2021-2022学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3 1.2.1微生物的纯培养课件（22张ppt）
文档属性
| 名称 | 2021-2022学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3 1.2.1微生物的纯培养课件（22张ppt） |  | |
| 格式 | pptx | ||
| 文件大小 | 2.6MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2022-01-10 22:24:07 | ||
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文档简介
(共22张PPT)
针对不耐高温的液体
接种室、超净工作台
培养皿.吸管等玻璃器皿耐高温、需保持干燥
接种环等金属工具
实验操作者的双手
培养基
家庭餐具等生活用品消毒
a.煮沸消毒法
b.巴氏消毒法
c.化学药剂
d.紫外线
e.灼烧灭菌
f.干热灭菌
g.高压蒸汽灭菌
b
d
e
c
a
g
f
回顾上节课内容
第二课时 微生物的纯培养
一、纯培养的概念、原理和步骤
1、培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体成为培养物；
2、纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
3、纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
4、纯培养的原理：
5、纯培养的步骤：
制备培养基、接种与分离、培养
①概念：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
②特征：
③功能：
获得单菌落的方法：
鉴定菌种的重要依据
大小、形状、隆起程度、颜色等。
平板划线法、
稀释涂布平板法
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
4、纯培养的原理：
几种菌落及其形态
几种菌落及其形态
涂布器
接种环
接种针
二、酵母菌的纯培养
①配制培养基
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml（定容）。
②灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌1-2h。
③倒平板
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
1.制备培养基
培养基：用高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌
培养皿：在干热灭菌箱内干热灭菌
干热灭菌：
160-170 ℃下加热1-2h。
高压蒸汽灭菌：
100kPa、121 ℃下维持15-30min.
1
2
3
4
1.拔出锥形瓶的棉塞
2.将瓶口迅速通过火焰
3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖
4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置
倒平板的具体步骤
1、培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
问题讨论：
3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后落入培养基，造成污染。
4、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
答：将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
5、怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
原理：
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
稀释分散
生长繁殖
“平板划线法”实验操作
2.接种与分离酵母菌
接种环
接种针
1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞
3、将试管口通过火焰
4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液
5、将试管通过火焰，并塞上棉塞
6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连
8、将平板倒置放入培养箱中培养。
划3个平板（重复实验）1个不接种（空白对照）
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
1
2
3
4
5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次
②划线首尾不能相接
③每次划线前接种环进行灭菌
④划线后,培养皿倒置培养
平板划线法注意事项:
1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
杀死接种环上原有微生物
灼烧时期 目的
取菌种前
每次划线前
接种结束后
问题探讨
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
4、平板划线时不能划破培养基，为什么？
1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
2）存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28摄氏度左右的恒温培养箱中培养24-48h。（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）
3、培养酵母菌
针对不耐高温的液体
接种室、超净工作台
培养皿.吸管等玻璃器皿耐高温、需保持干燥
接种环等金属工具
实验操作者的双手
培养基
家庭餐具等生活用品消毒
a.煮沸消毒法
b.巴氏消毒法
c.化学药剂
d.紫外线
e.灼烧灭菌
f.干热灭菌
g.高压蒸汽灭菌
b
d
e
c
a
g
f
回顾上节课内容
第二课时 微生物的纯培养
一、纯培养的概念、原理和步骤
1、培养物：在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体成为培养物；
2、纯培养物：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
3、纯培养：获得纯培养物的过程就是纯培养。
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
4、纯培养的原理：
5、纯培养的步骤：
制备培养基、接种与分离、培养
①概念：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
②特征：
③功能：
获得单菌落的方法：
鉴定菌种的重要依据
大小、形状、隆起程度、颜色等。
平板划线法、
稀释涂布平板法
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
4、纯培养的原理：
几种菌落及其形态
几种菌落及其形态
涂布器
接种环
接种针
二、酵母菌的纯培养
①配制培养基
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml（定容）。
②灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌1-2h。
③倒平板
待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
1.制备培养基
培养基：用高压蒸汽灭菌锅湿热灭菌
培养皿：在干热灭菌箱内干热灭菌
干热灭菌：
160-170 ℃下加热1-2h。
高压蒸汽灭菌：
100kPa、121 ℃下维持15-30min.
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1.拔出锥形瓶的棉塞
2.将瓶口迅速通过火焰
3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖
4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置
倒平板的具体步骤
1、培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
问题讨论：
3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后落入培养基，造成污染。
4、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
答：将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
5、怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
原理：
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
稀释分散
生长繁殖
“平板划线法”实验操作
2.接种与分离酵母菌
接种环
接种针
1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞
3、将试管口通过火焰
4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液
5、将试管通过火焰，并塞上棉塞
6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连
8、将平板倒置放入培养箱中培养。
划3个平板（重复实验）1个不接种（空白对照）
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
1
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3
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5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次
②划线首尾不能相接
③每次划线前接种环进行灭菌
④划线后,培养皿倒置培养
平板划线法注意事项:
1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
杀死接种环上原有微生物
灼烧时期 目的
取菌种前
每次划线前
接种结束后
问题探讨
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
4、平板划线时不能划破培养基，为什么？
1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
2）存留在划破处的单个细胞无法形成规则的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28摄氏度左右的恒温培养箱中培养24-48h。（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）
3、培养酵母菌