(共29张PPT)
第1节 植物细胞工程
一、植物细胞工程的基本技术
第2章 细胞工程
科技探索之路
1902年,哈伯兰特(G.Haberlandt,1854一1945)提出了细胞全能性的理论,但相关的实验尝试没有成功。
1958年,斯图尔德(EC.Steward,1904一1993)等发现胡萝卜的体细胞可以分化为胚,为细胞全能性理论提供了强有力的支持。
1960年,科金(E.C.Cocking,1931一)用真菌的纤维素酶分解番茄根的细胞壁,成功获得了原生质体。
1964年,古哈(S.Guha,1938-2007)等在培养毛曼陀罗的花药时,首次得到了由花药中的花粉粒发育而来的胚。
1971年,卡尔森(PS.Carlson,1944一2017)诱导烟草种间原生质体融合,获得了第一株体细胞种间杂种植株。
1974年,土壤农杆菌的Ti质粒被发现。之后,该质粒应用于植物分子生物学领域,促进了植物细胞工程与分子生物学技术紧密结合。
细胞工程的发展历程
“其茅葺,其叶青青,犹绿衣郎,挺节独立,可敬可慕。迨(dài)夫开也,凝情瀼露,万态千妍,薰(xūn)风自来,四坐芬郁,岂非真兰室乎!岂非有国香乎!”这是我国历史上第一部兰谱——《金漳(zhānɡ)兰谱》(宋·赵时庚)中对兰花的一段描述。从古至今,我国人民都把兰花看作高洁、典雅的象征,很多人喜欢养兰花。但是,兰花种子通常发育不全,在自然条件下萌发率极低;传统分株繁殖的方法又存在繁殖周期长、繁殖率低等问题,如果靠自然繁殖,兰花的价格可想而知了。如何能让名贵的兰花大量、快速地繁殖,从而走入寻常百姓家呢?
利用植物组织培养技术可以大量、快速地培育兰花。
从社会中来
植物通常是通过播种或扦插实现繁殖的。
玉米种子萌发
黄豆种子发芽
一、植物组织培养技术
落地生根
细胞具有全能性:细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。
细胞→完整个体或其他各种细胞
在生物的生长发育过程中,并不是所有的细胞都表现出全能性的原因?
在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会选择性表达
分化程度越高,全能性越低
细胞含有该物种生长发育所特有的全套遗传物质
如:植物细胞的全能性>动物细胞全能性(只有细胞核具有全能性)
如:受精卵>胚胎干细胞>生殖细胞(精细胞、卵细胞)>体细胞
一、植物组织培养技术
原因
细胞全能性的标志
全能性的高低
如:幼嫩的细胞>衰老的细胞
外植体
在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织、丛芽,最终形成完整植株的技术。
有丝分裂
无性生殖
细胞具有全能性
2. 生殖方式:
3. 分裂方式:
4. 原理:
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
一、植物组织培养技术
移栽成活
脱分化
再分化
再分化
1、概念:
脱分化:
也叫去分化,由外植体产生愈伤组织的过程。
再分化:
愈伤组织继续进行培养,重新分化成根或芽等器官。
细胞排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
外植体:
相关概念:
用于离体培养的植物器官或组织片段。
愈伤组织:
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
脱分化
再分化
再分化
移栽成活
芽发育成叶,叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照
胡萝卜的组织培养
探究·实践
一、目的要求
植物细胞一般具有全能性(理论基础)
芽、根
完整植株
脱分化
再分化
遮光
一定的光照
愈伤组织
离体的植物器官、组织或细胞(外植体)
愈伤组织
离体、无菌条件、种类和比例适宜的营养物质(无机物和有机物)、植物激素(主要是生长素和细胞分裂素)的诱导和调节、适宜的外界条件(温度、pH、光照等)。
②脱分化过程一般不需要光照;
再分化过程需要光照(诱导叶绿素的合成,使试管苗能够进行光合作用)。
①适宜的培养条件:
植物激素:
细胞分裂素<生长素
植物激素:
细胞分裂素>生长素
2、植物激素的作用:生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。它们的浓度、比例都会影响植物细胞的发育方向。
胡萝卜的组织培养
探究·实践
一、目的要求
生长素与细胞分裂素比值影响实验结果:
① IAA/CTK 高→形成根
保持生长而不分化
③IAA/CTK 中→
② IAA/CTK 低→形成芽
生长素/细胞分裂素 结果
比值高(>1)
比值低(<1)
比值适中(=1)
有利于根的分化,抑制芽的形成
有利于芽的分化,抑制根的形成
促进愈伤组织的形成
简记为:“高”根,“低”芽,“中”愈伤
①外植体消毒
②外植体处理
③接种外植体
④诱导愈伤组织
⑤诱导芽和根
⑥移栽
用酒精擦拭双手和超净工作台面。
①流水冲洗外植体(幼嫩的茎段)→②酒精消毒30s→③无菌水清洗2-3次→④次氯酸钠溶液处理30min→⑤无菌水清洗2-3次
①外植体消毒
胡萝卜的组织培养
探究·实践
二、方法步骤
②外植体处理
用无菌滤纸吸去表面水分,将外植体切成0.5-1cm长的小段
③接种外植体
在酒精灯火焰旁,将外植体的1/3-1/2插入诱导愈伤组织的培养基中。
胡萝卜的组织培养
探究·实践
二、方法步骤
④诱导愈伤组织
将接种了外植体的锥形瓶置18-22℃的培养箱中培养。
将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽培养基上出芽后,再将其转接到诱导生根的培养基上,进一步诱导形成试管苗。
⑤诱导芽和根
胡萝卜的组织培养
探究·实践
二、方法步骤
适时光照培养
避光培养
注意顺序,先诱导生芽,再诱导生根;
⑥移栽
移栽前先打开封口膜或瓶盖,让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中,待其长壮后再移栽入土。
胡萝卜的组织培养
探究·实践
二、方法步骤
①切取
形成层
②无菌接种
③诱导愈伤组织的形成
④试管苗的形成
⑤培养室
⑥移栽
脱分化
再分化
胡萝卜的组织培养实验
避光
需光
1、接种3-4d后,检查外植体的生长情况,统计有多少外植体被污染,试分析它们被污染的可能原因。
2、培育的试管苗能直接移栽到露地吗?应如何操作?
外植体消毒不彻底;培养基、接种工具灭菌不彻底;
操作过程不符合无菌操作要求等。
试管苗移栽的关键:既要充分清洗根系表面的培养基,又不能伤及根系。一般使用无土栽培方法。培养基质要提前消毒,可以向培养基质喷洒质量分数为5%的高锰酸钾,并用塑料薄膜覆盖12h,掀开塑料薄膜24h后才能移栽。新移栽的组培苗要在温室过渡几天,待其长壮后再移植到大田或盆中。
胡萝卜的组织培养
探究·实践
三、结果分析与评价
根、芽
植物体
脱分化
再分化
培养条件:
①无菌、离体
②营养物质
③适宜环境条件(温度、PH、光等)
④植物激素:细胞分裂素 生长素
如:胡萝卜的形成层、菊花幼茎段、月季的花药…
植物组织培养技术--过程
遮光
一定的光照
芽发育成叶,叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照
排列不规则,高度液泡化,呈不定形状态的薄壁细胞
愈伤组织
离体的植物器官、组织或细胞(外植体)
愈伤组织重新分化为芽、根等器官
失去特有结构和功能转变成未分化的细胞
1.下面是将四倍体兰花的叶片通过植物组织培养形成植株的示意图,相关叙述中正确的是( )
A. ②阶段会发生减数分裂过程
B. ①阶段需生长素而③阶段需细胞分裂素
C. 此过程体现植物细胞具有全能性
D. 此兰花的花药离体培养所得植株为二倍体
四倍体兰花叶片
愈伤组织
胚状体
植株
③
①
②
C
①脱分化过程中只进行有丝分裂,
②再分化过程中进行有丝分裂和分化
胚状体:离体培养条件下,没有经过受精过程,但经过胚胎发育过程形成的胚状类似物。
拓展:植物组织培养的两种途径
胚状体:离体培养条件下,没有经过受精过程,但经过胚胎发育过程形成的胚状类似物,因而统称为体细胞胚或胚状体。
胚状体
途径
器官发生途径
外植体
脱分化
愈伤组织
再分化
生芽生根
或胚状体
生长发育
试管苗
(移栽到大田)
欲培育地上长番茄和地下结马铃薯的“超级作物”。你有什么妙招?
利用传统有性杂交方法能实现吗?为什么?
不能。因为不同种物种之间存在着生殖隔离
有没有方法可以打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,获得“番茄-马铃薯杂种植株”呢?
二、植物体细胞杂交技术
“番茄-马铃薯”的假想图
二
①
①
②
③
④
⑤
⑥
植物体细胞杂交技术
杂种细胞再生出新的细胞壁
去除细胞壁
诱导融合
细胞壁再生
脱分化
再分化
移栽
杂种植株
植物组织培养
原生质体融合
(植物细胞的全能性)
(细胞膜的流动性)
二、植物体细胞杂交技术p36
酶解法:纤维素酶果胶酶
物理法:
化学法:
电激法、离心法、振荡法等
聚乙二醇(PEG)融合法等
植物细胞融合完成的标志
植物体细胞杂交技术完成的标志
原生质层和原生质体
原生质体:植物细胞去掉细胞壁后剩余的部分
原生质层:细胞膜、液泡膜和两膜之间的细胞质(比原生质体少细胞核和液泡)
原生质层
识图:数字代表过程,字母代表细胞、组织或植株
①_______________ a/b_____________
②_______________ c_______________
③_______________ d_______________
④_______________ e_______________
⑤_______________ f_______________
①②③___________ ④⑤____________
去除细胞壁
原生质体
原生质体间的融合
正在融合的原生质体
再生出新的细胞壁
杂种细胞
脱分化
愈伤组织
再分化
杂种植株
植物细胞融合
植物组织培养
1、概念:
2、原理:
细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
二、植物体细胞杂交技术
3、基础技术:
4、变异类型:
5、成功标志:
6、优点:
植物组织培养
获得杂种植株
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种等
染色体数目的变异
植物体细胞杂交是指将不同来源的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新植物体的技术。
白菜-甘蓝
二、植物体细胞杂交技术
需要进一步筛选
融合后,培养基中有几种类型的细胞?
融合完成的标志是重新产生细胞壁,形成杂种细胞。
高尔基体
A为2a=20
B为2b=30
50
4
杂种细胞染色体数为?
此过程中起主要作用的细胞器是?
杂种细胞染色体组数为?
从杂种植株的染色体组成上看属于何种变异?
原生质体融合
染色体数目变异
A
B
①未融合的细胞:A、B
②两两融合的细胞:AA、BB、AB ③多细胞融合体
植物体细胞杂交育种
四倍体
杂交育种诱导多倍体
四倍体
二倍体
如何处理植株使其可育?
看减数分裂联会、配对能否正常进行!
①若亲本植株可育,
则杂种植株可育。
②杂种植株是不同于
亲本的新物种。
意义:
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种
植物体细胞杂交技术总结:
⑵细胞融合为无性繁殖,细胞分裂方式为有丝分裂;培育新品种过程中,遗传物质的传递不遵循孟德尔的遗传定律。
⑴采用的理论基础:细胞膜的流动性和细胞的全能性。
⑷该技术最大的优点:克服远源杂交的不亲和障碍。
⑶杂种细胞中含有两种植物的遗传物质。不管染色体、基因组还是染色体组都采用直接相加的方法。
植物细胞工程
植物组
织培养
植物体
细胞杂交
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
移栽成活
去壁①
去壁①
融
合 ②
再生
新壁
③
脱分化
④
再分化
⑤
移栽
植物细胞工程的基本技术
总结
1、在植物细胞工程中,当原生质体融合成一个细胞后,需要诱导产生细胞壁,参与这一过程的细胞器是
A、叶绿体、高尔基体 B、线粒体、高尔基体
C、叶绿体、线粒体 D、线粒体、内质网
2、A种植物的细胞和B种植物细胞的结构如右图所示将A、B两种植物细胞去掉细胞壁后,诱导二者的原生质体融合,形成单核的杂种细胞,若经过组织培养后得到了杂种植株,则该杂种植株是( )
A.二倍体;基因型是DdYyRr
B.三倍体;基因型是DdYyRr
C.四倍体;基因型是DdYyRr
D.四倍体;基因型是DDddYYyyRRrr
B
C
see you