌的培养温度都不低于25 ℃。科赫的同事Walter Hesse发现琼脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。
二、无菌技术
1、什么是无菌技术
无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
注意事项
对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
2、消毒与灭菌
灭菌是指使用强烈的物理或化学因素杀死体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死或除去部分微生物，对于芽孢或孢子则不起作用。
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
思考题
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
3、常用的消毒与灭菌的方法
（1）消毒方法 煮沸消毒法
（2）灭菌方法
A 灼烧灭菌
B 干热灭菌?
C 高压蒸气灭菌 ?
灭菌锅
三、实验安排
本实验采用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，实验过程分为两个阶段：
1、制备培养基
2、纯化大肠杆菌
大肠杆菌
1、制备培养基
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方
牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g 琼脂 20.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL
（1）计算
根据下列培养基配方比例，计算配置100mL培养基时，各成分的用量。
（2）称量

注意
牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。
（3）溶化
（4）灭菌
在压力为100kPa，温度为121℃条件下，灭菌15-30min。
（5）倒平板
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
讨论

1. 培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
2. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
3. 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4. 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
2、纯化大肠杆菌
（1）平板划线法
平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到有一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
不同的平板划线法
培养基表面的单菌落
1. 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

议一议
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2. 在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3. 在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

议一议
（2）稀释涂布法
稀释涂布法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

稀释涂布法
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。
讨论
四、结果分析与评价
1、培养基的制作是否合格
2、接种操作是否符合无菌要求
3、是否进行了及时细致地观察与记录
五、课题延伸
菌种的保藏
斜面保藏
目的：保持菌种的纯净
方法：
斜面保藏法
甘油管保藏法
微生物的培养

基础
知识

实验操作
结果分析与评价
培养基

定义：
分类：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养物质
固体培养基
液体培养基

无菌技术
培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法

定义：
消毒与灭菌
常用灭菌方法
制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
纯化大肠杆菌

课堂小结