(共29张PPT)
第2节 动物细胞工程
第1课时 动物细胞培养
本节聚焦:
1、动物细胞培养需要哪些基本条件?
2、动物细胞培养的基本操作过程是什么?
3、怎样客观分析干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险?
怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢?
1.概念:
就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。
一、动物细胞的培养
2.原理:
细胞增殖
3.地位:
动物细胞工程的基本技术
想一想:
幼龄和老龄动物细胞、分化程度不同的细胞中,哪些细胞更易于培养?:
胚胎或幼龄动物的细胞较成体的细胞更易培养,因为这些组织或器官的生命力旺盛,分裂能力强
胚胎或幼龄动物的细胞
4.培养对象:
5.动物细胞培养的条件:
动物细胞培养的条件
①营养条件
②其他条件
无菌、无毒的环境
适宜的温度、pH和渗透压
适宜的气体环境
糖类、氨基酸、无机盐、维生素等
(1)营养条件
糖类、氨基酸、无机盐、维生素等
合成培养基
成分:
培养基类型:
液体培养基
通常需要加入血清等一些天然成分
为什么要加血清等天然成分
(2)无菌、无毒的环境
培养液和培养用具进行无菌处理以及在无菌环境下进行操作,培养液中添加一定量的_______,并定期 ,以便清除 ,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
抗生素
更换培养液
代谢产物
(3)温度
和pH
温度:哺乳动物多以 为宜
pH:多数细胞适宜pH为_________
(4)气体环境
O2:细胞代谢所必需的
CO2:________________
36.5±0.5 ℃
7.2~7.4
维持培养液的pH
95%空气+5%CO2的混合气体
6.动物细胞培养的过程:
①动物细胞培养前对取出的动物组织要做怎样的处理?处理目的是什么?
②为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞?
③进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是什么成分?那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢?用胃蛋白酶行吗?
阅读课本,思考下列问题
①动物细胞培养前对取出的动物组织要做怎样的处理?处理目的是什么?
剪碎并用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间,
目的是使组织块分散成单个细胞。
②为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞?
成块的组织中细胞与细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖。分散成单个细胞扩大了细胞与培养液的接触面积,利于细胞吸收营养和排出代谢废物。
主要是蛋白质
③进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是什么成分?那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢?用胃蛋白酶行吗?
胃蛋白酶作用的最适pH约为2,当pH大于6时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2~8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,胃蛋白酶在此环境中没有活性,而胰蛋白酶在此环境中活性较高,因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。
注意时间的控制
动物细胞培养的过程:
相关概念
①细胞贴壁:悬液中分散的细胞 上。
②接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到 时,细胞 的现象。
③原代培养:指动物组织经处理后的 。
④传代培养:将分瓶 的细胞培养称为传代培养。
贴附在瓶壁
表面相互接触
停止分裂增殖
初次培养
后
圆球形细胞刚开始
铺展贴壁生长(100×)
培养的动物细胞贴壁生长,并进行有丝分裂(100×)
细胞单层贴壁生长铺满瓶壁后,出现接触抑制(100×)
思考:在进行传代培养时,悬浮培养的细胞与贴壁细胞,应该分别采取什么方法收集?
提示:
悬浮培养的细胞:直接用离心法收集
贴壁细胞:重新用胰蛋白酶等处理,使之分散成单个细胞,然后再用离心法收集
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
培养基性质
培养基特有成分
培养结果
培养目的
相同点 讨论2:植物组织培养和动物细胞培养的比较
获得细胞或细胞产物
常用固体培养基
植物体
葡萄糖、动物血清
常用液体培养基
细胞增殖
细胞的全能性
许多细胞
快速繁殖等
蔗糖、植物激素
1.培养过程中细胞都进行有丝分裂,不涉及减数分裂;
2.均需无菌操作,需要适宜的温度、pH等条件
深度思考
根据癌细胞的特点,思考一下培养的癌细胞有没有接触抑制现象?
B
A
动物和人体内仍保留着少数具有分裂和分化能力的细胞,这些细胞叫作干细胞。
二、干细胞培养及其应用
1、干细胞概念:
2、存在部位: 、 和 等多种器官和组织中
脐带血
骨髓
早期胚胎
3、种类:
①胚胎干细胞
②成体干细胞
①胚胎干细胞(ES细胞)存在于早期胚胎中,具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。
也叫做全能干细胞。
②成体干细胞:存在于成体组织或器官内。
A.造血干细胞:存在于成体骨髓、外周血、脐带血, 可分化成各种 血细胞和免疫细胞。也叫做多能干细胞。
B. 神经干细胞:取自神经系统,可分化成神经细胞。
C. 精原干细胞:取自睾丸,可分化成精子。
专能干细胞
一般认为,成体干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力。
类型 应用
造血干细胞
神经干细胞
诱导多能干细胞(iPS细胞)
4、干细胞的应用
有着自我更新能力及分化潜能的干细胞,与组织、器官的发育、再生和修复等密切相关。
治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病(如帕金森病、阿尔茨海默病等)
可治疗小鼠的镰状细胞贫血症,在治疗阿尔兹海默病、心血管疾病等领域的研究也取得了新进展
干细胞应用面临的问题存在存在着导致肿瘤发生的风险。
诱导多能干细胞
(iPS细胞)
多种体细胞
iPS细胞用于治疗人类疾病示意图
定向诱导分化
体外诱导小鼠成纤维细胞
临床治疗人类疾病如:
白血病、帕金森病、阿而茨海默病等
5、诱导多能干细胞(IPS)
iPS细胞(诱导多能干细胞)的培养和应用
将特定基因或特定蛋白导入细胞
用小分子化合物诱导形成
①获取方法:iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来的,后来发现已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。
②诱导多能干细胞优点:
A. 诱导过程无需破坏胚胎。
B. iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞,将它移植回病人体内后,理论上可以避免免疫排斥反应。
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