(共15张PPT)
课题2
多聚酶链式反应（PCR)扩增DNA片段
温故知新1
组成DNA分子的基本单位是什么
这些基本单位是如何连接成DNA分子的
DNA分子结构有什么特点？
脱氧核苷酸
脱氧核苷
磷酸
脱氧核糖
含氮碱基
嘌呤
嘧啶
腺嘌呤（A）
鸟嘌呤（G）
胞嘧啶（C）
胸腺嘧啶（T）
1
2
3
4
5
碱基
OH
O
O
P
O
HO
OH
O
O
P
O
HO
碱基
OH
OH
O
O
P
O
HO
碱基
O
OH
O
O
P
O
HO
OH
碱基
碱基
脱氧核糖
磷酸基团
碱基
脱氧核糖
碱基
脱氧核糖
5’
3’
脱氧核苷酸链结构简图
磷酸二酯键
5’
5’
3’
3’
DNA分子的复制需要哪些条件？
DNA分子的复制过程是怎样的？
温故知新2
DNA母链：提供复制的模板
解旋酶：打开DNA双链
4种脱氧核苷酸：合成子链的原料
DNA聚合酶：催化合成DNA子链
ATP：为复制过程提供能量
引物：使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
DNA复制的条件
一、PCR原理：
PCR（多聚酶链式反应）技术
是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。
利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。
DNA母链：提供复制的模板
解旋酶： 打开DNA双链
4种脱氧核苷酸：合成子链的原料
DNA聚合酶： 催化合成DNA子链
ATP：为复制过程提供能量
引物：使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
PCR反应的条件
80—100℃
耐热的DNA聚合酶
缓冲溶液：维持反应的pH值不变
二、PCR反应的过程
1、变性：
温度上升到90℃以上时,双链DNA解聚成为单链。
2、复性（退火）：
温度下降到50℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
3、延伸：
温度上升到72℃左右,溶液中的4种脱氧核苷酸在Taq DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对的原则合成新的DNA链。
