2020-2021学年高二生物苏教版选修三单元测试AB卷
第一章
基因工程A卷
1.质粒和病毒是常用的基因工程的载体，原因之一是(
)
A.都含蛋白质，容易将目的基因整合到受体细胞的染色体上
B.都能够自我复制，且能保持稳定性和连续性
C.化学本质均为DNA，都具有限制酶切割位点
D.都具有环状结构，能够携带目的基因
2.如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是(
)
A.解旋酶、DNA连接酶、限制酶
B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶
C.解旋酶、限制酶、DNA连接酶
D.限制酶、DNA连接酶、解旋酶
3.作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由是(
)
A.能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因
B.其有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达
C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合
D.对受体细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择
4.下列关于基因工程技术的说法，正确的是(
)
A.基因工程中，天然质粒可以直接被用作载体
B.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达
C.目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能表达
D.人胃蛋白酶基因在大肠杆菌中表达，产生的胃蛋白酶具有生物活性
5.下列不属于目的基因分子水平检测和鉴定的是(
)
A.让害虫吃抗虫棉叶看其是否死亡
B.通过PCR技术检测目的基因片段是否导入受体细胞
C.检测目的基因是否转录形成mRNA
D.目的基因表达产物蛋白质能否与抗体形成杂交带
6.将乙肝病毒的抗原基因导入酵母菌中，通过发酵能大量生产乙肝疫苗。下列叙述正确的是(
)
A.目的基因在酵母菌中表达出抗体
B.目的基因的表达需要线粒体提供能量
C.得到的乙肝疫苗属于减毒活疫苗
D.受体菌内目的基因的转录和翻译发生在同一场所
7.利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示，下列有关叙述正确的是(
)
A.过程②需使用逆转录酶
B.过程②利用PCR扩增CarE基因需使用解旋酶和耐高温的DNA聚合酶
C.过程②利用PCR扩增CarE基因的前提是要有一段已知的CarE基因核苷酸序列
D.通过①过程获得的基因中含有启动子、终止子、内含子等序列
8.用于判断目的基因是否转移成功的方法中，不属于分子检测的是(
)
A.通过害虫吃棉叶看其是否死亡
B.转基因生物基因组DNA与DNA探针能否形成杂交带
C.转基因生物中提取的mRNA与DNA探针能否形成杂交带
D.转基因生物中提取的蛋白质能否与抗体形成杂交带
9.如图为基因表达载体的模式图．下列有关基因工程的说法错误的是(
)
A.基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建
B.任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别
C.图中启动子和终止子不同于起始密码子和终止密码子
D.抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因
10.下列关于基因检测和基因治疗的叙述，错误的是(
)
A.人的血液、唾液、毛发等都可以用来进行基因检测
B.通过检测细胞中的DNA序列可精确找到某突变基因
C.基因检测带来的负面影响主要是基因歧视
D.基因治疗是将患者细胞中有缺陷的基因诱变成正常基因，以达到治疗疾病的目的
11.下列哪项不是转基因技术的成果(
)
A.能清除石油污染的假单孢杆菌
B.高产青霉素菌株
C.转基因抗虫棉
D.利用乳腺生物反应器生产生长激素
12.关于蛋白质工程的基本流程，下列叙述正确的是(
)
①蛋白质分子结构设计
②DNA合成
③预期蛋白质功能?
④据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列
A.
③→①→④→②
B.
④→②→①→③
C.
①→②→③→④
D.
③→④→①→②
13.下列关于蛋白质工程的说法错误的是(
)
A.
蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要
B.
蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作
C.
蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子
D.
蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程
14.人乳铁蛋白是一种药用保健蛋白。下图表示将人乳铁蛋白基因整合到质粒上的过程，图中Tetr表示四环素抗性基因，Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：
限制酶
BamH
Ⅰ
Hae
Ⅲ
Bcl
Ⅰ
Sau3A
Ⅰ
Not
Ⅰ
识别序列及切割位点
(1)图示过程需要用到的工具酶包括_____________________。
(2)要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_____________________，酶能起催化作用的原理是_____________________。
(3)据图分析筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含_____________________(填“四环素”“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”)的培养基上进行，原因是_____________________。
(4)若BamH
I
酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6
个碱基对序列为_____________________，对于该部位，这两种酶_____________________(填“都不能”或“只有一种能”)切开。
15.已知生物体内有一种蛋白质（P），该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。如果将P分子中第158位的丝氨酸变成亮氨酸，第240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质（P1）不但保留了P的功能，而且具有酶的催化活性。回答下列问题：
（1）从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质的__________进行改造。
（2）以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有改造__________基因或合成__________基因，所获得的基因表达时遵循中心法则。
（3）蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期的蛋白质功能出发，通过__________和__________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，经表达、纯化获得蛋白质之后，还需要对蛋白质的生物__________进行鉴定。
答案以及解析
1.答案：B
解析：质粒是一种小型环状双链DNA分子，不含蛋白质，A错误；质粒和病毒都能在宿主细胞中自我复制，并保持稳定性和连续性，B正确；质粒的化学本质为DNA，而病毒由核酸（DNA或RNA）和蛋白质构成，化学本质不是DNA，C错误；质粒具有环状结构，能够携带目的基因，但具有环状结构不是作为基因工程载体的必备条件，病毒不一定具有环状结构，D错误。
2.答案：C
解析：①处为氢键，为解旋酶的作用部位，②处为脱氧核苷酸链上的磷酸二酯键，限制酶可以断开此键，③为将断开的两个DNA片段连接起来，DNA连接酶可以作用于该部位催化磷酸二酯键的形成，故选C。
3.答案：A
解析：作为载体必须能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因，A正确；作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，以便于目的基因的插入，而不是表达，B错误；作为载体必须具有标记基因，以便于重组DNA的鉴定和选择，C错误；作为载体必须是安全的，对受体细胞无害，以便受体细胞能进行正常的生命活动，D错误。
4.答案：C
解析：基因工程中，被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，A错误；载体上的抗性基因可作为标记基因，有利于筛选含重组DNA的细胞，但对目的基因的表达没有促进作用，B错误；目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能表达，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，C正确；大肠杆菌为原核生物，细胞内没有内质网和高尔基体等细胞器，不能对蛋白质进行加工，因此人胃蛋白酶基因在大肠杆菌中表达，产生的胃蛋白酶不具有生物活性，D错误。
5.答案：A
解析：让害虫吃抗虫棉叶看其是否死亡属于个体水平鉴定，不属于分子水平鉴定，A符合题意。
6.答案：B
解析：将乙肝病毒的抗原基因导入酵母菌中，目的基因在酵母菌中表达出抗原，A错误；目的基因的表达需要能量，而真核生物生命活动需要的能量主要由线粒体提供，B正确；酵母菌合成并分泌的是乙肝病毒抗原，属于蛋白质，该方法得到的乙肝疫苗不属于减毒活疫苗，C错误；酵母菌是真核生物，目的基因的转录和翻译不在同一场所，D错误。
7.答案：C
解析：
8.答案：A
解析：A.
通过观察害虫吃棉叶是否死亡，属于个体水平上的鉴定，A错误；
B.
检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带，采用的是DNA分子杂交技术，属于分子水平上的检测，B正确；
C.
检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带，采用的是分子杂交技术，属于分子水平上的检测，C正确；
D.
检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带，采用的是抗原-抗体杂交技术，属于分子水平上的检测，D正确。
故选：A。
9.答案：B
解析：A、基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，A正确；
B、不同基因表达载体的构建过程不一定相同，B错误；
C、启动子和终止子位于质粒上，其实质是DNA；起始密码子和终止密码子位于RNA上，其实质是RNA，C正确；
D、抗生素抗性基因作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了目的基因，D正确．
故选：B．
10.答案：D
解析：人的血液、唾液、毛发等都可以用来进行基因检测，通过检测细胞中的DNA序列可精确找到某突变基因，A、B正确；基因检测带来的负面影响主要是人们担心由于缺陷基因的检出而引起基因歧视，C正确；基因治疗是指用正常基因取代或修补患者细胞中有缺陷的基因，以达到治疗疾病的目的，D错误。
11.答案：B
解析：高产青霉素菌株是人工诱变育种的成果，不是转基因技术的成果。
12.答案：A
解析：
13.答案：B
解析：A、蛋白质工程能通过基因修饰或基因合成，定向对现有蛋白质分子的结构进行改造，使之更加符合人类需要，A正确；
B、蛋白质工程能通过基因修饰或基因合成，实现对蛋白质分子的结构进行改造的，蛋白质工程操作的直接对象是基因，而不是蛋白质，B错误；
C、蛋白质工程可以通过基因合成，制造自然界不曾存在过的新型蛋白质分子，C正确；
D、蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，二者密不可分，D正确；
故选：B。
14.答案：(1)限制酶、DNA连接酶
(2)Sau3AⅠ
可以降低化学反应的活化能
(3)氨苄青霉素
用限制酶切割后破坏了Tetr基因，但不会破坏Ampr基因，导入重组质粒的受体细胞(对氨苄青霉素具有抗性)，能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来
(4)都不能
解析：(1)图中将人乳铁蛋白基因整合到质粒上的过程需要限制酶、DNA连接酶的参与。
(2)根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Sau3AI还可以切割限制酶BclⅠ和限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将人乳蛋白基因插入载体，在只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因的情况下，应选择限制酶Sau3AI。酶能起催化作用的原理是酶可以显著降低化学反应的活化能。
(3)用限制酶Sau3AI切割后会破坏Tetr四环素抗性基因，但不会破坏Ampr氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的受体细胞可能在含有氨苄青霉素的培养基上生存下来。
(4)根据表格中各种限制酶的识别序列和切割位点可知，若BamH
I酶切的DNA末端与Bcl
I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶都不能切开。
15.答案：（1）氨基酸序列
（2）P；P1
（3）设计预期的蛋白质结构；推测应有的氨基酸序列；功能（活性）
解析：（1）由题干信息可知，改造蛋白质的功能可通过改变蛋白质的氨基酸序列来实现。
（2）依据蛋白质工程的定义及题中信息可知，获得P1基因的途径有改造现有基因（P基因）或根据P基因序列人工合成新基因（P1基因）。
（3）蛋白质工程的基本途径：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需要的蛋白质。通过蛋白质工程合成的蛋白质还需要对其进行生物活性的鉴定，即功能鉴定，看是否达到人们的需求。2020-2021学年高二生物苏教版选修三单元测试AB卷
第一章
基因工程B卷
1.下列有关基因工程的叙述正确的是(
)
A.目的基因导入受体细胞一定能成功表达
B.以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列一定相同
C.没有与目的基因重组的质粒不能进入受体细胞
D.基因工程中所用的质粒可能是由细菌的环状双链DNA分子改造而来的
2.以下关于基因工程操作工具的叙述，正确的是(
)
A.DNA连接酶能够催化核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键
B.限制酶能识别并切割DNA分子内一段特定的核苷酸序列
C.质粒一般具有复制原点、酶切位点和抗生素合成基因等
D.DNA聚合酶可将目的基因和载体连接形成重组DNA
3.如图为某种质粒的简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，P为转录的启动部位。已知目的基因的两端均有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列有关叙述正确的是(
)
A.将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切割，在DNA连接酶作用下，生成由两个DNA片段之间连接形成的产物有三种类型
B.DNA连接酶将酶切后得到的两个可互补配对的黏性末端连接起来，该过程形成一个磷酸二酯键
C.酶切时选用EcoRⅠ和BamHⅠ可避免目的基因反向连接和质粒自身环化
D.受体细胞能在含青霉素的培养基中生长，表明该目的基因已成功导入该细胞
4.科学家将萤火虫的荧光素和荧光酶基因转入烟草细胞，获得高水平的表达。长成的植物通体光亮，堪称自然界的奇迹。这一研究成果表明(
)
①萤火虫与烟草的DNA结构基本相同
②萤火虫与烟草共用一套遗传密码子
③烟草体内合成了荧光素和荧光酶
④萤火虫和烟草合成蛋白质的方式基本相同
A.①和③
B.②和③
C.①和④
D.①②③④
5.科研人员通过PCR技术获得肝细胞特异性启动子——白蛋白启动子，将该启动子与Cre重组酶基因结合构建表达载体，培育出在肝细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠。下列叙述正确的是(
)
A.将该表达载体导入肝细胞以获得转基因小鼠
B.利用PCR技术获得白蛋白启动子需设计特异性的引物
C.构建该表达载体需要限制酶和DNA聚合酶
D.通过PCR等技术检测目的基因是否完成表达
6.研究人员欲从酵母菌中获取某种酶的基因，并导入棉株表达，下列叙述不正确的是(
)
A.可用PCR技术在短时间内获得大量编码该酶的基因
B.以酵母菌中有关mRNA为模板合成目的基因的过程为逆转录
C.应使用PCR技术检验基因是否成功在棉株中表达
D.如果销售这种转基因棉籽榨成的油，应当在包装上标明其原料为转基因农作物
7.某实验小组利用如图所示质粒和目的基因来构建基因表达载体，将目的基因导入大肠杆菌细胞并表达。已知酶A、B、C切割DNA后形成的黏性末端互不相同，下列叙述正确的是(
)
A.图中的质粒用酶A切割后，会产生8个游离的磷酸基团
B.在构建重组质粒时，最好用酶A和酶C同时切割质粒和目的基因
C.成功导入目的基因的大肠杆菌可在含四环素的培养基中生长
D.若用酶B和酶C切割，可以避免质粒的自身环化
8.金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，通过如图所示的方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品种。下列相关叙述正确的是（
）
A.图中③②在基因工程中依次叫做标记基因、目的基因
B.图中的①是运载体，具有一个或多个限制酶识别位点
C.检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作的成功
D.抗枯萎病这一性状，在后代中能稳定遗传
9.将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因连接，构建
L1-GFP
融合基因，再将融合基因与质粒连接构建下图所示表达载体。图中限制酶
E1～E4
处理产生的黏性末端均不相同。下列叙述错误的是(
)
A.构建
L1-GFP
融合基因需要用到限制酶有
E1、E2、E4
B.E1、E4
双酶切确保
L1-GFP
融合基因与载体的正确连接
C.GFP
可用于检测受体细胞中目的基因是否表达
D.培育乳汁中含
L1
的转基因羊需将表达载体转入乳腺细胞
10.下列关于基因工程应用的叙述，错误的是(
)
A.科学家利用转基因技术抑制乙烯形成酶的活性和乙烯的生成量，从而延长番茄的储藏时间
B.将某些抗病毒的基因导入动物体内，使获得的转基因动物能抵抗相应病毒
C.抗虫基因只要成功地插入到植物细胞的染色体DNA上就能正常表达
D.可利用基因工程菌大规模生产细胞因子、抗体、疫苗、激素等医药产品
11.基因治疗是指把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。下列关于基因治疗的说法正确的是(
)
A.基因治疗可以治愈所有的遗传病
B.基因治疗的原理是基因突变
C.基因治疗时可用经过修饰的病毒作载体
D.经基因治疗治愈的病人，其后代不会再患同种基因疾病
12.科研人员利用相关技术改变了胰岛素B链的第28位氨基酸，从而有效抑制了胰岛素的聚合。下列相关叙述不正确的是(
)
A.该过程的操作对象是胰岛素分子
B.可通过测定DNA序列确定突变是否成功
C.对胰岛素结构的改造属于蛋白质工程
D.胰岛素的本质是蛋白质不宜口服使用
13.如图为蛋白质工程操作的基本思路，下列叙述不正确的是(
)
A.图中①代表转录，②代表翻译，④代表推测，⑤代表改造或合成
B.蛋白质工程中对蛋白质高级结构的了解是非常关键的工作
C.蛋白质工程的目的是对基因的结构进行分子设计
D.从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则是相反的
14.匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将匙叶草液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。请分析回答问题：
（1）若图1所示DNA片段是利用匙叶草的DNA直接获得的，则该获取目的基因的方法为____________。
（2）不能在匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA，其原因是____________。
（3）若用BamHⅠ切割图1所示的DNA片段，获得目的基因，则需选用________切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是________________（答出两点）。为了避免上述缺陷，切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用酶________，切割图3所示质粒的方案是选用酶________。
（4）用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒________（填“能”、“不能”或“不一定能”）被BamHⅠ切割。
（5）图3中，质粒上的抗生素抗性基因的作用是________。
15.请根据下图回答有关问题：
（1）在如图所示的蛋白质工程流程中，A、B分别是___________、___________。
（2）对获得的目的基因可采用________技术扩增其数量，依据的原理是________。在该过程中所用酶的最大理化特点是________。
（3）⑤过程中将构建的基因表达载体导入受精卵常用的方法是________。
答案以及解析
1.答案：D
解析：目的基因进入受体细胞后，只有当受体细胞表达出相应性状，才能说明目的基因成功表达，A错误；由于密码子具有简并性，因此以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列不一定相同，B错误；没有与目的基因重组的普通质粒也可以进入受体细胞，C错误；质粒可来自细菌，其本质是环状双链DNA分子，基因工程中所用的质粒都是在天然质粒的基础上经过人工改造的，D正确。
2.答案：B
解析：DNA连接酶能够催化两个DNA分子片段的脱氧核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键，A错误；限制酶能识别并切割DNA分子内一段特定的核苷酸序列，B正确；作为基因工程载体的质粒一般具有复制原点（能自我复制）、酶切位点和抗生素抗性基因（作为标记基因）等，C错误；将目的基因和载体连接形成重组DNA需要用到DNA连接酶，D错误。
3.答案：A
解析：根据题意，目的基因的两端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切割，在DNA连接酶作用下，可生成目的基因自身连接形成的连接物、质粒自身连接形成的连接物和重组质粒（目的基因和质粒连接物）三种类型，A正确。DNA连接酶将酶切后得到的两个可互补配对的黏性末端连接起来，该过程形成两个磷酸二酯键，B错误。EcoRⅠ和BamHⅠ识别的序列不同，用EcoRⅠ和BamHⅠ切割DNA后形成的末端不同，但根据题干信息无法得出这两个酶切位点在目的基因两侧的排列位置，目的基因用两种酶处理后，仍可能反向连接，C错误。题图显示，在构建基因表达载体的过程中质粒中的青霉素抗性基因和四环素抗性基因都不会被破坏，因此受体细胞能在含青霉素的培养基中生长，不能表明目的基因已成功导入该细胞，D错误。
4.答案：D
解析：科学家将萤火虫的荧光素和荧光酶基因转入烟草细胞后，相关基因需整合到烟草细胞的染色体的DNA上才能在植物体不同细胞得以表达，使植物通体光亮，说明萤火虫与烟草的DNA结构基本相同，①正确；荧光素和荧光酶基因转入烟草细胞后能成功表达，说明萤火虫和烟草合成蛋白质的方式基本相同，这两种生物共用一套遗传密码子，在烟草体内合成了荧光素和荧光酶，②③④正确，故选D。
5.答案：B
解析：将该表达载体导入受精卵以获得转基因小鼠，A错误；PCR技术需设计特异性的引物，B正确；构建该表达载体需要限制酶和DNA连接酶，C错误；检测目的基因是否完成表达常用抗原—抗体杂交技术，D错误。
6.答案：C
解析：利用PCR技术可以在短时间内获得大量目的基因，A正确；酵母菌的遗传物质是DNA，以mRNA为模板合成DNA的过程为逆转录，B正确；目的基因是否成功在棉株中表达要看棉株中是否产生了相应的酶，可用抗原—抗体杂交技术检验，C错误；根据我国的有关规定，用转基因生物加工成的产品，应当进行标识，保护消费者知情权，D正确。
7.答案：D
解析：图中质粒含有2个酶A的酶切位点，所以切割后会产生4个游离的磷酸基团，A错误；如果用酶A和酶C同时切割质粒，会将质粒切割成三段，两个抗性基因全部被破坏，给后续连接和筛选工作造成困难，B错误；无论用酶A和酶C还是酶B和酶C切割质粒和目的基因，重组质粒的四环素抗性基因均会被破坏，所以含目的基因的大肠杆菌不能在含四环素的培养基中生长，C错误；根据题干信息可知，用酶B和酶C切割后会产生不同的黏性末端，可避免质粒自身环化，D正确。
8.答案：B
解析：
9.答案：D
解析：A.
由图示可知，构建L1-GFP融合基因时，使用了三种限制酶，这两种酶是E1、E2、E4，A正确；
B.
由题意：E1、E4双酶切避免了出现自身环化问题，从而确保L1-GFP融合基因与载体的正确连接，B正确；
C.
GFP基因可以认为是标记基因，表达出的荧光蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，利用这一特性可用于检测细胞中目的基因是否表达，C正确；
D.
不能将对动物有害的病毒的外壳蛋白（L1）基因导入羊的乳腺细胞，D错误。
故选：D。
10.答案：C
解析：科学家可以通过转基因技术，抑制乙烯形成酶的活性、减少乙烯的生成量，从而延长番茄的储藏时间，A正确；将某些抗病毒的基因导入动物体内，可使获得的转基因动物能抵抗相应病毒，B正确；抗虫基因即使成功插入到植物细胞的染色体DNA上也不一定能成功表达，C错误；利用转基因技术构建的基因工程菌可用来大规模生产细胞因子、抗体、疫苗、激素等医药产品，D正确。
11.答案：C
解析：基因治疗是治疗遗传病的有效手段，但不能治愈所有遗传病，如染色体异常遗传病就不能被基因治疗治愈，A错误；基因治疗的基本原理属于基因重组，B错误；某些病毒可侵入人体细胞，基因治疗时可用经过修饰的病毒作载体，C正确；若导入的是患者体细胞，经基因治疗治愈的病人后代仍有可能再患同种基因疾病，D错误。
12.答案：A
解析：蛋白质工程是基因工程的延伸，蛋白质工程的操作对象是基因，A错误；可通过测定DNA的序列确定突变是否成功，B正确；对胰岛素结构的改造属于蛋白质工程，C正确；胰岛素的本质是蛋白质，只能注射，不宜口服使用，D正确。
13.答案：C
解析：分析题图可知，图中①代表转录，②代表翻译，④代表推测，⑤代表改造或合成，A正确；蛋白质发挥功能必须依赖于正确的高级结构，因此蛋白质工程中对蛋白质高级结构的了解是非常关键的工作，B正确；蛋白质工程的目的是对蛋白质的结构进行分子设计，通过基因合成或基因修饰实现，C错误；从图中可以看出蛋白质工程的基本途径与中心法则是相反的，D正确。
14.答案：（1）从基因文库中获取
（2）匙叶草根尖分生区细胞中的TaNHX2基因不表达
（3）Sau3AⅠ；会出现目的基因和质粒的自我环化、目的基因在质粒上的连接方向不确定；EcoRⅠ和BamHⅠ；EcoRⅠ和Sau3AⅠ
（4）不一定能
（5）筛选出含有目的基因的受体细胞
解析：（1）利用匙叶草的DNA直接获得目的基因的方法为从基因文库中获取目的基因。
（2）匙叶草根尖通过成熟区细胞吸收水分和矿质元素，细胞中TaNHX2基因表达，而分生区细胞中TaNHX2基因不表达。
（3）依据图示限制酶的识别序列和切割位点可知，用BamHⅠ切取目的基因，不能选EcoRⅠ切割载体，是因为EcoRⅠ切割产生的黏性末端和目的基因的黏性末端碱基序列不相同。因此，为了构建基因表达载体，应选用Sau3AⅠ切割相应质粒。该方案的缺陷是会出现目的基因和质粒的自我环化、目的基因在质粒上的连接方向不确定。为克服上述弊端，可选用EcoRⅠ和BamHⅠ切割图1所示DNA片段，选用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割图3所示质粒。
（4）选用EcoRⅠ和BamHⅠ切割图1所示DNA片段，选用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割图3所示质粒，构建基因表达载体后所得重组质粒上不一定有BamHⅠ酶切位点，故不一定能被BamHⅠ切割。
（5）基因工程中抗生素抗性基因常用作标记基因，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。
15.答案：（1）蛋白质的三维结构；相对应的脱氧核苷酸序列
（2）PCR（或聚合酶链式反应）；DNA半保留复制；耐高温
（3）显微注射法
解析：（1）根据题图所示的蛋白质工程流程可知，A是蛋白质的三维结构，B是相对应的脱氧核苷酸序列。
（2）对获得的目的基因可采用PCR（聚合酶链式反应）技术扩增其数量，依据的原理是DNA半保留复制。在该过程中所用酶的最大理化特点是耐高温。
（3）⑤过程中将构建的基因表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法。
