(共18张PPT)
1.家庭果酒制作过程中经常会出现果酒变酸、变味的现象。
2.一些人会在家里自制酸奶,自制酸奶虽然方便,但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜,
酸奶
从社会中来
思考1:主要原因是什么?
思考2:怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢?
在制作过程中有杂菌混入。
本节聚焦
1.什么是培养基?如何配制?
2.什么是无菌技术
3.怎样进行酵母菌的纯培养
第2节 微生物的培养与应用
— 微生物的基本培养技术(第一课时)
微生物:
细菌
原生生物 (草履虫、变形虫、衣藻等)
真菌 (酵母菌、霉菌等)
酵母菌
青霉菌
病毒(无细胞结构)
禽流感病毒
SARS病毒
难以用肉眼观察的微小生物的统称。
——原核生物
——真核生物
——真核生物
草履虫
衣藻
在实验室培养微生物的基本思路:
防止杂菌污染,获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提,也是发酵工程的重要基础。
一.培养基的配制
人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
培养基的作用:
培养、分离、鉴定、保存微生物或积累代谢物。
培养基:
一、培养基的配制
培养基类型:
长有菌落的固体培养基
液体培养基
琼脂:是一种从红藻中提取的多糖,在98C以上融化,在44℃以下凝固,琼脂仅作凝固剂,不提供能量和营养。
补充资料:培养基的类型及用途
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
用途
不加凝固剂
加凝固剂,如琼脂
扩大培养、工业生产
观察微生物的运动、
分类鉴定
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
天然培养基
合成培养基
固体培养基
液体培养基
半固体培养基
选择培养基
鉴别培养基
一、培养基的配制
(1)基本成分:
水、碳源、氮源、无机盐。
碳源
无机碳源:
有机碳源:
氮源
NH4+、NO3-、NH3等。
牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。
CO2、CO32-、HCO3-。
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。
无机氮源:
有机氮源:
来源于动物,含有糖、维生素和有机氮等营养物质
无机盐
Zn、Cu、Mn、Co、Mo等
大量元素:
微量元素:
Ca、K 、Mg等
牛肉膏、蛋白胨:
自养微生物
异养微生物
为什么培养基需要氮源?
是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
培养基的基本组成是什么?
一、培养基的配制
(2)特殊需求:
满足微生物对 ___________________ ___的需求
④培养厌氧微生物时,需要提供_____的条件。
①培养乳酸杆菌时,需要在培养基中添加_______;
②培养霉菌时,需要将培养基调至_____;
③培养细菌时,需要将培养基调至____ _______;
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
pH、特殊营养物质、氧气
特殊营养物质:主要指生长因子
概念:是一类调节微生物正常生长代谢所必需,但不能用简单的碳、氮源自行合成的有机物。
种类:维生素、碱基、胺类等
来源:酵母膏、五米浆、麦芽汁、蛋白胨、动植物组织提取液等
一、培养基的配制
(2)特殊需求:
满足微生物对 ___________________ ___的需求
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000ml 水
pH、特殊营养物质、氧气
一、培养基的配制
下表是某微生物培养基成分,据表分析:
成分 KH2PO4 NaHPO4 MgSO4·7H2O 葡萄糖 尿素 琼脂 水
含量 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g 适量
(1)该培养基是液体培养基还是固体培养基? 。为什么? 。(2)表中的KH2PO4、NaHPO4和MgSO4·7H2O主要为微生物提供 ,葡萄糖为微生物提供 ,尿素为微生物提供 。(3)不同微生物所需的pH不同,培养细菌时需要将pH调至 ;培养乳酸杆菌时要在培养基中添加维生素,目的是要满足乳酸杆菌的 。
【课堂探究】
二、无菌技术
获得纯净的微生物培养物的关键:防止外来杂菌的污染
无菌技术:指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。
方法:
①消毒
②灭菌
超净工作
①实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒
②培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
注:无菌操作过程中,应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行。
无菌技术的操作对象
二、无菌技术
消毒的方法:
①煮沸消毒法: 日常用品(100℃煮沸5-6min。)
②巴氏消毒法: 不耐高温的液体:
62-65℃下煮30min 或 80-90℃下煮30s-1min
(杀死牛奶中绝大多数微生物,且基本不会破坏牛奶的营养成分)
③化学药剂消毒法:用75%酒精擦拭双手;氯气消毒水源。
④紫外线消毒法:
接种室、接种箱、超净工作台,在使用前可用紫外线照射30min(杀死物体表面或空气中的微生物)
概念:指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
①消毒
二、无菌技术
②灭菌
概念:指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子。
芽孢:某些细菌在一定的条件下,在细胞内形成的休眠体。
孢子:某些细菌、原生动物、真菌和植物的繁殖体。
二、无菌技术
①湿热灭菌
高压蒸汽灭菌(效果最好)
灭菌的方法:
高压蒸汽灭菌锅
干热灭菌箱
②干热灭菌
③灼烧灭菌
(1)接种环、接种针、试管口等使用 灭菌法;(2)玻璃器皿、金属用具等使用 灭菌法,所用器械是 ;(3)培养基、无菌水等使用 灭菌法,所用器械是 。
二、无菌技术
灭菌的方法:
对象:耐高温、需保持干燥的物品,如
玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)
金属器具 (如 镊子、剪刀、针头等)
②干热灭菌:干热灭菌箱,在160-170 ℃的热空气中维持2-3h
注:利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤,目的是什么? 。
避免妨碍热空气流通
二、无菌技术
灭菌的方法:
③灼烧灭菌:直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
对象:接种工具,如:涂布器、接种环、接种针或其他金属工具接种过程中,试管口、瓶口等易被污染的部位
涂布器
接种环
二、无菌技术