DNA的粗提取与鉴定

(共14张PPT)
专题5
DNA和蛋白质技术
课题1
DNA的粗提取与鉴定
1.DNA的粗提取与鉴定的原理有哪些？
2.DNA的粗提取与鉴定的操作分为几步，每一步应如何操作，操作的目的是什么？
一、实验原理
1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水而破裂，释放出内容物。
2.洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。
3.DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
4. DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。
5.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色。
二、实验设计
1、实验材料的选取
选取原则
DNA含量丰富
材料易得
提取简便
鸡血细胞
鸡血细胞核DNA含量丰富
材料易得
鸡血细胞极易吸水胀破
若是动物细胞，如何获取DNA滤液？
为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
在低浓度的溶液中红细胞会吸水胀破。
二、实验设计
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液
若是植物细胞，如何获取DNA滤液？
加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐有利于DNA溶解。
二、实验设计
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液
滤液中的杂质可能有哪些细胞成分？
为什么反复地溶解与析出DNA，能够除去杂质？
可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质
用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去在低盐溶液中的杂质。
二、实验设计
3、去除滤液中的杂质
方案二与方案三的原理有什么不同？
方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白质，从而使提取的DNA与蛋白质分开；
方案三是利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。
二、实验设计
3、去除滤液中的杂质
滤液+同体积冷却95%酒精 白色丝状物
析出：
溶解：
鉴定：
沸水5min
DNA＋二苯胺 蓝色物
二、实验设计
4、DNA的析出与鉴定
将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中
方法步骤
加入物质
目的
1.制备鸡血细胞液
2.提取细胞核物质
3.溶解核内的DNA
4.析出含DNA的粘稠物
5.滤出含DNA的粘稠物
柠檬酸钠溶液
20 m1蒸馏水
2 mo1 /L的NaCl溶液
加蒸馏水
防止血凝固
加速血细胞破裂
溶解DNA
NaCl溶液稀释至0.14mol/L使DNA最大限度地释出
使含DNA的黏稠物被留在纱布上
方法步骤
加入物质
目的
6.DNA的黏稠物再溶解
7.过滤含DNA的NaCl溶液
8.提取杂质较少的DNA
9.DNA的鉴定
2 mo1 /L的NaCI溶液
冷却的95 ％的酒精
二苯胺试剂
使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中
除去含DNA的滤液中的杂质
提取DNA
有DNA则出现蓝色
方法步骤
加入物质
目的
1.制备鸡血细胞液
2.提取细胞核物质
3.溶解核内的DNA
4.析出含DNA的粘稠物
5.滤出含DNA的粘稠物
6.DNA的黏稠物再溶解
7.过滤含DNA的NaCl溶液
8.提取杂质较少的DNA
9.DNA的鉴定
柠檬酸钠溶液
20 m1蒸馏水
2 mo1 /L的NaCl溶液
蒸馏水
2 mo1 /L的NaCI溶液
冷却的95 ％的酒精
二苯胺试剂
①
②
③
④
⑤
⑥
⑦
⑧
⑨