人教版选修一高中生物5.1《DNA的粗提取与鉴定》PPT(22张PPT)

(共22张PPT)
一、基础知识
（一）提取DNA的方法
提取生物大分子的基本思路是什么？
DNA主要与哪些生物大分子分离？
方法1：根据DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，提取DNA
1、DNA在0.14
mol／L
NaCl溶液中溶解度最低而此时蛋白质的溶解度最高，DNA形成沉淀析出。
2、DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，将DNA与蛋白质进一步分离。
3、蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响。
4、大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，DNA在80°C以上才会变性（蛋白质变性后溶解度降低而产生沉淀）
5、洗涤剂瓦解细胞膜（脂质），对DNA没有影响（在植物材料中提取DNA使用）
小结：粗提取DNA的方法
DNA溶解性
DNA耐受性
（二）鉴定提取物——DNA的方法：
1、DNA遇二苯胺（沸水浴）呈蓝色
2、甲基绿与DNA结合，呈绿色
自主学习（实验思路）
（一）DNA从哪提取？（用什么方法破碎细胞而DNA不受破坏）
（二）怎样将DNA与细胞中其他生物大分子分离？
（三）怎样鉴定我们提取的DNA？
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
1、实验材料的选取
材料：新鲜的鸡血
原则上只要含DNA的生物材料都可以，但是选取DNA含量相对较高的生物组织，成功率更大。（人血红细胞？）
原因：①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得
②鸡血细胞极易吸水胀破
（一）DNA从哪提取
从鸡血中获取鸡血细胞
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液
（1）破碎动物细胞的方法——
（2）破碎植物细胞的方法——
渗透吸水胀破
洗涤剂+食盐搅拌研磨
？
？
不充分？
洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放
食
盐——NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中
研磨不充分——使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少
（一）DNA从哪提取
破碎细胞，获取含DNA的滤液
滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？
可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。
阅读课本55页的三个方案
（二）怎样将DNA与细胞中其他生物大分子分离
方案一：调节NaCl的浓度，反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质。
　　原理：高浓度的盐溶液除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，除去低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物
去除滤液中的杂质，获取DNA的粗提取物
方案二：直接在滤液中加入嫰肉粉（图5-3），反应10～15min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质
方案三：将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min，注意严格控制温度范围
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案二利用了酶的专一性；
方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。方案三利用了DNA的稳定性。
白色丝状物
2mol/L
NaCl
+
4ml二苯胺
实验组：
水浴加热
蓝色
等量2mol/L
NaCl
+
4ml二苯胺
水浴加热
对照组：
无蓝色
（三）怎样鉴定我们提取的DNA？
2
2
答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”
讨论：
两次蒸馏水
第一次：细胞吸水胀破
第二次：使
DNA黏稠物析出
（1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？
三次过滤
第一次：
DNA存在于滤液里
第二次：
DNA被留在纱布上
第三次：
DNA存在于滤液里
两次析出
第一次：用0.14
mol／L
的NaCI溶
第二次：用冷却的95％的酒精
六次搅拌
朝一个方向搅拌，搅动轻缓
1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是（
）
A
.防止凝血
B.
加快DNA析出
C
.加快DNA溶解
D.加速凝血
2、DNA的溶解度最低时，NaCl的物质的量浓度为（
）
A
.
2mol/l
B.
0.1mol/l
C
.
0.14mol/l
D.
0.015mol/l
3、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（
）
A
.加快DNA溶解的速度
B.
加快溶解杂质的速度
C
.减小DNA的溶解度，加快DNA析出
D.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出
4、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水,在这个过程中DNA的溶解度变化情况分别是
A
减小;减小
B
增大;增大
C
先减小后增大
D增大;
减小
5、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的办法是
A
加蒸馏水
B
加矿泉水
C
加清水
D
加生理盐水