3.1重组DNA技术的工具（共28张ppt）高中生物人教版（2019）选择性必修3
文档属性
| 名称 | 3.1重组DNA技术的工具（共28张ppt）高中生物人教版（2019）选择性必修3 |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 2.0MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2023-02-23 21:39:21 | ||
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文档简介
(共28张PPT)
第1节 重组DNA技术的基本工具
第3章 基因工程
我国是棉花的生产和消费大国，棉花在种植过程中,常常受到棉铃虫的侵袭，这会使棉花产量大大减产。大量施用农药杀虫不仅会提高生产成本,还可能造成农产品和环境的污染。如果能培育出自身就能抵抗虫害的棉花新品种,这一问题就会迎刀而解。
棉花本身不具有“杀虫基因”，而苏云金杆菌由一种“杀虫基因”，它能通过编码产生抗虫蛋白来杀手棉铃虫。
普通棉花和转基因抗虫棉
甲生物
取出优秀基因
“剪切”
“拼接”
乙生物
表达
新类型
新的生物产品
基因工程
是指按照人们的愿望，通过体外转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做重组DNA技术。
别名
操作环境
操作对象
操作水平
基本过程
结果
原 理
优 点
重组DNA技术
生物体外
基因
剪切→拼接→导入→表达
人类需要的新的生物类型和生物产品
对基因工程概念的理解
基因重组
克服远缘杂交不亲和障碍、
定向改造生物性状
DNA分子水平
工具
分子手术刀
分子缝合针
分子运输车
限制性内切核酸酶：
DNA连接酶：
载体：
准确切割DNA分子
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
“分子手术刀”
准确切割DNA分子
“分子缝合针”
“分子运输车”
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
重组DNA技术所需的三种基本工具
来源：
种类：
主要来自原核生物
数千种
（限制酶不是一种酶，而是一类酶）
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
你能根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么吗？
原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效，以保证自身安全。所以，简单来说：限制酶在原核生物中起到的作用为切割外源DNA、使之失效，以保证自身安全
试推测限制酶为什么不会切割自身的DNA？
原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰
特点：
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
（特异性）
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
1’
2’
3’
4’
5’
G
1’
2’
3’
4’
5’
A
磷酸二酯键
T
G
C
C
G
T
A
A
5'
3'
5'
3'
仔细观察以下四种限制酶识别的特定序列有何特点？
EcoRⅠ
……G-A-A-T-T-C……
……C-T-T-A-A-G……
HindⅢ
……A-A-G-C-T-T……
……T-T-C-G-A-A……
BamHⅠ
……G-G-A-T-C-C……
……C-C-T-A-G-G……
TaqⅠ
………T-C-G-A………
………A-G-C-T………
呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的
限制酶的命名：
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
是根据细菌种类而定：用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。
EcoRⅠ：大肠杆菌（Escherichia coli）R型菌株中分离出的第一个限制酶；
SmaⅠ：粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）中分离出的第一个限制酶。
两种常用的限制酶：
EcoRⅠ和SmaⅠ
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
EcoR I 限制酶的切割：
只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。
黏性末端
黏性末端
被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
平末端 平末端
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
Sma I 限制酶的切割：
只能识别CCCGGG序列，并在G和C之间切开。
限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。
写出下列限制酶切割形成的黏性末端
BamHⅠ____ EcoRⅠ___
HindⅢ___ BglⅡ ___
GATC
AATT
AGCT
GATC
思考：你从中发现什么现象了？
不同的限制酶可能切割形成相同的黏性末端
学以致用
以下黏性末端是由__种限制酶作用产生的
3
思考：你从中发现什么现象了？
相同的黏性末端也可能是由不同限制酶作用形成的
学以致用
CTTCATG
GAAGTACTTAA
AATTCCCTAA
GGGATT
GG...TCTTAA
AATTCC...AG
TCTTCATG
AGAAGTACTTAA
AATTCCCTAAG
GGGATTC
GG...TCTTAA
AATTCC...AG
2.“分子缝合针”—— DNA连接酶
2.“分子缝合针”—— DNA连接酶
(1)作用：
类型 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶
来源 ____________ ____________
功能 只缝合____________ 缝合____________和____________
结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_________________
大肠杆菌
T4噬菌体
黏性末端
黏性末端
平末端(效率较低)
磷酸二酯键
(2)类型：
将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,使之成为一个完整的DNA分子。
DNA连接酶 DNA聚合酶
相同 作用实质
化学本质
不 同 点 模板
作用对象
作用结果
用途
都能催化形成磷酸二酯键
都是蛋白质
不需要
需要DNA的一条链作模板
形成完整的重组DNA分子
形成DNA的一条链
基因工程
DNA复制
只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键
在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
DNA连接酶和DNA聚合酶功能比较
根据所学知识，完成以下填空：
①限制酶 ②解旋酶 ③DNA连接酶 ④DNA聚合酶 ⑤RNA聚合酶
b
a
A.切断a处的酶为_______
B.连接a处的酶为_______
C.切断b处的酶为_______
①
③④
②
a：磷酸二酯键；b：氢键
学以致用
将外源基因送入受体细胞, 在受体细胞内对目的基因进行大量复制.
1.作用：
2.种类：
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
质粒、噬菌体和动植物病毒等。
种类 用途 不同点
质粒、噬菌体
植物病毒
动物病毒
将外源基因导入大肠杆菌等受体细胞
将外源基因导入植物细胞
将外源基因导入动物细胞
来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别
3.作为载体需具备的条件
（1）有一个至多个限制酶切割位点
目的：供外源DNA片段（基因）插入其中。
（2）能在受体细胞中进行自我复制或整合到受体DNA上， 随受体DNA同步复制。
（3）常有特殊的标记基因
（如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等）
目的：便于重组DNA分子的鉴定和筛选。
（4）对受体细胞无害，大小合适、方便操作。
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
4.最常用的运载体——质粒
（1）质粒的化学本质：
质粒是一种裸露的、结构简单的、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子
（2）基因工程中使用质粒的特点：
在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是天然质粒的基础上进行过人工改造的；这些质粒上常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选；
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
1）DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸
2）都遵循碱基互补配对原则
3）双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
思考1:DNA为何能在不同生物间进行转移与拼接？
1）基因是控制生物性状的结构与功能单位
2）遗传信息传递都遵循中心法则
3）生物界几乎共用一套遗传密码
思考2：外源基因在受体细胞中能表达的原因？
DNA
（基因）
翻译
转录
蛋白质
（性状）
RNA
复
制
中心法则
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
一、提取DNA的基本思路（DNA的粗提取）
二、实验原理：
1.DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
2.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L NaCl溶液。
3.在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
0
DNA溶解度
NaCl浓度
0.14mol/L
2mol/L
DNA的粗提取与鉴定
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等
注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA
1.选材：
2.试剂：
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
析出DNA
溶解DNA
鉴定DNA，要现配现用
三、材料用具
抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
1.取材、研磨：
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨
研磨的目的：
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
2.过滤或离心取上清液：
方法一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
方法二：直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。
①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖等杂质
②低温放置几分钟的作用：
四、方法步骤：
研磨洋葱
3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA
方法一：在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；
方法二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。
①搅拌时应轻缓、并沿一个方向：
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
用冷却的酒精析出DNA
四、方法步骤：
②酒精预冷的作用：
低温可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。
4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定
取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
实验组
对照组
水浴加热
四、方法步骤：
溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关。
1.如果选用鸡血细胞进行实验，如何快速破碎细胞？
2.有时会在DNA滤液中添加嫩肉粉（木瓜蛋白酶），这样有什么好处？
3.有时还会反复利用不同浓度的NaCl溶液来溶解、析出DNA，试猜想该操作的目的？
将鸡血细胞置于蒸馏水中，待细胞涨破后，收集滤液。
利用蛋白酶分解杂质蛋白，不分解DNA，有利于DNA与蛋白质分开。
进一步纯化DNA——用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
思考
2.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeI进行切割，B片段分别用限制酶HindI、XbaI、EcoRV和Xhol进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
(2)不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义
二、拓展应用（P74-75）
练习与应用
提示:识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端
的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断;这时可以考虑用合适的同尾酶(目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列)来获取目的基因。
第1节 重组DNA技术的基本工具
第3章 基因工程
我国是棉花的生产和消费大国，棉花在种植过程中,常常受到棉铃虫的侵袭，这会使棉花产量大大减产。大量施用农药杀虫不仅会提高生产成本,还可能造成农产品和环境的污染。如果能培育出自身就能抵抗虫害的棉花新品种,这一问题就会迎刀而解。
棉花本身不具有“杀虫基因”，而苏云金杆菌由一种“杀虫基因”，它能通过编码产生抗虫蛋白来杀手棉铃虫。
普通棉花和转基因抗虫棉
甲生物
取出优秀基因
“剪切”
“拼接”
乙生物
表达
新类型
新的生物产品
基因工程
是指按照人们的愿望，通过体外转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做重组DNA技术。
别名
操作环境
操作对象
操作水平
基本过程
结果
原 理
优 点
重组DNA技术
生物体外
基因
剪切→拼接→导入→表达
人类需要的新的生物类型和生物产品
对基因工程概念的理解
基因重组
克服远缘杂交不亲和障碍、
定向改造生物性状
DNA分子水平
工具
分子手术刀
分子缝合针
分子运输车
限制性内切核酸酶：
DNA连接酶：
载体：
准确切割DNA分子
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
“分子手术刀”
准确切割DNA分子
“分子缝合针”
“分子运输车”
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
重组DNA技术所需的三种基本工具
来源：
种类：
主要来自原核生物
数千种
（限制酶不是一种酶，而是一类酶）
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
你能根据所掌握的知识，推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么吗？
原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效，以保证自身安全。所以，简单来说：限制酶在原核生物中起到的作用为切割外源DNA、使之失效，以保证自身安全
试推测限制酶为什么不会切割自身的DNA？
原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰
特点：
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
（特异性）
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
1’
2’
3’
4’
5’
G
1’
2’
3’
4’
5’
A
磷酸二酯键
T
G
C
C
G
T
A
A
5'
3'
5'
3'
仔细观察以下四种限制酶识别的特定序列有何特点？
EcoRⅠ
……G-A-A-T-T-C……
……C-T-T-A-A-G……
HindⅢ
……A-A-G-C-T-T……
……T-T-C-G-A-A……
BamHⅠ
……G-G-A-T-C-C……
……C-C-T-A-G-G……
TaqⅠ
………T-C-G-A………
………A-G-C-T………
呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的
限制酶的命名：
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
是根据细菌种类而定：用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。
EcoRⅠ：大肠杆菌（Escherichia coli）R型菌株中分离出的第一个限制酶；
SmaⅠ：粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）中分离出的第一个限制酶。
两种常用的限制酶：
EcoRⅠ和SmaⅠ
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
EcoR I 限制酶的切割：
只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。
黏性末端
黏性末端
被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。
平末端 平末端
1.“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶（限制酶）
Sma I 限制酶的切割：
只能识别CCCGGG序列，并在G和C之间切开。
限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。
写出下列限制酶切割形成的黏性末端
BamHⅠ____ EcoRⅠ___
HindⅢ___ BglⅡ ___
GATC
AATT
AGCT
GATC
思考：你从中发现什么现象了？
不同的限制酶可能切割形成相同的黏性末端
学以致用
以下黏性末端是由__种限制酶作用产生的
3
思考：你从中发现什么现象了？
相同的黏性末端也可能是由不同限制酶作用形成的
学以致用
CTTCATG
GAAGTACTTAA
AATTCCCTAA
GGGATT
GG...TCTTAA
AATTCC...AG
TCTTCATG
AGAAGTACTTAA
AATTCCCTAAG
GGGATTC
GG...TCTTAA
AATTCC...AG
2.“分子缝合针”—— DNA连接酶
2.“分子缝合针”—— DNA连接酶
(1)作用：
类型 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶
来源 ____________ ____________
功能 只缝合____________ 缝合____________和____________
结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_________________
大肠杆菌
T4噬菌体
黏性末端
黏性末端
平末端(效率较低)
磷酸二酯键
(2)类型：
将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键,使之成为一个完整的DNA分子。
DNA连接酶 DNA聚合酶
相同 作用实质
化学本质
不 同 点 模板
作用对象
作用结果
用途
都能催化形成磷酸二酯键
都是蛋白质
不需要
需要DNA的一条链作模板
形成完整的重组DNA分子
形成DNA的一条链
基因工程
DNA复制
只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键
在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键
DNA连接酶和DNA聚合酶功能比较
根据所学知识，完成以下填空：
①限制酶 ②解旋酶 ③DNA连接酶 ④DNA聚合酶 ⑤RNA聚合酶
b
a
A.切断a处的酶为_______
B.连接a处的酶为_______
C.切断b处的酶为_______
①
③④
②
a：磷酸二酯键；b：氢键
学以致用
将外源基因送入受体细胞, 在受体细胞内对目的基因进行大量复制.
1.作用：
2.种类：
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
质粒、噬菌体和动植物病毒等。
种类 用途 不同点
质粒、噬菌体
植物病毒
动物病毒
将外源基因导入大肠杆菌等受体细胞
将外源基因导入植物细胞
将外源基因导入动物细胞
来源不同，在大小、结构、复制方式以及可以插入外源DNA片段的大小也有很大差别
3.作为载体需具备的条件
（1）有一个至多个限制酶切割位点
目的：供外源DNA片段（基因）插入其中。
（2）能在受体细胞中进行自我复制或整合到受体DNA上， 随受体DNA同步复制。
（3）常有特殊的标记基因
（如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等）
目的：便于重组DNA分子的鉴定和筛选。
（4）对受体细胞无害，大小合适、方便操作。
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
4.最常用的运载体——质粒
（1）质粒的化学本质：
质粒是一种裸露的、结构简单的、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子
（2）基因工程中使用质粒的特点：
在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是天然质粒的基础上进行过人工改造的；这些质粒上常有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选；
3.“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体
1）DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸
2）都遵循碱基互补配对原则
3）双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
思考1:DNA为何能在不同生物间进行转移与拼接？
1）基因是控制生物性状的结构与功能单位
2）遗传信息传递都遵循中心法则
3）生物界几乎共用一套遗传密码
思考2：外源基因在受体细胞中能表达的原因？
DNA
（基因）
翻译
转录
蛋白质
（性状）
RNA
复
制
中心法则
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
一、提取DNA的基本思路（DNA的粗提取）
二、实验原理：
1.DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
2.DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L NaCl溶液。
3.在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
0
DNA溶解度
NaCl浓度
0.14mol/L
2mol/L
DNA的粗提取与鉴定
DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等
注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA
1.选材：
2.试剂：
①研磨液
②体积分数为95%的酒精
③2mol/L 的NaCl溶液
④二苯胺试剂
⑤蒸馏水
析出DNA
溶解DNA
鉴定DNA，要现配现用
三、材料用具
抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
1.取材、研磨：
称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨
研磨的目的：
破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
2.过滤或离心取上清液：
方法一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。
方法二：直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。
①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？
可能含有核蛋白、多糖等杂质
②低温放置几分钟的作用：
四、方法步骤：
研磨洋葱
3.预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA
方法一：在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；
方法二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干。
①搅拌时应轻缓、并沿一个方向：
减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子
用冷却的酒精析出DNA
四、方法步骤：
②酒精预冷的作用：
低温可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；
低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出；
低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。
4.NaCl溶液溶解DNA并鉴定
取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
实验组
对照组
水浴加热
四、方法步骤：
溶液蓝色的深浅与溶液中DNA的含量的多少有关。
1.如果选用鸡血细胞进行实验，如何快速破碎细胞？
2.有时会在DNA滤液中添加嫩肉粉（木瓜蛋白酶），这样有什么好处？
3.有时还会反复利用不同浓度的NaCl溶液来溶解、析出DNA，试猜想该操作的目的？
将鸡血细胞置于蒸馏水中，待细胞涨破后，收集滤液。
利用蛋白酶分解杂质蛋白，不分解DNA，有利于DNA与蛋白质分开。
进一步纯化DNA——用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐溶液中不能溶解的杂质；用低盐溶液使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
思考
2.有2个不同来源的DNA片段A和B，A片段用限制酶SpeI进行切割，B片段分别用限制酶HindI、XbaI、EcoRV和Xhol进行切割。各限制酶的识别序列和切割位点如下。
(2)不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义
二、拓展应用（P74-75）
练习与应用
提示:识别DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割产生相同黏性末端
的限制酶被称为同尾酶。同尾酶使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。例如，我们选择了用某种限制酶切割载体，如果目的基因的核苷酸序列中恰好含有该限制酶的识别序列，那么用该限制酶切割含有目的基因的DNA片段时，目的基因就很可能被切断;这时可以考虑用合适的同尾酶(目的基因的核苷酸序列中不能有它的识别序列)来获取目的基因。