DNA的粗提取与鉴定

(共26张PPT)
讨论2：真核生物的遗传物质存在于哪里？
讨论3：怎样才能将真核细胞内的遗传物质分离来？
讨论1：生物体的遗传物质是什么？
专题5 DNA和蛋白质技术
课题1 DNA的粗提取与鉴定
（一）、实验材料的选取：
用什么材料提取DNA？为什么？
（一）实验材料的选取：
鸡血细胞做实验材料。原因：
1、鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得
2、鸡血细胞极易吸水胀破
3、植物细胞外有细胞壁，其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、若是动物细胞，如何获取DNA滤液？
2、若是植物细胞，如何获取DNA滤液？
旁栏思考：
加入洗涤剂和食盐的作用分别是？
如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？
旁栏思考：
加入洗涤剂和食盐的作用分别是？
3、如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？
洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解
旁栏思考：
加入洗涤剂和食盐的作用分别是？
3、如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？
洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解
会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？
（三）去除滤液中的杂质
滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？
可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质。
（三）去除滤液中的杂质
根据DNA的理化性质，可以用哪些方法来去除滤液中的杂质？
（三）去除滤液中的杂质
为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？（注意：两种食盐溶液的浓度和作用）
（三）去除滤液中的杂质
用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。因此，反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？（注意：两种食盐溶液的浓度和作用）
（四）DNA的析出
析出：
滤液+同体积95%冷却酒精 白色丝状物
（五）DNA的鉴定
如何鉴定？
对比反应是为了证明什么？
原理？
沸水浴
DNA＋二苯胺 蓝色物
三、操作提示
1.以血液为实验材料，每100ml 加入3g柠檬酸钠，作为抗凝剂。
2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻 缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。
方法步骤
加入物质
目的
1
.
制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
①
提取鸡血细胞细胞核物质
20 m1
蒸馏水
②
2
.
溶解细胞核内的
DNA
2 m1
／
L
的
NaCI
溶液
40
mL
③
3
.
析出含
DNA
的黏稠物
蒸馏水
④
4
.
滤取含
DNA
的黏稠物
⑤
5
.
将
DNA
的黏稠物再溶解
2 mol
／
L
的
NaCl
溶液
20 mL
⑥
6
.
过滤含
DNA
的
NaC
l
溶液
⑦
7
.
提取含有杂质较少的
DNA
冷却的
95
％的酒精
50 mL
⑧
A
:
(1)
向试管中加入
0
.
015 mol
／
L
的
NaCl
溶液
5
mL
(2)
加入
DNA
(3)4 mL
二苯胺试剂
8
.
DNA
的鉴定
B
:
(1)
向试管中加入
0
.
015mol
／
L
的
NaCl
溶液
5
mL
(2)4 m
L
二苯胺试剂
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
②加速血细胞破裂
③溶解DNA
④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地析出
方法步骤
加入物质
目的
1
.
制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
①
提取鸡血细胞细胞核物质
20 m1
蒸馏水
②
2
.
溶解细胞核内的
DNA
2 m1
／
L
的
NaCI
溶液
40
mL
③
3
.
析出含
DNA
的黏稠物
蒸馏水
④
4
.
滤取含
DNA
的黏稠物
⑤
5
.
将
DNA
的黏稠物再溶解
2 mol
／
L
的
NaCl
溶液
20 mL
⑥
6
.
过滤含
DNA
的
NaC
l
溶液
⑦
7
.
提取含有杂质较少的
DNA
冷却的
95
％的酒精
50 mL
⑧
A
:
(1)
向试管中加入
0
.
015 mol
／
L
的
NaCl
溶液
5
mL
(2)
加入
DNA
(3)4 mL
二苯胺试剂
8
.
DNA
的鉴定
B
:
(1)
向试管中加入
0
.
015mol
／
L
的
NaCl
溶液
5
mL
(2)4 m
L
二苯胺试剂
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
②加速血细胞破裂
③溶解DNA
④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地析出
⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上
⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中
⑦除去含DNA的滤液中的杂质
⑧提取DNA
⑨ A出现蓝色 B无变化
此实验过程中有几次过滤，几次析出？分别在哪一步？
答：整个实验共“三次过滤，两次析出”
此实验过程中有几次过滤，几次析出？分别在哪一步？
过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层
三次过滤
第一次： DNA存在于滤液里 第一步
第二次： DNA被留在纱布上 第四步
第三次： DNA存在于滤液里 第六步
③两次析出
第一次：用0.14 mol／L 的NaCI溶液
第三步
第二次：用冷却的95％的酒精
第七步