微生物的基本培养技术
一、单项选择题
1.关于培养基的配制说法不正确的是( )
A.在配制培养乳酸杆菌的培养基时,需加入维生素
B.微生物的适应性强,配制培养基时可以不考虑pH
C.虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐
D.配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例
2.不同的微生物对营养物质的需求各不相同,但一般都需要水、碳源、氮源和无机盐。下列有关微生物所需营养物质的描述,正确的是( )
A.氮源物质只能为该微生物提供必要的氮元素
B.有些碳源也可以给微生物的生长提供能源
C.无机盐是微生物不可缺少的营养物质,所以无机盐越多越好
D.所有微生物所需营养是一样的
3.下列关于灭菌和消毒的理解,正确的是( )
A.灭菌是指杀死环境中的原核生物
B.消毒可以杀死微生物细胞和全部芽孢
C.常用的消毒方法有煮沸法、巴氏消毒法、紫外线法和化学药物法
D.常用的灭菌方法有加热法、紫外线法、化学药品法
4.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧、干热灭菌等几种不同的处理,这些方法依次用于杀死哪些部位的杂菌( )
A.接种环、手、培养基、涂布器
B.高压锅、手、接种环、培养基
C.培养基、手、接种环、吸管
D.接种环、手、高压锅、培养皿
5.有关平板划线操作的说法正确的是( )
A.使用已灭菌的接种环、培养皿,操作过程中不再灭菌
B.打开含菌种的试管需通过火焰灭菌,取出菌种后需马上塞上棉塞
C.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线即可
D.该方法常用于微生物的分离纯化
6.如图是倒平板的操作,下列相关叙述错误的是( )
A.正确的操作顺序是丙→乙→甲→丁
B.甲应在酒精灯火焰附近进行
C.此培养基不可能为液体培养基
D.完成甲后应快速进行丁操作
7.下列常用的无菌操作错误的是( )
A.无菌操作不要求杀死一切微生物
B.用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒
C.实验操作过程中应在酒精灯火焰附近进行
D.玻璃器皿可用酒精擦拭来进行灭菌
8.下列关于培养基的叙述,正确的是( )
A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
B.培养基都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等
C.牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基,营养全面
D.微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的单个细菌
9.如图所示为实验室使用某种接种方法在培养基上培养某种微生物的结果。下列相关说法正确的是( )
A.该图最可能是用稀释涂布平板法进行接种的
B.在操作时,为防止杂菌污染,需进行严格的消毒和灭菌
C.该种微生物有可能是新冠病毒COVID-19
D.该培养基上的菌落分布不均匀,代表纯化失败
10.如图为实验室中酵母菌的纯培养部分操作步骤,下列说法不正确的是( )
A.①步骤使用的培养基已经灭菌并调节过pH
B.②步骤接种环经灼烧灭菌后应趁热快速蘸取菌液
C.③到④过程中,每次接种前后都需要对接种环进行灼烧处理
D.①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行
二、不定项选择题(每题有一个或多个正确答案)
11.下列关于高压蒸汽灭菌法的说法,错误的是( )
A.灭菌锅内要加入适量的蒸馏水,且物品的摆放不能过挤
B.关闭电源后,打开排气阀,待压力表指针降为0后,打开灭菌锅盖
C.接通电源加热后,先打开排气阀,以排尽灭菌锅内的冷空气
D.待灭菌锅内的温度降至60
℃以下后,方可取出锅内物品
12.通常情况下,生长在平板上的菌落中央较厚而边缘较薄,菌落边缘的细胞比中央的细胞生长快。下列说法正确的是( )
A.菌落边缘细胞因发生了变异而生长较快
B.菌落边缘的细胞获得的营养多、代谢快
C.菌落外围的细胞易获得氧气,有氧呼吸快
D.菌落边缘的细胞周边代谢产物积累少,生长快
13.下列依次表示倒平板、接种的位置,以及划线法接种的路径示意图,其中错误的是( )
三、非选择题
14.回答下列与细菌培养相关的问题。
(1)在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常,制备培养基时除上述两种营养物质外,培养基中还需要添加________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长,原因是
________________________________________________________________________
________________。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。
(3)单个细菌在平板上会形成________,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物。
(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
15.某兴趣小组配制含琼脂的牛肉膏蛋白胨培养基后对培养基和培养皿进行灭菌,当培养基温度下降到50
℃时,在酒精灯火焰附近倒平板,待培养基冷却至室温,按下表进行处理,将处理完毕的培养皿培养2~3天,观察每个培养皿中的菌落特征和数目。
组别
A
B
C
D
E
F
距地面高度
0
m
0.3
m
0.6
m
0.9
m
1.2
m
0
m
处理方法
打开皿
盖暴露
15分钟
打开皿
盖暴露
15分钟
打开皿
盖暴露
15分钟
打开皿
盖暴露
15分钟
打开皿
盖暴露
15分钟
不打开皿盖
回答下列问题:
(1)上述实验的实验目的是_______________________________________。
常采用______________对培养基进行灭菌。若F组的培养基表面有菌落生长,说明________________________________________________________________。
(2)培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为微生物生长提供________。在酒精灯火焰附近进行相关操作是为了
_________________________________________________________________。
(3)实验过程特别强调温度控制。待培养基冷却至室温的目的是____________________________________________________________________。
(4)培养微生物时将培养皿倒置的目的是_____________________________________________________________________。
16.在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下:
―→―→―→
请回答下列有关问题:
(1)无论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是________。
(2)倒平板的适宜温度是50
℃左右,原因是______________________。待平板冷凝后,要将平板倒置,这样既可避免培养基表面的水分过快地挥发,又可防止__________________________________________________________________。
(3)若使用平板划线法进行接种,应选择的接种工具是图中的________。
(4)划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________________________________。
(5)若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。
参考答案
1.B
培养基除需要满足碳源、氮源、水和无机盐几种营养物质外,还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求,如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,A正确,B错误;虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐,C正确;不同微生物的生长对各种营养物质的需求不同,配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例,D正确。
2.B
含氮的有机物既可给微生物提供氮元素,也可给微生物提供能源,A错误;含碳的有机物既可给微生物提供碳元素,也可给微生物提供能源,B正确;微生物生长需要无机盐,但不是越多越好,过多会导致培养基渗透压过高,使微生物因失水过多而不能生存,C错误;不同的微生物有各自的营养需求,如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,D错误。
3.C
灭菌是指杀死环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子,A错误,B错误;常用的消毒方法有煮沸法、巴氏消毒法、紫外线法和化学药物法等,C正确;常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌,D错误。
4.C
通常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌,用酒精对操作者的手进行消毒,对接种针、瓶口采用火焰灼烧的方法进行灼烧灭菌,吸管、培养皿可用干热灭菌法灭菌。综上所述,C正确;A、B、D错误。
5.D
接种环在使用过程中需要多次灭菌,第一次灭菌是为了杀死其他微生物,每次划线结束后需要灭菌是为了杀死上次残留的菌种,A错误;打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌,接种后还需要通过火焰灭菌再塞上棉塞,B错误;将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划三至五条平行线,还需盖上培养皿盖,防止空气中杂菌混入,C错误。
6.D
倒平板的操作中,需要在无菌环境下操作,首先轻轻震荡灭菌后的锥形瓶,待冷却至50℃左右之后,然后在酒精灯附近灼烧锥形瓶瓶口灭菌,再在酒精灯附近进行倒平板操作,最后待培养基凝固后倒置存放,故正确的操作顺序为丙→乙→甲→丁,A正确;培养基分装时,需要使锥形瓶的瓶口通过火焰,防止瓶口的微生物污染培养基,B正确;图示操作为配置固体培养基的操作,C正确;培养皿应冷却到50℃倒平板,此温度下不烫手,等到所到的平板凝固后,再进行丁的操作,D错误。
7.D
无菌操作不要求杀死一切微生物,A正确;实验操作者双手用70%酒精消毒,B正确;实验操作过程中应在酒精灯火焰附近的无菌区进行,C正确;玻璃器皿需要干热灭菌的方法来进行灭菌,D错误。
8.A
:培养基是为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源、水和无机盐等营养的基质,A正确;微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐等,有的还需要生长因子等特殊的营养,B错误;牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基,营养全面,C错误;微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的菌落,但不一定是单个细菌繁殖而来的,D错误。
9.B
题图中菌落分布不均匀,部分菌落过于密集,最可能是用平板划线法进行接种的,A错误;在操作时,为防止杂菌污染,需进行严格的消毒和灭菌,B正确;病毒不能在培养基上生存繁殖,故该种微生物不可能是新冠病毒COVID-19,C错误;平板划线法,随划线次数的增加,菌落密度逐渐减小,因此菌落分布不均匀,不属于纯化失败,D错误。
10.B
①步骤表示倒平板,为防止杂菌污染,在倒平板之前培养基已经灭菌并调节过pH,A正确;②步骤为用接种环蘸取菌液,需在酒精灯火焰旁等接种环冷却后蘸取,防止温度过高,将菌种杀死,B错误;③到④过程中,每次接种前后都需要对接种环进行灼烧处理,进行纯化,最后一次划线后灼烧,防止污染环境,C正确;①②③步骤操作时都需要在酒精灯火焰旁进行,以防被杂菌污染,D正确。
11.B
灭菌锅内要加入适量的蒸馏水,避免沸水与物品接触,且物品的摆放不能过挤,以利于蒸汽与物品充分接触,A正确;关闭电源后,应使其自然降温,待压力表指针降为0后,打开灭菌锅盖,B错误;接通电源加热后,先打开排气阀,以排尽灭菌锅内的冷空气,否则锅内温度达不到规定温度,C正确;待灭菌锅内的温度降至60℃以下后,方可取出锅内物品,以免因温度过高而骤然降温导致玻璃器皿炸裂,D正确。
12.BCD
变异与细胞所处的位置无关,菌落的中央和边缘细胞都可能发生变异,A错误;菌落边缘的细胞接触新培养基,营养物质更多,生长快,B正确;菌落外围的细胞接触到的空气多,氧气充足,因此有氧呼吸快,C正确;菌落边缘的细胞周边代谢产物易于排出,积累少,对细胞代谢的影响更小,生长快,D正确。
13.D
倒平板时,用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖,防止空气中的杂菌污染,A正确;左手将培养皿打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,B正确;三个区域内划线,而且每次转换划线角度后再进行划线,让菌种来源于上一次划线末端,C正确;没有让接种环在固体培养基表面连续划线的操作,D错误。
14.(1)蛋白胨 水、无机盐 能够 硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源 (2)倒置 (3)菌落 (4)灭菌
15.(1)探究不同高度空气中微生物的种类和数量 高压蒸汽灭菌法 培养基灭菌不合格(受到杂菌污染) (2)碳源和氮源 避免周围环境中微生物的污染 (3)使培养基凝固,防止培养基温度过高杀死接种在其上的微生物 (4)防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上(污染培养基和破坏菌落)
16.(1)调节pH (2)温度过高会烫手,过低培养基又会凝固 皿盖上的水珠落入培养基,造成污染 (3)A (4)①接种环灼烧后未冷却;②划线未从第一区域末端开始 (5)灭菌