人教版生物选修1高中5.1：DNA的粗提取与鉴定(共38张PPT)

(共38张PPT)
一、基础知识
（一）提取DNA的方法
1.提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
2.生物大分子
主要指蛋白质、酶和核酸
3.提取DNA的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
4.DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反
讨论：
①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，
DNA的溶解度最小？
DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？
在NaCl溶液浓度低于0.14
mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；
在0.14
mol/L时，DNA溶解度最小；
当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。
当氯化钠的物质的量浓度为
2
mol／L时，DNA的溶解度最大.
浓度为
0．14
mol／L时，DNA的溶解度最低。
利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。
利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离
DNA在酒精溶液中的溶解性
5.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性.
①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响
6.DNA的鉴定
DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂
二、(DNA的粗提取与鉴定的)实验设计
（一）实验材料的选取
1.材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。
（从中选取2～3种实验材料）
2.原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大
动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水
，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1.动物细胞
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA
讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜
2、植物细胞
讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？
（三）去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离
（四）
DNA的析出与鉴定
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95
％）
，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水
1.DNA的析出
2.
DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L
的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml
试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色
（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取
(五）实验案例。
②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长
1.鸡血细胞做实验材料的原因
①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得
2.实验原理
3.实验材料和用具：
4.课前准备鸡血细胞液
取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内，精置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。）
①过程
②柠檬酸钠作用
防止血液凝固
③作用机理
柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液就不会凝固
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液
④注意事项
讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液中的上清液？
答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是血细胞，离心后除去的上清液是血浆
②溶解细胞核内的DNA
③析出含DNA的粘稠物
讨论：加入蒸馏水的目的？
降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出
5.方法步骤
①提取鸡血细胞的细胞核物质
④滤取含DNA的粘稠物
⑤将DNA的粘稠物再溶解
⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液
⑦提取含杂质较少的DNA
⑧
DNA的鉴定
讨论：
答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破
（1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会有什么变化？
（2）用玻璃棒搅拌有什么意义？
答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA
（3）滤去的是什么物质？得到的是什么？
答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA
答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中
讨论：
（2）观察丝状物呈什么颜色？
答：白色
（1）为什么要加50mL的冷酒精？
讨论：
答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色
（2）这一鉴定结果说明什么问题？
（1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？
答：提取出的丝状物是DNA
（3）
DNA的直径约为20×10-10
m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？
答：
DNA分子直径只有2
nm。丝状物是多个DNA子聚在一起形成的
答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”
6.讨论：
①两次蒸馏水
第一次：细胞吸水胀破
第一步
第二次：使
DNA黏稠物析出
第三步
（1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？
过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层
②三次过滤
第一次：
DNA存在于滤液里
第一步
第二次：
DNA被留在纱布上
第四步第三次：
DNA存在于滤液里
第六步
③两次析出
第一次：用0.14
mol／L
的NaCI溶液含杂质多
第三步
第二次：用冷却的95％的酒精
第七步
④六次搅拌：第一、二、三、五、七步
其中除第八步外，其余均要朝一个方向搅拌，在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，这样才能保证得到完整的DNA
（2）为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
（二）案例二：以菜花为实验材料进行DNA的粗提取
1、课前准备
将新鲜菜花和体积分数为95％的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24
h
2、提取DNA的具体步骤
①取材：称取30
g菜花，去梗取花，切碎
②研磨：将碎菜花放入研钵中，倒入10
mL研磨液，充分研磨10
min
③过滤：在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000
r/min的转速，离心2～5
min，取上清液放入烧杯中)。在4
℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
④沉淀：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95％的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要直插到烧杯底部)。沉淀3～5
min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上
观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备
四、结果分析与评价
（一）是否提取出了DNA
本实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质
（二）分析DNA中的杂质
（三）不同实验方法的比较
对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好
五、课题延伸。
课堂小结
一、基础知识。
提取DNA的方法。
1.提取思路。
2.生物大分子。3.提取DNA基本思路。
4.DNA的不溶解性。5.DNA耐受性。
6.DNA的鉴定。
二、实验设计。
（一）实验材料的选取。
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液。
（三）去除滤液中的杂质。
1.利用DNA在不同浓度的食盐溶液中溶解度不同。
2.在滤液中加入嫩肉粉。（木瓜蛋白酶分解蛋白质。
3.将滤液放在60—75度恒温水浴箱保温10—15分钟。
（四）DNA的析出与鉴定。
（五）实验案例。
三、操作提示。
四、结果评价与分析。
五、课题延伸。