3.1重组DNA的基本工具课件2021-2022学年高二下学期生物人教版选择性必修3(共68张PPT)
文档属性
| 名称 | 3.1重组DNA的基本工具课件2021-2022学年高二下学期生物人教版选择性必修3(共68张PPT) |  | |
| 格式 | pptx | ||
| 文件大小 | 34.2MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2022-04-24 20:28:48 | ||
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文档简介
(共68张PPT)
第三章 基因工程
基因工程
培育能产生人胰岛素的大肠杆菌
胰岛素基因从人体细胞内提取出来
胰岛素基因与载体DNA链接
胰岛素基因导入大肠杆菌
基因工程
指按照人们的愿望，通过 等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的 和生物制品。由于基因工程是在DNA 上进行设计和施工的，因此又叫作 。
1.概念：
转基因
新的生物类型
基因重组
②操作水平：
⑤操作结果：
①操作原理：
DNA分子水平
获得新的生物类型和生物产品
③操作环境：
生物体外
④操作对象：
基因
⑥优点：
克服远缘杂交不亲和障碍、定向改造生物性状。
分子水平
重组DNA技术
基因工程的理论基础
①DAN是主要的遗传物质的证明
②DNA双螺旋结构的证明
③中心法则的确立
④遗传密码的破译
①DAN是主要的遗传物质的证明
孟德尔的遗传定律：
提出遗传因子
摩尔根的果蝇实验：
将基因确定到染色体上
①DAN是主要的遗传物质的证明
A、格里菲斯的肺炎链球菌体内转化实验
结论：加热杀死的S菌中含有转化因子
B、艾弗里的肺炎链球菌体外转化实验
结论：DNA是转化因子，
蛋白质、RNA、脂质等不是遗传因子
①DAN是主要的遗传物质的证明
C、噬菌体侵染细菌的实验 结论：DNA是噬菌体的遗传物质
②DNA双螺旋结构的证明
DNA的结构特点：
5’
3’
3’
5’
② 和 交替连接，排列在外侧，构成 ； 排列在内侧。
③两条链上的碱基通过 连接成碱基对，且遵循 。
①DNA是由两条单链组成的，这两条链
按 方式盘旋成双螺旋结构。
反向平行
脱氧核糖
磷酸
碱基
基本骨架
氢键
碱基互补配对原则
②DNA双螺旋结构的证明
脱氧
核糖
A
磷酸
脱氧
核糖
G
磷酸
脱氧
核糖
T
磷酸
T
磷酸
脱氧
核糖
C
磷酸
脱氧
核糖
A
磷酸
脱氧
核糖
氢键
磷酸二酯键
脱氧核苷酸如何链接成脱氧核苷酸链的呢？
②DNA双螺旋结构的证明
③中心法则的确立
基因是通常是有遗传效应的DNA片段
基因控制形状的表达
④遗传密码的破译
所有生物共用一套遗传密码
基因工程的理论基础
①DAN是主要的遗传物质的证明
②DNA双螺旋结构的证明
③中心法则的确立
④遗传密码的破译
基础理论和技术的发展催生了基因工程
1967年,科学家发现,在细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力,并可以在细菌细胞间转移。
1970年,科学家在细菌中发现了第一个限制性内切核酸酶(简称限制酶)。
20世纪70年代初,多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
1972年,伯格(P.Berg,1926一)首先在体外进行了DNA改造的研究,成功地构建了第一个体外重组DNA分子。
⑤基础理论和技术的发展催生了基因工程
1973年,科学家证明质粒可以作为基因工程的载体,构建重组DNA,导入受体细胞,使外源基因在原核细胞中成功表达,并实现物种间的基因交流。至此,基因工程正式问世。
1977年,桑格等科学家发明了DNA序列分析的方法,为基因序列图的绘制提供了可能。此后,DNA合成仪的问世为体外合成DNA提供了方便。
1982年,第一个基因工程药物——重组人胰岛素被批准上市。基因工程药物成为世界各国研究和投资开发的热点。
1983年,科学家采用农杆菌转化法培育出世界上第一例转基因烟草。此后,基因工程进入了迅速发展的阶段。
⑤基础理论和技术的发展催生了基因工程
1984年,我国科学家朱作言领导的团队培育出世界上第一条转基因鱼。
1985年,穆里斯(K. Mullis, 1944—2019)等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。
1990年,人类基因组计划启动。2003年,该计划的测序任务顺利完成。
21世纪以来,科学家发明了多种高通量测序技术,可以实现低成本测定大量核酸序列,加速了人们对基因组序列的了解。
2013年,华人科学家张锋(1982一)及其团队首次报道利用最新的基因组编辑技术——CRISPR(成类规律间隔短回文重复)技术编辑了哺乳动物基因组。该技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。
⑤基础理论和技术的发展催生了基因工程
第1节 重组DNA技术的基本工具
载体
——“分子运输车”
限制性内切核酸酶
——“分子手术刀”
DNA连接酶
——“分子缝合针”
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称 。
1.来源：
2.种类：
主要来自原核生物
限制酶
数千种
限制酶不是一种酶，而是一类酶
3.功能：
识别特定的核苷酸序列，使特定部位的磷酸二酯键断开。
①
②
能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
作用部位
一般为4~8个或其他数量的核苷酸，最常见的为6个核苷酸。
限制酶只切割两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
EcoRⅠ
EcoRⅠ：
专一识别GAATTC的序列，并使G和A之间的磷酸二酯键断开。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
几种常见的限制酶的识别序列及切割位点：
①大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
②限制酶的名字的由来 P72
EcoRⅠ
种加词头两个字母
菌株型号
数字表示分离出来的第几种限制酶
属名首字母
大肠杆菌R型菌株分离出来的第一种限制酶
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线(如图)，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列。
EcoRⅠ
5’…G-A-A-T-T-C…3’
3’…C-T-T-A-A-G…5’
SmaⅠ
5’…C-C-C-G-G-G…3’
3’…G-G-G-C-C-C…5’
TaqⅠ
5’……T-C-G-A……3’
3’……A-G-C-T……5’
能被限制性酶特异性识别的序列一般都是回文序列：即正反读顺序相同，围绕一条轴线对称排列。
读：5’→ 3’
反馈练习
下面哪项不具有限制酶识别序列的特征（ ）
A．GAATTC B．GGGGCCCC
CTTAAG CCCCGGGG
C．CTGCAG D．CTAAATC
GACGTC GATTTAG
D
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
EcoR Ⅰ
中轴线
粘性末端
平末端
Sam Ⅰ
产生黏性末端或平末端
4.切割结果：
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
粘性末端：
EcoR Ⅰ限制酶的切割 只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。
A
A
G
T
T
C
C
T
T
A
A
G
被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
C
T
T
A
A
G
G
A
A
T
T
C
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
平末端：
当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。
Sma Ⅰ限制酶的切割只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。
C
C
C
G
G
G
G
G
G
C
C
C
C
C
C
G
G
G
G
G
G
C
C
C
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
写出下列限制酶切割形成的黏性末端
BamH Ⅰ:
EcoR Ⅰ:
Hind Ⅲ:
Bgl Ⅱ:
GATC
AATT
AGCT
GATC
*思考：你从中发现什么现象了？
不同的限制酶可能切割形成相同的黏性末端。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
1.要想从一个DNA分子中获得某个特定的基因需要有几个酶切位点？ 产生几个末端？
4
CT TCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGAT T
GGCATCTTAA
AAT TCCGTAG
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
使用EcoRⅠ酶剪切目的基因
识别序列GAATTC
2
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
2.如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？
会产生相同的黏性末端
3.限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？
不能。限制酶只能识别并切开双链DNA分子。
4.推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？
防御机制限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
5.为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？
通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
6.请结合图示，
推断限制酶切一次
可断开 个磷酸二酯键，产生 个游离的磷酸基团，产生 个黏性末端，
消耗 分子水。
两
2
2
两
5’
A
T
G
C
T
A
C
G
3’
5’
3’
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
7.下图甲是一个DNA片段，箭头处代表不同限制酶的切点，
据图回答：
（1）用EcoR Ⅰ 酶切，能得到 种DNA片段；
（2）用Pst Ⅰ 完全酶切，能得到 种DNA片段；
（3）同时用Sma Ⅰ 和Pst Ⅰ 完全酶切，能得到 种DNA片段；
（4）只用Pst Ⅰ 酶切，最多能得到 种DNA片段。
2
3
5
5
DNA连接酶——“分子缝合针”
1.作用：
将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
注意：不是连接氢键
（氢键的形成不需要酶的催化）
DNA连接酶——“分子缝合针”
DNA连接酶——“分子缝合针”
2.DNA连接酶的种类：
E.coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
①E.coli DNA连接酶
②T4 DNA连接酶
来源：大肠杆菌
来源：T4噬菌体
功能：只能连接黏性末端
功能：能连接黏性末端和平末端(效率较低)
结果：恢复被限制酶切开的两个核苷酸
之间的磷酸二酯键
结果：恢复被限制酶切开的两个核苷酸
之间的磷酸二酯键
判断以下说法是否正确：
因为黏性末端的碱基是互补的，在连接时，黏性末端可以通过碱基互补配对，加快DNA连接酶的连接速度，而平末端则不能。
A.两个DNA片段的黏性末端必须互补才能通过DNA连接酶连接
起来。
B.T4 DNA连接酶连接平末端的效率和连接黏性末端的效率相同。
C.DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事。
反馈练习
请判断：DNA片段经限制酶处理后产生的相同黏性末端，再经过DNA连接酶处理后，形成的新的识别序列，能否再被所用的限制酶识别。
（1）若两个相同黏性末端都是由同种限制酶
（EcoR Ⅰ）切割后所得， （填“能”或“不能”）
再被所用的限制酶识别。
能
（2）若两个相同黏性末端是由不同限制酶切割所得，形成的新的
识别序列 （填“能”或“不能”）再被所用的限制酶识别。
不能
反馈练习
DNA连接酶
DNA连接酶
A
T
A
G
T
C
C
G
A
A
T
T
连接两个DNA片段
DNA连接酶和DNA聚合酶的比较
DNA连接酶和DNA聚合酶的比较
C
A
A
T
T
G
A
G
T
A
T
C
DNA聚合酶
以DNA母链为模板，连接单个脱氧核苷酸形成单链
DNA连接酶和DNA聚合酶的比较
DNA连接酶 DNA聚合酶
相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板
作用对象
作用结果
用途
都能催化形成磷酸二酯键
都是蛋白质
不需要
需要DNA的一条链作模板
形成完整的重组DNA分子
形成DNA的一条链
基因工程
DNA复制
只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键
在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
DNA连接酶、限制酶、 DNA聚合酶、解旋酶、DNA酶的比较
项目 DNA连接酶 限制酶 DNA聚合酶 解旋酶 DNA酶
作用部位
作用对象
作用结果
磷酸二酯键
将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
磷酸二酯键
磷酸二酯键
磷酸二酯键
氢键
DNA片段
DNA
单个的脱氧
核苷酸
DNA
DNA
将两个DNA片段连接成完整的DNA分子
切割双链DNA分子
将单个的脱氧核苷酸连接到DNA单链末端
将双链DNA分子局部解旋为单链
根据所学知识，完成以下填空：
①限制酶 ②解旋酶 ③DNA连接酶 ④DNA聚合酶 ⑤RNA聚合酶
b
a
A.切断a处的酶为_______
B.连接a处的酶为_______
C.切断b处的酶为_______
①
③④
②
a：磷酸二酯键；b：氢键
反馈练习
限制酶
DNA连接酶
解旋酶
DNA聚合酶
试判断以上过程起作用的酶的名称
反馈练习
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
2.种类：
质粒、噬菌体、动植物病毒等。
将目的基因转入受体细胞，
在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
1.作用：
种类 用途 不同点
质粒、噬菌体
植物病毒 动物病毒 将外源基因导入大肠杆菌
等受体细胞
将外源基因导入植物细胞
将外源基因导入动物细胞
来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
3.运载体需具备的条件：
①有一个至多个限制酶切割位点: 供外源DNA片段（基因）插入其中
②在受体细胞中稳定存在并能自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制：使外源基因在受体细胞中稳定存在并复制，以扩增外源基因的数量
③具有特殊的标记基因 ：便于重组DNA分子的筛选；
如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等
④对受体细胞无害、易分离。避免受体细胞受到损伤
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备运载体的条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
4.最常用的载体——质粒
一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
其基因属于细胞质基因。
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备运载体的条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
终止子：转录的终点，在转录过程中起调控作用。
启动子: 转录的起点，在转录过程中起调控作用。
复制原点:DNA复制的起始位点。
特殊的标记基因：用于鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞
载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。
选用图示载体将目的基因导入细菌中并将含有目的基因的细菌筛选出来。
（1）在培养细菌的培养基中添加
抗生素B，则应该选择的限制酶
为_______。
（2）在培养细菌的培养基中添加
抗生素A，则应该选择的限制酶
为_____。
①或②
①
反馈练习
1.现有一段DNA，含有g1、g2、g3，若要将g2提取出来，
如何操作？
g1
g2
g3
目的基因两端均含有特定序列，
但目的基因内部不应含有相应序列。
思考·讨论
思考·讨论
…ATAGCATGCTATCCATG
…TATCGTACGATAGGTACTTAA
目的基因
… TCCTAG
… AGGATCTTAA
GAGCCATACTTAA
AATTCTCGGTATG
AATTCCATAC …
GGTATG …
AATTCGGCATAC…
GCCGTATG…
思考·讨论
①.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？
剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。
②.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对
如果不能，可能是什么原因造成的？
如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。
③.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？
不能。
因为基因的长度一般在100个碱基对以上。
用相同的限制酶切割目的基因和运载体。
产生相同末端，便于连接。
2.目的基因是要与运载体结合的，
那如何处理质粒？
★重组质粒的形成：
用相同的限制酶处理目的基因和运载体，
获得相同的末端，
然后用DNA连接酶对其进行连接。
思考·讨论
思考·讨论
由于用同种限制酶切割，
会产生相同黏性末端，
则可能导致目的基因、质粒的自身环化以及目的基因与质粒反向连接。
思考·讨论3.用EcoR Ⅰ切下图含有目的基因的DNA片段，能成功不？双酶切：用2种酶分别对目的基因和运载体切割。…ATCGAATCATCCCGGGCATTAGTG…CCAAGTCTCTGGAATTCACGATTAG……TAGCTTAGTAGGGCCCGTAATCAC…GGTTCAGAGACCTTAAGTGCTAATC…确保目的基因与运载体定向连接，减少重组杂物。不能…GGGCATTAGTG…CCAAGTCTCTGG……CCCGTAATCAC…GGTTCAGAGACCTTAA…双酶切产生不同末端：
思考·讨论
(1)获取目的基因和切割载体时, 通常使用同种限制酶,目的是为了
。但是使用该法缺点是容易发生
以及 ，为了避免上述情况发生，可采取的措施是
。
产生相同的黏性末端，便于连接
目的基因与质粒反向连接
目的基因、质粒的自身环化
分别使用两种限制酶去切割目的基因和运载体
(2)获取一个目的基因需限制酶切割 次,
共产生 个游离的磷酸基团。
两
4
思考·讨论
(3)选择限制酶切割位点的基本原则：
①切割目的基因时： 。
②切割质粒时： 。
能切下目的基因且不破坏目的基因
至少保留一个完整的标记基因，便于筛选
1.“分子手术刀”——
1）来源：
2）作用：
3）作用结果：
2.“分子缝合线”——
1）作用：
2）分类：
3.“分子运输车”——
1）作用：
2）种类：
3）应具备条件：
限制酶
产生黏性末端、平末端
DNA连接酶
将不同的DNA片段连接起来
磷酸二酯键
将外源基因送入受体细胞
质粒（最常用）、噬菌体、动植物病毒
E.Coli DNA连接酶、T4DNA连接酶（来源、区别？）
主要从原核生物中分离纯化出来。
载体
识别特定的核苷酸序列，使特定部位的磷酸二酯键断开。
作用部位：
②能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。
①有一个至多个限制酶切割位点
③具有标记基因
④对受体细胞无害
——便于重组DNA分子的筛选
——供外源DNA片段（目的基因）插入其中
总结
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
0
0.14
NaCI浓度（mol/L）
DNA溶解度
1.实验原理
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
DNA不溶于酒精，
但某些蛋白质溶于酒精
DNA能溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液
在一定温度下，
DNA被二苯胺试剂染成蓝色
初步分离DNA和蛋白质
溶解DNA
鉴定DNA
DNA不溶于酒精，
但某些蛋白质溶于酒精
DNA能溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液
在一定温度下，
DNA被二苯胺试剂染成蓝色
DNA的粗提取与鉴定
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。
（注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。）
二、材料用具
1.选材：
2.试剂：
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
——溶解并提取DNA
——析出DNA
——溶解DNA
——鉴定DNA，要现配现用
研磨液、二苯胺的配制方法
课本P117
DNA的粗提取与鉴定
1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质
方案一 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
方案二 直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液
DNA的粗提取与鉴定
3.DNA的析出
方案一 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
方案二 将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
低温放置几分钟的作用：
①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。
DNA的粗提取与鉴定
4.DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，
各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。将丝状物或沉淀物溶解于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
实验组
对照组
水浴加热
DNA的粗提取与鉴定
对照组：如何设置？
阴性对照：
在等体积的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min
思考：如何评价结果？
——看与二苯胺反应颜色的深浅
DNA纯度
DNA的量
——看提取物颜色
1．以血液为实验材料时，
每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，
以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
3．利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：
动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。
4．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，
原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
5．提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：
体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。
特别提醒
特别提醒
6．提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：
体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。预冷的酒精具有以下优点：①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。
7.实验中出现的丝状物的主要成分是DNA，
实际上每一根“丝”都是由许多DNA分子聚集在一起形成的，
应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免破坏DNA。
8.为减少DNA的损失，过滤过程一般使用纱布过滤。
9.粗提取的DNA中可能含有少量的蛋白质等。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
第三章 基因工程
基因工程
培育能产生人胰岛素的大肠杆菌
胰岛素基因从人体细胞内提取出来
胰岛素基因与载体DNA链接
胰岛素基因导入大肠杆菌
基因工程
指按照人们的愿望，通过 等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的 和生物制品。由于基因工程是在DNA 上进行设计和施工的，因此又叫作 。
1.概念：
转基因
新的生物类型
基因重组
②操作水平：
⑤操作结果：
①操作原理：
DNA分子水平
获得新的生物类型和生物产品
③操作环境：
生物体外
④操作对象：
基因
⑥优点：
克服远缘杂交不亲和障碍、定向改造生物性状。
分子水平
重组DNA技术
基因工程的理论基础
①DAN是主要的遗传物质的证明
②DNA双螺旋结构的证明
③中心法则的确立
④遗传密码的破译
①DAN是主要的遗传物质的证明
孟德尔的遗传定律：
提出遗传因子
摩尔根的果蝇实验：
将基因确定到染色体上
①DAN是主要的遗传物质的证明
A、格里菲斯的肺炎链球菌体内转化实验
结论：加热杀死的S菌中含有转化因子
B、艾弗里的肺炎链球菌体外转化实验
结论：DNA是转化因子，
蛋白质、RNA、脂质等不是遗传因子
①DAN是主要的遗传物质的证明
C、噬菌体侵染细菌的实验 结论：DNA是噬菌体的遗传物质
②DNA双螺旋结构的证明
DNA的结构特点：
5’
3’
3’
5’
② 和 交替连接，排列在外侧，构成 ； 排列在内侧。
③两条链上的碱基通过 连接成碱基对，且遵循 。
①DNA是由两条单链组成的，这两条链
按 方式盘旋成双螺旋结构。
反向平行
脱氧核糖
磷酸
碱基
基本骨架
氢键
碱基互补配对原则
②DNA双螺旋结构的证明
脱氧
核糖
A
磷酸
脱氧
核糖
G
磷酸
脱氧
核糖
T
磷酸
T
磷酸
脱氧
核糖
C
磷酸
脱氧
核糖
A
磷酸
脱氧
核糖
氢键
磷酸二酯键
脱氧核苷酸如何链接成脱氧核苷酸链的呢？
②DNA双螺旋结构的证明
③中心法则的确立
基因是通常是有遗传效应的DNA片段
基因控制形状的表达
④遗传密码的破译
所有生物共用一套遗传密码
基因工程的理论基础
①DAN是主要的遗传物质的证明
②DNA双螺旋结构的证明
③中心法则的确立
④遗传密码的破译
基础理论和技术的发展催生了基因工程
1967年,科学家发现,在细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力,并可以在细菌细胞间转移。
1970年,科学家在细菌中发现了第一个限制性内切核酸酶(简称限制酶)。
20世纪70年代初,多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
1972年,伯格(P.Berg,1926一)首先在体外进行了DNA改造的研究,成功地构建了第一个体外重组DNA分子。
⑤基础理论和技术的发展催生了基因工程
1973年,科学家证明质粒可以作为基因工程的载体,构建重组DNA,导入受体细胞,使外源基因在原核细胞中成功表达,并实现物种间的基因交流。至此,基因工程正式问世。
1977年,桑格等科学家发明了DNA序列分析的方法,为基因序列图的绘制提供了可能。此后,DNA合成仪的问世为体外合成DNA提供了方便。
1982年,第一个基因工程药物——重组人胰岛素被批准上市。基因工程药物成为世界各国研究和投资开发的热点。
1983年,科学家采用农杆菌转化法培育出世界上第一例转基因烟草。此后,基因工程进入了迅速发展的阶段。
⑤基础理论和技术的发展催生了基因工程
1984年,我国科学家朱作言领导的团队培育出世界上第一条转基因鱼。
1985年,穆里斯(K. Mullis, 1944—2019)等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。
1990年,人类基因组计划启动。2003年,该计划的测序任务顺利完成。
21世纪以来,科学家发明了多种高通量测序技术,可以实现低成本测定大量核酸序列,加速了人们对基因组序列的了解。
2013年,华人科学家张锋(1982一)及其团队首次报道利用最新的基因组编辑技术——CRISPR(成类规律间隔短回文重复)技术编辑了哺乳动物基因组。该技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。
⑤基础理论和技术的发展催生了基因工程
第1节 重组DNA技术的基本工具
载体
——“分子运输车”
限制性内切核酸酶
——“分子手术刀”
DNA连接酶
——“分子缝合针”
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，又称 。
1.来源：
2.种类：
主要来自原核生物
限制酶
数千种
限制酶不是一种酶，而是一类酶
3.功能：
识别特定的核苷酸序列，使特定部位的磷酸二酯键断开。
①
②
能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
作用部位
一般为4~8个或其他数量的核苷酸，最常见的为6个核苷酸。
限制酶只切割两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
EcoRⅠ
EcoRⅠ：
专一识别GAATTC的序列，并使G和A之间的磷酸二酯键断开。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
几种常见的限制酶的识别序列及切割位点：
①大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
②限制酶的名字的由来 P72
EcoRⅠ
种加词头两个字母
菌株型号
数字表示分离出来的第几种限制酶
属名首字母
大肠杆菌R型菌株分离出来的第一种限制酶
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线(如图)，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列。
EcoRⅠ
5’…G-A-A-T-T-C…3’
3’…C-T-T-A-A-G…5’
SmaⅠ
5’…C-C-C-G-G-G…3’
3’…G-G-G-C-C-C…5’
TaqⅠ
5’……T-C-G-A……3’
3’……A-G-C-T……5’
能被限制性酶特异性识别的序列一般都是回文序列：即正反读顺序相同，围绕一条轴线对称排列。
读：5’→ 3’
反馈练习
下面哪项不具有限制酶识别序列的特征（ ）
A．GAATTC B．GGGGCCCC
CTTAAG CCCCGGGG
C．CTGCAG D．CTAAATC
GACGTC GATTTAG
D
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
EcoR Ⅰ
中轴线
粘性末端
平末端
Sam Ⅰ
产生黏性末端或平末端
4.切割结果：
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
粘性末端：
EcoR Ⅰ限制酶的切割 只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。
A
A
G
T
T
C
C
T
T
A
A
G
被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
C
T
T
A
A
G
G
A
A
T
T
C
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
平末端：
当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。
Sma Ⅰ限制酶的切割只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。
C
C
C
G
G
G
G
G
G
C
C
C
C
C
C
G
G
G
G
G
G
C
C
C
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
写出下列限制酶切割形成的黏性末端
BamH Ⅰ:
EcoR Ⅰ:
Hind Ⅲ:
Bgl Ⅱ:
GATC
AATT
AGCT
GATC
*思考：你从中发现什么现象了？
不同的限制酶可能切割形成相同的黏性末端。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
1.要想从一个DNA分子中获得某个特定的基因需要有几个酶切位点？ 产生几个末端？
4
CT TCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGAT T
GGCATCTTAA
AAT TCCGTAG
GGCATCTTAA
AATTCCGTAG
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
CTTCATG AATTCCCTAA
GAAGTACTTAA GGGATT
使用EcoRⅠ酶剪切目的基因
识别序列GAATTC
2
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
2.如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？
会产生相同的黏性末端
3.限制酶能切开RNA分子的磷酸二酯键吗？
不能。限制酶只能识别并切开双链DNA分子。
4.推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？
防御机制限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
5.为什么限制酶不切割细菌本身的DNA分子？
通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
6.请结合图示，
推断限制酶切一次
可断开 个磷酸二酯键，产生 个游离的磷酸基团，产生 个黏性末端，
消耗 分子水。
两
2
2
两
5’
A
T
G
C
T
A
C
G
3’
5’
3’
限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
7.下图甲是一个DNA片段，箭头处代表不同限制酶的切点，
据图回答：
（1）用EcoR Ⅰ 酶切，能得到 种DNA片段；
（2）用Pst Ⅰ 完全酶切，能得到 种DNA片段；
（3）同时用Sma Ⅰ 和Pst Ⅰ 完全酶切，能得到 种DNA片段；
（4）只用Pst Ⅰ 酶切，最多能得到 种DNA片段。
2
3
5
5
DNA连接酶——“分子缝合针”
1.作用：
将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
注意：不是连接氢键
（氢键的形成不需要酶的催化）
DNA连接酶——“分子缝合针”
DNA连接酶——“分子缝合针”
2.DNA连接酶的种类：
E.coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
①E.coli DNA连接酶
②T4 DNA连接酶
来源：大肠杆菌
来源：T4噬菌体
功能：只能连接黏性末端
功能：能连接黏性末端和平末端(效率较低)
结果：恢复被限制酶切开的两个核苷酸
之间的磷酸二酯键
结果：恢复被限制酶切开的两个核苷酸
之间的磷酸二酯键
判断以下说法是否正确：
因为黏性末端的碱基是互补的，在连接时，黏性末端可以通过碱基互补配对，加快DNA连接酶的连接速度，而平末端则不能。
A.两个DNA片段的黏性末端必须互补才能通过DNA连接酶连接
起来。
B.T4 DNA连接酶连接平末端的效率和连接黏性末端的效率相同。
C.DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事。
反馈练习
请判断：DNA片段经限制酶处理后产生的相同黏性末端，再经过DNA连接酶处理后，形成的新的识别序列，能否再被所用的限制酶识别。
（1）若两个相同黏性末端都是由同种限制酶
（EcoR Ⅰ）切割后所得， （填“能”或“不能”）
再被所用的限制酶识别。
能
（2）若两个相同黏性末端是由不同限制酶切割所得，形成的新的
识别序列 （填“能”或“不能”）再被所用的限制酶识别。
不能
反馈练习
DNA连接酶
DNA连接酶
A
T
A
G
T
C
C
G
A
A
T
T
连接两个DNA片段
DNA连接酶和DNA聚合酶的比较
DNA连接酶和DNA聚合酶的比较
C
A
A
T
T
G
A
G
T
A
T
C
DNA聚合酶
以DNA母链为模板，连接单个脱氧核苷酸形成单链
DNA连接酶和DNA聚合酶的比较
DNA连接酶 DNA聚合酶
相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板
作用对象
作用结果
用途
都能催化形成磷酸二酯键
都是蛋白质
不需要
需要DNA的一条链作模板
形成完整的重组DNA分子
形成DNA的一条链
基因工程
DNA复制
只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键
在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
DNA连接酶、限制酶、 DNA聚合酶、解旋酶、DNA酶的比较
项目 DNA连接酶 限制酶 DNA聚合酶 解旋酶 DNA酶
作用部位
作用对象
作用结果
磷酸二酯键
将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
磷酸二酯键
磷酸二酯键
磷酸二酯键
氢键
DNA片段
DNA
单个的脱氧
核苷酸
DNA
DNA
将两个DNA片段连接成完整的DNA分子
切割双链DNA分子
将单个的脱氧核苷酸连接到DNA单链末端
将双链DNA分子局部解旋为单链
根据所学知识，完成以下填空：
①限制酶 ②解旋酶 ③DNA连接酶 ④DNA聚合酶 ⑤RNA聚合酶
b
a
A.切断a处的酶为_______
B.连接a处的酶为_______
C.切断b处的酶为_______
①
③④
②
a：磷酸二酯键；b：氢键
反馈练习
限制酶
DNA连接酶
解旋酶
DNA聚合酶
试判断以上过程起作用的酶的名称
反馈练习
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
2.种类：
质粒、噬菌体、动植物病毒等。
将目的基因转入受体细胞，
在受体细胞内对目的基因进行大量复制。
1.作用：
种类 用途 不同点
质粒、噬菌体
植物病毒 动物病毒 将外源基因导入大肠杆菌
等受体细胞
将外源基因导入植物细胞
将外源基因导入动物细胞
来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
3.运载体需具备的条件：
①有一个至多个限制酶切割位点: 供外源DNA片段（基因）插入其中
②在受体细胞中稳定存在并能自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制：使外源基因在受体细胞中稳定存在并复制，以扩增外源基因的数量
③具有特殊的标记基因 ：便于重组DNA分子的筛选；
如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等
④对受体细胞无害、易分离。避免受体细胞受到损伤
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备运载体的条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
4.最常用的载体——质粒
一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
其基因属于细胞质基因。
实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备运载体的条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。
基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
终止子：转录的终点，在转录过程中起调控作用。
启动子: 转录的起点，在转录过程中起调控作用。
复制原点:DNA复制的起始位点。
特殊的标记基因：用于鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞
载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。
选用图示载体将目的基因导入细菌中并将含有目的基因的细菌筛选出来。
（1）在培养细菌的培养基中添加
抗生素B，则应该选择的限制酶
为_______。
（2）在培养细菌的培养基中添加
抗生素A，则应该选择的限制酶
为_____。
①或②
①
反馈练习
1.现有一段DNA，含有g1、g2、g3，若要将g2提取出来，
如何操作？
g1
g2
g3
目的基因两端均含有特定序列，
但目的基因内部不应含有相应序列。
思考·讨论
思考·讨论
…ATAGCATGCTATCCATG
…TATCGTACGATAGGTACTTAA
目的基因
… TCCTAG
… AGGATCTTAA
GAGCCATACTTAA
AATTCTCGGTATG
AATTCCATAC …
GGTATG …
AATTCGGCATAC…
GCCGTATG…
思考·讨论
①.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？
剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。
②.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对
如果不能，可能是什么原因造成的？
如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。
③.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？
不能。
因为基因的长度一般在100个碱基对以上。
用相同的限制酶切割目的基因和运载体。
产生相同末端，便于连接。
2.目的基因是要与运载体结合的，
那如何处理质粒？
★重组质粒的形成：
用相同的限制酶处理目的基因和运载体，
获得相同的末端，
然后用DNA连接酶对其进行连接。
思考·讨论
思考·讨论
由于用同种限制酶切割，
会产生相同黏性末端，
则可能导致目的基因、质粒的自身环化以及目的基因与质粒反向连接。
思考·讨论3.用EcoR Ⅰ切下图含有目的基因的DNA片段，能成功不？双酶切：用2种酶分别对目的基因和运载体切割。…ATCGAATCATCCCGGGCATTAGTG…CCAAGTCTCTGGAATTCACGATTAG……TAGCTTAGTAGGGCCCGTAATCAC…GGTTCAGAGACCTTAAGTGCTAATC…确保目的基因与运载体定向连接，减少重组杂物。不能…GGGCATTAGTG…CCAAGTCTCTGG……CCCGTAATCAC…GGTTCAGAGACCTTAA…双酶切产生不同末端：
思考·讨论
(1)获取目的基因和切割载体时, 通常使用同种限制酶,目的是为了
。但是使用该法缺点是容易发生
以及 ，为了避免上述情况发生，可采取的措施是
。
产生相同的黏性末端，便于连接
目的基因与质粒反向连接
目的基因、质粒的自身环化
分别使用两种限制酶去切割目的基因和运载体
(2)获取一个目的基因需限制酶切割 次,
共产生 个游离的磷酸基团。
两
4
思考·讨论
(3)选择限制酶切割位点的基本原则：
①切割目的基因时： 。
②切割质粒时： 。
能切下目的基因且不破坏目的基因
至少保留一个完整的标记基因，便于筛选
1.“分子手术刀”——
1）来源：
2）作用：
3）作用结果：
2.“分子缝合线”——
1）作用：
2）分类：
3.“分子运输车”——
1）作用：
2）种类：
3）应具备条件：
限制酶
产生黏性末端、平末端
DNA连接酶
将不同的DNA片段连接起来
磷酸二酯键
将外源基因送入受体细胞
质粒（最常用）、噬菌体、动植物病毒
E.Coli DNA连接酶、T4DNA连接酶（来源、区别？）
主要从原核生物中分离纯化出来。
载体
识别特定的核苷酸序列，使特定部位的磷酸二酯键断开。
作用部位：
②能在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。
①有一个至多个限制酶切割位点
③具有标记基因
④对受体细胞无害
——便于重组DNA分子的筛选
——供外源DNA片段（目的基因）插入其中
总结
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
0
0.14
NaCI浓度（mol/L）
DNA溶解度
1.实验原理
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
DNA不溶于酒精，
但某些蛋白质溶于酒精
DNA能溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液
在一定温度下，
DNA被二苯胺试剂染成蓝色
初步分离DNA和蛋白质
溶解DNA
鉴定DNA
DNA不溶于酒精，
但某些蛋白质溶于酒精
DNA能溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液
在一定温度下，
DNA被二苯胺试剂染成蓝色
DNA的粗提取与鉴定
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。
（注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。）
二、材料用具
1.选材：
2.试剂：
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
——溶解并提取DNA
——析出DNA
——溶解DNA
——鉴定DNA，要现配现用
研磨液、二苯胺的配制方法
课本P117
DNA的粗提取与鉴定
1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质
方案一 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
方案二 直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液
DNA的粗提取与鉴定
3.DNA的析出
方案一 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
方案二 将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
低温放置几分钟的作用：
①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
③低温有利于增加DNA的柔韧性，减少其断裂。
DNA的粗提取与鉴定
4.DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，
各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。将丝状物或沉淀物溶解于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
实验组
对照组
水浴加热
DNA的粗提取与鉴定
对照组：如何设置？
阴性对照：
在等体积的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，将试管置于同等沸水浴中加热5min
思考：如何评价结果？
——看与二苯胺反应颜色的深浅
DNA纯度
DNA的量
——看提取物颜色
1．以血液为实验材料时，
每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，
以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
3．利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法：
动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。
4．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，
原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
5．提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：
体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。
特别提醒
特别提醒
6．提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：
体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。预冷的酒精具有以下优点：①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。
7.实验中出现的丝状物的主要成分是DNA，
实际上每一根“丝”都是由许多DNA分子聚集在一起形成的，
应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免破坏DNA。
8.为减少DNA的损失，过滤过程一般使用纱布过滤。
9.粗提取的DNA中可能含有少量的蛋白质等。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定