3.1.2DNA的粗提取与鉴定 课件（共14张ppt）生物人教版（2019）选择性必修3
文档属性
| 名称 | 3.1.2DNA的粗提取与鉴定 课件（共14张ppt）生物人教版（2019）选择性必修3 |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 1.2MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2022-09-26 16:59:54 | ||
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文档简介
(共14张PPT)
DNA的粗提取与鉴定
实验原理：
1、DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精
2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L NaCl溶液
补充：在0.14mol/LNaCl溶液溶解度最低
3、在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取
基础知识：
新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等都可以作为实验材料，但提取DNA的方法可能稍有不同
不能，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体， 几乎不含DNA
1、实验材料：
思考：能否选取牛、羊、猪等哺乳动物成熟的红细胞作为DNA
提取的材料？
材料选择：
2、选取原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是，选用DNA
含量相对较高的组织，成功的可能性更大。
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
含有EDTA、SDS、Tris和HCl
析出DNA
溶解DNA
鉴定DNA，要现配现用
实验试剂：
研磨液
试剂 中文名称 作用
Tris 三羟甲基氨基甲烷 维持缓冲液pH值
EDTA 乙二胺四乙酸 抑制DNA水解酶，防止DNA被水解
SDS 十二烷基硫酸钠 使蛋白质变形，与DNA发生分离
Hcl 盐酸，浓度：2mol/l 将溶液调节pH至8
1、研磨
实验步骤：
2、过滤
3、析出
4、鉴定
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨
研磨的目的：
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
方法一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
方法二：可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中
1、研磨
2、过滤
①低温抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出
问题一：
上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖、RNA等杂质
问题二：
低温放置几分钟的作用是什么？
2、过滤
注意：
搅拌时应轻缓、并沿一个方向，减少DNA断裂，以便获得
较完整的DNA分子
3、析出
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA
方法一：用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
方法二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
实验组
对照组
水浴加热
4、鉴定
对照组：2mol/L的NaCl溶液5mL+4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min —（现象）—试管内溶液呈无色
实验组：2mol/L的NaCl溶液5mL+丝状物或沉淀物+4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min —（现象）—试管内溶液呈蓝色
1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？
①观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多
②二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等
2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？
可能仍然含有核蛋白、多糖、RNA等杂质。
结果分析与评价：
3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。
本实验可以采取分组的方式进行；可以选取不同的实验材料；也可以查阅资料了解其他提取DNA的方法，对同种材料采用不同的方法。最后从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好。
结果分析与评价：
1、动物细胞破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可
2、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA
知识扩展：
3、若是以动物血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠。 目的：防止血液凝固
4、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果
5、二苯胺试剂的配制：
称取1.5g二苯胺，溶于100ml冰醋酸中，再加入1.5ml浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10ml的上述溶液中再加入0.1ml体积分数为0.2%的乙醛溶液。 作用：促进染色效果
知识扩展：
6、用冷酒精浓缩和沉淀DNA时，所用的95%的酒精必须经过预冷后才能使用
作用：①低温抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②低温抑制DNA分子的运动，有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂
知识扩展：
DNA的粗提取与鉴定
实验原理：
1、DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精
2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L NaCl溶液
补充：在0.14mol/LNaCl溶液溶解度最低
3、在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取
基础知识：
新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等都可以作为实验材料，但提取DNA的方法可能稍有不同
不能，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体， 几乎不含DNA
1、实验材料：
思考：能否选取牛、羊、猪等哺乳动物成熟的红细胞作为DNA
提取的材料？
材料选择：
2、选取原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是，选用DNA
含量相对较高的组织，成功的可能性更大。
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
含有EDTA、SDS、Tris和HCl
析出DNA
溶解DNA
鉴定DNA，要现配现用
实验试剂：
研磨液
试剂 中文名称 作用
Tris 三羟甲基氨基甲烷 维持缓冲液pH值
EDTA 乙二胺四乙酸 抑制DNA水解酶，防止DNA被水解
SDS 十二烷基硫酸钠 使蛋白质变形，与DNA发生分离
Hcl 盐酸，浓度：2mol/l 将溶液调节pH至8
1、研磨
实验步骤：
2、过滤
3、析出
4、鉴定
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨
研磨的目的：
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
方法一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液
方法二：可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中
1、研磨
2、过滤
①低温抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出
问题一：
上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖、RNA等杂质
问题二：
低温放置几分钟的作用是什么？
2、过滤
注意：
搅拌时应轻缓、并沿一个方向，减少DNA断裂，以便获得
较完整的DNA分子
3、析出
在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA
方法一：用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分
方法二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干
实验组
对照组
水浴加热
4、鉴定
对照组：2mol/L的NaCl溶液5mL+4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min —（现象）—试管内溶液呈无色
实验组：2mol/L的NaCl溶液5mL+丝状物或沉淀物+4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min —（现象）—试管内溶液呈蓝色
1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？
①观察提取的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多
②二苯胺试剂鉴定呈现蓝色说明实验基本成功；如果不呈现蓝色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在实验操作过程中出现了失误等
2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？
可能仍然含有核蛋白、多糖、RNA等杂质。
结果分析与评价：
3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。
本实验可以采取分组的方式进行；可以选取不同的实验材料；也可以查阅资料了解其他提取DNA的方法，对同种材料采用不同的方法。最后从多方面比较实验结果，如DNA的纯度、DNA的颜色、二苯胺试剂显色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的效果更好。
结果分析与评价：
1、动物细胞破碎较易，以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可
2、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗溶液，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA
知识扩展：
3、若是以动物血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠。 目的：防止血液凝固
4、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果
5、二苯胺试剂的配制：
称取1.5g二苯胺，溶于100ml冰醋酸中，再加入1.5ml浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10ml的上述溶液中再加入0.1ml体积分数为0.2%的乙醛溶液。 作用：促进染色效果
知识扩展：
6、用冷酒精浓缩和沉淀DNA时，所用的95%的酒精必须经过预冷后才能使用
作用：①低温抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
②低温抑制DNA分子的运动，有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂
知识扩展：