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人教版（2019版）选择性必修三3.1 重组DNA技术的基本工具同步练习
一、单选题
1．（2021高二上·沈阳期中）下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ）
A．新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取
B．提取植物材料的DNA需先研磨破碎细胞
C．DNA只能溶于2 mol/L的NaCl溶液
D．溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺后颜色呈紫色
2．（2021高三上·黑龙江期中）以下说法正确的是（ ）
A．所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
B．质粒是基因工程中惟一运载体
C．限制酶和DNA连接酶的作用部位相同
D．黑农五号是通过杂交育种方法获取的
3．（2021高二上·抚松竞赛）有关基因工程的叙述正确的是（ ）
A．基因工程都能定向改变生物的性状
B．DNA连接酶可以切断磷酸二酯键
C．质粒都可以做运载体
D．限制性核酸内切酶只在获取目的基因时才使用
4．（2021高二上·抚松竞赛）关于基因工程下列操作步骤的叙述，错误的是（ ）
A．用“鸟枪法”提取目的基因的过程需发生碱基互补配对
B．两种DNA黏性末端的黏合是通过碱基互补配对实现的
C．目的基因导入受体细胞过程不发生碱基互补配对
D．目的基因表达过程要发生碱基互补配对
5．（2021·肥城模拟）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是（ ）
A．用蒸馏水将NaCl溶液的物质的量浓度调至0.14 mol/L，过滤去除析出物
B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质
C．将丝状物溶解在浓度为2 mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈紫色
D．用植物替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同
6．（2021高三上·湖南月考）哺乳动物的血红蛋白在含氧量高的地方易与氧结合，在含氧量低的地方易与氧分离，红细胞结合和携带O2的过程并不影响二价铁离子。若血红蛋白中Fe2+ 被氧化为Fe3+，则形成高铁血红蛋白，O2与其结合十分牢固，不易分离。若控制血红蛋白的基因发生突变，可引起血红蛋白结构改变，进而引发镰刀型细胞贫血症。下列说法错误的是（ ）
A．高铁血红蛋白形成会导致组织细胞缺氧
B．人体血液中红细胞吸收葡萄糖所需能量由无氧呼吸提供
C．DNA的粗提取可选用鸡的红细胞
D．镰刀型细胞贫血症可通过显微镜观察到
7．（2021高三上·普宁月考）在基因工程中，为将目的基因导入受体细胞常采用土壤农杆菌转化法，在土壤农杆菌中常含有一个Ti质粒。某科研小组欲将某抗虫基因导入某植物，下列分析错误的是( )
A．Ti质粒含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因，是基因工程中重要的载体
B．用Ca2＋处理细菌是重组Ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法
C．重组Ti质粒的土壤农杆菌成功感染植物细胞，可通过植物组织培养技术将该细胞培养成具有抗虫性状的植物
D．若能够在植物细胞中检测到抗虫基因，则说明将重组质粒成功地导入到了受体细胞
8．（2021高三上·普宁月考）下列关于基因工程的叙述中，正确的是( )
①基因工程打破了物种与物种之间的界限 ②基因治疗是基因工程技术的应用 ③载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞 ④所需要的工具酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体 ⑤常使用的载体有大肠杆菌、质粒和动植物病毒等
A．②③⑤ B．①②⑤ C．①②③ D．①③④
9．（2021高一下·岑溪期末）目前市面上许多疫苗是应用基因工程技术生产的，在基因工程的实验过程中，把目的基因和运载体连接起来的是（ ）
A．DNA聚合酶 B．限制性核酸内切酶
C．逆转录酶 D．DNA连接酶
10．（2021高二下·韩城期末）下图分别表示限制酶甲、乙、丙、丁的识别序列和切割位点（图中“↑”所指处），其中切割DNA所得黏性末端相同的两种酶是（ ）
A．甲、乙 B．甲、丙 C．甲、丁 D．乙、丙
11．（2021高二下·山东期末）使用染色剂染色是生物学实验常用的方法，某同学以香蕉为材料做了如下实验，其中染色方法和实验结论均正确的是（ ）
实验 观察对象 染色方法 实验结果 实验结论
A 香蕉中糖的鉴定 斐林试剂＋水浴(50~65℃) 呈现砖红色 不含有蔗糖
B 香蕉中DNA的粗提取与鉴定 二苯胺＋沸水浴 呈现蓝色 提取物中含DNA
C 香蕉原生质体的活性 台盼蓝 细胞染成蓝色 原生质体有活性
D 香蕉皮上微生物种类 刚果红 培养基中出现透明圈 含有大肠杆菌
A．A
B．B
C．C
D．D
12．（2021高一下·桂林期末）下列不属于基因工程工具的是（ ）
A．限制性内切酶 B．RNA聚合酶
C．DNA连接酶 D．质粒
13．（2021高二下·邢台月考）下图所示三个DNA片段依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点。下列有关叙述正确的是（ ）
A．限制酶主要是从真核生物中分离纯化出来的
B．这三种限制酶的识别序列都是由6个核苷酸组成的
C．用这三种限制酶切割DNA片段会形成三种相同的黏性末端
D．图中的DNA片段被EcoRⅠ切割后，会增加两个游离的磷酸基团
14．（2021高二下·邢台月考）下列有关基因工程的理论基础和技术发展的叙述，错误的是（ ）
A．遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据
B．基因载体的发现为基因跨物种转移找到了运载工具
C．限制酶和连接酶的发现为DNA的切割和连接创造了条件
D．PCR技术扩增目的基因的前提是已知目的基因的碱基序列
15．（2021高二下·金台期中）关于基因工程下列说法正确的有（ ）
①一种限制酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子 ②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工 ③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 ④只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达 ⑤限制酶的识别序列越长，酶切点出现的概率越大⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物上 ⑦质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物的细胞中
A．2项 B．3项 C．4项 D．5项
16．（2021高二下·金台期中）下列关于基因工程的相关叙述，错误的是（ ）
A．基因工程的原理是基因重组
B．限制酶只在获得目的基因时才用
C．质粒和噬菌体等都可以作为基因工程的运载体
D．转基因动物培养过程中往往以受精卵为受体细胞
17．（2021高二下·金台期中）下列关于DNA重组技术基本工具的叙述，正确的是（ ）
A．质粒是广泛存在于细菌细胞质中的一种颗粒状的细胞器
B．限制酶将一个线形DNA分子切成两个片段需破坏两个磷酸二酯键
C．DNA连接酶能将目的基因与质粒黏性末端的碱基随机黏合
D．质粒上的目的基因必须整合到受体细胞的DNA上才能不被分解
18．（2021高二下·武功期中）下列关于基因工程工具酶的说法，正确的是（ ）
A．E．coliDNA连接酶既能够连接平末端，也可以连接黏性末端
B．每种限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点进行切割，验证了酶的专一性
C．E．coliDNA连接酶可以连接DNA分子中的氢键
D．限制酶、DNA连接酶和质粒是基因工程常用的工具酶
19．（2021高二下·武功期中）下列四个DNA片段，彼此可通过DNA连接酶重组在一起的是（ ）
A．②④ B．②③ C．③④ D．①②
20．（2021高二下·吉林期中）在基因工程中不能用作载体的是（ ）
A．质粒 B．大肠杆菌 C．噬菌体 D．动植物病毒
二、综合题
21．（2021·青冈模拟）下列是基因工程的有关问题，请回答：
（1）限制性核酸内切酶可以识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的 （填化学键名称）断裂，形成的末端总体可分为两种类型，分别是 和 。
（2）目的基因和载体重组时需要的工具酶是 ，与限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列 （填“有”或“无”）专一性要求。
（3）如图表示的是构建表达载体时的某种质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。
分析可知，可用限制酶 （填“Ⅰ”或“Ⅱ”）切割目的基因所在的DNA，这样做的原因是
22．（2021高二下·金台期中）根据现代生物科技专题的有关知识，回答下列问题：
（1）植物组织培养技术是指在 和人工控制的条件下，将离体的组织和细胞在特定培养基上先脱分化得到 ，再分化得到胚状体等，进而得到新植株。若要利用植物组织培养技术培育无病毒植株，应选用植物的 处的组织进行培养，其依据是 。
（2）利用植物组织培养技术可以制造出人工种子。人工种子是指以植物组织培养得到的 为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。与天然种子相比，人工种子具有的优点有 。
（3）利用PCR方法进行基因扩增时需要先根据 合成引物，该技术的原理是 。
（4）基因工程中载体应具备的条件有： 。（答出两点即可）
23．（2021高二下·大名期中）基因工程是从分子水平对基因进行操作，从而实现定向改造生物，得到人们所需要的生物性状或生物产品的技术。分析回答下列问题：
（1）目的基因可从基因文库中获得，构建基因文库包括基因组文库和cDNA文库，基因组文库 （填“大于”“等于”或“小于”）cDNA文库，两种文库中不含有启动子的是 。启动子的作用是 。
（2）可采用PCR技术扩增获得大量的目的基因，采用该技术扩增目的基因的前提是 ，以便合成引物。PCR技术的一个循环包括： 。
（3）基因工程的核心步骤是 ，该步骤需DNA连接酶，其中既可连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端的DNA连接酶是 。
（4）欲检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常采用的方法是 。
24．（2021高二下·榆林月考）请回答下列有关获取转基因植物的问题：
（1）对获取的目的基因可以通过
技术进行扩增。
（2）将目的基因导入植物细胞常采用的方法是
，该方法的主要优点是其运载体上含有 片段，可将目的基因插入到受体细胞染色体的
DNA 上。检测目的基因是否插入成功的方法 是 ，该方法应该用
作为探针。检测目的基因是否翻译成了相应蛋白质，利用的技 术是
。
（3）将导入目的基因的受体细胞培育成转基因植株涉及的细胞工程技术是 ，该技术的原 理是 。
答案解析部分
1．【答案】B
【考点】DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、猪是哺乳动物，其成熟红细胞内没有细胞核，所以猪血不能用于DNA的粗提取，A错误；
B、植物细胞含有细胞壁，因此选用植物细胞提取DNA时，需先研磨破碎细胞，B正确；
C、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2mol/L的NaCl溶液中溶解度高，C错误；
D、溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴加热后冷却，颜色应呈现蓝色，D错误。
故答案为：B。
【分析】DNA粗提取和鉴定过程：
1、实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大；
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可.如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜.例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液；
3、去除滤液中的杂质：原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同； 4、DNA的析出与鉴定：（1）将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2~3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA.用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分；（2）取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解.然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂.混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。
2．【答案】C
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，不同限制酶识别的序列不同，A错误；
B、基因工程常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等，B错误；
C、限制酶和DNA连接酶的作用部位相同，都是磷酸二酯键，C正确；
D、黑农五号是通过诱变育种方法获取的，D错误。
故答案为：C。
【分析】基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
3．【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、基因工程都能定向改变生物的性状，A正确；
B、DNA连接酶可以连接磷酸二酯键，B错误；
C、质粒往往需要加工才能做运载体，C错误；
D、限制性核酸内切酶在构建载体的时候也能使用，D错误。
故答案为：A。
【分析】基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
4．【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、鸟枪法获取目的基因，直接使用限制酶切割含有目的基因即可，不发生碱基互补配对，A错误；
B、黏性末端通过碱基互补配对黏合在一起，成为双链，再被DNA连接酶连接，B正确；
C、目的基因导入受体细胞过程不发生碱基互补配对，C正确；
D、目的基因表达过程要发生碱基互补配对，D正确。
故答案为：A。
【分析】基因工程技术的基本步骤︰
（1）目的基因的获取︰方法有从基因文库中获取（基因组文库包含某种生物所有的基因，部分基因文库包含某种生物的部分基因，如：CDNA文库）、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建︰基因表达载体的构建：①过程：用同一种限制酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。②目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。③基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。a、启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；b、终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；c、标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。
( 3 )将目的基因导入受体细胞∶根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；②将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；③将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定∶分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定︰抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
5．【答案】B
【考点】DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，DNA存在于析出物中，不能去掉析出物，A错误；
B、利用DNA在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度不同，可以通过DNA的反复溶解和析出除去杂质，蛋白酶能水解蛋白质，而对DNA没有影响，因此可以利用木瓜蛋白酶除去杂蛋白，B正确；
C、用二苯胺试剂检测DNA分子的原理是： 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，所以用二苯胺鉴定DNA时，需沸水浴加热 ，C错误；
D、植物细胞有细胞壁，所以用植物做实验材料时，需要研磨，加入食盐和洗涤剂，D错误。
故答案为：B。
【分析】DNA粗提取和鉴定过程：
1、实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大；
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可.如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜.例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液；
3、去除滤液中的杂质：
原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；
4、DNA的析出与鉴定：
（1）将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2~3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA.用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分；（2）取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCI溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解.然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂.混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。
6．【答案】B
【考点】三种跨膜运输方式的比较；DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、高铁血红蛋白与O2结合十分牢固，O2不易释放可导致组织细胞缺氧，A正确；
B、人体红细胞吸收葡萄糖为协助扩散，不需要能量，B错误；
C、鸡为鸟类，有细胞核，含DNA，DNA的粗提取可选用鸡的红细胞，C正确；
D、镰刀型细胞贫血症会导致红细胞形态改变，可通过显微镜观察，D正确。
故答案为：B。
【分析】1、协助扩散的方向是从高浓度向低浓度，需要载体，不需要能量，如红细胞吸收葡萄糖。
2、DNA粗提取实验：实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。
3、镰刀型细胞贫血症可通过显微镜观察到 。
7．【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、Ti质粒是基因工程中重要的载体，不对宿主细胞生存有影响，故A错误；
B、Ca2+处理可增加细菌细胞壁的通透性，使土壤农杆菌处于感受态，是重组Ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法，故B正确；
C、重组Ti质粒的土壤农杆菌成功感染植物细胞， 通过植物组织培养技术将该细胞培养成 转基因植物，故C正确；
D、在植物细胞中检测到抗虫目的基因，说明目的基因已成功导入受体细胞，故D正确。
故答案为：A。
【分析】基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。
③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
8．【答案】C
【考点】基因工程的应用；基因工程的基本工具（详细）；基因工程的概述
【解析】【解答】①基因工程打破了物种与物种之间的界限，克服远缘杂交不亲和的障碍，正确；
②基因治疗是治疗遗传病最有效的手段，正确；
③载体上的抗性基因作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，正确；
④载体是运载目的基因的工具不是酶，错误；
⑤常使用的载体有质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒等，错误；
C正确，A、B、D错误。
故答案为：C。
【分析】1、基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
2、基因工程的应用：（1）植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力（如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等）以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。（2）动物基因工程方面，将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。该转基因动物进入泌乳期后，通过分泌的乳汁获得所需药品，称之为乳腺生物反应器。（3）医药卫生方面，基因治疗是治疗遗传病最有效的手段。
3、基工程意义：（1）定向改变物性状；（2）打破物种界限，排除远源杂交亲性
9．【答案】D
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、DNA聚合酶是聚合一个个游离的脱氧核苷酸，A错误；
B、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，B错误；
C、逆转录酶是催化以RNA为模板合成DNA的酶，C错误；
D、基因工程将目的基因与运载体连接起来的工具是DNA连接酶，D正确。
故答案为：D。
【分析】基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）（1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”-DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E穋oliDNA连接酶和TADNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E穋oliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而TADNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3、“分子运输车”-载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
10．【答案】C
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】甲经酶切割后形成的黏性末端是 -GATC，乙经酶切后的末端为-AATT，丙酶切后位点为-AGGT，丁酶切后位点为-GATC，故切割DNA所得黏性末端相同的两种酶是甲和丁，C正确。
故答案为：C。
【分析】 限制酶主要从原核生物中分离纯化出来的，能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。由题意可知，切割之后甲酶和丁酶形成的粘性末端相同。
11．【答案】B
【考点】检测还原糖的实验；细胞膜的功能；纤维素分解菌的分离；DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、香蕉中的糖与斐林试剂发生作用，在水浴加热(50～65℃)的条件下会生成砖红色沉淀，说明香蕉中含有还原糖，但不能说明香蕉中不含有蔗糖，A错误；
B、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，B正确；
C、生物膜的选择透过性会阻止台盼蓝染色剂进入活细胞中，用台盼蓝染色的方法对香蕉原生质体进行染色，结果细胞被染成蓝色，说明原生质体没有活性，C错误；
D、借助刚果红染色法培养香蕉皮上的微生物，结果培养基中出现透明圈，说明香蕉皮上附着有纤维素分解菌，D错误。
故答案为：B。
【分析】1、斐林试剂可用于鉴定还原糖，在水浴加热的条件下（50~65℃），溶液的颜色变化为砖红色（沉淀），斐林试剂只能检验生物组织中还原糖（如葡萄糖、麦芽糖、果糖）存在与否，而不能鉴定非还原性糖（如淀粉）。
2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
3、生物膜具有选择透过性，可以阻止活细胞不需要的台盼蓝染色剂进入，因此活细胞不能被台盼蓝染成蓝色；当细胞死亡后，细胞膜的选择透过性丧失，台盼蓝染色剂才能进入细胞，因此凡被染成蓝色的均为死细胞。
4、刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应。当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红一纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
12．【答案】B
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、限制性内切酶是基因工程的工具之一，A正确；
B、RNA聚合酶催化转录过程，不是基因工程的工具，B错误；
C、DNA连接酶是基因工程的工具之一，C正确；
D、运载体是基因工程的工具之一，D正确。
故答案为：B。
【分析】基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
13．【答案】D
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来，A错误；
B、由图可知，Sau3AⅠ的识别序列是4个核苷酸组成的，B错误；
C、用BamHⅠ和Sau3AⅠ切割DNA会形成相同的粘性末端，C错误；
D、图中的DNA片段被EcoRⅠ切割后，会断裂两个磷酸二酯键，从而增加两个游离的磷酸基团，D正确。
故答案为：D。
【分析】关于限制酶，考生可以从以下几方面把握：（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来；（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；（3）结果：形成黏性末端或平末端。
14．【答案】D
【考点】基因工程的原理；基因工程的基本工具（详细）；基因工程的基本操作程序
【解析】【解答】A、美国生物学家尼伦伯格和德国生物学家马太破译了第一个遗传密码，然后多位科学家终于破译了全部64个密码子，为基因的分离和合成提供了理论依据，A正确；
B、细菌的质粒有自我复制能力，并可以在细胞间转移，质粒作为基因工程的常用载体，为基因跨物种转移找到了运载工具，B正确；
C、基因工程诞生的过程中，限制酶和DNA连接酶的发现为DNA的切割和连接创造了条件，C正确；
D、在基因工程中，利用PCR技术扩增目的基因的前提需要有一段已知该基因的碱基序列，便于合成引物，并不是已知目的基因的碱基序列，D错误。
故答案为：D。
【分析】1、基因工程又叫作重组DNA技术，是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。2、限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，具有特异性，即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。3、DNA连接酶分为E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。DNA连接酶连接的是两个DNA片段之间核苷酸的磷酸二酯键，这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。4、DNA连接酶和DNA聚合酶的区别：
①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键。
②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。
③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板。
15．【答案】B
【考点】基因工程的基本工具简介；基因工程的概述
【解析】【解答】①一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子，①错误； ②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工， ②正确； ③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，
载体不是酶，③错误；④目的基因进入受体细胞后不一定能成功表达，因此最后还需要进行目的基因的检测和鉴定，④错误；⑤在同一DNA分子中，限制酶的识别序列越长，酶切点出现的概率越小，⑤错误；⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物上，⑥正确；⑦质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物的细胞中，⑦正确。②⑥⑦正确，正确选项有3个，B正确。
故答案为：B。
【分析】1、基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。2、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。
16．【答案】B
【考点】基因工程的原理；基因工程的基本工具简介
【解析】【解答】A、基因工程又叫转基因技术、体外DNA重组技术，其生物学原理是基因重组，A正确；
B、限制酶在切割质粒时也需要，B错误；
C、质粒、动植物病毒、噬菌体等都可以作为基因工程的运载体，C正确；
D、利用基因工程的方法可生产胰岛素等药物和培育转基因奶牛、超级绵羊，D正确。
故答案为：B。
【分析】基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。（1）原理：基因重组；（2）工具：限制酶、DNA连接酶和运载体；（3）操作步骤：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。（4）应用：提高生物的品质，用工程菌制备疫苗等。
17．【答案】B
【考点】基因工程的基本工具简介；基因工程的概述
【解析】【解答】A、质粒是一种双链环状DNA分子，不是细胞器，A错误；
B、由于DNA分子由两条链组成，因此限制酶将一个线形DNA分子切成两个片段需破坏两个磷酸二酯键，B正确；
C、DNA连接酶能将目的基因与质粒黏性末端的磷酸二酯键连接起来，C错误；
D、用质粒作为运载体时，质粒上的目的基因不需要整合到受体细胞的DNA上，用病毒或噬菌体作为运载体时，目的基因需整合到受体细胞DNA上，D错误。
故答案为：B。
【分析】基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
18．【答案】B
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】E．coliDNA连接酶只能连接黏性末端，A错误；每种限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点进行切割，验证了酶的专一性，B正确；E．coliDNA连接酶可以形成DNA分子片段之间的磷酸二酯键，C错误；限制酶、DNA连接酶是基因工程常用的工具酶，质粒是运输工具，不是酶，D错误。
【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
19．【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】题图中黏性末端②ATGG 和④CCAT正好可以碱基互补配对，可用DNA连接酶将其连接在一起，即A正确，BCD错误。
故答案为：A。
【分析】DNA经不同限制酶切割后，只有在形成相同的黏性末端时，才可以通过DNA连接酶拼接。
20．【答案】B
【考点】基因工程的基本工具简介
【解析】【解答】质粒、噬菌体、动植物病毒是基因工程中常用的运载体；大肠杆菌是一种原核细菌，通常在基因工程中不是作为运载体出现，而是作为靶细胞，因为大肠杆菌不具备运载体的条件，即能在宿主细胞中复制并稳定保存（让目的基因稳定存在），
且大肠杆菌并不是寄生在细胞内的，不存在宿主细胞一说。因此，ACD错误，B正确。
故答案为：B。
【分析】1、常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒，（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子）。2、作为运载体必须具备的条件：①能在宿主细胞中复制并稳定保存；②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入；③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。3、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
21．【答案】（1）磷酸二酯键；黏性末端；平末端
（2）DNA连接酶；无
（3）II；目的基因两端均有酶II的识别序列
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】（1）限制性核酸内切酶作用的化学键是磷酸二酯键。限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成平末端或黏性末端。
（2）目的基因与载体连接需要用DNA连接酶，DNA连接酶催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键，不具有专一性。
（3）限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，目的基因两端有酶II的识别序列，所以用限制酶II切割目的基因。
【分析】1、“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶） （1 )来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”-DNA连接酶 （1）两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和TDNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而TDNA连接酶来源于T噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
22．【答案】（1）无菌；愈伤组织；根尖或茎尖（分生组织）；根尖或茎尖（分生组织）携带的病毒极少甚至无毒
（2）胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等；生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输
（3）目的基因的一段核苷酸序列；DNA双链复制
（4）能自我复制；有一个至多个限制酶切割位点；具有标记基因；能在受体细胞中稳定存在；不影响宿主细胞的生命活动
【考点】植物组织培养的过程；人工种子的制备；基因工程的基本工具简介
【解析】【解答】（1）植物组织培养技术：在无菌和人工控制的条件下，让离体的组织和细胞在特定培养基上先脱分化得到愈伤组织，再分化得到胚状体、丛芽等，进而得到新植株。该过程的原理是植物细胞的全能性。由于根尖或茎尖（分生组织）携带的病毒极少甚至无毒，所以常选用根尖或茎尖（分生组织）进行植物组织培养以获得无病毒植株。
（2）人工种子是指以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。人工种子的形成属于无性繁殖，与天然种子相比，人工种子具有生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输的优点。
（3）体外扩增目的基因时，因为合成DNA过程中脱氧核苷酸需要在单链的3，端开始延伸，因此，利用PCR方法进行基因扩增时需要先根据目的基因的一段核苷酸序列合成引物，该技术利用了DNA双链复制的原理。
（4）基因工程中载体应具备的条件有：能自我复制；有一个至多个限制酶切割位点；具有标记基因；能在受体细胞中稳定存在；不影响宿主细胞的生命活动这是基因工程中载体应具备的条件。
【分析】植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性，从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养，以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
23．【答案】（1）大于；cDNA文库；是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA
（2）要有一段已知目的基因的核苷酸序列；变性、复性、延伸
（3）基因表达载体的构建；T4DNA连接酶
（4）DNA分子杂交技术
【考点】基因工程的基本工具（详细）；基因工程的操作程序（详细）
【解析】【解答】（1）构建基因组文库的一般步骤为：①提取某种生物体内的全部DNA或全部基因，用适当的限制酶处理，得到一定范围大小的DNA片段。②DNA片段分别与载体结合，得到重组载体结合前载体应该用同一种限制酶处理，结合时DNA片段和载体应该用DNA连接酶处理。③重组载体导入到受体菌的群体中储存，基因组文库构建完成。而cDNA文库只能收集到生物发育到某时期己发生转录的基因，而基因组文库能收集到全部基因，因此与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少，根据两种文库的构建过程可知，两种文库中不含有启动子的是cDNA文库。启动子是位于基因首端的调控基因基因转录的序列，即启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA。
（2）可采用PCR技术扩增获得大量的目的基因，采用该技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物，为子链的延伸提高起点。PCR技术的一个循环包括变性（通过高温条件破坏氢键，是双链变成单链）、复性（氢键形成）、延伸（DNA聚合酶起作用，使游离的脱氧核苷酸连接到引物末端）。
（3）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，该步骤需DNA连接酶，T4DNA连接酶既可连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端。
（4）结合分析可知，检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常采用的方法是DNA分子杂交技术。
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
24．【答案】（1）PCR
（2）农杆菌转化法；T-DNA；DNA分子杂交技术；放射性同位素标记的目的基因；抗原-抗体杂交技术
（3）植物组织培养；植物细胞的全能性
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】（1）在基因工程中，获取目的基因后可以通过PCR的方法进行扩增。
（2）将目的基因导入植物细胞常采用的方法是农杆菌转化法，农杆菌转化法的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。检测目的基因是否插入成功的方法 是DNA分子杂交法，该方法应该用放射性同位素标记的目的基因作为探针，检测蛋白质，利用的是抗原-抗体杂交技术。
（3）将导入目的基因的受体细胞培育成转基因植株涉及的细胞工程技术是植物组织培养，该技术的原理是植物细胞的全能性。
【分析】 1、目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 和某些具有调控作用的因子。
2、原核基因采取直接分离（从基因文库中获取）获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3、农杆菌的种类有几百种。农杆菌一般可以感染双子叶植物和裸子植物的受伤部位，农杆菌把自己的T-DNA整合到植物的染色体上，随着植物细胞的细胞染色体复制，T-DNA也随着复制，从而实现外源基因稳定性的表达。
4、目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
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人教版（2019版）选择性必修三3.1 重组DNA技术的基本工具同步练习
一、单选题
1．（2021高二上·沈阳期中）下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（ ）
A．新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取
B．提取植物材料的DNA需先研磨破碎细胞
C．DNA只能溶于2 mol/L的NaCl溶液
D．溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺后颜色呈紫色
【答案】B
【考点】DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、猪是哺乳动物，其成熟红细胞内没有细胞核，所以猪血不能用于DNA的粗提取，A错误；
B、植物细胞含有细胞壁，因此选用植物细胞提取DNA时，需先研磨破碎细胞，B正确；
C、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2mol/L的NaCl溶液中溶解度高，C错误；
D、溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴加热后冷却，颜色应呈现蓝色，D错误。
故答案为：B。
【分析】DNA粗提取和鉴定过程：
1、实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大；
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可.如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜.例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液；
3、去除滤液中的杂质：原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同； 4、DNA的析出与鉴定：（1）将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2~3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA.用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分；（2）取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解.然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂.混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。
2．（2021高三上·黑龙江期中）以下说法正确的是（ ）
A．所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
B．质粒是基因工程中惟一运载体
C．限制酶和DNA连接酶的作用部位相同
D．黑农五号是通过杂交育种方法获取的
【答案】C
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，不同限制酶识别的序列不同，A错误；
B、基因工程常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等，B错误；
C、限制酶和DNA连接酶的作用部位相同，都是磷酸二酯键，C正确；
D、黑农五号是通过诱变育种方法获取的，D错误。
故答案为：C。
【分析】基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
3．（2021高二上·抚松竞赛）有关基因工程的叙述正确的是（ ）
A．基因工程都能定向改变生物的性状
B．DNA连接酶可以切断磷酸二酯键
C．质粒都可以做运载体
D．限制性核酸内切酶只在获取目的基因时才使用
【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、基因工程都能定向改变生物的性状，A正确；
B、DNA连接酶可以连接磷酸二酯键，B错误；
C、质粒往往需要加工才能做运载体，C错误；
D、限制性核酸内切酶在构建载体的时候也能使用，D错误。
故答案为：A。
【分析】基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
4．（2021高二上·抚松竞赛）关于基因工程下列操作步骤的叙述，错误的是（ ）
A．用“鸟枪法”提取目的基因的过程需发生碱基互补配对
B．两种DNA黏性末端的黏合是通过碱基互补配对实现的
C．目的基因导入受体细胞过程不发生碱基互补配对
D．目的基因表达过程要发生碱基互补配对
【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、鸟枪法获取目的基因，直接使用限制酶切割含有目的基因即可，不发生碱基互补配对，A错误；
B、黏性末端通过碱基互补配对黏合在一起，成为双链，再被DNA连接酶连接，B正确；
C、目的基因导入受体细胞过程不发生碱基互补配对，C正确；
D、目的基因表达过程要发生碱基互补配对，D正确。
故答案为：A。
【分析】基因工程技术的基本步骤︰
（1）目的基因的获取︰方法有从基因文库中获取（基因组文库包含某种生物所有的基因，部分基因文库包含某种生物的部分基因，如：CDNA文库）、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建︰基因表达载体的构建：①过程：用同一种限制酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。②目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。③基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。a、启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；b、终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；c、标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。
( 3 )将目的基因导入受体细胞∶根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；②将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；③将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定∶分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定︰抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
5．（2021·肥城模拟）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是（ ）
A．用蒸馏水将NaCl溶液的物质的量浓度调至0.14 mol/L，过滤去除析出物
B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质
C．将丝状物溶解在浓度为2 mol/L的NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈紫色
D．用植物替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同
【答案】B
【考点】DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，DNA存在于析出物中，不能去掉析出物，A错误；
B、利用DNA在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度不同，可以通过DNA的反复溶解和析出除去杂质，蛋白酶能水解蛋白质，而对DNA没有影响，因此可以利用木瓜蛋白酶除去杂蛋白，B正确；
C、用二苯胺试剂检测DNA分子的原理是： 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，所以用二苯胺鉴定DNA时，需沸水浴加热 ，C错误；
D、植物细胞有细胞壁，所以用植物做实验材料时，需要研磨，加入食盐和洗涤剂，D错误。
故答案为：B。
【分析】DNA粗提取和鉴定过程：
1、实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大；
2、破碎细胞，获取含DNA的滤液：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可.如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜.例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液；
3、去除滤液中的杂质：
原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；
4、DNA的析出与鉴定：
（1）将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2~3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA.用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分；（2）取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCI溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解.然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂.混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。
6．（2021高三上·湖南月考）哺乳动物的血红蛋白在含氧量高的地方易与氧结合，在含氧量低的地方易与氧分离，红细胞结合和携带O2的过程并不影响二价铁离子。若血红蛋白中Fe2+ 被氧化为Fe3+，则形成高铁血红蛋白，O2与其结合十分牢固，不易分离。若控制血红蛋白的基因发生突变，可引起血红蛋白结构改变，进而引发镰刀型细胞贫血症。下列说法错误的是（ ）
A．高铁血红蛋白形成会导致组织细胞缺氧
B．人体血液中红细胞吸收葡萄糖所需能量由无氧呼吸提供
C．DNA的粗提取可选用鸡的红细胞
D．镰刀型细胞贫血症可通过显微镜观察到
【答案】B
【考点】三种跨膜运输方式的比较；DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、高铁血红蛋白与O2结合十分牢固，O2不易释放可导致组织细胞缺氧，A正确；
B、人体红细胞吸收葡萄糖为协助扩散，不需要能量，B错误；
C、鸡为鸟类，有细胞核，含DNA，DNA的粗提取可选用鸡的红细胞，C正确；
D、镰刀型细胞贫血症会导致红细胞形态改变，可通过显微镜观察，D正确。
故答案为：B。
【分析】1、协助扩散的方向是从高浓度向低浓度，需要载体，不需要能量，如红细胞吸收葡萄糖。
2、DNA粗提取实验：实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。
3、镰刀型细胞贫血症可通过显微镜观察到 。
7．（2021高三上·普宁月考）在基因工程中，为将目的基因导入受体细胞常采用土壤农杆菌转化法，在土壤农杆菌中常含有一个Ti质粒。某科研小组欲将某抗虫基因导入某植物，下列分析错误的是( )
A．Ti质粒含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因，是基因工程中重要的载体
B．用Ca2＋处理细菌是重组Ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法
C．重组Ti质粒的土壤农杆菌成功感染植物细胞，可通过植物组织培养技术将该细胞培养成具有抗虫性状的植物
D．若能够在植物细胞中检测到抗虫基因，则说明将重组质粒成功地导入到了受体细胞
【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、Ti质粒是基因工程中重要的载体，不对宿主细胞生存有影响，故A错误；
B、Ca2+处理可增加细菌细胞壁的通透性，使土壤农杆菌处于感受态，是重组Ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法，故B正确；
C、重组Ti质粒的土壤农杆菌成功感染植物细胞， 通过植物组织培养技术将该细胞培养成 转基因植物，故C正确；
D、在植物细胞中检测到抗虫目的基因，说明目的基因已成功导入受体细胞，故D正确。
故答案为：A。
【分析】基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。
③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
8．（2021高三上·普宁月考）下列关于基因工程的叙述中，正确的是( )
①基因工程打破了物种与物种之间的界限 ②基因治疗是基因工程技术的应用 ③载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞 ④所需要的工具酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体 ⑤常使用的载体有大肠杆菌、质粒和动植物病毒等
A．②③⑤ B．①②⑤ C．①②③ D．①③④
【答案】C
【考点】基因工程的应用；基因工程的基本工具（详细）；基因工程的概述
【解析】【解答】①基因工程打破了物种与物种之间的界限，克服远缘杂交不亲和的障碍，正确；
②基因治疗是治疗遗传病最有效的手段，正确；
③载体上的抗性基因作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，正确；
④载体是运载目的基因的工具不是酶，错误；
⑤常使用的载体有质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒等，错误；
C正确，A、B、D错误。
故答案为：C。
【分析】1、基因工程的基本工具
（1）“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
（2）“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：a、相同点：都缝合磷酸二酯键。b、区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
（3）“分子运输车”-载体①载体具备的条件：a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。c、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
2、基因工程的应用：（1）植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力（如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等）以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。（2）动物基因工程方面，将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物（哺乳动物才会泌乳）的受精卵中，然后将受精卵送入母体内，使其生长发育成转基因动物。该转基因动物进入泌乳期后，通过分泌的乳汁获得所需药品，称之为乳腺生物反应器。（3）医药卫生方面，基因治疗是治疗遗传病最有效的手段。
3、基工程意义：（1）定向改变物性状；（2）打破物种界限，排除远源杂交亲性
9．（2021高一下·岑溪期末）目前市面上许多疫苗是应用基因工程技术生产的，在基因工程的实验过程中，把目的基因和运载体连接起来的是（ ）
A．DNA聚合酶 B．限制性核酸内切酶
C．逆转录酶 D．DNA连接酶
【答案】D
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、DNA聚合酶是聚合一个个游离的脱氧核苷酸，A错误；
B、限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，B错误；
C、逆转录酶是催化以RNA为模板合成DNA的酶，C错误；
D、基因工程将目的基因与运载体连接起来的工具是DNA连接酶，D正确。
故答案为：D。
【分析】基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶）（1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”-DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E穋oliDNA连接酶和TADNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E穋oliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而TADNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3、“分子运输车”-载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
10．（2021高二下·韩城期末）下图分别表示限制酶甲、乙、丙、丁的识别序列和切割位点（图中“↑”所指处），其中切割DNA所得黏性末端相同的两种酶是（ ）
A．甲、乙 B．甲、丙 C．甲、丁 D．乙、丙
【答案】C
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】甲经酶切割后形成的黏性末端是 -GATC，乙经酶切后的末端为-AATT，丙酶切后位点为-AGGT，丁酶切后位点为-GATC，故切割DNA所得黏性末端相同的两种酶是甲和丁，C正确。
故答案为：C。
【分析】 限制酶主要从原核生物中分离纯化出来的，能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。由题意可知，切割之后甲酶和丁酶形成的粘性末端相同。
11．（2021高二下·山东期末）使用染色剂染色是生物学实验常用的方法，某同学以香蕉为材料做了如下实验，其中染色方法和实验结论均正确的是（ ）
实验 观察对象 染色方法 实验结果 实验结论
A 香蕉中糖的鉴定 斐林试剂＋水浴(50~65℃) 呈现砖红色 不含有蔗糖
B 香蕉中DNA的粗提取与鉴定 二苯胺＋沸水浴 呈现蓝色 提取物中含DNA
C 香蕉原生质体的活性 台盼蓝 细胞染成蓝色 原生质体有活性
D 香蕉皮上微生物种类 刚果红 培养基中出现透明圈 含有大肠杆菌
A．A
B．B
C．C
D．D
【答案】B
【考点】检测还原糖的实验；细胞膜的功能；纤维素分解菌的分离；DNA的粗提取和鉴定
【解析】【解答】A、香蕉中的糖与斐林试剂发生作用，在水浴加热(50～65℃)的条件下会生成砖红色沉淀，说明香蕉中含有还原糖，但不能说明香蕉中不含有蔗糖，A错误；
B、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，B正确；
C、生物膜的选择透过性会阻止台盼蓝染色剂进入活细胞中，用台盼蓝染色的方法对香蕉原生质体进行染色，结果细胞被染成蓝色，说明原生质体没有活性，C错误；
D、借助刚果红染色法培养香蕉皮上的微生物，结果培养基中出现透明圈，说明香蕉皮上附着有纤维素分解菌，D错误。
故答案为：B。
【分析】1、斐林试剂可用于鉴定还原糖，在水浴加热的条件下（50~65℃），溶液的颜色变化为砖红色（沉淀），斐林试剂只能检验生物组织中还原糖（如葡萄糖、麦芽糖、果糖）存在与否，而不能鉴定非还原性糖（如淀粉）。
2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
3、生物膜具有选择透过性，可以阻止活细胞不需要的台盼蓝染色剂进入，因此活细胞不能被台盼蓝染成蓝色；当细胞死亡后，细胞膜的选择透过性丧失，台盼蓝染色剂才能进入细胞，因此凡被染成蓝色的均为死细胞。
4、刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖发生颜色反应。当纤维素被纤维素酶水解后，刚果红一纤维素复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
12．（2021高一下·桂林期末）下列不属于基因工程工具的是（ ）
A．限制性内切酶 B．RNA聚合酶
C．DNA连接酶 D．质粒
【答案】B
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、限制性内切酶是基因工程的工具之一，A正确；
B、RNA聚合酶催化转录过程，不是基因工程的工具，B错误；
C、DNA连接酶是基因工程的工具之一，C正确；
D、运载体是基因工程的工具之一，D正确。
故答案为：B。
【分析】基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
13．（2021高二下·邢台月考）下图所示三个DNA片段依次表示EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点。下列有关叙述正确的是（ ）
A．限制酶主要是从真核生物中分离纯化出来的
B．这三种限制酶的识别序列都是由6个核苷酸组成的
C．用这三种限制酶切割DNA片段会形成三种相同的黏性末端
D．图中的DNA片段被EcoRⅠ切割后，会增加两个游离的磷酸基团
【答案】D
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】A、限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来，A错误；
B、由图可知，Sau3AⅠ的识别序列是4个核苷酸组成的，B错误；
C、用BamHⅠ和Sau3AⅠ切割DNA会形成相同的粘性末端，C错误；
D、图中的DNA片段被EcoRⅠ切割后，会断裂两个磷酸二酯键，从而增加两个游离的磷酸基团，D正确。
故答案为：D。
【分析】关于限制酶，考生可以从以下几方面把握：（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来；（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；（3）结果：形成黏性末端或平末端。
14．（2021高二下·邢台月考）下列有关基因工程的理论基础和技术发展的叙述，错误的是（ ）
A．遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据
B．基因载体的发现为基因跨物种转移找到了运载工具
C．限制酶和连接酶的发现为DNA的切割和连接创造了条件
D．PCR技术扩增目的基因的前提是已知目的基因的碱基序列
【答案】D
【考点】基因工程的原理；基因工程的基本工具（详细）；基因工程的基本操作程序
【解析】【解答】A、美国生物学家尼伦伯格和德国生物学家马太破译了第一个遗传密码，然后多位科学家终于破译了全部64个密码子，为基因的分离和合成提供了理论依据，A正确；
B、细菌的质粒有自我复制能力，并可以在细胞间转移，质粒作为基因工程的常用载体，为基因跨物种转移找到了运载工具，B正确；
C、基因工程诞生的过程中，限制酶和DNA连接酶的发现为DNA的切割和连接创造了条件，C正确；
D、在基因工程中，利用PCR技术扩增目的基因的前提需要有一段已知该基因的碱基序列，便于合成引物，并不是已知目的基因的碱基序列，D错误。
故答案为：D。
【分析】1、基因工程又叫作重组DNA技术，是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。2、限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，具有特异性，即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。3、DNA连接酶分为E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。DNA连接酶连接的是两个DNA片段之间核苷酸的磷酸二酯键，这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。4、DNA连接酶和DNA聚合酶的区别：
①DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键。
②DNA连接酶是同时连接双链的切口，而DNA聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来。
③DNA连接酶不需要模板，而DNA聚合酶需要模板。
15．（2021高二下·金台期中）关于基因工程下列说法正确的有（ ）
①一种限制酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子 ②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工 ③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶和运载体 ④只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达 ⑤限制酶的识别序列越长，酶切点出现的概率越大⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物上 ⑦质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物的细胞中
A．2项 B．3项 C．4项 D．5项
【答案】B
【考点】基因工程的基本工具简介；基因工程的概述
【解析】【解答】①一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子，①错误； ②基因工程是在DNA上进行的分子水平的设计施工， ②正确； ③重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，
载体不是酶，③错误；④目的基因进入受体细胞后不一定能成功表达，因此最后还需要进行目的基因的检测和鉴定，④错误；⑤在同一DNA分子中，限制酶的识别序列越长，酶切点出现的概率越小，⑤错误；⑥基因工程可以将一种生物的优良性状移植到另一种生物上，⑥正确；⑦质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物的细胞中，⑦正确。②⑥⑦正确，正确选项有3个，B正确。
故答案为：B。
【分析】1、基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。2、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。
16．（2021高二下·金台期中）下列关于基因工程的相关叙述，错误的是（ ）
A．基因工程的原理是基因重组
B．限制酶只在获得目的基因时才用
C．质粒和噬菌体等都可以作为基因工程的运载体
D．转基因动物培养过程中往往以受精卵为受体细胞
【答案】B
【考点】基因工程的原理；基因工程的基本工具简介
【解析】【解答】A、基因工程又叫转基因技术、体外DNA重组技术，其生物学原理是基因重组，A正确；
B、限制酶在切割质粒时也需要，B错误；
C、质粒、动植物病毒、噬菌体等都可以作为基因工程的运载体，C正确；
D、利用基因工程的方法可生产胰岛素等药物和培育转基因奶牛、超级绵羊，D正确。
故答案为：B。
【分析】基因工程又叫DNA重组技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。（1）原理：基因重组；（2）工具：限制酶、DNA连接酶和运载体；（3）操作步骤：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。（4）应用：提高生物的品质，用工程菌制备疫苗等。
17．（2021高二下·金台期中）下列关于DNA重组技术基本工具的叙述，正确的是（ ）
A．质粒是广泛存在于细菌细胞质中的一种颗粒状的细胞器
B．限制酶将一个线形DNA分子切成两个片段需破坏两个磷酸二酯键
C．DNA连接酶能将目的基因与质粒黏性末端的碱基随机黏合
D．质粒上的目的基因必须整合到受体细胞的DNA上才能不被分解
【答案】B
【考点】基因工程的基本工具简介；基因工程的概述
【解析】【解答】A、质粒是一种双链环状DNA分子，不是细胞器，A错误；
B、由于DNA分子由两条链组成，因此限制酶将一个线形DNA分子切成两个片段需破坏两个磷酸二酯键，B正确；
C、DNA连接酶能将目的基因与质粒黏性末端的磷酸二酯键连接起来，C错误；
D、用质粒作为运载体时，质粒上的目的基因不需要整合到受体细胞的DNA上，用病毒或噬菌体作为运载体时，目的基因需整合到受体细胞DNA上，D错误。
故答案为：B。
【分析】基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
18．（2021高二下·武功期中）下列关于基因工程工具酶的说法，正确的是（ ）
A．E．coliDNA连接酶既能够连接平末端，也可以连接黏性末端
B．每种限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点进行切割，验证了酶的专一性
C．E．coliDNA连接酶可以连接DNA分子中的氢键
D．限制酶、DNA连接酶和质粒是基因工程常用的工具酶
【答案】B
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】E．coliDNA连接酶只能连接黏性末端，A错误；每种限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定位点进行切割，验证了酶的专一性，B正确；E．coliDNA连接酶可以形成DNA分子片段之间的磷酸二酯键，C错误；限制酶、DNA连接酶是基因工程常用的工具酶，质粒是运输工具，不是酶，D错误。
【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
19．（2021高二下·武功期中）下列四个DNA片段，彼此可通过DNA连接酶重组在一起的是（ ）
A．②④ B．②③ C．③④ D．①②
【答案】A
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】题图中黏性末端②ATGG 和④CCAT正好可以碱基互补配对，可用DNA连接酶将其连接在一起，即A正确，BCD错误。
故答案为：A。
【分析】DNA经不同限制酶切割后，只有在形成相同的黏性末端时，才可以通过DNA连接酶拼接。
20．（2021高二下·吉林期中）在基因工程中不能用作载体的是（ ）
A．质粒 B．大肠杆菌 C．噬菌体 D．动植物病毒
【答案】B
【考点】基因工程的基本工具简介
【解析】【解答】质粒、噬菌体、动植物病毒是基因工程中常用的运载体；大肠杆菌是一种原核细菌，通常在基因工程中不是作为运载体出现，而是作为靶细胞，因为大肠杆菌不具备运载体的条件，即能在宿主细胞中复制并稳定保存（让目的基因稳定存在），
且大肠杆菌并不是寄生在细胞内的，不存在宿主细胞一说。因此，ACD错误，B正确。
故答案为：B。
【分析】1、常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒，（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子）。2、作为运载体必须具备的条件：①能在宿主细胞中复制并稳定保存；②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入；③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。3、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。
二、综合题
21．（2021·青冈模拟）下列是基因工程的有关问题，请回答：
（1）限制性核酸内切酶可以识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的 （填化学键名称）断裂，形成的末端总体可分为两种类型，分别是 和 。
（2）目的基因和载体重组时需要的工具酶是 ，与限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列 （填“有”或“无”）专一性要求。
（3）如图表示的是构建表达载体时的某种质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。
分析可知，可用限制酶 （填“Ⅰ”或“Ⅱ”）切割目的基因所在的DNA，这样做的原因是
【答案】（1）磷酸二酯键；黏性末端；平末端
（2）DNA连接酶；无
（3）II；目的基因两端均有酶II的识别序列
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】（1）限制性核酸内切酶作用的化学键是磷酸二酯键。限制性核酸内切酶切割DNA分子后形成平末端或黏性末端。
（2）目的基因与载体连接需要用DNA连接酶，DNA连接酶催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键，不具有专一性。
（3）限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，目的基因两端有酶II的识别序列，所以用限制酶II切割目的基因。
【分析】1、“分子手术刀”-限制性核酸内切酶（限制酶） （1 )来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2、“分子缝合针”-DNA连接酶 （1）两种DNA连接酶（E.coliDNA连接酶和TDNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而TDNA连接酶来源于T噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。
（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
22．（2021高二下·金台期中）根据现代生物科技专题的有关知识，回答下列问题：
（1）植物组织培养技术是指在 和人工控制的条件下，将离体的组织和细胞在特定培养基上先脱分化得到 ，再分化得到胚状体等，进而得到新植株。若要利用植物组织培养技术培育无病毒植株，应选用植物的 处的组织进行培养，其依据是 。
（2）利用植物组织培养技术可以制造出人工种子。人工种子是指以植物组织培养得到的 为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。与天然种子相比，人工种子具有的优点有 。
（3）利用PCR方法进行基因扩增时需要先根据 合成引物，该技术的原理是 。
（4）基因工程中载体应具备的条件有： 。（答出两点即可）
【答案】（1）无菌；愈伤组织；根尖或茎尖（分生组织）；根尖或茎尖（分生组织）携带的病毒极少甚至无毒
（2）胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等；生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输
（3）目的基因的一段核苷酸序列；DNA双链复制
（4）能自我复制；有一个至多个限制酶切割位点；具有标记基因；能在受体细胞中稳定存在；不影响宿主细胞的生命活动
【考点】植物组织培养的过程；人工种子的制备；基因工程的基本工具简介
【解析】【解答】（1）植物组织培养技术：在无菌和人工控制的条件下，让离体的组织和细胞在特定培养基上先脱分化得到愈伤组织，再分化得到胚状体、丛芽等，进而得到新植株。该过程的原理是植物细胞的全能性。由于根尖或茎尖（分生组织）携带的病毒极少甚至无毒，所以常选用根尖或茎尖（分生组织）进行植物组织培养以获得无病毒植株。
（2）人工种子是指以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。人工种子的形成属于无性繁殖，与天然种子相比，人工种子具有生产不受季节限制、不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性、方便贮存和运输的优点。
（3）体外扩增目的基因时，因为合成DNA过程中脱氧核苷酸需要在单链的3，端开始延伸，因此，利用PCR方法进行基因扩增时需要先根据目的基因的一段核苷酸序列合成引物，该技术利用了DNA双链复制的原理。
（4）基因工程中载体应具备的条件有：能自我复制；有一个至多个限制酶切割位点；具有标记基因；能在受体细胞中稳定存在；不影响宿主细胞的生命活动这是基因工程中载体应具备的条件。
【分析】植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性，从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养，以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
23．（2021高二下·大名期中）基因工程是从分子水平对基因进行操作，从而实现定向改造生物，得到人们所需要的生物性状或生物产品的技术。分析回答下列问题：
（1）目的基因可从基因文库中获得，构建基因文库包括基因组文库和cDNA文库，基因组文库 （填“大于”“等于”或“小于”）cDNA文库，两种文库中不含有启动子的是 。启动子的作用是 。
（2）可采用PCR技术扩增获得大量的目的基因，采用该技术扩增目的基因的前提是 ，以便合成引物。PCR技术的一个循环包括： 。
（3）基因工程的核心步骤是 ，该步骤需DNA连接酶，其中既可连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端的DNA连接酶是 。
（4）欲检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常采用的方法是 。
【答案】（1）大于；cDNA文库；是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA
（2）要有一段已知目的基因的核苷酸序列；变性、复性、延伸
（3）基因表达载体的构建；T4DNA连接酶
（4）DNA分子杂交技术
【考点】基因工程的基本工具（详细）；基因工程的操作程序（详细）
【解析】【解答】（1）构建基因组文库的一般步骤为：①提取某种生物体内的全部DNA或全部基因，用适当的限制酶处理，得到一定范围大小的DNA片段。②DNA片段分别与载体结合，得到重组载体结合前载体应该用同一种限制酶处理，结合时DNA片段和载体应该用DNA连接酶处理。③重组载体导入到受体菌的群体中储存，基因组文库构建完成。而cDNA文库只能收集到生物发育到某时期己发生转录的基因，而基因组文库能收集到全部基因，因此与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少，根据两种文库的构建过程可知，两种文库中不含有启动子的是cDNA文库。启动子是位于基因首端的调控基因基因转录的序列，即启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA。
（2）可采用PCR技术扩增获得大量的目的基因，采用该技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物，为子链的延伸提高起点。PCR技术的一个循环包括变性（通过高温条件破坏氢键，是双链变成单链）、复性（氢键形成）、延伸（DNA聚合酶起作用，使游离的脱氧核苷酸连接到引物末端）。
（3）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，该步骤需DNA连接酶，T4DNA连接酶既可连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端。
（4）结合分析可知，检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常采用的方法是DNA分子杂交技术。
【分析】基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
24．（2021高二下·榆林月考）请回答下列有关获取转基因植物的问题：
（1）对获取的目的基因可以通过
技术进行扩增。
（2）将目的基因导入植物细胞常采用的方法是
，该方法的主要优点是其运载体上含有 片段，可将目的基因插入到受体细胞染色体的
DNA 上。检测目的基因是否插入成功的方法 是 ，该方法应该用
作为探针。检测目的基因是否翻译成了相应蛋白质，利用的技 术是
。
（3）将导入目的基因的受体细胞培育成转基因植株涉及的细胞工程技术是 ，该技术的原 理是 。
【答案】（1）PCR
（2）农杆菌转化法；T-DNA；DNA分子杂交技术；放射性同位素标记的目的基因；抗原-抗体杂交技术
（3）植物组织培养；植物细胞的全能性
【考点】基因工程的基本工具（详细）
【解析】【解答】（1）在基因工程中，获取目的基因后可以通过PCR的方法进行扩增。
（2）将目的基因导入植物细胞常采用的方法是农杆菌转化法，农杆菌转化法的原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。检测目的基因是否插入成功的方法 是DNA分子杂交法，该方法应该用放射性同位素标记的目的基因作为探针，检测蛋白质，利用的是抗原-抗体杂交技术。
（3）将导入目的基因的受体细胞培育成转基因植株涉及的细胞工程技术是植物组织培养，该技术的原理是植物细胞的全能性。
【分析】 1、目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 和某些具有调控作用的因子。
2、原核基因采取直接分离（从基因文库中获取）获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3、农杆菌的种类有几百种。农杆菌一般可以感染双子叶植物和裸子植物的受伤部位，农杆菌把自己的T-DNA整合到植物的染色体上，随着植物细胞的细胞染色体复制，T-DNA也随着复制，从而实现外源基因稳定性的表达。
4、目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
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