【高三生物新题专项汇编】考点17 微生物的培养与应用（精品试题+答案详解）

中小学教育资源及组卷应用平台
高三生物新题专项汇编2
考点17
微生物的培养与应用
1．（2020·安徽金安·六安一中月考）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中关于倒平板的描述正确的有几项（
）
①等培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板
②将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞
③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰
④用左手的拇指和食指完全打开皿盖
⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖
⑥等待平板冷却5~10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上
A．一项
B．二项
C．三项
D．四项
2．（2020·安徽金安·六安一中月考）关于稀释涂布平板法和平板划线法的操作过程，下列叙述中，错误的是（
）
A．稀释涂布平板法中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能蘸取菌液
B．为保证结果准确，每个稀释度的菌液一般涂布3个平板
C．采用平板划线法的培养皿中所得的菌落都符合要求
D．平板划线法中的连续划线的起点是上一次划线的末端
3．（2020·安徽金安·六安一中月考）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。
菌种
菌落直径：C（mm）
透明圈直径：H（mm）
H/C
细菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
细菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
有关本实验的叙述，错误的是（
）
A．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
B．筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
D．H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异
4．（2020·安徽金安·六安一中月考）无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中正确的是（
）
A．紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果
B．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．在微生物接种的实验中，用95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒
5．（2020·张家口市宣化第一中学高三月考）下列有关微生物培养与应用的说法正确的是（　　）
A．培养霉菌时需要将培养基的PH调至中性或微碱性
B．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理
C．大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段
D．分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源
6．（2020·张家口市宣化第一中学高三月考）欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（
）
A．将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释
B．同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板
C．可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照
D．用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌
7．（2020·辽宁沈阳·高三月考）下面有关微生物培养、分离等的叙述，错误的是（
）
A．检验自来水中大肠杆菌数是否超标，可用稀释涂布平板法来分离并计数
B．检测同种水样中细菌的数量时，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数大于选择培养基
C．配制培养基时要注意各种营养成分，必须含有碳源、氮源、无机盐、水及生长因子
D．对于经常使用的菌种可采用试管固体斜面临时保存，但该方法保存的菌种易变异
8．（2020·河北衡水·高三其他）秸秆还田可增加土壤肥力，缓解环境污染。为分离分解纤维素的微生物菌种，实现废物的资源化利用，研究人员设计了“土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌株”的实验流程。下列叙述错误的是（
）
A．配制培养基时，应在高压蒸汽灭菌之后调节pH
B．选择培养时，应使用纤维素为唯一碳源的培养基
C．进行梯度稀释时，应在酒精灯火焰旁完成各种操作
D．挑选菌株后，应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃
9．（2020·北京）某种难以降解的物质S，会对环境造成污染，研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。甲、乙是两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和物质X。下列叙述不正确的是（
）
A．通常采用高压蒸汽灭菌法对培养基和锥形瓶进行灭菌
B．甲、乙均为选择培养基，物质X可能是琼脂
C．步骤③将M中的菌液接种到乙上所用的方法是平板划线法
D．步骤④要挑取单个菌落接种，经⑤筛选出高效降解S的菌株。
10．（2020·湖北武汉·月考）下列能达到微生物菌种分离目的的是（
）
A．利用稀释涂布法接种土壤提取液，分离尿素分解菌
B．利用平板划线法接种土壤提取液，分离纤维素分解菌
C．利用伊红－美蓝培养基鉴定大肠杆菌
D．利用以尿素为唯一氮源的培养基筛选尿素分解菌
11．（2020·大连市普兰店区第三十八中学高三开学考试）关于生物技术实践中的有关检验，正确的是（　　）
A．在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液
B．在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起培养
C．检验以尿素为唯一氮源的培养是否分离出了分解尿素的细菌，方法是在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则说明分离成功
D．进行菌种保藏时，对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏得方法
12．（2020·山东青岛·高三开学考试）在微生物培养过程中，由单一个体
繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。平板划线法和稀释涂布平板法是常用的获取纯培养物的方法。下列说法不正确的是（
）
A．两种纯化方法的核心都是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度
B．用稀释涂布平板法进行微生物的计数时，所得数据往往比实际数据偏大
C．通常对接种室用紫外线照射30min后，再适量喷洒石炭酸等消毒液来增强消毒效果
D．接种环在划线前后都需要灼烧，涂布器在接种前也需要灼烧，但两种处理方法不同
13．（2020·安徽金安·六安一中月考）在1943年，曾获诺贝尔理学或医学奖的美国科学家鲁里亚和德尔布吕克设计以下实验，研究大肠杆菌的抗噬菌体突变是发生在接触噬菌体之前还是之后。请阅读以下资料回答下列问题：
培养皿中培养基的基本配方：
配方
蛋白胨
乳糖
KH2PO4
水
琼脂
20%伊红水溶液
0．325%美蓝水溶液
PH
含量
10g
10g
2g
1000mL
25g
20mL
20
mL
7．2~7．4
（1）噬菌体与大肠杆菌这两种生物之间的关系是_____。
（2）在培养基中加噬菌体的作用是_____；加伊红与美蓝的的是_____。
（3）由于大肠杆菌的同化作用类型是_____，因此在培养基中还加入了一些相应的物质，其中乳糖为大肠杆菌生长提供_____，配方中为大肠杆菌提供氮源的是_____。
（4）该实验有两个假设：
假设一：大肠杆菌的抗噬菌体突变发生在大肠杆菌与噬菌体接触之前。
假设二：大肠杆菌的抗噬菌体突变发生在大肠杆菌与噬菌体接触之后。
你认为图中的实验结果支持上述哪个假设：_____，如果另一个假设成立的话，实验结果应该是：_____。
14．（2020·贵州遵义·其他）胡萝卜素是常用的食品色素，不仅能预防眼病还能抑制肿瘤的发生和生长。利用酵母R提取胡萝卜素具有周期短、成本低等优点。请回答下列问题：
①
②
③
（1）采用平板划线法筛选酵母R时，需从图中选择_____（选填“①”、“②”、“③”），按种完成后需把培养皿__________（“倒置”或“正放”）于恒温培养箱中恒温培养。
（2）培养4至5天后，选取表面光滑、湿润、且为红色的菌落进行扩大培养得到酵母R，菌落是指______________，一经定量分析后，若对高产菌株临时保藏，通常将其放入__________℃的冰箱保藏。
（3）通常需要在有氧条件下，利用麦芽汁培养酵母R用于提取胡萝卜素，从能量供应的角度分析控制有氧条件的原因是__________________。
（4）根据胡萝卜素不易挥发和易溶于有机溶剂的特点，应选择_____法进行提取。提取到的胡萝卜素粗品通过_____________法进行鉴定。
15．（2020·江西临川一中月考）梨树胶孢炭疽病是严重危害梨树的一种真菌病害，目前生产上侧重于用化学药剂进行防治，该方法对人类健康和生态环境都有危害。为改善这种状况，科研工作者对梨树胶孢炭疽病生物防治菌进行分离纯化，具体流程如下：
各种菌株的分离→炭疽病生物防治菌的筛选→炭痘病生物防治菌对病原菌抑菌活性的测定→最后确定的炭疽病生物防治菌为RT-30菌株。
请回答：
（1）研究未知的微生物时，一定注意进行规范的无菌操作，以防研究者______________。使用后的培养基在丢弃前需进行______________。
（2）分离和筛选出来的菌株，要进行纯化处理，纯化处理的常用方法有______________；纯化得到的菌株经培养会表现出稳定的菌落特征，菌落特征包括菌落的______________（写出两点即可）。
（3）分离和筛选菌株的培养基为______________，其原理是______________。
（4）最后确定的炭疽病生物防治菌为RT-30菌株的理由是______________。
16．（2020·广东月考）现有两份培养基的营养构成如下表：
编号
成分
A
KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水
B
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、蒸馏水
回答下列相关问题
（1）各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，从细胞中元素组成的角度考虑，阐述为什么大多数培养基需要提供氮源____________________________。B培养基中氮源是__________；A培养基只有能合成___________的细菌才能在该培养基上生长，因此该培养基属于选择培养基；从同化作用类型看，用A培养基培养的细菌属于____________。
（2）B培养基可以培养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑__________、___________和渗透压等条件。在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行___________（消毒、灭菌）。
（3）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是________________________________________________________。
（4）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的___________________。
17．（2020·四川双流·棠湖中学月考）稻田除草后残留的除草剂A和除草剂B会污染环境。某科研小组欲从土壤中筛选能同时分解除草剂A和除草剂B的微生物（除草剂A和除草剂B均可作为氮源）。请回答下列问题：
（1）取土样：取多年_____________的稻田土壤放入塑料瓶中备用。
（2）配制培养基：将除草剂A和除草剂B混合后，用于制液体培养基甲取部分液体培养基甲，并加入_____________（填凝固剂名称）配制固体培养基乙。为了检测配制的固体培养基乙是否灭菌合格，需要进行的操作是将一部分空白培养基乙培养一段时间，观察_____________。
（3）富集培养：将适量土样加入培养液甲中，置于恒温摇床上振荡培养一段时间。富集培养的目的是______________________；富集培养过程中振荡的作用是使所培养的微生物能充分利用___________。
（4）分离纯化：将富集培养的菌液涂布到培养基乙之前，需要进行的操作是_____________。接种培养后，最终获取优势菌落，保存菌种。
（5）复选：为进一步鉴定上一步骤中分离纯化的优势菌种能否同时分解除草剂A和除草剂B，还需配制两种培养基——丙和丁，而后将上述优势菌种分别接种到培养基丙和丁中进行培养观察，则培养基丙和丁的营养组成特点是__________________________。
18．（2020·四川省内江市第六中学高三月考）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌的培养基配方，请结合所学知识，回答下列相关问题。
成分
含量
蛋白胨
10．0g
乳糖
5．0g
蔗糖
5．0g
K2HPO4
2．0g
显色剂（伊红美蓝）
0．2g
琼脂
12．0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
（1）根据用途划分，该培养基属于______________培养基，若要分离能分解尿素的细菌，需对培养基作出的
最关键的调整是_____________；若还需鉴定分解尿素的细菌，需做出的调整
是_____。
（2）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_____。该培养基是否只允许大肠杆菌生长？为什么？______________________________________。
（3）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。用紫外线可对空气进行灭菌的原因是是紫外线能使_________，还能破坏DNA的结构。
（4）某同学尝试纯化大肠杆菌，其中一个平板形成的菌落分布如上图，推测该同学接种时可能的操作失误___________________________________。
（5）使用以下微生物发酵生产特定产物时，所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是_________________________________________。
A．制作果酒
B．由果酒制作果醋
C．制作泡菜
D．制作腐乳
19．（2020·四川省彭州市濛阳中学高三月考）据有关媒体报道：手机屏幕上的细菌比马桶按钮上的细菌的种类和数量多，为验证这一说法，中央电视台和北京电视台分别进行了相应的实验进行调查，相关实验环节如下：
请回答下列相关问题：
（1）实验中将菌悬液接种到培养皿上的方法是__________，所使用的接种工具是__________。
（2）为确保实验的可信度，在恒温培养接种有菌悬液平板的同时，还应__________。
（3）为确定马桶按钮上是否存在大肠杆菌，还应在培养基中加入__________用于鉴别，若出现__________菌落，则说明马桶按钮上有大肠杆菌。
（4）两个电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为可能原因是___________。
（5）如需统计平板上菌落数，应每隔__________统计一次，选取数目稳定时的记录作为结果，以防止___________________。
20．（2020·宁夏银川二中高三月考）微生物培养与分离技术是生物中重要的实验技术。根据有关的微生物知识，回答下列问题：
（1）实验室常用的灭菌方法有__________________________________________；
（2）纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是平板划线法和________________________；
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应选择尿素作为__________；培养基中加入指示剂_______以鉴定其中是否含有能分解尿素的细菌。分别取0.1mL涂布在平板上，结果发现，稀释倍数为104的5个平板上，长出的菌落数分别为9、147、150、153和360，则每升土壤样液中的细菌数为_______________×1010个。
（4）在分离分解纤维素的微生物实验中，所用培养基中的染料是___________________，该染料能与纤维素形成__________复合物，最后挑选菌落的标准是_______________________________。
21．（2020·河北高三其他）变酸的酒表面和泡菜表面都可能长一层菌膜，某生物活动小组想对两种膜中所含菌的种类进行鉴定，回答下列问题：
（1）如果要通过观察菌落特征进行鉴定，可通过接种环在琼脂固体培养基表面进行_____操作，在最后一区分离到单个菌落；如要用涂布器进行接种，在涂布平板操作之前一般要进行_____操作。两种纯化分离的方式都必须在_____条件下进行。
（2）接种后的培养基放在恒温箱内培养一段时间，可结合菌落的__________等特征对菌的类型作出初步判断。培养时的对照组可设置为______________。
（3）研究表明，泡菜表面的菌是产膜酵母，为了观察产膜酵母对酿酒的影响。实验组除接种酿酒酵母外，还应接种一定量的产膜酵母，与实验组相比，对照组不接种_____________。
（4）变酸的酒表面的膜是由醋酸菌形成，该菌集中在酒表面与它对环境中_____的需求有关。醋酸菌能将乙醇变成_______，再继续转变成醋酸。
22．（2020·黑龙江鹤岗一中高三月考）自然界里有多种微生物，将其进行合理的筛选、培养和应用，能给医药和化工等生产领域带来巨大经济效益。回答下列问题。
（1）对培养基进行灭菌时，多采取____________法，而对接种环或涂布器灭菌时则用____________法，若要将微生物采用平板划线法进行分离操作，在固体培养基表面连续进行了5次划线，则需要对接种环灼烧____________次。平板划线在做第二次及其后的划线操作时，要从上次划线的____________开始划线，最后一次划的线不能与第一次划的线____________。
（2）将接种后的固体培养基和一个未接种的固体培养基放入恒温箱中____________培养，以减少培养基中的水分挥发。长期保存菌种时，应将培养的菌液与____________充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。
23．（2020·瑞昌市第二中学高三开学考试）某种农药M很难降解，对环境会造成一定的污染。为了从土壤中分离出能分解该农药的微生物，某科研人员进行了如图所示的实验。已知含有该农药的培养基呈乳白色，回答下列问题。
（1）该实验所用培养基，从功能上可划分为__________________培养基，理由是_______________________________。
（2）该实验过程中，将土壤稀释液接种到培养基表面的常用方法是__________________。1g土壤被稀释了______________倍。
（3）根据实验结果__________________(填“能”或“不能”)较为准确的计算出土壤中微生物的数量，理由是________________________________________。
（4）根据实验结果，可得出的结论是_____________________________________________。
24．（2020·四川高三其他）三孢布拉氏霉为单细胞的霉菌，能产生β-胡萝卜素，可用于工业生产。回答下列问题:
（1）工业生产中发酵罐内的培养基属于______
（填“液体”或“固体”）培养基，有利于营养物质与三孢布拉氏霉充分接触，菌丝体生长迅速。培养三孢布拉氏霉时需将培养基pH调至____（填“酸性”“中性”或“碱性”）。在接入菌种前，应对培养基进行______灭菌，以避免杂菌污染。
（2）三孢布拉氏霉含有β-胡萝卜素合成的关键酶——八氢番茄红素合成酶（PSY），可根据________（答出一点即可）等特性的差异将PSY与其他蛋白质分离。再采用_________（答出两种方法）固定化PSY，应用于工业生产。
（3）提取到的胡萝卜素粗品，在实验室中通常需通过______法进行鉴定。若观察到____则说明β-胡萝卜素提取成功。
25．（2020·河北承德·高三其他）酵母菌等是与人们的日常生活密切相关的几种微生物。请回答下列有关微生物的应用与培养的问题：
(1)制作果酒时，对酵母菌生长和发酵有重要作用的条件是__________。该条件一般要控制在__________℃。控制好发酵条件，10d后可得到散发着酒香的成品，此过程的原理是__________________________________________________。
(2)家庭中利用成熟的葡萄酿造葡萄酒时，一般不需要特别添加纯正的酵母菌，原因是__________________________________________________。
(3)制作泡菜过程中进行杀菌的处理方法有_________________________________。
(4)分解尿素的细菌能够分解尿素的原因是_________________________________。
(5)为鉴定筛选出的尿素分解菌，应向培养基中加入_________。
26．（2020·吉林长春·高三一模）20世纪70年代以来，燃料乙醇产业得以发展，2018年世界燃料乙醇产量已接近1000亿升。丰富且不可食用的木质纤维素被作为潜在原料用于乙醇生产，这首先需要获得高产纤维素酶的纤维素分解菌。下图是从腐殖土中筛选纤维素分解菌的流程，请分析回答：
腐殖土溶液→选择培养→①→将样品涂布到鉴别培养基上→挑选产生透明圈的菌落
（1）上图中步骤①为__________，鉴别培养基中应加入__________________。
（2）纤维素分解菌中含有纤维素酶，纤维素酶主要包括___________________三种组分，为进一步确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行__________________，纤维素酶活性的测定方法为__________________。
（3）利用纤维素生产乙醇时，发酵罐中还需要接种_________菌，发酵条件应控制温度为_________℃，通气情况为____________________________。
四、填空题
27．（2020·全国开学考试）琼脂是一种多糖类物质，由于很少有微生物能将其降解而成为配制固体培养基常用的凝固剂之一。某实验室在处理一批已进行过微生物培养的废弃固体培养基时发现，培养基上的微生物几乎全部死亡，但在其中一个培养基上存在一个正常生长的细菌菌落，该实验室研究人员对此提出“该种细菌能利用琼脂”的假说。据此回答问题：
（1）若要证明该假说的正确性，应该在配制培养基时，选择以____________为唯一碳源的固体培养基进行培养，配制好的培养基需通过____________法进行灭菌。
（2）通过实验证明该假说是正确的，并且发现该琼脂分解菌能分泌脱色酶，分解糖蜜发酵废液的黑褐色色素。
①欲从获得的菌种中分离出分解黑褐色色素能力强的细菌，可在培养基中加入从糖蜜发酵废液中提取到的黑褐色色素，采用的接种方法是____________。适宜条件下培养一段时间，发现菌落周围形成圆形凹穴和透明圈，形成的原因是____________；应选择凹穴大且周围透明圈大的菌落进行扩大培养。
②由于该菌种在自然界中极为稀少，欲长期保存该菌种，可以采用____________法，具体操作是在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌，然后将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。
（3）实验中需要及时灭菌或消毒，才能保证实验结果的准确性，下列各项可以使用干热灭菌的是______（填标号）
A．实验者的皮肤
B．培养基
C．吸管
D．金属用具
E．玻璃棒
F．培养皿
28．（2020·湖北月考）牛奶是微生物培养的良好培养基，牛奶在饮用前都要经过消毒，以杀死有害微生物，牛奶也可以加工制成酸奶，请回答下列有关问题：
(1)牛奶常用的消毒的方法是（_________），使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是（___________）。
(2)利用（__________）可以对生鲜牛奶中细菌进行计数，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小的原因是：（__________）。
(3)生鲜牛奶加工成酸奶的过程中利用的是乳酸菌，常见的乳酸菌有（__________），其代谢类型是（_____________）。
(4)在进行乳酸菌分离纯化时，科研人员将酸奶稀释后涂布在含溴甲酚绿（遇酸变色）的（____________）（“选择”或“鉴别”）培养基上，（___________）（“需氧”或“厌氧”）培养一段时间后，选择（____________）的菌落临时保存。
(5)获得的乳酸菌如需要长期保存时，菌液中常需要加入一定量的（__________）置于-20℃条件下保存。
29．（2020·通榆县第一中学校月考）腐乳是传统的民间美食和重要的调味品，采用传统方法制作腐乳时，豆腐块上的毛霉来自空气中的毛霉孢子，而现代的腐乳是将优良毛霉菌种接种在豆腐上，通过发酵制成的。请回答下列问题：
（1）腐乳发酵的过程中，毛霉主要是利用其产生的___________(酶)将豆腐中的大分子物质分解成小分子物质，这两种酶最初是在_______________上合成的。
（2）在腐乳制作过程中，防腐杀菌物质主要有盐、酒和香辛料等，盐的作用在于__________________；卤汤中酒的含量应控制在12%左右，若酒精含量过高，则会导致_________________。
（3）实验室中常用平板划线法来分离样品中的优良毛霉菌种，操作时，每次划线之前都要对接种环进行灭菌，目的是___________。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是________。
30．（2020·张家界市民族中学高三月考）回答下列关于微生物的问题。
临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤进行实验，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。
（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
（2）获得致病菌菌落后，在进行扩大培养时，应选用__________培养基。
（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A，B，C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；含C滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素C的________。
（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。
（5）用来判断选择培养基是否起到了选择作用，要设置的对照是
A．未接种的选择培养基
B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
D．接种了的选择培养基
31．（2020·河南高三其他）如图所示为从土壤中分离、纯化和扩大培养某种微生物的流程图。回答下列问题：
（1）称量土样时，土壤____（填“需要”或“不需要”）进行消毒和灭菌。
（2）进行梯度稀释操作时，若待稀释菌液取1
ml，注入9
ml的无菌水，则该1
ml待稀释菌液被稀释了____倍。
（3）平板浇注法分离指的是将1ml稀释的样品放于空白的无菌培养皿之后，将冷却到45~50°C的培养基倒入，轻摇混匀、凝固，然后放于恒温箱中培养。从土壤中分离酵母菌和醋酸菌时，可以使用平板浇注法的是____次，理由是_______________________________________。
（4）划线纯化阶段，对图示培养皿进行划线时接种环取菌液____次，该培养皿划线完成时接种环共需进行灼烧灭菌______次。
（5）扩大培养阶段，所用培养基是____（填“液体”或“固体”）培养基。
高三生物新题专项汇编2
考点17
微生物的培养与应用
1【答案】C
倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰；用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖；等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上，这样可以防止皿盖上的水分滴到培养基上造成培养基的污染。
①培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，防止杂菌污染，①错误；
②将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，②正确；
③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰，高温防止杂菌污染，③正确；
④用左手的拇指和食指打开一条稍大于瓶口和缝隙，④错误；
⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖，并通过酒精灯火焰，⑤正确；
⑥等待平板冷却5~10分钟，将平板倒过来放置使皿盖在下，皿底在上，⑥错误。
故选C。
2【答案】C
1、平板划线法操作步骤：①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞；③将试管口通过火焰；④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液；⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞；⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿；⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连；⑧将平板倒置放入培养箱中培养。
2、稀释涂布平板操作的步骤：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；②取少量菌液，滴加到培养基表面；③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却
8～10
s；④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
A、稀释涂布平板法中涂布前要将涂布器灼烧，其目的是为了杀死其他杂菌，冷却后才能蘸取菌液，是为了避免涂布器温度太高，杀死菌种，A正确；
B、为保证结果准确，降低偶然误差，每个稀释度的菌液一般涂布3个平板，B正确；
C、采用平板划线法的培养皿中所得的菌落可能会因为操作过程中污染或菌液不纯而不符合要求，C错误；
D、平板划线法中的连续划线的起点是上一次划线的末端，是因为划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落，D正确。
故选C。
3【答案】C
该选择培养基上的唯一碳源是淀粉，只有能利用淀粉的微生物才能存活，微生物分解淀粉后，会产生透明圈。
培养基一般含有碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等成分，A正确；筛选淀粉分解菌时，需要对菌液进行一系列的梯度稀释，再将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养，B正确；由题意可知，以上两种菌均会产生透明圈，说明两种菌均可以产生淀粉酶并分泌到细胞外分解淀粉，C错误；淀粉分解菌的H/C越大，说明其产生的淀粉酶分解的淀粉相对越多，可说明该淀粉分解菌分解淀粉的能力越强，D正确。因此，本题答案选C。
4【答案】A
由题文描述可知：该题考查学生对无菌技术的相关知识的识记和理解能力。
用紫外线照射30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果，A正确；高压灭菌加热结束时，待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，B错误；为了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；在微生物接种的实验中，一般用75%酒精对实验者的双手进行消毒，用紫外线照射30min对超净工作台进行灭菌，D错误。
【点睛】
解答本题的关键是理解无菌技术的主要内容及其适用范围等相关知识、形成清晰的知识网络。在此基础上，结合问题情境对各选项进行分析判断。
5【答案】C
1.培养基按成分分为天然培养基和合成培养基；
2.微生物实验室培养的关键就在于防止杂菌污染，故实验室培养时需严格无菌操作，对培养基用高压蒸汽灭菌、培养皿用干热灭菌，接种环用灼烧灭菌，实验者的双手用酒精擦拭消毒处理；
3.微生物的纯培养包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段；
4.要分离某种微生物，必须在特定的条件下进行，利用选择培养基进行培养。本题考查有关微生物培养与应用，意在考查考生实验能力，属识记内容。
A、培养霉菌时需将培养基的PH调至酸性，A错误；
B、接种前需要对培养基、培养皿、接种环进行灭菌，实验操作者的双手等进行消毒处理，B错误；
C、大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配置和纯化大肠杆菌两个阶段，C正确；
D、分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，尿素和葡萄糖是碳源，D错误。
故选C。
6【答案】D
A、为防止土壤浸出液浓度过高，不能获得单菌落，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；
B、同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，B正确；
C、可以将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以判断培养基灭菌是否彻底，C正确；
D、可筛选出分解尿素的细菌的培养基是以尿素为唯一氮源的选择培养基，D错误。
故选D。
7【答案】C
培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面形成单个菌落。
A、当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，A正确；
B、检测同种水样中细菌的数量时，由于选择培养基具有选择作用，因此会导致牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数大于选择培养基，B正确；
C、培养基不一定都含有碳源，氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中，不需加入氮源，C错误；
D、对于经常使用的菌种可采用试管固体斜面临时保存，该方法保存的菌种易被污染或产生变异，D正确。
故选C。
8【答案】A
土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。正是在这三种酶的协同作用下，纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养，同样，也可以为人类所利用。
A、配制培养基时，应在高压蒸汽灭菌之前调节pH，避免灭菌之后调pH造成杂菌污染，A错误；
B、选择培养时，为分离分解纤维素的微生物菌种，应使用纤维素为唯一碳源的培养基，B正确；
C、进行梯度稀释时，为了无菌操作，应在酒精灯火焰旁完成各种操作，C正确；
D、挑选菌株后，为了防止造成污染，应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃，D正确。
故选A。
【点睛】
本题考查选择培养基配制的基本过程和注意事项。
9【答案】C
实验室常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法，对培养基或者培养液灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。培养基一般含有水、碳源、氮源和无机盐等。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
A、对培养基和锥形瓶灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法，A正确；
B、甲和乙培养基可以用于筛选能降解S的菌株，故均属于选择培养基，乙为固体培养基，因此物质X可能是琼脂，B正确；
C、图中将M中的菌液接种到乙上所用的方法是稀释涂布平板法，C错误；
D、因为甲、乙均为选择培养基，经过不断分离纯化，最终筛选出高效降解S的菌株，D正确。
10【答案】ABC
微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线主要是用来纯化的，稀释涂布主要用来计数；此外，利用分离对象对某一营养物质的“嗜好”，专门在培养基中加入该营养物质，制备选择培养基，从而使该微生物大量增殖，也可用于微生物的分离和纯化。
A、利用稀释涂布法可以对某一种细菌进行分离和计数，因此可用于微生物的纯化分离，A正确；
B、利用平板划线法可以对某一种细菌进行分离和纯化，B正确；
C、伊红和美蓝两种染料一酸一碱在培养基中为指示剂，对革兰氏阳性菌有抑制生长作用，当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽，C正确；
D、利用以尿素为唯一氮源的培养基筛选尿素分解菌，需要加入酚红指示剂，指示剂变红，可说明该细菌可以分解尿素，D错误。
故选ABC。
11【答案】BCD
1、酒精与酸性重铬酸钾溶液反应呈现灰绿色，因此可以用酸性重铬酸钾溶液检测酒精。
2、分解尿素的菌能将尿素转化成氨气，使培养基碱性增强，pH升高，酚红指示剂会变红。
A、在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入3mol/L的硫酸3滴，混匀后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察到橙色的重铬酸钾变成灰绿色，A错误；
B、在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起放在恒温箱中培养，如果未接种的培养基或接种无菌水的培养基没有菌落生长，说明培养基制作合格，即没有被污染，B正确；
C、鉴定分解尿素的细菌可用加入酚红指示剂的尿素为唯一氮源培养基是否出现红色来判断，C正确；
D、需要长期保存的菌种，可以与甘油混匀后放入-20℃的冷冻箱内保存，D正确。
12【答案】BC
平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法则是菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
A、获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，故两种纯化方法都是要防止杂菌污染，A正确；
B、因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故用稀释涂布平板法进行微生物的计数时，所得数据往往比实际数据偏小，B错误；
C、通常对接种室用紫外线照射30min，照射前可适量喷洒石炭酸等消毒液来增强消毒效果，C错误；
D、接种环可用灼烧灭菌，涂布器要沾少量酒精在火焰上引燃进行灭菌，D正确。
13【答案】寄生
选择具有抗噬菌体突变的大肠杆菌
便于识别大肠杆菌菌落
异养型
碳源
蛋白胨
假设一
A、B两组所有培养基中菌落数没有显著差异
1、微生物的营养包括碳源、氮源、水和无机盐。
2、培养基的种类按功能分：
种类
制备方法
特征
用途
选择培养基
培养基中加入某种化学成分
根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率
加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基
加入某种试剂或化学药品
依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计
鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌
（1）噬菌体与大肠杆菌的关系为寄生。
（2）有些大肠杆菌对噬菌体具有抗性，利用加噬菌体的培养基将其筛选出来。伊红美蓝培养基用于特异性鉴别大肠杆菌，使其在此培养基上的菌落呈深紫色。
（3）大肠杆菌的同化作用类型是异养型，乳糖可以为大肠杆菌的生长提供碳源，蛋白胨可以为微生物生长提供氮源。
（4）由于生物的变异具有不定向性，且通过图示可以看出，将A试管中10mL菌液先均分到50支试管中，再培养24h后涂布到50个含噬菌体的平板上，菌落数有了明显差异，说明抗性发生了差异；B试管中10mL菌液先一起培养24h后再均分为50份分别涂布，结果各培养基菌落数相当，则说明假设一成立。若假设二成立，则A、B两组所有培养基中菌落数应无显著差异。
【点睛】
微生物实验室培养是高考的热点内容，考生需注意分析实验的题意，需要考生分析图中实验过程，并得出结论。
14【答案】①和③
倒置
由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体
4
酵母R进行有氧呼吸能量供应充足，繁殖快
萃取
纸层析
微生物的分离和纯化中，常用接种方法有两种:稀释涂布平板法和平板划线法。利用平板划线法进行接种时需要用到接种环和酒精灯。接种后，将培养基倒置于恒温培养箱中进行培养。培养一段时间后，挑取目的菌落再进行扩大培养。
菌种的保藏方法有两种：临时保藏法和甘油管藏法。对菌种进行临时保藏时，需要放置在4℃环境中保存。
胡萝卜素不易挥发、易溶于有机溶剂，因此可用萃取法进行提取，再利用纸层析进行纯度鉴定。
⑴平板划线法要用接种环和酒精灯，所以选①和③。接种后将培养基倒置放在恒温培养箱中进行培养，以减缓水分蒸发和防止杂菌污染。
⑵菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，挑取目的菌落进行培养即获得所需的菌种。若进行临时保藏，需要放置在4℃冰箱中保藏。
⑶利用酵母R提取胡萝卜素时，需要在有氧条件下用麦芽汁培养酵母R，以增加酵母R的数量。因为酵母R在进行有氧呼吸时，能获得充足的能量，繁殖速度快。
⑷胡萝卜素不易挥发、易溶于有机溶剂，因此可用萃取法进行提取。提取后的粗品需要进行纯度鉴定，常用纸层析法，同时需要加样品进行层析对照。
【点睛】
微生物的分离和纯化中常用稀释涂布平板法和平板划线法。前者需要用涂布器，后者用接种环，这是两种方法的明显区别，无论采用哪种方法，都需要用酒精灯对接种工具进行灼烧灭菌。
15【答案】被致病微生物感染
灭菌处理
平板划线法、稀释涂布平板法
大小、形态、隆起程度和颜色
选择培养基
提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长
能够抑制炭疽病菌的生长繁殖；测定筛选的炭疽病生物防治菌对病原菌的抑制活性，RT-30菌株对病原菌的抑菌活性最大
1.无菌技术
（1）关键：防止外来杂菌的入侵；
（2）具体操作：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触；
（3）消毒和灭菌
消毒
灭菌
概念
使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）
使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法
煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象
操作空间、某些液体、双手等
接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等
2.生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
（1）研究未知的微生物时，一定注意进行规范的无菌操作，以防研究者被致病微生物感染；使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，防止杂菌污染。
（2）纯化微生物的常用方法有平板划线法、稀释涂布平板法。菌落特征包括菌落的大小、形态、隆起程度和颜色。
（3）分离和筛选菌株的培养基为选择培养基，其原理是提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。
（4）最后确定的炭疽病生物防治菌为RT-30菌株的理由是：能够抑制炭疽病菌的生长繁殖；测定筛选的炭疽病生物防治菌对病原菌的抑制活性，RT-30菌株对病原菌的抑菌活性最大。
【点睛】
本题考查微生物的分离和培养，需要识记无菌技术及实例，掌握接种微生物常用的两种方法，再结合题中信息准确答题。
16【答案】氮元素是细胞内蛋白质和核酸必要组成元素，蛋白质是生命活动的承担者，核酸是存储遗传信息的物质，是细胞内重要的两种化合物
牛肉膏和蛋白胨
脲酶
异养型
温度
酸碱度
灭菌
将未接种的培养基在适宜的温度（条件）下放置适宜的时间，
观察培养基上是否有菌落产生
比例合适
培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
（1）氮元素是细胞内蛋白质和核酸必要组成元素，蛋白质是生命活动的承担者，核酸是存储遗传信息的物质，是细胞内重要的两种化合物，因此培养基的配方中一般都需要提供氮源。从表格中看，B培养基中氮源是牛肉膏和蛋白胨。A培养基中有尿素，只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，因此属于选择培养基。从同化作用类型看，A培养基中含有机碳源葡萄糖，A培养基培养的细菌属于异养型。
（2）B培养基可以培养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌。
（3）检测固体培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的温度（条件）下放置适宜的时间，
观察培养基上是否有菌落产生。
（4）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的比例合适。
【点睛】
本题考查了培养基的制备、微生物的培养条件、灭菌和消毒等，主要考查学生对相关知识的记忆与综合运用。
17【答案】同时使用除草剂A和除草剂B
琼脂
培养基上是否有菌落生长
增加能同时分解除草剂A和除草剂B的微生物（目标微生物）的数量
养料和氧气
梯度稀释
分别以除草剂A和除草剂B为唯一氮源
1.微生物接种常用的两种方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后，可形成单菌落。
2.选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。
（1）欲筛选能同时分解除草剂A和除草剂B的微生物，需要选用多年同时使用除草剂A和除草剂B的稻田土壤。
（2）制取固体培养基时需加入凝固剂琼脂。为了检测所配制培养基是否灭菌合格，可将空白培养基培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生长，如果培养基上有菌落生长，说明灭菌不合格；如果培养基上没有菌落生长，说明灭菌合格。
（3）富集培养的目的是使那些能够适应这种营养条件的微生物得以迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制。富集培养中不断振荡培养瓶能提高培养液中溶解氧的含量，同时使微生物能够充分利用培养基中的养料和氧气，进而提高营养物质的利用率。
（4）富集培养的菌液中微生物浓度较大，直接涂布到培养基上进行培养，不容易得到单菌落，所以需要经过梯度稀释而后再接种，这样操作后可使富集培养的菌液中的微生物细胞分散开来。
（5）为进一步鉴定获得的优势菌种能否同时分解除草剂A和除草剂B还需配制分别以除草剂A和除草剂B为唯一氮源的培养基丙和丁，再将上述优势菌种分别接种到培养基丙和丁中进行培养观察。
【点睛】
熟知分离微生物的操作流程及其包含的原理是解答本题的关键，微生物的接种方法以及目的也是本题的考查点。
18【答案】鉴别
将蛋白胨换成尿素
将伊红美蓝换成酚红
分解者、消费者
否，原因是培养基中的碳源种类很多，可供多种微生物生存
蛋白质变性
涂布不均匀
B
C
微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
（1）该培养基中含有显色剂（伊红美蓝），可用于鉴别大肠杆菌，应属于鉴别培养基；分离能分解尿素的细菌时应该以尿素为唯一氮源，因此需要将蛋白胨换成尿素；鉴定分解尿素的细菌，需要使用酚红指示剂，所以应该将伊红美蓝换成酚红。
（2）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于消费者、分解者。由于培养基中有多种碳源，可以供多种微生物生存，因此该培养基不能分离筛选出大肠杆菌。
（3）空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能让蛋白质变性，同时还能破坏DNA的结构。
（4）据图分析，平板上的大肠杆菌分布不均匀，可能是该同学涂布不均匀导致的。
（5）大肠杆菌属于原核生物。
A、参与果酒制作的微生物是酵母菌，属于真核生物，A错误；
B、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，属于原核生物，B正确；
C、参与泡菜制作的微生物是乳酸菌，属于原核生物，C正确；
D、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，属于真核生物，D错误。
故选BC。
【点睛】
本题考查微生物分离和培养，要求考生识记培养基的组成成分、种类及功能；识记接种微生物常用的两种方法及注意事项，能结合表中和图中信息准确答题。
19【答案】稀释涂布平板法
涂布器
培养未接种的（空白）培养基
伊红美蓝
黑色
取样对象不同
24h
因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目
常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。稀释涂布平板法是将待测样品制成均匀的系列稀释液，取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
（1）图中培养皿上菌落分布均匀，应是使用涂布器，运用稀释涂布平板法进行接种。
（2）在恒温培养接种有菌悬液平板的同时，还应恒温培养未接种的培养基，以检验平板是否灭菌合格，从而增加实验的可信度。
（3）大肠杆菌与伊红美蓝发生反应，形成黑色菌落。因此，伊红美蓝试剂常常用来检测大肠杆菌。
（4）两家电视台结果相反，可能是由于选取样本不同或取样时间不同等原因。以手机为例，不同的手机不同的屏幕位置，所含的菌种的数量都会不同。
（5）在统计菌落数目时，每隔24h统计一次，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗落菌落数目。
【点睛】
解答本题学生需要对微生物培养的相关知识有一定程度的了解。熟悉常用的接种方法和菌种的计数方法。
20【答案】灼烧灭菌，干热灭菌
，高温蒸汽灭菌
稀释涂布平板法
唯一氮源
酚红
1.5
刚果红染液
红色
产生透明圈
消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）；灭菌是指用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解成氨供自身利用，氨能使培养基pH升高，导致酚红指示剂变红。
纤维素分解菌能产生纤维素酶，将纤维素水解成葡萄糖供自身利用，刚果红能与纤维素这类多糖物质形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，因此可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
（1）实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高温蒸汽灭菌。
（2）纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。
（3）为达到筛选土壤中分解尿素细菌的目的，平板内的固体培养基应选择尿素作为唯一氮源，能合成脲酶的细菌才能存活，其他微生物不能利用尿素而生长和繁殖受到抑制；培养基中加入指示剂酚红，若指示剂变红，可鉴定其中含有能分解尿素的细菌。取0.1mL培养液涂布，且稀释倍数为104的5个平板上，长出的菌落数分别为9、147、150、153和360，其中应选择菌落数为30～300的平板进行计算，则细菌的浓度为（147+150+153）÷3×104÷0.1×103=1.5×1010个。
（4）在分离分解纤维素的微生物实验中，所用培养基中的染料是刚果红染液，该染料能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，因此最后挑选菌落的标准是产生透明圈。
【点睛】
本题综合考查微生物的培养、分离与计数相关知识，要求考生掌握无菌技术、微生物的接种方法、分解尿素的细菌的分离与计数的原理和方法以及分离纤维素分解菌的原理和鉴定方法，能根据要求准确解答并进行相关计算。
21【答案】（平板）划线
（梯度）稀释
无菌
形状、大小、颜色、隆起程度
未接种的空白培养基放在相同条件下培养
产膜酵母
氧
乙醛
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
（1）平板划线法和稀释涂布平板法都可分离纯化微生物，平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。而稀释涂布平板法要得到单菌落，要将菌液进行系列梯度的稀释，然后进行涂布平板操作，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。不管是平板划线还是稀释涂布平板操作，都必须在无菌条件下进行。
（2）同种微生物表现出稳定的菌落特征，菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面是鉴定微生物的手段之一。未接种的空白培养基（对照组）放在相同条件下培养可检测灭菌是否合格。
（3）该实验的自变量为是否接种产膜酵母。
（4）醋酸菌是好氧性细菌，该菌集中在酒表面与它对环境中氧的需求有关，醋酸菌可将乙醇变成乙醛，再继续转变成醋酸。
【点睛】
本题旨在考查微生物的分离和培养、某种微生物数量的测定和培养基对微生物的选择利用，意在考查具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理，具有对一些生物学问题进行初步探究的能力。
22【答案】高压蒸汽灭菌
灼烧灭菌
6
末端
相连（或相接、相交等意思正确）
倒置
甘油
1、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。
2、微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面，后者是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
（1）对培养基进行灭菌时，多采取高压蒸汽灭菌法，而对接种环或涂布器灭菌时则用灼烧灭菌。平板划线时，为保证每次划线都从上次划线末端的微生物浓度开始，所以每次划线前都要对接种环灼烧灭菌，灼烧灭菌的次数为划线的次数+1，即需要灼烧6次，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线相交。
（2）微生物培养时，培养基应倒置培养。长期保存菌种时，应将培养的菌液与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱保存。
【点睛】
本题考查微生物培养和利用的有关知识，意在考查考生能理解生物实验的目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能。
23【答案】鉴定
能分解农药M的微生物和不能分解农药M的微生物均在该培养基上生长，另外能分解农药M的微生物周围会出现透明圈
涂布平板法
105
不能
平板上单菌落数小于30，计结果误差大
该土壤中有多种能分解农药M的微生物且不同微生物分解农药M的能力有差异
1.从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株
2.微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
（1）该实验的目的是要筛选能分解农药M的细菌，所用培养基，从功能上可划分为鉴别培养基，目的是鉴别出能分解农药M的微生物，在分解农药M的微生物产生的菌落周围出现透明圈，而其他的不能分解农药M的微生物菌落周围不会出现透明圈。
（2）该实验过程中，将土壤稀释液接种到培养基表面通常用涂布平板法操作。图中1g土壤首先溶解到99mL无菌水中，随后又稀释了1000倍，故1g土壤被稀释了105倍。
（3）根据实验结果不能较为准确的计算出土壤中微生物的数量，因为图示平板上单菌落数小于30，统计结果误差偏大，在使用稀释涂布平板法计数时，通常选择对应的稀释倍数下涂布的菌落数在30~300范围内的进行计数。
（4）平板上显示了三个大小不同的菌落，且透明圈的大小也各不相同，显然说明是该土壤中有多种能分解农药M的微生物且不同微生物分解农药M的能力有差异。
【点睛】
熟知微生物培养的操作过程及其实际应用的原理和方法是解答本题的关键，能正确分析图示的信息并能结合所学进行综合分析是解答本题的另一关键。
24【答案】液体
酸性
高压蒸汽灭菌法
分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力
化学结合法或物理吸附法
纸层析法
样品具有与标准样对应的色素带
各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性。
固定化酶和固定化细胞技术是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化，而细胞多采用包埋法固定化。
蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
胡萝卜素易溶于有机溶剂的特点，可以考虑有机溶剂萃取的方法。将提取的胡萝卜素粗品通过纸层析进行鉴定，观察标准样品中位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带，萃取样品中是否也出现了对应的层析带，则说明β-胡萝卜素提取成功。
⑴工业生产中发酵罐内的培养基属于液体培养基，有利于营养物质与三孢布拉氏霉充分接触，菌丝体生长迅速。培养三孢布拉氏霉时需将培养基pH调至酸性。在接入菌种前，应对培养基进高压蒸汽灭菌法灭菌，以避免杂菌污染。
⑵三孢布拉氏霉含有β-胡萝卜素合成的关键酶——八氢番茄红素合成酶（PSY），可根据分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等特性的差异将PSY与其他蛋白质分离。再采用化学结合法或物理吸附法固定化PSY，应用于工业生产。
⑶提取到的胡萝卜素粗品，在实验室中通常需通过纸层析法进行鉴定。若观察到样品具有与标准样对应的色素带则说明β-胡萝卜素提取成功。
【点睛】
本题综合考查生物技术实践内容，掌握培养基的制备、蛋白质的分离、固定化酶技术和提取鉴定胡萝卜素等知识是解题的基础。
25【答案】温度
18～25
在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵
成熟葡萄皮上附着有野生型酵母菌
盐水煮沸冷却和无氧发酵
能合成脲酶
酚红指示剂
参与果酒制作的微生物是酵母菌，其代谢类型为异养兼性厌氧型，在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气，在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵，酒精发酵的最佳温度是在18～25℃，pH最好是弱酸性。
泡菜的制作使用的微生物是乳酸菌，代谢类型是异养厌氧型，在无氧条件下乳酸菌能够将蔬菜中的葡萄糖氧化为乳酸。泡菜的制作流程是：选择原料、配置盐水、调味装坛、密封发酵。
分离分解尿素的微生物的原理：培养基以尿素为唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长、发育和繁殖，因而受到抑制。细菌产生的脲酶可将尿素分解为氨，使得周围环境的pH上升，进而使酚红指示剂变色。
（1）温度是酵母菌生长和发酵的重要条件，20℃左右最适合酵母菌繁殖，因此制作果酒时要将温度严格控制在18～25℃。控制好发酵条件，10d后可得到散发着酒香的成品，此过程的原理是在无氧条件下，酵母菌进行酒精发酵，能将葡萄糖分解并产生酒精。
（2）家庭中利用成熟的葡萄酿造葡萄酒时，一般不需要特别添加纯正的酵母菌，原因是成熟葡萄皮上附着有野生型酵母菌。
（3）制作泡菜过程中进行杀菌的处理方法有盐水煮沸冷却（直接杀死杂菌）和无氧发酵（抑制需氧细菌）。
（4）分解尿素的细菌能够分解尿素的原因是它们能合成脲酶，将尿素分解成氨，供自身利用。
（5）为鉴定筛选出的尿素分解菌，应向培养基中加入酚红指示剂，若pH升高，指示剂将变红，即可初步鉴定出该种细菌能分解尿素并产生氨。
【点睛】
本题考查果酒、泡菜的制作和分解尿素的细菌的分离与鉴定，要求考生掌握果酒和泡菜制作的原理、条件和注意事项，并明确尿素分解菌的分离与鉴定的原理，然后根据要求准确作答。
26【答案】梯度稀释
刚果红
C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶
发酵产纤维素酶的实验
一般采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定
酵母菌
18℃~25℃
控制无氧条件。
从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。筛选纤维素分解菌需要使用一纤维素为唯一碳源的选择培养基。刚果红和纤维素结合能形成红色复合物，纤维素分解菌可以产生纤维素酶而分解纤维素使菌落周围出现透明圈，所以可以用刚果红鉴别纤维素分解菌．酵母菌无氧发酵产生的酒精可以用酸性的重铬酸钾检验，呈灰绿色。
土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶．纤维素酶是一种复合酶（纤维素酶是一类酶包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶），可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。
（1）结合分析可知，题中步骤①为梯度稀释，鉴别培养基中应加入刚果红，刚果红能与纤维素形成红色复合物，随着纤维素被分解，在纤维素分解菌菌落的周围出现透明圈，进而将纤维素分解菌鉴别出来。
（2）纤维素分解菌中含有纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，纤维素酶主要包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分，为进一步确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵，纤维素酶活性的测定方法一般采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。
（3）利用纤维素生产乙醇时，发酵罐中还需要接种酵母菌，酵母菌在无氧条件下能将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，酵母菌适宜的生活温度为18℃~25℃，因此发酵条件应控制温度为18℃~25℃，并控制无氧条件。
【点睛】
熟知微生物的培养与应用原理与操作要点是解答本题的关键，掌握酵母菌的发酵条件以及在生产中的应用是解答本题的另一关键。纤维素分解菌的分离、鉴定方法以及纤维素酶的种类是本题的重要考查点。
27【答案】琼脂
高压蒸汽灭菌
稀释涂布平板法（或平板划线法）
琼脂分解菌分解琼脂出现凹穴，分解黑褐色色素形成透明圈
甘油管藏
CDEF
【解析】（1）欲证明该种细菌可以利用琼脂，利用筛选微生物的原理，应该选择以琼脂为唯一碳源的固体培养基进行培养，如果该种细菌能在此培养基上生长，则结论是正确的，否则就是错误的。
（2）该琼脂分解菌能分泌脱色酶，分解黑褐色色素，可在培养基中加入从糖蜜发酵废液中提取的黑褐色色素，采用稀释涂布平板法或平板划线接种菌种，由于琼脂分解菌分解琼脂，且能分解色素，所以在培养基上形成凹穴，周围形成透明圈：凹穴大，说明利用琼脂的能力强，透明圈大，说明分解色素的能力强。对于频繁使用的菌种，先接种到试管的固定斜面培养基上培养，然后放入4℃的冰箱中保藏，为临时保藏法。对于需要长期保存的菌种，先将菌液转入灭菌后的甘油中，混匀后放在-20℃冷冻箱中保存，为甘油管藏法。
（3）实验中可以使用干热灭菌的有吸管、金属用具、玻璃棒、培养皿等，实验者的皮肤采用化学试剂消毒的方法，培养基采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
微生物灭菌处理的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等，处理能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用干热灭菌法灭菌。微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用临时保藏的方法。首先，将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，装人1
mL甘油后灭菌。将1
mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。
（1）欲证明该种细菌可以利用琼脂，利用筛选微生物的原理，应该选择以琼脂为唯一碳源的固体培养基进行培养，如果该种细菌能在此培养基上生长，则结论是正确的，否则就是错误的。
（2）该琼脂分解菌能分泌脱色酶，分解黑褐色色素，可在培养基中加入从糖蜜发酵废液中提取的黑褐色色素，采用稀释涂布平板法或平板划线接种菌种，由于琼脂分解菌分解琼脂所以在培养基上形成凹穴，能分解黑褐色色素所以周围形成透明圈。凹穴大，说明利用琼脂的能力强，透明圈大，说明分解色素的能力强。对于需要长期保存的菌种，应用甘油管藏法长期保存。
（3）实验中可以使用干热灭菌的有吸管、金属用具、玻璃棒、培养皿等，实验者的皮肤采用化学试剂消毒的方法，培养基采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
【点睛】
本题主要考查微生物的培养和筛选的相关知识，意在考查考生识记培养基的营养要素以及制备培养基的流程，能挖掘题干信息依据培养基的分类，然后分析题干情境准确作答。
28【答案】巴氏消毒法
牛奶的营养成分不被破坏
稀释涂布平板法
个别菌落可能是由2个或多个细菌形成的
乳酸链球菌和乳酸杆菌
异养厌氧型
鉴别
厌氧
周围变色
甘油
无菌技术中消毒的方法有：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒、紫外线消毒等。微生物培养时常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法；
稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数；
培养基按照其用途可分为选择培养基和鉴别培养基；
需要长期保存菌种，可以采用甘油管藏，置于-20℃条件下保存。
(1)牛奶常用的消毒的方法是巴氏消毒法，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是牛奶的营养成分不被破坏；
(2)利用稀释涂布平板法可以对生鲜牛奶中细菌进行计数，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小的原因是：个别菌落可能是由2个或多个细菌形成的；
(3)生鲜牛奶加工成酸奶的过程中利用的是乳酸菌，常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌，其代谢类型是异养厌氧型；
(4)在进行乳酸菌分离纯化时，科研人员将酸奶稀释后涂布在含溴甲酚绿（遇酸变色）的鉴别培养基上，厌氧培养一段时间后，选择周围变色的菌落临时保存；
(5)获得的乳酸菌如需要长期保存时，菌液中常需要加入一定量的甘油置于-20℃条件下保存。
【点睛】
本题考查无菌技术中消毒的方法、菌落计数以及分离和纯化、菌种的保存等过程的相关知识，意在考查学生的识记能力。
29【答案】蛋白酶和脂肪酶
核糖体
抑制微生物的生长、调制腐乳的风味、析出豆腐中的水分
发酵时间延长
杀死上次划线后接种环上残留的毛霉菌种
将聚集的毛霉菌种逐步进行稀释，以获得单个的菌落
（1）腐乳发酵的过程中，毛霉主要是利用其产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐中的大分子物质分解成小分子物质，这两种酶的化学本质都是蛋白质，最初是在核糖体上合成的。
（2）在腐乳的制作过程中，盐的作用在于抑制微生物的生长、调制腐乳的风味、析出豆腐中的水分；卤汤中酒的含量应控制在12%左右，若酒精含量过高，则会导致发酵时间延长。
（3）用平板划线法分离样品中的优良毛霉菌种时，每次划线之前都要对接种环进行灭菌，目的是杀死上次划线后接种环上残留的毛霉菌种；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的毛霉菌种逐步进行稀释，以获得单个的菌落。
30【答案】（8分）（1）划线
稀释涂布（或涂布）
（2）液体
（3）敏感
不敏感
耐药菌
（4）A
（5）C
试题分析：（1）分离菌落常用稀释涂布平板法或划线涂布法。
（2）在进行扩大培养时，应选用液体培养基进行培养。
（3）含抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对该抗生素有敏感性且透明圈越大的敏感性越强，周围没有透明圈的说明该抗生素不具有敏感性。故该致病菌对抗生素A敏感，对抗生素B不敏感。在排除杂菌污染的情况下，滤纸片C出现透明圈，说明此菌对抗生素C敏感，但中间出现的菌落可能是出现了对抗生素C的耐药菌。
（4）实验结果抗生素A对该致病菌的作用最好。
（5）对照实验是指除所控因素外其它条件与被对照实验完全对等的实验，判断选择培养基是否起到了选择作用，则接种了的选择培养基是实验组，而接种了的牛肉膏蛋白胨培养基属于对照组。故C项正确。
考点：本题考查微生物的培养和应用，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。
31【答案】不需要
10
1
酵母菌平板浇注会使部分菌体埋入培养基中，酵母菌是兼性厌氧型生物，可以在低氧甚至无氧环境下生存繁殖
1
6
液体
培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐等。
常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。
（1）要从土壤中分离相关的微生物，所以不需要对土壤进行消毒和灭菌。
（2）若待稀释菌液取1
ml，注入9
ml的无菌水，则相当于稀释了10倍。
（3）酵母菌平板浇注会使部分菌体埋入培养基中，酵母菌是兼性厌氧型生物，可以在低氧甚至无氧环境下生存繁殖，而醋酸菌是需氧生物，不能在无氧条件下生存，故从土壤中分离酵母菌和醋酸菌时，只需使用1次平板浇注法。
（4）划线纯化阶段，图中只有一个培养皿，接种环取一次菌液即可，接种之前对接种环需要进行一次灼烧灭菌处理，图中共划了5个区，每个区划线后均需进行灼烧灭菌，故共灼烧6次。
（5）扩大培养常用液体培养基进行培养，增加微生物的数量。
21世纪教育网
www.21cnjy.com
精品试卷·第
2
页
（共
2
页）
HYPERLINK
"http://21世纪教育网(www.21cnjy.com)
"
21世纪教育网(www.21cnjy.com)