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专题22
微生物的利用
一、单选题
1.（2020·浙江选考）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（??
）
A.?利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B.?配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C.?酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D.?适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
2.（2020·新高考I）野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。将甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N单独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。某同学实验过程中发现，将M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本培养基上，培养后均有菌落出现。该同学对这些菌落出现原因的分析，不合理的是（??
）
A.?操作过程中出现杂菌污染
B.?M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸
C.?混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质
D.?混合培养过程中，菌株中已突变的基因再次发生突变
3.（2020·江苏）为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（??
）
A.?倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B.?图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C.?该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D.?菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
4.（2020·浙江选考）细菌内某种物质在酶的作用下转变为另一种物质的过程如图所示，其中甲～戊代表生长必需的不同物质，①～⑤代表不同的酶。野生型细菌只要在培养基中添加甲就能生长，而突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长。下列叙述正确的是（??
）
A.?突变型细菌缺乏酶①、②、③?????????????????????????????B.?酶④与乙结合后不会改变酶④的形状
C.?酶②能催化乙转变为丙，也能催化丙转变为丁????D.?若丙→戊的反应受阻，突变型细菌也能生长
5.（2019·江苏）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是（???
）
A.?筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B.?可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C.?在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D.?用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值
6.（2019·北京）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。（???
）
有关本实验的叙述，错误的是
A.?培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质????????B.?筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C.?以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外????????D.?H/C
值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
7.（2019·江苏）下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是（???
）
A.?培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B.?接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C.?接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D.?菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
8.（2020·天津）阅读下列材料，回答下列小题。
甜瓣子是豆瓣酱的重要成分，风味受蚕豆蛋白分解产生的氨基酸影响，也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物影响。其生产工艺如下图所示。
某研究团队对加盐水后的发酵阶段的传统工艺（盐度15%，温度37
℃，发酵30天）进行了改良，改良后甜瓣子风味得以提升。新工艺参数如下表所示。
时期
时段（天）
盐度（%）
温度（℃）
前期
0~12
6
12
中期
12~16
6
37
后期
16~30
15
37
两种工艺的结果比较见下图。
（1）下列关于本研究的实验方法与原理的描述，错误的是（??
）
A.发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累
B.蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源
C.温度与盐度都影响微生物的生长繁殖
D.定期取样，使用平板划线法统计活细菌总数
（2）下列对实验结果的分析，错误的是（??
）
A.新工艺中期活霉菌总数下降由温度升高导致
B.新工艺后期活细菌总数下降由温度、盐度均升高导致
C.新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快，是因为温度升高提高了蛋白酶活性
D.新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数高和氨基酸终产量高均有关
9.（2018·全国Ⅰ卷）某大肠杆菌能在基本培养基上生长，其突变体M和N均不能在基本培养基上生长，但M可在添加了氨基酸甲的基本培养基上生长，N可在添加了氨基酸乙的基本培养基上生长，将M和N在同时添加氨基酸甲和乙的基本培养基中混合培养一段时间后；再将菌体接种在基本培养基平板上，发现长出了大肠杆菌（X）的菌落。据此判断，下列说法不合理的是（??
）
A.?突变体M催化合成氨基酸甲所需酶的活性丧失??????????B.?突变体M和N都是由于基因发生突变而得来的
C.?突变体M的RNA与突变体N混合培养能得到X??????????D.?突变体M和N在混合培养期间发生了DNA转移
10.（2020·海淀模拟）下列关于生物技术实践的叙述，不正确的是（??
）
A.?用含有脲酶的培养基筛选分解尿素的细菌???????????B.?在切成小块的豆腐上接种毛霉制作腐乳
C.?在坛口用水封闭的泡菜坛中发酵制作泡菜???????????D.?无菌条件下培养离体植物叶片获得愈伤组织
11.（2020·浦东模拟）某种细菌可以在含蛋白质、牛肉膏、氯化钠和微量维生素的培养基中生长，其中微量维生素对该菌的培养而言属于（???
）
A.?碳源?????????????????????????????????B.?氮源?????????????????????????????????C.?无机盐?????????????????????????????????D.?生长因子
12.（2020·深圳模拟）某种细菌（Z）能依赖其细胞膜上的H+载体将胞内的H+排出，该过程需要消耗ATP。研究者得到该细菌H+载体结构改变的一种突变体（T），并比较了Z、T分别纯培养时细菌数量和培养液pH的变化规律，结果如图所示。下列相关分析不正确的是（??
）
A.?T菌群呈S型增长，培养约20小时后达到K值????????B.?T细菌可能是H+载体功能降低的一种突变体
C.?Z细菌将胞内H+排到胞外的过程属于主动运输????D.?Z细菌生长的培养液最适pH一定小于4.0
13.（2020·西城模拟）菌种
M
和菌种
N
在发酵工程应用上具有不同的优越性，为了获得具有它们共同优良性状的融合菌，进行了下图所示的实验。已知菌种M
为组氨酸依赖（组氨酸合成相关基因突变为B-），菌种
N
为色氨酸依赖（色氨酸合成相关基因突变为
A-），下列分析错误的是（???
）
A.?菌种M
和N
可通过人工诱变和选择性培养筛选获得
B.?用
PEG
诱导融合之前需要去除菌种
M
和N
的细胞壁
C.?在培养基X
中添加组氨酸和色氨酸以筛选出杂种融合菌
D.?从培养基X
中分离出的杂种融合菌P
对两种氨基酸均不依赖
14.（2020·温州模拟）下列关于无菌或灭菌的相关叙述，错误的是（??
）
A.?在分离并计数以尿素为氮源的土壤微生物实验中，取土样的工具必须是无菌的
B.?蔬菜在开水中浸1min入坛与添加白酒可确保泡菜腌制的无菌环境
C.?制作斜面时，装有培养基的试管先后经灭菌、斜靠和冷却过程
D.?生根后的试管苗在移栽锻炼时，所用的蛭石无需灭菌
15.（2020·日照模拟）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术在生产、生活和科研实践中有着广泛的应用。有关无菌技术的叙述错误的是（??
）
A.?饮用前的鲜牛奶或使用后的液体培养基均可用高温瞬时消毒法进行处理
B.?用干热灭菌箱对带棉塞的试管灭菌时，可用报纸包裹严密后再进行灭菌处理
C.?用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，开始阶段需打开排气阀排尽锅内冷空气
D.?用紫外线对空气进行灭菌时，适量喷洒石碳酸等化学抑菌剂以加强灭菌效果
16.（2020·青浦模拟）如图表示培养和分离某种细菌的部分操作步骤，下列叙述正确的是（ ）
A.?步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B.?步骤②接种环火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线
C.?步骤③三个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D.?步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数
17.（2020高三下·长沙模拟）菌株甲为大肠杆菌的甲硫氨酸（Met）营养缺陷型，菌株乙为苏氨酸（Thr）营养缺陷型，分别受a、b基因控制，在基本培养基（M）上不能生长，但可在添加相应氨基酸的培养基上生长。将上述两菌株的菌液混合一段时间后，从中筛选出4种菌株，4种菌株在不同培养基上的培养结果见表。
菌株
培养基
M
M+Met
M+Thr
M+Met+Thr
菌株Ⅰ
－
＋
－
＋
菌株Ⅱ
－
－
－
＋
菌株Ⅲ
－
－
＋
＋
菌株Ⅳ
＋
＋
＋
＋
注：“＋”表示能生长，“-”表示不能生长
下列分析不合理的是（???
）
A.?菌株甲可能缺少合成甲硫氨酸的酶??????????????????????B.?菌株Ⅰ和菌株Ⅲ分别为菌株甲和菌株乙
C.?菌株Ⅱ和菌株Ⅳ的基因型可能分别为ab、AB??????D.?菌株Ⅳ一定来自菌株甲或菌株乙的基因突变
18.（2020·大兴模拟）幽门螺杆菌是急慢性胃炎和胃溃疡的主要致病菌，它能将热稳定性低的尿素分解成氨气等物质。若从携带者胃黏膜样本中分离幽门螺杆菌，相关实验步骤和方法不合理的是（??
）
A.?配制培养基时，先加入尿素然后再灭菌???????????????B.?应设置未接种的培养基，作为对照实验
C.?可用稀释涂布平板法统计样本中活菌数量???????????D.?可利用酚红指示剂鉴定幽门螺杆菌的菌落
19.（2020·山东模拟）为探究适宜环境下，固定容积的培养液中酵母菌种群数量变化规律，研究者进行了相关实验。下列叙述错误的是（???
）
A.?利用血细胞计数板计数时需要振荡均匀后取样????B.?生长旺盛期的培养液上层比下层酵母菌数量多
C.?涂布平板法计数可用接种等量无菌水组做对照????D.?涂布平板法统计的酵母菌数目会比实际值略大
20.（2020·浙江模拟）下列关于无菌操作的叙述正确的是（???
）
A.?制作棉塞的棉花可以选择用脱脂棉
B.?配制培养基时，需在酒精灯火焰旁操作
C.?G6玻璃砂漏斗使用后需用lmol/L的HCl浸泡
D.?利用高压蒸气灭菌法对含有葡萄糖的培养基灭菌时，需将压强调整为500g/cm2
，
其他条件不变
21.（2020·南京模拟）下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是（???
）
A.?接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育检测
B.?接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落
C.?以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌
D.?利用刚果红培养基上是否形成透明圈可筛选纤维素分解菌
22.（2019·宁波模拟）酵母菌按照不同分裂方式分为多种类型，其中一种为芽殖酵母，是以出芽方式进行分裂（如右图所示）。其中纺锤体的两端为纺锤体极体。芽殖酵母细胞分裂过程属于封闭式，即在细胞分裂时，细胞核核膜不解体。下列叙述错误的是（???
）
A.?与细胞核分裂直接相关的纺锤体位于细胞核内
B.?芽殖酵母为不均等分裂，由芽体逐渐形成的子细胞体积较小
C.?芽殖酵母计数时，若芽体体积超过细胞体积的
1/3则算独立个体
D.?根据芽体的大小比例可粗略估计细胞所处的时期
23.（2019·城中模拟）下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是（?????
）
A.?在配制步骤②、③的培养基时，应先调pH值后髙压蒸汽灭菌
B.?步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落
C.?步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
D.?步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力
24.（2017·苏州模拟）下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述中，正确的是（ ）
A.?利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离和计数
B.?对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记
C.?倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
D.?将好氧型菌株接种到培养液中需静置培养，防止培养液沾染试管壁引发污染
25.（2019·崇明模拟）通过微生物的实验室培养，筛选获得具有高效降解土霉素能力的菌株。表为各菌株在以土霉素为唯一碳源的培养基中的生长情况，应选择进一步培养的菌株是（???
）
A.?T1????????????????????????????????????????B.?T2????????????????????????????????????????C.?T4????????????????????????????????????????D.?ZC-3
二、综合题
26.（2020·浙江选考）回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
Ⅰ.柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值________的处理效果好。③对不同处理进行________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
Ⅱ.加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的________下降。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的________。
Ⅱ.结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用________的转基因方法。
Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间________，且不经历________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
Ⅳ.与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如________（A.提高蔗糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大量元素浓度D.不添加琼脂）。
27.（2019·全国Ⅱ卷）物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是________。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即________。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明________。
28.（2018·全国Ⅲ卷）回答下列与酵母菌有关的问题：
（1）分离培养酵母菌通常使用________（填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，该培养基应采用________灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是________。
（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）；若进行厌氧培养，可促进________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）。
（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是________。
29.（2018·全国Ⅰ卷）将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。
回答下列问题:
（1）M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制________的生长,加入了链霉素的培养基属于________培养基。
（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有________(答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有________(答出两点即可)。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是________该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是________。
（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板,统计的偏落数分别是110，140和149,取平均值133；
乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。
有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是________。
30.（2020·遂宁模拟）某研究者拟从植食性动物的粪便中筛选高产纤维素酶菌株，并对菌株进行鉴定和产酶条件的优化，以期为纤维素酶制剂研制提供基础。据此回答下列问题：
（1）从植食性动物粪便中能分离出纤维素分解菌的原因是________
；而纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素酶是由________组成。
（2）在对菌株进行鉴定和产酶条件的优化过程中，需将富集培养后植食性动物的粪便混合菌适当稀释后涂布于以________作唯一碳源的选择培养基上，倒置放入37℃恒温培养箱中培养24h，在系列稀释操作中，用移液管使菌液与水充分混匀时所进行的操作是________。
（3）筛选获得纤维素酶高活性菌株3株，分别命名为A，B，C。在相同培养基上培养一段时间后，测得3种菌株的菌落直径与刚果红透明圈直径，结果如下表：
菌株编码
菌落直径（d）cm
刚果红透明圈直径（D）cm
D/d
A
3.53
5.53
1.57
B
2.96
6.72
2.27
C
1.86
4.86
2.61
由表可知，________菌株纤维素酶的活性最强。
（4）若将纤维素分解菌细胞内的酶提取出来后，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，与相对分子质量较小的蛋白质相比，其移动速度________（填“较快”或“较慢”或“基本相同”），原因是________。
答案解析部分
一、单选题
1.A
【考点】微生物的分离和培养，果酒果醋的制作
【解析】A、利用尿素固体培养基，由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生长繁殖，而保留利用尿素的微生物，并非杀死，A错误；
B、不同的微生物所需的pH不同，所以配置培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；
C、酵母菌不能直接利用淀粉，应用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化，再用酵母菌发酵得到糯米酒，C正确；
D、醋化醋杆菌在有氧条件下利用酒精产生醋酸，D正确。
故答案为：A。
【分析】培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能选择分解尿素的微生物。
2.B
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A.操作过程当中出现杂菌污染，基本培养基上生长的为杂菌，A合理；
B.若M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸形成的菌落，需要MN混合在一起才能生存，而该菌落来自于单个细菌形成的菌落，单个细菌不可能混合培养的细菌。B项不合理。
C.M、N菌株混合培养后在基本培养基上可以生存。推测可能是混合培养过程当中，菌株间发生了基因交流，获得了对方的遗传物质，C合理；
D.基因突变是不定向的，在混合培养过程中，菌株当中已突变的基因也可能再次发生突变得到可在基本培养基上生存的野生型大肠杆菌，D合理。
故答案为：B。
【分析】甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N由于各自不能够合成甲硫氨酸和苏氨酸导致无法在基本培养基上生长，而两者要单独在基本培养基中存活需要各自添加甲硫氨酸、苏氨酸。
3.B
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、倒平板后无需晃动，A错误；
B、Ⅰ区、Ⅱ区没有出现单菌落，说明细菌数量太多，故应从Ⅲ区挑取单菌落，B正确；
C、出现单菌落即达到了菌种纯化的目的，C错误；
D、刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解
后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，D错误。
故答案为：B。
【分析】分析平板结果可知，采用的接种方法为平板划线法，且划线顺序是Ⅰ区、Ⅱ区、Ⅲ区，可以看到Ⅲ区中出现了单菌落。
4.D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长，说明缺乏合成乙、丁所必需的的酶，即酶①、③，A错误；
B、酶与底物结合后会改变酶的形状，反应完成后，酶分子又恢复原状，B错误；
C、酶具有专一性，酶②能催化乙转变为丙，酶③能催化丙转变为丁，C错误；???
D、若丙→戊的反应受阻，乙可以合成戊，所以突变型细菌也能生长，D正确。
故答案为：D。
【分析】分析题意可知，野生型细菌体内含有①～⑤这五种酶，所以只要在培养基中添加甲就能合成生长需要的乙、丙、丁、戊这四种物质；而突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长，说明缺乏合成相应物质所必需的的酶。
5.A
【考点】纤维素分解菌的分离
【解析】A.应该用以纤维素为唯一碳源的培养基筛选纤维素分解菌，只有纤维素分解菌能够存活，A符合题意；
B.木材、秸秆中富含纤维素，故可以从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌，B不符合题意；
C.用以纤维素为唯一碳源的培养基筛选纤维素分解菌后，为了确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，C不符合题意；
D.用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆，可以把纤维素分解成葡萄糖，提高饲用价值，D不符合题意
故答案为：A
【分析】（1）纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖．
（2）常用的接种工具是接种环，操作时采用灼烧的方法灭菌．
（3）刚果红与纤维素反应呈红色，纤维素分解菌产生的纤维素酶会将纤维素分解而不能与刚果红染液呈红色，在菌落周围会出现透明圈．为了确定是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验．纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定．
6.C
【考点】微生物的分离和培养，培养基概述及其分类
【解析】A、培养基的化学成分都应该含有水、无机盐、碳源、氮源，有些含有生长因子，所以题中培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质，A不符合题意；
B、筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布，B不符合题意；
C、以上两种细菌周围经稀碘液处理均有透明圈说明两种细菌都能将淀粉酶分泌到细胞外分解淀粉，C符合题意；
D、H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异，H/C值越大分解淀粉能力越强，D不符合题意。
故答案为：C
【分析】1.平板划线法和稀释涂布平板法作用不完全相同：平板划线法和稀释涂布平板法都能纯化细菌，但平板划线法不易分离出单个菌落，不能计数；稀释涂布平板法能使单菌落分离，便于计数。
2.
培养基的化学成分都应该含有水、无机盐、碳源、氮源，有些含有生长因子。
3.碘液遇淀粉变蓝，淀粉酶可以催化淀粉水解。
7.A
【考点】微生物的分离和培养，培养基概述及其分类，灭菌技术
【解析】A接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A符合题意；
B为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B不符合题意；
C接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C不符合题意；
D分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法，后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，D不符合题意
故答案为：A
【分析】一、无菌操作要求
1.
接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。
2.
进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，
工作前经紫外线消毒后使用。
3.
接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。
4.
进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。
5.
从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。
6.
接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取
出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。
7.
接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆
的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。
8.
吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
二、细菌培养方法
（1）平板划线操作：
①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。
②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。
③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。
④等平板凝固后，将平板倒置。
（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。
8.（1）D
（2）B
【考点】微生物的分离和培养，微生物发酵及其应用
【解析】（1）A、制曲过程中会有微生物的积累，是发酵开始阶段微生物的主要来源，A正确；
B、蚕豆瓣中有很多有机物，可以提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源，B正确；
C、观察新工艺各个时期的活霉菌总数和活细菌总数的变化，从前期到中期，盐度不变温度升高，活霉菌总数下降，说明温度影响微生物的生长繁殖；从中期到后期，盐度升高温度不变，活细菌总数下降，说明盐度影响微生物的生长繁殖，C正确；
D、平板划线法不能用来计数，统计活细菌总数要用稀释涂布平板法，D错误。
故答案为：D。（2）A、分析新工艺的参数和结果，从前期到中期，盐度不变，温度升高，活霉菌总数下降，说明中期活霉菌总数下降是由温度升高导致，A正确；
B、新工艺从中期到后期，盐度升高，温度不变，活细菌总数下降，说明活细菌总数下降是由盐度升高导致的，B错误；
C、新工艺从前期到中期，盐度不变，温度升高，因此，中期氨基酸产生速率较前期末加快是由于温度升高提高了蛋白酶的活性，C正确；
D、比较两种工艺的结果，新工艺前、中期活微生物总数和氨基酸终产量都比传统工艺高，因此，新工艺中甜瓣子风味有所提升，D正确。
故答案为：B。
【分析】1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、新工艺前期至中期，盐度不变，温度升高，中期至后期，温度保持不变，盐度增加；传统工艺中盐度和温度一直不变。分析两种工艺的结果，新工艺在前期和中期，活霉菌总数和活细菌总数均高于传统工艺，且最终的氨基酸态氮含量高于传统工艺。
9.C
【考点】培养基对微生物的选择作用
【解析】A、依题意，突变体M和N分别在添加了氨基酸甲和氨基酸乙的基本培养基上生长，说明催化合成相应氨基酸的酶的活性丧失，A不符合题意；
B、原核生物的细胞内可遗传的变异只有基因突变，不可能发生基因重组和染色体变异，B不符合题意；
C、突变体M和N在同时添加氨基酸甲和乙的基本培养基中混合培养，产生了大肠杆菌X，这可能是两种大肠杆菌之间发生了重组，但不能确定突变体M的RNA与突变体N混合培养能否得到X，C符合题意；
D、当突变体M和N放到同一个培养基时发生了细胞间的DNA转移，从而产生大肠杆菌X，D不符合题意。
故答案为：C。
【分析】本题考查了细菌的可遗传变异类型，当基因发生突变以后，会改变酶的活性，使代谢途径发生了变化，进而引起性状的改变。当不同种类的细菌混合培养时，会发生基因的重新组合，产生新的变异类型。
10.A
【考点】微生物的分离和培养，腐乳的制作，泡菜的制作，植物组织培养的过程
【解析】A、脲酶能够将尿素分解成氨，使一些不能利用尿素的微生物也能再此培养基上生长，所以用含有脲酶的培养基不能筛选分解尿素的细菌，可用以尿素为唯一氮源的培养基筛选分解尿素的细菌，A错误；
B、在切成小块的豆腐上接种毛霉制作腐乳，这样可以避免其他菌种的污染，保证产品的质量，B正确；
C、乳酸菌为厌氧型，在坛口用水封闭泡菜坛，可以提供无氧的环境，使乳酸菌发酵制作泡菜，C正确；
D、植物组织培养需将离体组织、细胞在无菌和适宜条件下培养，即在无菌条件下培养离体植物叶片可获得愈伤组织，D正确。
故答案为：A。
【分析】配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌；分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
11.D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】由分析可知，题中所提供的培养基中的微量维生素应该归为培养基中的生长因子，即D正确。
故答案为：D。
【分析】培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，各种培养基的成分中一般都含有水、无机盐、碳源、氮源和特殊的营养物质（生长因子）。
12.D
【考点】微生物的分离和培养，测定某种微生物的数量，主动运输
【解析】A、分析曲线图可以看出，T菌群呈S型增长，培养约20小时后达到K值，A正确；
B、T和Z培养液pH比较，T组培养液中pH下降较慢，说明从胞内排出的H+较少，T细菌可能是H+载体功能降低的一种突变体，B正确；
C、细菌（Z）能依赖其细胞膜上的H+载体将胞内的H+排出，该过程需要消耗ATP，说明Z细菌将胞内H+排到胞外的过程属于主动运输，C正确；
D、Z细菌生长的培养液最适pH不一定小于4.0，在4.5左右Z细菌增长速率较快，D错误。
故答案为：D。
【分析】统计菌落数目的方法：（1）显微镜直接计数法
?①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数；
③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）
?①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
13.C
【考点】微生物的分离和培养，培养基对微生物的选择作用，培养基概述及其分类
【解析】A、人工诱变可获得不同类型的突变体，再利用选择培养基从中选取组氨酸依赖型和色氨酸依赖型的菌种，即为M、N菌种，A正确；
B、M、N菌均为有细胞结构的微生物，再由图示流程可知，M、N菌经处理后得到与之前形态不同的原生质体，再用PEG处理，所用M、N菌均有细胞壁结构，B正确；
C、培养基X筛选的菌种是M菌和N菌融合后的细胞，同时含有M、N两种菌的基因，即基因型为A+B+
，
故培养基X中应不添加组氨酸和色氨酸，C错误；
D、培养基X筛选的菌种是M菌和N菌融合后的细胞，同时含有M、N两种菌的基因，即基因型为A+B+
，
对组氨酸和色氨酸均不依赖，D正确；
故答案为：C。
【分析】由题意可知，该实验目的是获得兼具M、N两种菌的优良性状的菌种P，菌种融合不是所有细菌都能够成功，故在培养基X上必然留下单独的M、N菌成为杂菌，故培养基X的作用是筛选出兼具M、N菌优良性状的融合菌。
14.B
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、为防止取土工具上的微生物对实验结果构成影响，取土工具需要进行灭菌处理，A项正确；
B、泡菜制备过程中没有进行“开水中浸1min”，起到灭菌效果的应该是盐水煮沸，B项错误；
C、斜面培养基的制备步骤为：灭菌、斜靠和冷却，C项正确；
D、无土栽培时不需要进行灭菌处理，D项正确。
【分析】在微生物的实验室培养中获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵.无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面，
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；
②将用于微生物培养的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触.
15.A
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、鲜牛奶用巴氏消毒法，使用后的液体培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌后再丢弃，防止对环境造成污染，A错误；
B、用干热灭菌箱对带棉塞的试管灭菌时，可用报纸包裹严密后再进行灭菌处理，B正确；
C、用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，开始阶段需打开排气阀排尽锅内冷空气，否则可能灭菌的温度达不到要求，C正确；
D、用紫外线对空气进行灭菌时，适量喷洒石碳酸等化学抑菌剂以加强灭菌效果，D正确。
故答案为：A。
【分析】消毒和灭菌：
?
消毒
灭菌
概念
使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）
使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象
操作空间、某些液体、双手等
接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等
16.C
【考点】微生物的分离和培养，灭菌技术
【解析】解：A、步骤①倒平板操作时，倒好后应待平板冷却凝固后再将平板倒过来放置，防止冷凝水倒流污染培养基，A错误；
B、灼烧后的接种环需在火焰旁冷却后再沾取菌液进行平板划线，B错误；
C、步骤③通过连续划线，使接种物逐渐稀释分布在培养基的表面，在数次划线后培养，可分离到一个细胞繁殖而来的单个菌落，C正确；
D、平板划线法接种的培养基上，由于起始段菌体密集，所以无法对其计数，D错误。
故答案为：C。
【分析】根据题意和图示分析可知：①是倒平板，②是用接种环沾取菌液，③是进行平板划线，④是培养。
17.D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】解：A、菌株甲为大肠杆菌的甲硫氨酸（Met）营养缺陷型，菌株乙为苏氨酸（Thr）营养缺陷型，一般情况下，各营养缺陷型缺少合成相应氨基酸的酶，A正确；
B、从表格中看出，菌株Ⅰ为甲硫氨酸（Met）营养缺陷型，菌株Ⅲ为苏氨酸（Thr）营养缺陷型，B正确；
C、菌株甲和菌株乙菌液混合后，通过结合发生基因重组，形成了新的菌株Ⅱ（基因型为ab）和菌株Ⅳ（基因型为AB）。当然也可能发生了基因突变，但基因突变的概率很小，C正确；
D、菌株Ⅳ可能来自菌株甲或菌株乙的基因突变，但也可能是菌株甲和菌株乙菌液混合后，通过结合发生基因重组，D错误。
故答案为：D。
【分析】分析表格可知：菌株Ⅰ在基本培养基上不能生长，只有在加入Met或加入Met和Thr的基础培养基上可生长，菌株Ⅰ为甲硫氨酸（Met）营养缺陷型；菌株Ⅱ在基本培养基上不能生长，只有在同时加入Met和Thr的基础培养基上可生长，菌株Ⅱ为甲硫氨酸（Met）和苏氨酸（Thr）营养缺陷型；菌株Ⅲ在基本培养基上不能生长，只有在加入Thr或加入Met和Thr的基础培养基上可生长，菌株Ⅲ为苏氨酸（Thr）营养缺陷型；菌株Ⅳ在基本培养上能生长，说明菌株Ⅳ体内可以合成甲硫氨酸和苏氨酸。
18.A
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、因为幽门螺杆菌能以尿素作为氮源，尿素高温易分解，尿素培养基中除尿素外的其它成分用高压蒸汽灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌，因此，配制培养基并灭菌后，需要加入无菌尿素，A错误；
B、在培养过程中，可设置一个未接种的培养基做为对照组，证明培养过程中没有杂菌污染，B正确；
C、样品中活菌数量统计时，接种方法应采用稀释涂布平板法，C正确；
D、酚红指示剂可用于鉴定尿素分解菌，D正确。
故答案为：A。
【分析】微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面；后者是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
19.D
【考点】探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，微生物的分离和培养
【解析】解：探究培养液中酵母菌种群数量变化规律实验中，利用血细胞计数板计数时需要振荡均匀后取样，A正确；
酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此生长旺盛期的培养液上层比下层酵母菌数量多，B正确；
涂布平板法计数可用接种等量无菌水组做对照，C正确；
由于酵母菌会相互重叠，因此涂布平板法统计的酵母菌数目会比实际值略小，D错误。
【分析】采用抽样检测法使用血球计数板对酵母菌进行计数，在计数时应从以下几方面注意：
1、每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。
2、从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。
3、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。
4、对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取数上线不数下线，数左线不数右线的原则处理，另两边不计数。
5、计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值．计数时应不时地调节焦距，才能观察到不同深度的菌体．按公式计算每mL（或10mL）菌液中所含的酵母菌个数。
6、血球计数板的清洁．血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥．通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物．若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
20.C
【考点】微生物的分离和培养，灭菌技术
【解析】解：A、制作棉塞要选纤维较长的棉花，一般不选用脱脂棉，A错误；
B.
配制培养基时，不需在酒精灯火焰旁操作，B错误；
C.
G6玻璃砂漏斗使用后需用lmol/L的HCl浸泡，C正确；
D、灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121℃，500g/cm2压力下灭菌30分钟，D错误。
故答案为：C。
【分析】灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
实验室常用的灭菌方法：
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100
kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30
min。
21.A
【考点】微生物的分离和培养，培养基对微生物的选择作用，培养基概述及其分类
【解析】解：A、检测培养基被污染的方法是：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生，A错误；?
B、接种换上的菌液经过连续划线，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落，B正确；?
C、鉴定尿素分解菌培养基不是无氮，有唯一氮源尿素，尿素分解菌分解尿素形成了氨气，氨气会使培养基的碱性增强，用酚红试剂即可鉴定出，C正确；?
D、当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌，D正确。?
故答案为：A。
【分析】微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面，后者是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
22.C
【考点】测定某种微生物的数量
【解析】A、题干中说在细胞分裂时，细胞核核膜不解体，说明使染色体分离的纺锤体位于细胞核内，A不符合题意；
B、根据图示可知芽殖酵母为不均等分裂，由芽体逐渐形成的子细胞体积较小，B不符合题意；
C、芽殖酵母计数时，若芽体体积超过细胞体积的1/2则算独立个体，C符合题意；
D、根据芽体体积大小比例可粗略估计细胞所处的周期，D不符合题意。
故答案为：C
【分析】1.芽殖：这是酵母菌进行无性繁殖的主要方式。成熟的酵母菌细胞，先长出一个小芽，芽细胞长到一定程度，脱离母细胞继续生长，而后形成新个体。有多边出芽、两端出芽、和三边出芽。
2.活酵母有出芽生殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为2个菌体计数，若芽体大小小于母细胞的一半时为1个酵母细胞。
23.C
【考点】微生物的分离和培养，尿素分解菌的分离与计数，灭菌技术
【解析】配制培养基时，应先调pH值后髙压蒸汽灭菌，A不符合题意；步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌通过涂布平板法分散，获得单细胞菌落，B不符合题意；步骤③筛选分解尿素的细菌，培养基中应以尿素为唯一氮源，C符合题意；步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力，D不符合题意。
故答案为：C
【分析】?培养基选择分解尿素的微生物的原理：尿素为培养基的唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
24.【答案】B
【考点】微生物的分离和培养
【解析】解：A、利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离，但是不能对微生物进行计数，计数一般采用稀释涂布平板法，A错误；
B、对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记，B正确；
C、倒平板时，不能将打开的培养皿盖放到一边，以免微生物污染，C错误；
D、将好氧型菌株接种到培养液中需振荡培养，D错误．
故选：B．
【分析】1)两种纯化细菌的方法的比较
优点
缺点
适用范围
平板划线分离法
可以观察菌落特征，对混合菌进行分离
不能计数
适用于好氧菌
稀释涂布平板法
可以计数，可以观察菌落特征
吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延
适用于厌氧，兼性厌氧
2)平板划线的操作的基本步骤是：（一）、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞．（二）、左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处将接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面．（三）、烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连．（四）、将平板倒置，放入培养箱中培养．
25.C
【考点】微生物的分离和培养
【解析】解：从表中可以看出，在以土霉素为唯一碳源的培养基中，土霉素的浓度为50mg/L和100mg/L时，生长情况最好的都是T4
，
应选择进一步培养的菌株是T4
，
C符合题意，ABD不符合题意。
故答案为：C
【分析】本实验的目的是筛选获得具有高效降解土霉素能力的菌株。据表格结果分析可知，
在以土霉素为唯一碳源的培养基中
，T4?
菌株在高浓度的土霉素培养基生长最好。据此答题。
二、综合题
26.（1）澄清度；95%乙醇；较小；抽滤；细菌悬液；灭菌；较小；粘性
（2）抗性基因；全能性表达充分；显微注射；短；脱分化；生长素；根的分生组织；B
【考点】微生物的分离和培养，果胶酶的活性测定，组织培养基的成分及作用，基因工程的操作程序（详细）
【解析】（1）Ⅰ.由于植物细胞壁和植物细胞间果胶的存在时，果汁的澄清度受到一定的影响，因此可以加入果胶酶使果胶降解为可溶性的半乳糖醛酸，提高果汁的澄清度。判断果胶酶的处理效果，可采用三种方法，①看果胶的剩余量，果胶不溶于乙醇，加入95%的乙醇，沉淀量少的即果胶的剩余量少，处理效果好，②进行离心处理，取上清液测OD值，OD值越小，说明降解越充分，果胶酶的处理效果越好，③对不同处理进行抽滤，记录相同体积果汁的通过时间，固形物含量越少，时间越短，处理效果越好。Ⅱ.为筛选不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，需从腐烂残渣中分离菌株，用无菌水配制成细菌悬液，再涂布在LB固体培养基上待筛选。由于目标是筛选不被香精油抑制的细菌，因此还需准备香精油，并将其制作成滤纸片贴在培养基上，香精油需灭菌处理。观察滤纸片周围的抑菌圈，直径越小说明该菌株越不易被香精油抑制，因而成为初步待选的菌株。再进一步接种到含果胶的液体培养基中培养，果胶使植物细胞粘连，若果胶被降解，则液体培养基的粘性下降。（2）Ⅰ.设计重组质粒时，除了要含有可表达的目的基因，还需要有可表达的抗性基因（如抗生素抗性基因），在添加抗生素的培养基上，含重组质粒的宿主细胞能够生长，因而被筛选出来。Ⅱ.转基因实验要求宿主细胞性状优良、遗传稳定性较高、全能性（细胞发育成个体的潜能）较高及易被农杆菌侵染等特点。若植物材料对农杆菌不敏感，可采用显微注射的方法。Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程，比利用茎段诱导产生愈伤组织获得丛状苗的过程时间更短，因为不需要经历脱分化的过程，而且遗传性状稳定。植物器官的分化需要一定的营养物质及适宜的激素配比，配制丛状苗生根培养基需根据实际情况添加生长素，促进基部细胞形成愈伤组织，并进一步分化形成根的分生组织，最终形成根。比较发芽培养基和生根培养基可知MS培养基的浓度下降，因此可降低培养基的浓度促进生根。故答案为：B。
【分析】（1）果胶酶：果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等。
①分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层；提高水果的出汁率
②使果胶水解为半乳糖醛酸，并使果汁变得澄清。
（2）发芽培养基：3000mLMS培养基+含1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g琼脂，再加蒸馏水至4000mL，混合均匀加热至琼脂融化后，通过三角漏斗分装至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共100瓶三角瓶，加上封口膜后1kg压力下在灭菌锅内灭菌20分钟。
（3）生根培养基：1000mLMS培养基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g琼脂，再加蒸馏水至2000mL，混合均匀加热至琼脂融化后，通过三角漏斗分装至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共50瓶三角瓶，加上封口膜后1kg压力下在灭菌锅内灭菌20分钟。
27.（1）W
（2）乙；乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W
（3）将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源
（4）缓冲液；缓冲液不能降解W；酶E与天然酶降解W的能力相近
【考点】微生物的分离和培养，培养基对微生物的选择作用，培养基概述及其分类
【解析】
（1）能降解W的细菌可以以W为氮源，不能降解W的细菌不能以W为氮源，要想分离出能降解W的细菌，所用的选择培养基只能以W为氮源。（2）以W为氮源的选择性培养基表现为不透明，而乙菌落周围出现了透明圈，说明乙菌能降解W，甲菌落周围没有透明圈，说明甲菌不能降解W。要得到目标菌应选择乙菌落进一步纯化。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。要想确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，需要在将其在无氮培养基上培养，能利用空气中氮气为氮源的细菌可生长，不能利用空气中氮气为氮源的细菌不能生长。实验思路：将甲乙菌分别接种在无氮培养基上。预期结果和结论：若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。
（4）①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，A、B处均加入了酶为实验组，还需一个对照组，不加任何酶，还要遵循单一变量原则，所以C处滴加缓冲液，且三处滴加量相同。
②C处只滴加了缓冲液，若C处没有出现透明圈，说明缓冲液不能降解W；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明酶E与天然酶降解W的能力相近。
故答案为：（1）W
（2）乙?
乙菌落周围出现了透明圈，说明乙菌能降解W（3）将甲乙菌分别接种在无氮培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。（4）①缓冲液?
缓冲液不能降解W???
酶E与天然酶降解W的能力相近。
【分析】选择培养基：通过加入某化学物质或除去某营养物质，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
28.（1）麦芽汁琼脂；高压蒸汽；由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体
（2）菌体快速增殖；乙醇产生
（3）酵母菌分解葡萄糖会产生CO2
，
CO2使面包松软
【考点】微生物的分离和培养
【解析】（1）培养酵母菌的培养基为麦芽汁琼脂培养基，培养基的灭菌方式为高压蒸汽灭菌。菌落是指在培养基上由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。（2）酵母菌可以进行有氧呼吸和无氧呼吸，当有氧气时进行有氧呼吸，可促进菌体快速增殖。进行无氧呼吸时，可进行酒精发酵，产生乙醇。（3）制作面包时，酵母菌会分解葡萄糖产生CO2
，
产生的气体使面包松软。
【分析】本题考查了酵母菌不同呼吸方式引起的结果不同，及生活中的应用。
（
1
）培养基按照物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。液体培养基不加凝固剂，用于大量繁殖；半固体培养基加凝固剂，用于观察微生物的运动、分类鉴定；固体培养基加凝固剂，用于微生物分离、鉴定、活菌记数、保藏菌种。
（
2
）常用的灭菌方法：
灭菌方法
适用对象
灼烧灭菌
接种的工具、试管口、瓶口
干热灭菌
耐高温需干燥的物品（玻璃器皿等）
高压蒸汽灭菌
培养基、培养皿、实验器材
（
3
）酵母菌的代谢类型：异养兼性厌氧型——既能进行有氧呼吸，又能进行无氧呼吸。
反应式：
在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O6→2C2H5OH＋2CO2
29.（1）细菌；选择
（2）碳源、无机盐（答出两点即可）；蛋白质、核酸（答出两点即可）
（3）碘液；淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被分解，形成透明圈
（4）乙同学的结果中1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差
【考点】微生物的分离和培养
【解析】（1）M培养基若用于真菌的筛选，应该抑制细菌的生长，链霉素是抗生素，可抑制细菌的生长。该培养基从功能的角度属于选择培养基。
（2）微生物生长需要多种营养物质
除氮源外，还需要碳源、无机盐、生长因子等。氮元素是蛋白质、核酸等生物大分子的组成元素。（3）筛选产淀粉酶的微生物，?依据淀粉遇碘液变蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被分解，形成透明圈。（4）在同一稀释倍数涂布的平板，所得微生物的菌落数应差距不大。而乙同学的结果中1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果不准确。
【分析】本题考查了如何筛选某种微生物以及筛选的原理，培养基的营养成分，涂布平板中遇到的问题。
（1）培养基的营养物质
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。
氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。
（2）稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
30.（1）纤维素分解菌大多分布于富含纤维素的环境中，动物粪便富含纤维素；C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶
（2）纤维素；用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次
（3）C
（4）较慢；SDS掩盖了不同种蛋白质间电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小，分子越大，运动速度越慢
【考点】纤维素分解菌的分离，蛋白质的提取和分离
【解析】（1）纤维素分解菌大多分布于富含纤维素的环境中，植食性动物粪便中含有大量的未被分解的纤维素，能为纤维素分解菌提供丰富的碳源。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。（2）为选择纤维素分解菌，应将富集培养后植食性动物的粪便混合菌适当稀释后涂布于以纤维素作为唯一碳源的选择培养基上。在系列稀释操作中，用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。（3）由表中数据可知，C菌株的D/d的值最大，因此其纤维素酶的活性最强。（4）SDS所带电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移速率完全取决于分子的大小，分子越大，移动速度越慢，因此其移动速度较相对分子质量较小的蛋白质慢。
【分析】电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
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专题22
微生物的利用
一、单选题
1.（2020·浙江选考）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（??
）
A.?利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B.?配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C.?酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D.?适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
2.（2020·新高考I）野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。将甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N单独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。某同学实验过程中发现，将M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本培养基上，培养后均有菌落出现。该同学对这些菌落出现原因的分析，不合理的是（??
）
A.?操作过程中出现杂菌污染
B.?M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸
C.?混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质
D.?混合培养过程中，菌株中已突变的基因再次发生突变
3.（2020·江苏）为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是（??
）
A.?倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整
B.?图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落
C.?该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的
D.?菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色
4.（2020·浙江选考）细菌内某种物质在酶的作用下转变为另一种物质的过程如图所示，其中甲～戊代表生长必需的不同物质，①～⑤代表不同的酶。野生型细菌只要在培养基中添加甲就能生长，而突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长。下列叙述正确的是（??
）
A.?突变型细菌缺乏酶①、②、③?????????????????????????????B.?酶④与乙结合后不会改变酶④的形状
C.?酶②能催化乙转变为丙，也能催化丙转变为丁????D.?若丙→戊的反应受阻，突变型细菌也能生长
5.（2019·江苏）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是（???
）
A.?筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B.?可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C.?在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D.?用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值
6.（2019·北京）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。（???
）
有关本实验的叙述，错误的是
A.?培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质????????B.?筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C.?以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外????????D.?H/C
值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
7.（2019·江苏）下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是（???
）
A.?培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B.?接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C.?接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D.?菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
8.（2020·天津）阅读下列材料，回答下列小题。
甜瓣子是豆瓣酱的重要成分，风味受蚕豆蛋白分解产生的氨基酸影响，也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物影响。其生产工艺如下图所示。
某研究团队对加盐水后的发酵阶段的传统工艺（盐度15%，温度37
℃，发酵30天）进行了改良，改良后甜瓣子风味得以提升。新工艺参数如下表所示。
时期
时段（天）
盐度（%）
温度（℃）
前期
0~12
6
12
中期
12~16
6
37
后期
16~30
15
37
两种工艺的结果比较见下图。
（1）下列关于本研究的实验方法与原理的描述，错误的是（??
）
A.发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累
B.蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源
C.温度与盐度都影响微生物的生长繁殖
D.定期取样，使用平板划线法统计活细菌总数
（2）下列对实验结果的分析，错误的是（??
）
A.新工艺中期活霉菌总数下降由温度升高导致
B.新工艺后期活细菌总数下降由温度、盐度均升高导致
C.新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快，是因为温度升高提高了蛋白酶活性
D.新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数高和氨基酸终产量高均有关
9.（2018·全国Ⅰ卷）某大肠杆菌能在基本培养基上生长，其突变体M和N均不能在基本培养基上生长，但M可在添加了氨基酸甲的基本培养基上生长，N可在添加了氨基酸乙的基本培养基上生长，将M和N在同时添加氨基酸甲和乙的基本培养基中混合培养一段时间后；再将菌体接种在基本培养基平板上，发现长出了大肠杆菌（X）的菌落。据此判断，下列说法不合理的是（??
）
A.?突变体M催化合成氨基酸甲所需酶的活性丧失??????????B.?突变体M和N都是由于基因发生突变而得来的
C.?突变体M的RNA与突变体N混合培养能得到X??????????D.?突变体M和N在混合培养期间发生了DNA转移
10.（2020·海淀模拟）下列关于生物技术实践的叙述，不正确的是（??
）
A.?用含有脲酶的培养基筛选分解尿素的细菌???????????B.?在切成小块的豆腐上接种毛霉制作腐乳
C.?在坛口用水封闭的泡菜坛中发酵制作泡菜???????????D.?无菌条件下培养离体植物叶片获得愈伤组织
11.（2020·浦东模拟）某种细菌可以在含蛋白质、牛肉膏、氯化钠和微量维生素的培养基中生长，其中微量维生素对该菌的培养而言属于（???
）
A.?碳源?????????????????????????????????B.?氮源?????????????????????????????????C.?无机盐?????????????????????????????????D.?生长因子
12.（2020·深圳模拟）某种细菌（Z）能依赖其细胞膜上的H+载体将胞内的H+排出，该过程需要消耗ATP。研究者得到该细菌H+载体结构改变的一种突变体（T），并比较了Z、T分别纯培养时细菌数量和培养液pH的变化规律，结果如图所示。下列相关分析不正确的是（??
）
A.?T菌群呈S型增长，培养约20小时后达到K值????????B.?T细菌可能是H+载体功能降低的一种突变体
C.?Z细菌将胞内H+排到胞外的过程属于主动运输????D.?Z细菌生长的培养液最适pH一定小于4.0
13.（2020·西城模拟）菌种
M
和菌种
N
在发酵工程应用上具有不同的优越性，为了获得具有它们共同优良性状的融合菌，进行了下图所示的实验。已知菌种M
为组氨酸依赖（组氨酸合成相关基因突变为B-），菌种
N
为色氨酸依赖（色氨酸合成相关基因突变为
A-），下列分析错误的是（???
）
A.?菌种M
和N
可通过人工诱变和选择性培养筛选获得
B.?用
PEG
诱导融合之前需要去除菌种
M
和N
的细胞壁
C.?在培养基X
中添加组氨酸和色氨酸以筛选出杂种融合菌
D.?从培养基X
中分离出的杂种融合菌P
对两种氨基酸均不依赖
14.（2020·温州模拟）下列关于无菌或灭菌的相关叙述，错误的是（??
）
A.?在分离并计数以尿素为氮源的土壤微生物实验中，取土样的工具必须是无菌的
B.?蔬菜在开水中浸1min入坛与添加白酒可确保泡菜腌制的无菌环境
C.?制作斜面时，装有培养基的试管先后经灭菌、斜靠和冷却过程
D.?生根后的试管苗在移栽锻炼时，所用的蛭石无需灭菌
15.（2020·日照模拟）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术在生产、生活和科研实践中有着广泛的应用。有关无菌技术的叙述错误的是（??
）
A.?饮用前的鲜牛奶或使用后的液体培养基均可用高温瞬时消毒法进行处理
B.?用干热灭菌箱对带棉塞的试管灭菌时，可用报纸包裹严密后再进行灭菌处理
C.?用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，开始阶段需打开排气阀排尽锅内冷空气
D.?用紫外线对空气进行灭菌时，适量喷洒石碳酸等化学抑菌剂以加强灭菌效果
16.（2020·青浦模拟）如图表示培养和分离某种细菌的部分操作步骤，下列叙述正确的是（ ）
A.?步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B.?步骤②接种环火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线
C.?步骤③三个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D.?步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数
17.（2020高三下·长沙模拟）菌株甲为大肠杆菌的甲硫氨酸（Met）营养缺陷型，菌株乙为苏氨酸（Thr）营养缺陷型，分别受a、b基因控制，在基本培养基（M）上不能生长，但可在添加相应氨基酸的培养基上生长。将上述两菌株的菌液混合一段时间后，从中筛选出4种菌株，4种菌株在不同培养基上的培养结果见表。
菌株
培养基
M
M+Met
M+Thr
M+Met+Thr
菌株Ⅰ
－
＋
－
＋
菌株Ⅱ
－
－
－
＋
菌株Ⅲ
－
－
＋
＋
菌株Ⅳ
＋
＋
＋
＋
注：“＋”表示能生长，“-”表示不能生长
下列分析不合理的是（???
）
A.?菌株甲可能缺少合成甲硫氨酸的酶??????????????????????B.?菌株Ⅰ和菌株Ⅲ分别为菌株甲和菌株乙
C.?菌株Ⅱ和菌株Ⅳ的基因型可能分别为ab、AB??????D.?菌株Ⅳ一定来自菌株甲或菌株乙的基因突变
18.（2020·大兴模拟）幽门螺杆菌是急慢性胃炎和胃溃疡的主要致病菌，它能将热稳定性低的尿素分解成氨气等物质。若从携带者胃黏膜样本中分离幽门螺杆菌，相关实验步骤和方法不合理的是（??
）
A.?配制培养基时，先加入尿素然后再灭菌???????????????B.?应设置未接种的培养基，作为对照实验
C.?可用稀释涂布平板法统计样本中活菌数量???????????D.?可利用酚红指示剂鉴定幽门螺杆菌的菌落
19.（2020·山东模拟）为探究适宜环境下，固定容积的培养液中酵母菌种群数量变化规律，研究者进行了相关实验。下列叙述错误的是（???
）
A.?利用血细胞计数板计数时需要振荡均匀后取样????B.?生长旺盛期的培养液上层比下层酵母菌数量多
C.?涂布平板法计数可用接种等量无菌水组做对照????D.?涂布平板法统计的酵母菌数目会比实际值略大
20.（2020·浙江模拟）下列关于无菌操作的叙述正确的是（???
）
A.?制作棉塞的棉花可以选择用脱脂棉
B.?配制培养基时，需在酒精灯火焰旁操作
C.?G6玻璃砂漏斗使用后需用lmol/L的HCl浸泡
D.?利用高压蒸气灭菌法对含有葡萄糖的培养基灭菌时，需将压强调整为500g/cm2
，
其他条件不变
21.（2020·南京模拟）下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是（???
）
A.?接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馏水来培育检测
B.?接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落
C.?以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌
D.?利用刚果红培养基上是否形成透明圈可筛选纤维素分解菌
22.（2019·宁波模拟）酵母菌按照不同分裂方式分为多种类型，其中一种为芽殖酵母，是以出芽方式进行分裂（如右图所示）。其中纺锤体的两端为纺锤体极体。芽殖酵母细胞分裂过程属于封闭式，即在细胞分裂时，细胞核核膜不解体。下列叙述错误的是（???
）
A.?与细胞核分裂直接相关的纺锤体位于细胞核内
B.?芽殖酵母为不均等分裂，由芽体逐渐形成的子细胞体积较小
C.?芽殖酵母计数时，若芽体体积超过细胞体积的
1/3则算独立个体
D.?根据芽体的大小比例可粗略估计细胞所处的时期
23.（2019·城中模拟）下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是（?????
）
A.?在配制步骤②、③的培养基时，应先调pH值后髙压蒸汽灭菌
B.?步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落
C.?步骤③采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素
D.?步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力
24.（2017·苏州模拟）下列有关“微生物的分离与培养”实验的叙述中，正确的是（ ）
A.?利用平板划线法可对微生物进行接种、纯化、分离和计数
B.?对培养皿进行编号或对菌种进行标注时，应使用记号笔在皿底标记
C.?倒平板时，应将打开的培养皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
D.?将好氧型菌株接种到培养液中需静置培养，防止培养液沾染试管壁引发污染
25.（2019·崇明模拟）通过微生物的实验室培养，筛选获得具有高效降解土霉素能力的菌株。表为各菌株在以土霉素为唯一碳源的培养基中的生长情况，应选择进一步培养的菌株是（???
）
A.?T1????????????????????????????????????????B.?T2????????????????????????????????????????C.?T4????????????????????????????????????????D.?ZC-3
二、综合题
26.（2020·浙江选考）回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
Ⅰ.柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值________的处理效果好。③对不同处理进行________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
Ⅱ.加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的________下降。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的________。
Ⅱ.结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用________的转基因方法。
Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间________，且不经历________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
Ⅳ.与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如________（A.提高蔗糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大量元素浓度D.不添加琼脂）。
27.（2019·全国Ⅱ卷）物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是________。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________。
（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即________。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明________。
28.（2018·全国Ⅲ卷）回答下列与酵母菌有关的问题：
（1）分离培养酵母菌通常使用________（填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，该培养基应采用________灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是________。
（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）；若进行厌氧培养，可促进________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）。
（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是________。
29.（2018·全国Ⅰ卷）将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。
回答下列问题:
（1）M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制________的生长,加入了链霉素的培养基属于________培养基。
（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有________(答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有________(答出两点即可)。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是________该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是________。
（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板,统计的偏落数分别是110，140和149,取平均值133；
乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。
有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是________。
30.（2020·遂宁模拟）某研究者拟从植食性动物的粪便中筛选高产纤维素酶菌株，并对菌株进行鉴定和产酶条件的优化，以期为纤维素酶制剂研制提供基础。据此回答下列问题：
（1）从植食性动物粪便中能分离出纤维素分解菌的原因是________
；而纤维素分解菌能产生纤维素酶，纤维素酶是由________组成。
（2）在对菌株进行鉴定和产酶条件的优化过程中，需将富集培养后植食性动物的粪便混合菌适当稀释后涂布于以________作唯一碳源的选择培养基上，倒置放入37℃恒温培养箱中培养24h，在系列稀释操作中，用移液管使菌液与水充分混匀时所进行的操作是________。
（3）筛选获得纤维素酶高活性菌株3株，分别命名为A，B，C。在相同培养基上培养一段时间后，测得3种菌株的菌落直径与刚果红透明圈直径，结果如下表：
菌株编码
菌落直径（d）cm
刚果红透明圈直径（D）cm
D/d
A
3.53
5.53
1.57
B
2.96
6.72
2.27
C
1.86
4.86
2.61
由表可知，________菌株纤维素酶的活性最强。
（4）若将纤维素分解菌细胞内的酶提取出来后，采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，与相对分子质量较小的蛋白质相比，其移动速度________（填“较快”或“较慢”或“基本相同”），原因是________。
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精品试卷·第
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