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专题22
生物技术实践
一、单选题
1.下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（??
）
A.?利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B.?配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C.?酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D.?适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
2.细菌内某种物质在酶的作用下转变为另一种物质的过程如图所示，其中甲～戊代表生长必需的不同物质，①～⑤代表不同的酶。野生型细菌只要在培养基中添加甲就能生长，而突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长。下列叙述正确的是（??
）
A.?突变型细菌缺乏酶①、②、③?????????????????????????????B.?酶④与乙结合后不会改变酶④的形状
C.?酶②能催化乙转变为丙，也能催化丙转变为丁????D.?若丙→戊的反应受阻，突变型细菌也能生长
3.下列关于淀粉酶的叙述，错误的是（??
）
A.?植物、动物和微生物能产生淀粉酶
B.?固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高
C.?枯草杆菌
淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高
D.?淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色
4.下列关于生物技术实践的叙述，正确的是（????
）
A.?制作果醋时，通气的直角玻璃管内塞有脱脂棉球，用以过滤空气
B.?振荡培养能增大微生物与培养液的接触面积，从而促进微生物对营养物质的吸收
C.?测定样品中亚硝酸盐含量时，将水放入比色杯中，直接测其
OD
值，作为空白对照
D.?亚硝酸盐可在碱性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，产物再与
N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物
5.下列关于无菌操作的叙述正确的是（???
）
A.?制作棉塞的棉花可以选择用脱脂棉
B.?配制培养基时，需在酒精灯火焰旁操作
C.?G6玻璃砂漏斗使用后需用lmol/L的HCl浸泡
D.?利用高压蒸气灭菌法对含有葡萄糖的培养基灭菌时，需将压强调整为500g/cm2
，
其他条件不变
6.在果胶酶催化水解实验结果中，最浑浊的一组是（???
）
A.?沸水浴+果胶酶?????????????????B.?不加热+果胶酶?????????????????C.?沸水浴+清水?????????????????D.?不加热+清水
7.有关果胶酶的相关说法，正确的是（????
）
A.?果胶酶是植物细胞壁及胞间层的主要成分之一
B.?果胶酶是一类复合酶，至少包括果胶酶和果胶甲酯酶
C.?以果胶酶单位时间内催化产生的主要产物半乳糖醛酸的量计算酶的活力
D.?利用葡萄进行酒精发酵过程中，加入果胶酶不能增加甜度和酒精含量
8.如图为某同学取1
mL培养液稀释100倍后，用血球计数板(1mm×1mm×0.1mm)通过显微镜观察到的培养液中的酵母菌在血球计数板中的分布情况。下列相关叙述错误的是（????
）
A.?该培养液中酵母菌的数量为6×105个/mL
B.?选择图示乙规格的计数室，含25个中方格、400个小方格
C.?一个血细胞计数板中央仅含有一个计数室
D.?取样时滴管从静置的培养液底部吸取，会导致数据偏大
9.下列关于果酒果醋制作的叙述，错误的是（????
）
A.?醋化醋杆菌的菌种需在液体培养基中用振荡培养来扩大培养
B.?果醋发酵中丙瓶内发酵液的醋酸浓度可达13%，成分与市售白醋相同
C.?制作果酒时，果汁中加入适量蔗糖可以提高果酒的甜度和酒精度
D.?果酒发酵瓶中液体不能装满，否则发酵过程中发酵液将发生外溢
10.下列有关微生物培养与分离的操作叙述中正确的是（??
）
A.?G6玻璃砂漏斗用完后用0．1mol/LHCl浸泡，并抽滤去酸
B.?在将培养基转移到三角瓶和试管时使用取样器
C.?在超净台操作时需打开紫外灯和过滤风
D.?玻璃刮刀在涂布前后都要进行灼烧处理
11.泡菜是人们比较喜欢的食品，但里面的亚硝酸盐会影响人的健康，食用前最好检测亚硝酸盐的含量，有关的叙述，正确的是（???
）
A.?检测亚硝酸盐的含量，用的是波长为550nm的光，是因为亚硝酸盐对该波长的光有最大的吸收率
B.?为了使发酵更快些，可将蔬菜用开水和白酒浸泡1min
C.?在整个发酵过程中，乳酸菌的数量是先增多后减少
D.?在亚硝酸盐定量的实验中，制作标准曲线时用的比色杯的光程比待测样品的比色杯光程大，则计算出待测样品中的亚硝酸盐的含量偏低
12.下图表示细菌细胞中的一个反应程序。在这个程序中，一种氨基酸在酶的作用下产生另一种的氨基酸，1～6代表不同的氨基酸，V～Z代表不同的酶所有氨基酸对生命活动都是必需的。原始种的细菌只要培养基中有氨基酸1就能生长，而细菌的变异种只有在培养基中有氨基酸1、2、5时才能生长。下列叙述正确的是（????
）
A.?细菌的变异种缺乏的酶有X、W、Z
B.?图示各种酶的形成可能会用到高尔基体和内质网的加工
C.?若在培养基中加入相应的酶，细菌也可以生存
D.?吸收的氨基酸用于合成多肽时，其场所核糖体可以与DNA直接接触
13.通过传统发酵工艺制作的果酒深受人们喜爱，如图为某同学酿制葡萄酒的两个简易装置，下列说法错误的是（）
A.?在葡萄酒的自然发酵过程中，酵母菌的来源是附着在葡萄皮表面的野生酵母菌
B.?乙醇和
CO2
是在酵母菌的细胞溶胶中产生的
C.?若用乙装置，在发酵过程中，必须进行的操作是定期拧松瓶盖
D.?甲装置中，A
液体是发酵液，要留有大约
1/3
的空间不是为了提供氧气，因为制作果酒酵母菌进行厌氧呼吸
14.某研究小组发现，水稻萌发种子的胚可以产生赤霉素(GA)，GA
与种子细胞中
α－淀粉酶基因表达有关，具体作用机制如图所示，下列叙述错误的是（）
A.?枯草杆菌也可以产生α－淀粉酶，且该酶耐热性很强
B.?工业生产中，因酶在水溶液中不稳定，可用吸附法将α－淀粉酶固定在石英砂上。
C.?赤霉素除了存在于胚中，还可存在于顶芽和根的分生组织中。据图可推测
GA
可诱导种子产生α－淀粉酶。
D.?若
GARE
序列的几个碱基改变使得
GAMYB
转录因子无法与其结合，则该序列改变的杂合种子萌发时不能产生α－淀粉酶。
15.燕窝是中国人的传统保健品，近年来被传为珍稀滋补品的“血燕”更是价格高昂。但浙江曾在某次抽査时发现，主要产自马来西亚的3万余盏血燕亚硝酸盐最高超标350
多倍。以下说法错误的是（??
）
A.?“血燕”中的亚硝酸盐在人体内主要以“过客”的形式随尿排出
B.?“血燕”中的亚硝酸盐是一种强致癌物
C.?检测“血燕”中亚硝酸盐的含量需将“血燕”制成样品处理液
D.?一次误食亚硝酸盐0.3—0.5g就会引起中毒，但不会导致死亡
二、综合题
16.回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
Ⅰ.柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值________的处理效果好。③对不同处理进行________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
Ⅱ.加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的________下降。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的________。
Ⅱ.结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用________的转基因方法。
Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间________，且不经历________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
Ⅳ.与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如________（A.提高蔗糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大量元素浓度D.不添加琼脂）。
17.回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与泡菜制作有关的问题：
Ⅰ.用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜，用热水短时处理，可抑制某些微生物产生________，从而使成品泡菜口感较脆。同时，该处理也会使泡菜发酵时间缩短，其原因是________。
Ⅱ.泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，会使________菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大量繁殖，会使________菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，会使乳酸菌受到抑制。
Ⅲ.从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行________，再用________的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。该培养基必须含有________，以便于观察是否产酸。
Ⅳ.自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加________。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经________处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有________（答出2点即可）。
Ⅱ.若要获得已知序列的抗病基因，可采用________或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用________，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中________，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。
Ⅲ.原生质体在培养过程中，只有重新形成________后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过________或器官发生的途径再生植株。
18.回答下列小题：
（1）回答与果胶和果胶酶有关的问题：
①通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还因为________。
②为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行________。
③在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使________。果汁生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入________。使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。
④常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有________和可连续处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有________和________。
（2）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：
①通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），可通过________技术获得特异性探针，并将________中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。
②将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测________（A.质粒载体?
B.转录产物?
C.抗性基因?
D.病原微生物）。
③植物细胞在培养过程中往往会发生________，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时在培养基中加入________，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用________培养建立的细胞系用于筛选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。
④用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。若要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是________。
19.回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与果胶、淀粉等提取和利用有关的问题：
某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。某小组开展了该植物综合利用的研究。
①果胶提取工艺研究结果表明，原料先经过一段时间沸水漂洗的果胶得率（提取得到的果胶占原料质量的百分率）显著高于常温水漂洗的果胶得率，最主要原因是沸水漂洗________
(A．有助于清洗杂质和去除可溶性糖?
B．使植物组织变得松散?
C．使有关酶失活?
D．有利细胞破裂和原料粉碎制浆)。
②在淀粉分离生产工艺研究中，为促进淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝剂（乳酸菌菌液），其菌株起重要作用。为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用________，进行单菌落分离，然后将其________，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。
③在用以上提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题,可添加________使果胶彻底分解成半乳糖醛酸，再添加________，以解决汁液浑浊和沉淀问题。
④在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反应器中的________（答出2点即可）、反应液pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过________来调节。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题。
①将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶EcoR
I酶切，在切口处形成________。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接。在两个片段相邻处形成________，获得重组质粒。
②已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是________，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。
③取田间不同品种水稻的幼胚，先进行________，然后接种到培养基中培养，幼胚发生________形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及________（答
2点即可）。
20.【加试题】
（一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：
（1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌．取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用________蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落．如图所示的划线分离操作，正确的是________．
A.
B.
C.
D.
（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由________进行厌氧呼吸产生．亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与________发生重氮化反应，再与
N﹣1﹣萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物．然后用光程为1cm的________，在
550nm光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的________比对，计算样品中亚硝酸盐的含量．
（3）已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐．在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和________环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解．
答案解析部分
一、单选题
1.A
【考点】微生物的分离和培养，果酒果醋的制作
【解析】A、利用尿素固体培养基，由于不能利用尿素做氮源的微生物不能生长繁殖，而保留利用尿素的微生物，并非杀死，A错误；
B、不同的微生物所需的pH不同，所以配置培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；
C、酵母菌不能直接利用淀粉，应用酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化，再用酵母菌发酵得到糯米酒，C正确；
D、醋化醋杆菌在有氧条件下利用酒精产生醋酸，D正确。
故答案为：A。
【分析】培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能选择分解尿素的微生物。
2.D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长，说明缺乏合成乙、丁所必需的的酶，即酶①、③，A错误；
B、酶与底物结合后会改变酶的形状，反应完成后，酶分子又恢复原状，B错误；
C、酶具有专一性，酶②能催化乙转变为丙，酶③能催化丙转变为丁，C错误；???
D、若丙→戊的反应受阻，乙可以合成戊，所以突变型细菌也能生长，D正确。
故答案为：D。
【分析】分析题意可知，野生型细菌体内含有①～⑤这五种酶，所以只要在培养基中添加甲就能合成生长需要的乙、丙、丁、戊这四种物质；而突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长，说明缺乏合成相应物质所必需的的酶。
3.D
【考点】酶的特性，固定化酶及其应用
【解析】A、淀粉酶可以分解淀粉，植物、动物和微生物都能产生淀粉酶，A正确；
B、固相淀粉酶不溶于水，比水溶液中的淀粉酶稳定性更高，可以反复利用，B正确；
C、枯草杆菌
淀粉酶的最适温度为50～75℃，比唾液淀粉酶的高，C正确；???
D、淀粉水解时一般先生成糊精（遇碘显红色），再生成麦芽糖（遇碘不显色），最终生成葡萄糖，D错误。
故答案为：D。
【分析】1.酶：
(1)作用:酶是生物体内各种化学反应的催化剂。
(2)特点:它有高度的专一性和高效性、酶的作用受多种因素的影响。
2.固定化酶:将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。
4.A
【考点】果酒果醋的制作，亚硝酸盐含量的测定
【解析】A、制作果醋时，通气的直角玻璃管内塞上脱脂棉球的目的是过滤空气，防止杂菌进入，A正确；
B、振荡培养能使微生物与培养液充分接触，但没有增大微生物与培养液的接触面积，B错误；
C、作为空白对照的水中也应与样品组一样，加入氯化铵缓冲液、乙酸和显色液，C错误；
D、亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，D错误。
故答案为：A。
【分析】理清亚硝酸盐测定的原理：在酸性条件下，亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氨化反应，这一产物再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。
5.C
【考点】微生物的分离和培养，灭菌技术
【解析】解：A、制作棉塞要选纤维较长的棉花，一般不选用脱脂棉，A错误；
B.
配制培养基时，不需在酒精灯火焰旁操作，B错误；
C.
G6玻璃砂漏斗使用后需用lmol/L的HCl浸泡，C正确；
D、灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121℃，500g/cm2压力下灭菌30分钟，D错误。
故答案为：C。
【分析】灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
实验室常用的灭菌方法：
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100
kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30
min。
6.C
【考点】酶的特性，果胶酶的活性测定
【解析】解：果胶是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水，果胶酶可以促进果胶的水解，产物是可溶性的半乳糖醛酸；酶的催化需要适宜的温度，加热会使酶变性失活。故加入沸水浴+清水果胶不能被水解，最浑浊。故C正确，ABD错误。
故答案为：C。
【分析】1．果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物，不溶于水。在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁浑浊。
2．果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。果胶酶的作用是分解果胶变成可溶性的半乳糖醛酸。酶的催化作用需要适宜的温度与pH，高温、过酸、过碱都会使酶失去活性。据此答题。
7.B
【考点】果胶酶的活性测定
【解析】A.果胶是植物细胞壁及胞间层的主要成分之一，A不符合题意；
B.果胶酶是一类复合酶，至少包括果胶酶和果胶甲酯酶，B符合题意；
C.以果胶酶单位时间单位酶量内催化产生的主要产物半乳糖醛酸的量计算酶的活力，C不符合题意；
D.利用葡萄糖进行酒精发酵过程中，加入果胶酶可增加果汁的出汁率和澄清度，可以增加甜度和酒精含量，D不符合题意。
【分析】1.果胶是植物细胞壁和胞间层的主要成分之一，由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成。
2.果胶酶和果胶甲酯酶总称果胶酶，可水解果胶，瓦解胞间层。
8.C
【考点】测定某种微生物的数量
【解析】A.乙中一个中方格含24个酵母菌，则一个大方格中含600个，因大方格体积为0.1mm3
，
又稀释了100倍，所以酵母菌为6×105个/mL，A不符合题意；
B.该血细胞计数板的规格为25个中方格，每个中方格有16个小方格，即一个大方格中含有400个小方格，B不符合题意；
C.一个血细胞计数板含有两个计数室，C符合题意；
D.静置的培养液中酵母菌细胞沉到底部，直接从底部吸取会导致细胞数目偏多，数据偏大，D不符合题意。
【分析】1.血小球计数板规格：（1）大方格分为16个中方格，每个中方格分为25个小方格。（2）大方格分为25个中方格，每个中方格分为16个小方格。
2.当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。
9.B
【考点】果酒果醋的制作
【解析】本题考查果酒及果醋的制作。丙瓶内发酵液的醋酸浓度可达3%，但市售白醋中成分除醋酸外，还有丰富的不挥发性酸、糖、酯、醇等物质。成品白醋还需要调兑、过滤、化验、再包装，故B错误。
【分析】比较果酒和果醋的制作原理与发酵条件:
?
果酒制作
果醋制作
菌种
酵母菌
醋酸菌
菌种来源
附着在葡萄皮上的野生型酵母菌
变酸酒表面的菌膜
发酵过程
有氧条件下，酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖：C6H12O6＋6O2―→
6CO2＋6H2O；无氧条件下，酵母菌通过无氧呼吸产生酒精：C6H12O6―→2C2H5OH＋2CO2
氧气、糖源充足时：C6H12O6＋2O2―→
2CH3COOH＋2CO2＋2H2O；缺少糖源、氧气充足时：C2H5OH＋O2―→
CH3COOH＋H2O
温度
一般酒精发酵18～25
℃，繁殖最适为20
℃左右
最适为30～35
℃
气体
前期：需氧，后期：无氧
需要充足的氧气
时间
10～12天
7～8天
10.D
【考点】微生物的分离和培养，灭菌技术
【解析】A、G6玻璃砂漏斗用完后用1mol/LHCl浸泡，并抽滤去酸，再用蒸馏水冲洗至中性，干燥保存，A错误；
B、将培养基转移到三角瓶和试管时必须使用三角漏斗，B错误；
C、在超净台操作时需要关闭紫外灯，C错误；
D、玻璃刮刀在涂布前后都要进行灼烧灭菌，D正确。
故答案为：D。
【分析】常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。
11.C
【考点】亚硝酸盐含量的测定
【解析】A、检测亚硝酸盐的含量，用的是波长为550nm的光，是因为亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后与盐酸萘乙二胺偶合形成的红色染料的最大吸收波长是550nm，A错误；
B、为了使发酵更快些，可将蔬菜在开水中浸1min后入坛，再加上一些白酒，B错误；
C、在发酵过程中乳酸菌的含量先增加然后减少，C正确；
D、在亚硝酸盐定量的实验中，制作标准曲线时用的比色杯的光程比待测样品的比色杯光程大，则计算出待测样品中的亚硝酸盐的含量偏大，D错误；
故答案为：C。
【分析】泡菜中亚硝酸盐的检测可以用比色法，即在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行比较，可以估测出泡菜中亚硝酸盐的含量。
12.D
【考点】微生物的分离和培养
【解析】A、细菌的变异种只有在培养基中有氨基酸1、2、5时才能生长，说明该变种细菌无法合成氨基酸1、2、5，必须直接提供，由此可推变异种种中不存在的酶是V、Z，A错误；
B、细菌属于原核生物，没有高尔基体和内质网，B错误；
C、酶在细胞内发挥作用，培养基中加入的酶属于生物大分子，不进入细菌细胞内，C错误；
D、细菌原核生物，其细胞中不含核膜，因此其内的核糖体可与DNA直接接触，D正确。
故答案为：D。
【分析】分析题图：酶V能将氨基酸1转化成氨基酸2，酶W能将氨基酸2转化成氨基酸4，酶Y能将氨基酸4转化成氨基酸6，酶X能将氨基酸2转化成氨基酸3，酶Z能将氨基酸4转化成氨基酸5。
13.D
【考点】果酒果醋的制作
【解析】解：A.
在葡萄酒的自然发酵过程中，所需的菌种是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，A正确；
B.
乙醇和
CO2
是在酵母菌无氧呼吸产物，发生在细胞溶胶中，B正确；
C.
若用乙装置，在发酵过程中会产生二氧化碳，故必须定期拧松瓶盖，C正确；
D.
甲装置中，A
液体是发酵液，要留有大约
1/3
的空间为酵母菌大量繁殖提供适量的氧气，又防止发酵旺盛时汁液溢出，D错误。
故答案为：D。
【分析】1、分析题图：图示为酿制葡萄酒的两个简易装置，甲装置中，A为葡萄汁，能为酵母菌提供碳源、氮源、水、无机盐和生长因子；NaHCO3溶液能够吸收酵母菌酒精发酵产生的CO2。乙装置需要定期拧松瓶盖排气。2、参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型.果酒制作的原理：
有氧呼吸的反应式是：6O2+C6H12O6+6H2O
?酶?
6CO2+12H2O+能量，
无氧呼吸的反应式为：C6H12O6
?酶?
2CO2+2C2H5OH+能量；C6H12O6
?酶?
2C3H6O3+能量。
14.D
【考点】酶的特性，其他植物激素的种类和作用，固定化酶及其应用
【解析】解：A.
枯草杆菌也可以产生α－淀粉酶，且该酶耐热性很强，A正确；
B.
工业生产中，可用吸附法将α－淀粉酶固定在石英砂上，B正确；
C.
赤霉素存在于分裂旺盛的胚、顶芽和根的分生组织中。据图可推测
GA活化GID1蛋白，促进抑制蛋白的降解，解除对GAMYB基因的抑制作用，从而开启了α﹣淀粉酶基因的表达，C正确；
D.杂合子中有GARE序列没有改变的基因，能受GAMYB转录因子的诱导产生a﹣淀粉酶，所以该序列改变的杂合种子萌发时，能产生a﹣淀粉酶，D错误。
故答案为：D。
【分析】1、a﹣淀粉酶基因转录形成a﹣淀粉酶mRNA，a﹣淀粉酶mRNA翻译形成多肽，转录发生在细胞核中，翻译过程在细胞质中的核糖体上，淀粉酶在粗面内质网上的核糖体上形成后，依次进入内质网、高尔基体中进行加工，由细胞膜分泌到细胞外。2、基因中启动子是RNA聚合酶的结合位点，抑制蛋白与启动子结合后，导致RNA聚合酶不能与启动子结合，使转录不能正常进行。
15.B
【考点】亚硝酸盐含量的测定
【解析】A、“血燕”中的亚硝酸盐在人体内主要以“过客”的形式随尿排出，A正确；
B、“血燕”中的亚硝酸盐一般无致癌作用，但在一定条件下会转化为致癌物质，B错误；
C、检测“血燕”中亚硝酸盐的含量需将“血燕”制成样品处理液，C正确；
D、误食亚硝酸盐0.3-0.5g就会引起中毒，但不会导致死亡，当摄入总量达到3克时，会引起死亡，D正确。
故答案为：B。
【分析】膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但是，当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.3--0.5克时，会引起中毒，当摄入总量达到3克时，会引起死亡。同时，膳食中的亚硝酸盐绝大多数在人体内以“过客”的形式随尿排出，只有在特定条件下（适宜的pH、温度和一定的微生物作用），才会转变成致癌物---亚硝胺.因此，不必太在意。
二、综合题
16.（1）澄清度；95%乙醇；较小；抽滤；细菌悬液；灭菌；较小；粘性
（2）抗性基因；全能性表达充分；显微注射；短；脱分化；生长素；根的分生组织；B
【考点】微生物的分离和培养，果胶酶的活性测定，组织培养基的成分及作用，基因工程的操作程序（详细）
【解析】（1）Ⅰ.由于植物细胞壁和植物细胞间果胶的存在时，果汁的澄清度受到一定的影响，因此可以加入果胶酶使果胶降解为可溶性的半乳糖醛酸，提高果汁的澄清度。判断果胶酶的处理效果，可采用三种方法，①看果胶的剩余量，果胶不溶于乙醇，加入95%的乙醇，沉淀量少的即果胶的剩余量少，处理效果好，②进行离心处理，取上清液测OD值，OD值越小，说明降解越充分，果胶酶的处理效果越好，③对不同处理进行抽滤，记录相同体积果汁的通过时间，固形物含量越少，时间越短，处理效果越好。Ⅱ.为筛选不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，需从腐烂残渣中分离菌株，用无菌水配制成细菌悬液，再涂布在LB固体培养基上待筛选。由于目标是筛选不被香精油抑制的细菌，因此还需准备香精油，并将其制作成滤纸片贴在培养基上，香精油需灭菌处理。观察滤纸片周围的抑菌圈，直径越小说明该菌株越不易被香精油抑制，因而成为初步待选的菌株。再进一步接种到含果胶的液体培养基中培养，果胶使植物细胞粘连，若果胶被降解，则液体培养基的粘性下降。（2）Ⅰ.设计重组质粒时，除了要含有可表达的目的基因，还需要有可表达的抗性基因（如抗生素抗性基因），在添加抗生素的培养基上，含重组质粒的宿主细胞能够生长，因而被筛选出来。Ⅱ.转基因实验要求宿主细胞性状优良、遗传稳定性较高、全能性（细胞发育成个体的潜能）较高及易被农杆菌侵染等特点。若植物材料对农杆菌不敏感，可采用显微注射的方法。Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程，比利用茎段诱导产生愈伤组织获得丛状苗的过程时间更短，因为不需要经历脱分化的过程，而且遗传性状稳定。植物器官的分化需要一定的营养物质及适宜的激素配比，配制丛状苗生根培养基需根据实际情况添加生长素，促进基部细胞形成愈伤组织，并进一步分化形成根的分生组织，最终形成根。比较发芽培养基和生根培养基可知MS培养基的浓度下降，因此可降低培养基的浓度促进生根。故答案为：B。
【分析】（1）果胶酶：果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，包括半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等。
①分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层；提高水果的出汁率
②使果胶水解为半乳糖醛酸，并使果汁变得澄清。
（2）发芽培养基：3000mLMS培养基+含1.5mgBA的溶液+含0.02mgNAA的溶液+30g蔗糖+40g琼脂，再加蒸馏水至4000mL，混合均匀加热至琼脂融化后，通过三角漏斗分装至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共100瓶三角瓶，加上封口膜后1kg压力下在灭菌锅内灭菌20分钟。
（3）生根培养基：1000mLMS培养基+含0.38mgNAA的溶液+30g蔗糖+20g琼脂，再加蒸馏水至2000mL，混合均匀加热至琼脂融化后，通过三角漏斗分装至100mL，三角瓶中每瓶40mL，共50瓶三角瓶，加上封口膜后1kg压力下在灭菌锅内灭菌20分钟。
17.（1）果胶酶；细胞破裂，细胞内营养物质外流使乳酸菌快速地获得营养物质；喜好氧的；不耐酸的；稀释；涂布分离；酸碱指示剂；乙醇
（2）过滤灭菌；染色法，渗透吸水或失水；化学合成；两种限制性核酸内切酶；扩增；细胞壁；胚胎发生
【考点】泡菜的制作，基因工程的应用，植物细胞工程的应用
【解析】（1）Ⅰ.用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜时，为抑制某些微生物产生果胶酶，从而使成品泡菜口感较脆，可用热水短时处理。同时，该处理也会使细胞破裂，细胞内营养物质外流使乳酸菌快速地获得营养物质，从而使泡菜发酵时间缩短。Ⅱ.泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，形成无氧环境，会使喜好氧的菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大量繁殖，产生乳酸，会使不耐酸的菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，又会抑制乳酸菌。Ⅲ.从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行稀释，再用涂布分离的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。为了便于观察是否产酸，该培养基必须含有酸碱指示剂。Ⅳ.自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。由于醋酸杆菌可以利用乙醇产生醋酸，若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加乙醇。（2）Ⅰ.为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经过滤灭菌处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。可采用染色法、渗透吸水或失水的方法测定该原生质体的活性。Ⅱ.可采用人工合成或PCR的方法获得已知序列的抗病基因。对含目的基因的DNA片段进行处理，为使其两端形成不同的粘性末端，需要选择使用两种限制性核酸内切酶，对质粒也进行相同的处理，为了提高目的基因和质粒重组的成功率，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中扩增，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。Ⅲ.原生质体在培养过程中，只有重新形成细胞壁后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过胚胎发生或器官发生的途径再生植株。
【分析】泡菜制作：①菌种：假丝酵母和乳酸菌；②发酵原理：在无氧条件下，微生物利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵，发酵产物有有机酸和醇类物质等，还有亚硝酸。③亚硝酸盐的测定：亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，这一产物再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物，可用光电比色法定量。
18.（1）腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多；涂布分离（或划线分离）；水果组织软化疏松及细胞受损；95%乙醇；提高果胶酶的稳定性；固定化的方法；固定化所用的介质
（2）单克隆抗体；基因文库；B；变异；高浓度致病真菌；花粉离体；胚的离体培养
【考点】果胶酶的活性测定，基因工程的应用，固定化酶及其应用
【解析】解：（1）①腐烂的水果通常细胞壁被分解较多，所以含有能产生果胶酶的微生物较多；②获取单菌落的方式有划线分离法和涂布分离法两种，本题中两种方式均可；③果胶酶的作用是水解果胶，果胶位于植物细胞壁中，故水解果胶会使得水果组织软化疏松及使细胞受损；果胶不溶于酒精，故提取回收果胶需要使用95%乙醇，使果胶形成絮状物回收；④固定化的果胶酶在处理含果胶的污水时，可提高果胶酶的稳定性并可连续处理；在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的因素有固定化的方法和固定化所用的介质。（2）①抗病蛋白可作抗原，则特异性探针应为抗体，则需要通过单克隆抗体技术获得特异性探针；基因文库包含了某个DNA分子的所有基因，故是将基因文库中的所有基因进行表达，再利用探针获得目的基因；②质粒载体只能检测目的基因是否转入受体细胞，A不符合题意；转录产物为RNA，可以通过DNA-RNA分子杂交检测抗病基因是否表达，B不符合题意；检测抗性基因只能检测抗性基因是否导入受体细胞，无法检测该基因是否表达，C不符合题意；检测病原微生物是个体水平检测目的基因是否表达的方式，D不符合题意；故正确的选项选择B；③抗致病真菌基因是原本植物细胞不含的基因，则需要利用植物细胞在培养过程中的变异来筛选抗致病真菌能力强的细胞；由于需要筛选抗致病真菌能力强的细胞，故需要在培养基中加入高浓度致病真菌；快速稳定遗传的抗病植株需要通过单倍体培养获得，故需要利用花粉离体培养建立细胞系用于筛选；④要利用胚的发育获得植株，可利用胚细胞的全能性，采用胚的离体培养获得植株。
【分析】在变异品种的筛选中，要求获得的是抗致病真菌能力强的细胞，则只加入致病真菌只能筛选具有抗致病真菌能力的细胞，需要筛选抗致病真菌能力强的细胞，则需要添加高浓度的致病真菌，这对考查学生对筛选培养基的理解有一定的要求。
19.（1）C；划线分离法（或涂布分离法）；扩大培养；果胶酶和果胶甲酯酶；淀粉酶使淀粉分解；固定化酶的量、反应液温度；控制反应器液体流最（或体积）
（2）黏性末端；磷酸二酯键；转化；使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态；消毒；脱分化；水稻的基因型、愈伤组织继代的次数
【考点】加酶洗衣粉的洗涤效果及其影响因素，植物组织培养的过程，固定化酶及其应用
【解析】（1）①沸水漂洗，因高温会破坏蛋白质的空间结构，进而使有关酶失活，C不符合题意，A、C、D不符合题意。???
②为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用划线分离法（或涂布分离法）进行单菌落分离，然后将其扩大培养，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。???
③蛋白酶和纤维素酶可分别催化蛋白质和纤维素分解。在将以上提取过果胶和淀粉后的剩渣制成的汁液，经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，仍存在浑浊和沉淀问题，说明该汁液中仍有少量的果胶和淀粉，可添加果胶酶和果胶甲酯酶使果胶彻底分解成半乳糖醛酸，再添加淀粉酶使淀粉分解，以解决汁液浑浊和沉淀问题。??
④在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反应器中的固定化酶的量、反应液温度、反应液pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过控制反应器液体流最（或体积）来调节。
(2)
①用限制性核酸内切酶EcoR
I酶切含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121，可在切口处形成黏性末端。用DNA连接酶连接含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121，可在两个片段相邻处形成磷酸二酯键，获得重组质粒。
②取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成转化实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是：使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态。
③在进行植物组织培养时，取田间不同品种水稻的幼胚，先进行消毒，以清除其表面附着的微生物；然后接种到培养基中培养，幼胚发生脱分化形成愈伤组织，并进行继代培养。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及水稻的基因型、愈伤组织继代的次数等。
【分析】（1）酶的特性：专一性，高效性，作用条件较温和（最适温度，最适pH），高温使酶失活。低温降低酶的活性，在适宜温度下酶活性可以恢复。
（
2
）基因工程的基本操作程序:
第一步：目的基因的获取
第二步：基因表达载体的构建
第三步：将目的基因导入受体细胞常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，
最常用的原核细胞是大肠杆菌
，
其转化方法是：先用Ca2+
处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
（
3
）植物组织培养的过程：离体的植物器官、组织或细胞→愈伤组织→试管苗→植物体
20.（1）接种环；B
（2）假丝酵母；对氨基苯磺酸；比色杯；标准曲线
（3）酸性
【考点】亚硝酸盐含量的测定
【解析】解：（1）平板上划线的工具为接种环．如图所示的划线分离操作，A图很难得到由单个细胞发育而来的菌落，A错误；
B图划线从上次划线末端开始，容易得到由单个细胞发育而来的菌落，B正确；
C图划线没有从上次划线的末端开始，接种环上没有菌种，不能得到由单个细胞发育而来的菌落，C错误；
D图划线不是从上次划线末端开始，不容易得到由单个细胞发育而来的菌落，D错误．故选B．（2）泡菜腌制过程中醇类是由假丝酵母进行厌氧呼吸产生．亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与
N﹣1﹣萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物．然后用光程为1cm的比色杯，在550nm光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的标准曲线比对，计算样品中亚硝酸盐的含量．（3）已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐．在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和酸性环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解．
故答案为：（1）接种环?????
B（2）假丝酵母??????
对氨基苯磺酸??????
比色杯??????
标准曲线（3）酸性
【分析】（1）泡菜的制作原理
泡菜的制作离不开乳酸菌．在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸．（2）测定亚硝酸盐含量的原理
在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N﹣1﹣萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料．将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量．
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精品试卷·第
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专题22
生物技术实践
一、单选题
1.下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是（??
）
A.?利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物
B.?配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH
C.?酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒
D.?适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化
2.细菌内某种物质在酶的作用下转变为另一种物质的过程如图所示，其中甲～戊代表生长必需的不同物质，①～⑤代表不同的酶。野生型细菌只要在培养基中添加甲就能生长，而突变型细菌必须在培养基中添加甲、乙、丁才能生长。下列叙述正确的是（??
）
A.?突变型细菌缺乏酶①、②、③?????????????????????????????B.?酶④与乙结合后不会改变酶④的形状
C.?酶②能催化乙转变为丙，也能催化丙转变为丁????D.?若丙→戊的反应受阻，突变型细菌也能生长
3.下列关于淀粉酶的叙述，错误的是（??
）
A.?植物、动物和微生物能产生淀粉酶
B.?固相淀粉酶比水溶液中的淀粉酶稳定性更高
C.?枯草杆菌
淀粉酶的最适温度比唾液淀粉酶的高
D.?淀粉被淀粉酶水解形成的糊精遇碘-碘化钾溶液不显色
4.下列关于生物技术实践的叙述，正确的是（????
）
A.?制作果醋时，通气的直角玻璃管内塞有脱脂棉球，用以过滤空气
B.?振荡培养能增大微生物与培养液的接触面积，从而促进微生物对营养物质的吸收
C.?测定样品中亚硝酸盐含量时，将水放入比色杯中，直接测其
OD
值，作为空白对照
D.?亚硝酸盐可在碱性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，产物再与
N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物
5.下列关于无菌操作的叙述正确的是（???
）
A.?制作棉塞的棉花可以选择用脱脂棉
B.?配制培养基时，需在酒精灯火焰旁操作
C.?G6玻璃砂漏斗使用后需用lmol/L的HCl浸泡
D.?利用高压蒸气灭菌法对含有葡萄糖的培养基灭菌时，需将压强调整为500g/cm2
，
其他条件不变
6.在果胶酶催化水解实验结果中，最浑浊的一组是（???
）
A.?沸水浴+果胶酶?????????????????B.?不加热+果胶酶?????????????????C.?沸水浴+清水?????????????????D.?不加热+清水
7.有关果胶酶的相关说法，正确的是（????
）
A.?果胶酶是植物细胞壁及胞间层的主要成分之一
B.?果胶酶是一类复合酶，至少包括果胶酶和果胶甲酯酶
C.?以果胶酶单位时间内催化产生的主要产物半乳糖醛酸的量计算酶的活力
D.?利用葡萄进行酒精发酵过程中，加入果胶酶不能增加甜度和酒精含量
8.如图为某同学取1
mL培养液稀释100倍后，用血球计数板(1mm×1mm×0.1mm)通过显微镜观察到的培养液中的酵母菌在血球计数板中的分布情况。下列相关叙述错误的是（????
）
A.?该培养液中酵母菌的数量为6×105个/mL
B.?选择图示乙规格的计数室，含25个中方格、400个小方格
C.?一个血细胞计数板中央仅含有一个计数室
D.?取样时滴管从静置的培养液底部吸取，会导致数据偏大
9.下列关于果酒果醋制作的叙述，错误的是（????
）
A.?醋化醋杆菌的菌种需在液体培养基中用振荡培养来扩大培养
B.?果醋发酵中丙瓶内发酵液的醋酸浓度可达13%，成分与市售白醋相同
C.?制作果酒时，果汁中加入适量蔗糖可以提高果酒的甜度和酒精度
D.?果酒发酵瓶中液体不能装满，否则发酵过程中发酵液将发生外溢
10.下列有关微生物培养与分离的操作叙述中正确的是（??
）
A.?G6玻璃砂漏斗用完后用0．1mol/LHCl浸泡，并抽滤去酸
B.?在将培养基转移到三角瓶和试管时使用取样器
C.?在超净台操作时需打开紫外灯和过滤风
D.?玻璃刮刀在涂布前后都要进行灼烧处理
11.泡菜是人们比较喜欢的食品，但里面的亚硝酸盐会影响人的健康，食用前最好检测亚硝酸盐的含量，有关的叙述，正确的是（???
）
A.?检测亚硝酸盐的含量，用的是波长为550nm的光，是因为亚硝酸盐对该波长的光有最大的吸收率
B.?为了使发酵更快些，可将蔬菜用开水和白酒浸泡1min
C.?在整个发酵过程中，乳酸菌的数量是先增多后减少
D.?在亚硝酸盐定量的实验中，制作标准曲线时用的比色杯的光程比待测样品的比色杯光程大，则计算出待测样品中的亚硝酸盐的含量偏低
12.下图表示细菌细胞中的一个反应程序。在这个程序中，一种氨基酸在酶的作用下产生另一种的氨基酸，1～6代表不同的氨基酸，V～Z代表不同的酶所有氨基酸对生命活动都是必需的。原始种的细菌只要培养基中有氨基酸1就能生长，而细菌的变异种只有在培养基中有氨基酸1、2、5时才能生长。下列叙述正确的是（????
）
A.?细菌的变异种缺乏的酶有X、W、Z
B.?图示各种酶的形成可能会用到高尔基体和内质网的加工
C.?若在培养基中加入相应的酶，细菌也可以生存
D.?吸收的氨基酸用于合成多肽时，其场所核糖体可以与DNA直接接触
13.通过传统发酵工艺制作的果酒深受人们喜爱，如图为某同学酿制葡萄酒的两个简易装置，下列说法错误的是（）
A.?在葡萄酒的自然发酵过程中，酵母菌的来源是附着在葡萄皮表面的野生酵母菌
B.?乙醇和
CO2
是在酵母菌的细胞溶胶中产生的
C.?若用乙装置，在发酵过程中，必须进行的操作是定期拧松瓶盖
D.?甲装置中，A
液体是发酵液，要留有大约
1/3
的空间不是为了提供氧气，因为制作果酒酵母菌进行厌氧呼吸
14.某研究小组发现，水稻萌发种子的胚可以产生赤霉素(GA)，GA
与种子细胞中
α－淀粉酶基因表达有关，具体作用机制如图所示，下列叙述错误的是（）
A.?枯草杆菌也可以产生α－淀粉酶，且该酶耐热性很强
B.?工业生产中，因酶在水溶液中不稳定，可用吸附法将α－淀粉酶固定在石英砂上。
C.?赤霉素除了存在于胚中，还可存在于顶芽和根的分生组织中。据图可推测
GA
可诱导种子产生α－淀粉酶。
D.?若
GARE
序列的几个碱基改变使得
GAMYB
转录因子无法与其结合，则该序列改变的杂合种子萌发时不能产生α－淀粉酶。
15.燕窝是中国人的传统保健品，近年来被传为珍稀滋补品的“血燕”更是价格高昂。但浙江曾在某次抽査时发现，主要产自马来西亚的3万余盏血燕亚硝酸盐最高超标350
多倍。以下说法错误的是（??
）
A.?“血燕”中的亚硝酸盐在人体内主要以“过客”的形式随尿排出
B.?“血燕”中的亚硝酸盐是一种强致癌物
C.?检测“血燕”中亚硝酸盐的含量需将“血燕”制成样品处理液
D.?一次误食亚硝酸盐0.3—0.5g就会引起中毒，但不会导致死亡
二、综合题
16.回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与柑橘加工与再利用有关的问题：
Ⅰ.柑橘果实经挤压获得果汁后，需用果胶酶处理，主要目的是提高果汁的________。为确定果胶酶的处理效果，对分别加入不同浓度果胶酶的果汁样品，可采用3种方法进行实验：①取各处理样品，添加相同体积的________，沉淀生成量较少的处理效果好。②对不同处理进行离心，用比色计对上清液进行测定，OD值________的处理效果好。③对不同处理进行________，记录相同体积果汁通过的时间，时间较短的处理效果好。
Ⅱ.加工后的柑橘残渣含有抑菌作用的香精油及较多的果胶等。为筛选生长不被香精油抑制且能高效利用果胶的细菌，从腐烂残渣中分离得到若干菌株，分别用无菌水配制成________，再均匀涂布在LB固体培养基上。配制适宜浓度的香精油，浸润大小适宜并已________的圆形滤纸片若干，再贴在上述培养基上。培养一段时间后，测量滤纸片周围抑制菌体生长形成的透明圈的直径大小。从直径________的菌株中取菌接种到含有适量果胶的液体培养基试管中培养，若有果胶酶产生，摇晃试管并观察，与接种前相比，液体培养基的________下降。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.天然农杆菌的Ti质粒上存在着一段DNA片段（T-DNA），该片段可转移并整合到植物细胞染色体上。为便于转基因植物在组织培养阶段的筛选，设计重组Ti质粒时，应考虑T-DNA中要有可表达的目的基因，还需要有可表达的________。
Ⅱ.结合植物克隆技术进行转基因实验，为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。若植物材料对农杆菌不敏感，则可用________的转基因方法。
Ⅲ.利用带侧芽的茎段获得丛状苗的过程与利用茎段诱导产生愈伤组织再获得丛状苗的过程相比，前者总培养时间________，且不经历________过程，因而其遗传性状稳定，是大多数植物快速繁殖的常用方法。
Ⅳ.与发芽培养基相比，配制转基因丛状苗生根培养基时，可根据实际情况适当添加________，促进丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织并进一步分化形成________，最终形成根。还可通过改变MS培养基促进生根，如________（A.提高蔗糖浓度B.降低培养基浓度C.提高大量元素浓度D.不添加琼脂）。
17.回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与泡菜制作有关的问题：
Ⅰ.用萝卜等根菜类蔬菜制作泡菜，用热水短时处理，可抑制某些微生物产生________，从而使成品泡菜口感较脆。同时，该处理也会使泡菜发酵时间缩短，其原因是________。
Ⅱ.泡菜发酵初期，由于泡菜罐加盖并水封，会使________菌被逐渐抑制。发酵中期，乳酸菌大量繁殖，会使________菌受到抑制。发酵后期，乳酸生产过多，会使乳酸菌受到抑制。
Ⅲ.从泡菜汁中可分离制作酸奶的乳酸菌，首先对经多次发酵的泡菜汁进行过滤，然后取滤液进行________，再用________的方法在某种含牛乳的专用的培养基中进行初步筛选。该培养基必须含有________，以便于观察是否产酸。
Ⅳ.自然界中醋杆菌常与乳酸菌共同生长。若要筛选出醋杆菌，则其专用的培养基中应添加________。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：
Ⅰ.为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经________处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有________（答出2点即可）。
Ⅱ.若要获得已知序列的抗病基因，可采用________或PCR的方法。为了提高目的基因和质粒重组的成功率，选择使用________，对含目的基因的DNA片段进行处理，使其两端形成不同的粘性末端，对质粒也进行相同的处理，然后用DNA连接酶连接形成重组质粒。通过在大肠杆菌中________，以获得大量的重组质粒，最终将其导入原生质体中。
Ⅲ.原生质体在培养过程中，只有重新形成________后，才可进行有丝分裂。多次分裂形成的小细胞团可通过________或器官发生的途径再生植株。
18.回答下列小题：
（1）回答与果胶和果胶酶有关的问题：
①通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还因为________。
②为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行________。
③在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使________。果汁生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入________。使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。
④常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有________和可连续处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有________和________。
（2）回答与利用生物技术培育抗病品种有关的问题：
①通过抗病性强的植株获取抗病目的基因有多种方法。现已获得纯度高的抗病蛋白（可作为抗原），可通过________技术获得特异性探针，并将________中所有基因进行表达，然后利用该探针，找出能与探针特异性结合的表达产物，进而获得与之对应的目的基因。
②将上述抗病基因通过转基因的方法导入植物的分生组织可获得抗病性强的植株。若在试管苗期间用分子水平方法判断抗病基因是否表达，应检测________（A.质粒载体?
B.转录产物?
C.抗性基因?
D.病原微生物）。
③植物细胞在培养过程中往往会发生________，可利用这一特性筛选抗致病真菌能力强的细胞。筛选时在培养基中加入________，并将存活的细胞进一步培养至再生植株。若利用________培养建立的细胞系用于筛选，则可快速获得稳定遗传的抗病植株。
④用抗病品种与高产品种进行杂交育种过程中，有时会遇到因胚发育中止而得不到可育种子的情况。若要使该胚继续发育获得植株，可采用的方法是________。
19.回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与果胶、淀粉等提取和利用有关的问题：
某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。某小组开展了该植物综合利用的研究。
①果胶提取工艺研究结果表明，原料先经过一段时间沸水漂洗的果胶得率（提取得到的果胶占原料质量的百分率）显著高于常温水漂洗的果胶得率，最主要原因是沸水漂洗________
(A．有助于清洗杂质和去除可溶性糖?
B．使植物组织变得松散?
C．使有关酶失活?
D．有利细胞破裂和原料粉碎制浆)。
②在淀粉分离生产工艺研究中，为促进淀粉絮凝沉降，添加生物絮凝剂（乳酸菌菌液），其菌株起重要作用。为了消除絮凝剂中的杂菌，通常将生产上使用的菌液，采用________，进行单菌落分离，然后将其________，并进行特性鉴定，筛选得到纯的菌株。
③在用以上提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题,可添加________使果胶彻底分解成半乳糖醛酸，再添加________，以解决汁液浑浊和沉淀问题。
④在建立和优化固定化酶反应器连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反应器中的________（答出2点即可）、反应液pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过________来调节。
（2）回答与基因工程和植物克隆有关的问题。
①将含某抗虫基因的载体和含卡那霉素抗性基因的载体pBI121均用限制性核酸内切酶EcoR
I酶切，在切口处形成________。选取含抗虫基因的DNA片段与切割后的pBI121用DNA连接酶连接。在两个片段相邻处形成________，获得重组质粒。
②已知用CaCl2处理细菌，会改变其某些生理状态。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。在离心管中加入液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是________，从而表达卡那霉素抗性基因，并大量增殖。
③取田间不同品种水稻的幼胚，先进行________，然后接种到培养基中培养，幼胚发生________形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及________（答
2点即可）。
20.【加试题】
（一）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：
（1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌．取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用________蘸取少量的稀释液，在MRS乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落．如图所示的划线分离操作，正确的是________．
A.
B.
C.
D.
（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由________进行厌氧呼吸产生．亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸盐，与________发生重氮化反应，再与
N﹣1﹣萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物．然后用光程为1cm的________，在
550nm光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的________比对，计算样品中亚硝酸盐的含量．
（3）已知乳酸菌中的亚硝酸还原酶能降解亚硝酸盐．在一定的腌制时间内，随着腌制时间的延长，泡菜中亚硝酸盐含量逐渐降低，是由于在厌氧和________环境下亚硝酸盐被亚硝酸还原酶降解．
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精品试卷·第
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