(共19张PPT)
在制作过程中有杂菌混入
①容器和原料灭菌
②接种纯的菌种
③在无菌条件下操作
思考1:失败的原因是什么?
思考2:怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢?
微生物的培养技术及应用
--微生物的基本培养技术(一)
新冠病毒
乳酸杆菌
霉菌
衣原体
本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌
☆实验室培养微生物的基本思路:
①为微生物提供合适的营养
③确保其他微生物无法混入
②为微生物提供合适的环境条件
④将需要的微生物分离出来
培养基
培养环境
无菌技术
分离培养
01
培养基的配制
培养基:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。(教材P9)
培养
分离
鉴定
保存
菌落
由单个微生物细胞接种到培养基表面或内层时,当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下,该细胞就会迅速生长繁殖形成一堆肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团。(微生物学·周德庆)
01
培养基的配制
不含凝固剂呈液体状态
液体培养基
液体培养基+琼脂
固体培养基
琼脂:是一种从红藻中提取的多糖,在98℃以上融化,在44℃以下凝固,琼脂仅作凝固剂,不提供能量和营养。
01
培养基的配制
培养基的基本组成是什么?
水分
碳源:提供碳元素的物质,如白砂糖
氮源:提供氮元素的物质,如蛋白胨
无机盐
01
培养基的配制
☆培养基营养成分的含义、作用、主要来源分析
营养物质 含义 作用 主要来源
碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体细胞的物质和一些代谢产物,有些是异养生物的能源物质 无机碳源:NaHCO3、CO2等;
有机碳源:糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油、牛肉膏和蛋白胨等
氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机氮源:NH3、铵盐、硝酸盐等;
有机氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨等
水 在高等生物体内含量很高,在低等生物体内含量更高 不仅是优良的溶剂,而且可维持生物大分子结构的稳定 培养基、大气、代谢产物等
无机盐 为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素,包括某些大量元素 细胞内的组成成分;生理调节物质;某些化能自养菌的能源;酶的激活剂 培养基、大气等环境
01
培养基的配制
培养基的基本组成有哪些?
水分
碳源:提供碳元素的物质,如白砂糖
氮源:提供氮元素的物质,如蛋白胨
无机盐
01
培养基的配制
只需要这些物质就好了吗?
其他条件
pH、O2和特殊营养物质
水
碳源
氮源
无机盐
①pH 、O2
培养霉菌
培养细菌
培养厌氧微生物
培养基pH调至酸性
培养基pH调至中性或弱碱性
控制培养环境为无氧
②特殊营养物质
主要指生长因子
▲概念:是一类调节微生物正常生长代谢所必需,但不能用简单的碳、氮源自行合成的有机物。(微生物学·周德庆·第三版)
▲种类:维生素、碱基、卟啉、胺类等
▲来源:酵母膏、玉米浆、麦芽汁、蛋白胨、动植物组织提取液等
01
培养基的配制
只需要这些物质就好了吗?
其他条件
水
碳源
氮源
无机盐
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
H2O 定容至1000mL
1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
碳源、磷酸盐和维生素等
氮源和维生素等
无机盐
水
01
培养基的配制
想一想
是不是所有微生物的培养基都需要加入碳源、氮源
不是
光合细菌:不需要加入碳源
固氮菌:不需要加入氮源
断一断
1.同一种物质不能既做碳源,又做氮源。( )
2.碳源都能提供能量。( )
3.无机氮源也能提供能量。( )
4.除水以外的无机物只提供无机盐( )
×
×
√
×
02
无菌技术
★无菌技术:在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。
方法:
①消毒
02
无菌技术
★无菌操作的对象:
①实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒
② 培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
无菌操作过程中,应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。
02
无菌技术
①消毒
☆概念:使用较温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。(教材P10黑体字)
☆方法:
①煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min。
可杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。
②巴氏消毒法:62-65℃煮30min或 80℃-90℃下处理30s-1min。
可杀死绝大多数微生物,不破坏食物的营养成分。
③化学药物消毒法:用75%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等
④紫外线消毒法:对接种室、接种箱或超净工作台用紫外线照射30min,以杀死物体表面或空气中的微生物。
02
无菌技术
②灭菌
☆概念:用强烈的理化方法杀死物体内外的所有的微生物,包括芽孢和孢子。(教材P10黑体字)
▲芽孢和孢子:
③化学药物消毒法:用75%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等
④紫外线消毒法:对接种室、接种箱或超净工作台用紫外线照射30min,以杀死物体表面或空气中的微生物。
芽孢:某些细菌生长到一定阶段,在细胞内形成的休眠体
孢子:某些生物的繁殖体
芽孢和孢子具有高度的耐热性,可抗化学药物和抗辐射
02
无菌技术
②灭菌
☆方法:
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
接种环灼烧灭菌
充分燃烧层
不充分燃烧层
02
无菌技术
②灭菌
☆方法:
湿热灭菌
高压蒸汽灭菌锅
加热
进行灭菌
效果最好
高压蒸汽
100kPa
121℃
15~30min
沸水
流通蒸汽
高压蒸汽
02
无菌技术
②灭菌
☆方法:
干热灭菌
干热灭菌箱
灭菌物品
干热灭菌箱
耐高温和需要
保持干燥的物品
玻璃器皿
金属用具
吸管
培养皿
160~170℃
2~3h
灭菌
02
无菌技术
②灭菌
☆方法:
灼烧灭菌
2
3
接种环的灼烧灭菌
1
接种工具
涂布器
接种环
接种针
其他金属用具
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
接种过程中
试管口
瓶口
通过酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
迅速彻底灭菌