第3章 基因工程：第2节　基因工程的基本操作程序(共62张PPT)

(共62张PPT)
续表
变性
当温度超过
℃时，双链DNA解聚为
温度下降到
℃左右时，两种
通过碱基
复性
互补配对与两条单链DNA结合
当温度上升到
℃左右时，溶液中的4种脱
延伸
氧核苷酸在耐高温的
的作用下，根
据碱基互补配对原则合成新的DA链
组成
作用
a.紧挨转录的起始位点，是RNA
①目的基因
聚合酶识别和结合的部位
②启动子
b.转录的终点
③终止子
c.鉴别受体细胞中是否含有目
④标记基因
的基因
d.能够控制特定性状
受体细胞
导入方法
①植物细胞
a.农杆菌转化法
b.显微注射技术
②动物细胞
c.Ca2+处理法
③微生物细胞
d.花粉管通道法
检测目的
检测方法
①是否导入受体细胞
a.抗原-抗体杂交技术
②是否转录出了mRNA
b.如抗虫或抗病的接种实验
③是否翻译成蛋白质
④是否赋予生物某些特性
c.PCR等技术
位置：基因的上游
启动子
功能：
识别和结合的
部位，驱动基因的
:人们所需要的基因
表达载体
终止子位置：基因的
功能：RNA聚合酶脱离部位，终
止转录
:用于鉴别受体细胞中是否含有
,从而将含有目的基因
的细胞筛选出来
5
5
3
约95℃
3
51
5′
3
载体（质粒）
DNA分子（含目的基因）
限制酶切割
带有黏性末端（或
带有相同黏性末端（或平
平末端)的切口
末端)的目的基因片段
DNA连接酶
重组DNA(重组质粒)
PstI SmaI i
EcoR I
含抗原基
因的DNA
抗原基因
表达
Pstl
载体
抗卡那霉
素基因
质粒
SmaI
EcoR]
Apal
进入下一
次扩增
①高温变性
②低温复性
③适温延伸
(9095℃)
(45~55℃)
(65~75℃)
将目的基因插入
染色体DNA中
导入植物
转入农
细胞
杆菌
质粒
T-DNA
携带外含目的基
含重组
植物
表现出
源基因因的重组
Ti质粒的
细胞
新性状
的DNA Ti质粒
农杆菌
的植株
图1
目的
基因
子房
图2花粉管通道法
图3将目的基因注射
到动物细胞
迷取青蒿酶↓CDNA P(R,含s基因的
酶2
总RNA
DNA片段
混合
质粒a酶
2
酶3
重组质粒
菌
青蒿
移液
用
按照配方或PCR试剂盒的说明书向微
量离心管中依次加入各组分
离心
盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里，离
心约10s,使反应液集中在管的
反应
设置好PCR仪的循环程序，将离心管放入
进行反应
琼脂
制作琼脂糖凝胶放入电泳槽内→将电泳缓冲液加入
糖凝
电泳槽内→将扩增的PCR产物与凝胶载样缓冲液
胶电
混合→用微量移液器将混合液加样（留一个加样孔
泳
加入指示分子大小的标准参照物)→接通电源，电泳
取出凝胶置于紫外灯下观察和照相