1.2.2微生物的培养技术及应用（第2课时）（课件）(共25张PPT)高二生物下学期（人教版2019选择性必修3）
文档属性
| 名称 | 1.2.2微生物的培养技术及应用（第2课时）（课件）(共25张PPT)高二生物下学期（人教版2019选择性必修3） |  | |
| 格式 | pptx | ||
| 文件大小 | 37.6MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2023-03-23 20:31:03 | ||
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文档简介
(共25张PPT)
复习巩固
1.2.2微生物的培养技术及应用
微生物的选择培养和计数
壹、选择培养基
贰、稀释涂布平板
叁、分解尿素的细菌的分离与计数
肆、分解纤维素的细菌的分离
选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基，称为选择培养基。
内容
选择培养基
依据原理：不同的微生物有不同的营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。
a.分离耐高温菌，在高温条件培养。
b.分离对抗生素具有抗性的菌种，加该抗生素(如链霉素或青霉素)进行分离。
c.在培养基中加入质量分数为10%的酚，可以抑制细菌和霉菌的生长。
d.纤维素作为唯一碳源和能源的培养基，分离能分解纤维素的细菌。
e.无氮培养基(培养基完全不含氮元素)，能分离固氮的细菌。
f.只含尿素而不含其他氮元素的培养基，选择分解尿素以获取氮的微生物(能合成脲酶的微生物可以分解尿素)。
选择培养基筛选微生物的方法
在培养基中加入某种化学物质
改变培养基中的营养成分
改变微生物的培养条件
小任务
阅读书本17-19页，以小组进行讨论，回答以下问题：
a.稀释涂布平板法的操作要点（操作过程中要特别注意什么？）
b.实验的原理；
c.实验过程用箭头画流程图；
d.实验注意事项有哪些？
涂布器
稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
稀释涂布平板法
培养基菌落
涂布平板法
平板划线法
采用唯一氮源为尿素的选择培养基来培养。分离出能在此培养基中生长、繁殖的微生物。
实验原理
分解尿素的细菌的分离和计数
（NH2）2C=O + H2O
2NH3 + CO2
脲酶
分解尿素的细菌的分离和计数
采集土壤制备悬液
制备系列稀释液
选择培养
采用选择培养基培养
接种
涂布平板
培养与观察
计数
菌落
选取菌落数为30-300的一组为样本进行统计
分解尿素的细菌的分离和计数
思考
2.此选择培养基的成分如何调整？
1.从哪里取样？
4.如何鉴定该选择培养基上生长的是能分解尿素的微生物？
3.尿素如何除菌？
从有哺乳动物排泄物的地方取得土样
尿素为唯一氮源
把琼脂换成琼脂糖
G6玻璃砂漏斗过滤
培养基中加入酚红指示剂，周围出现红色环带的菌落是能分解尿素的。
复习巩固
分离、计数微生物——稀释涂布平板法
无法计数 159 17 2 0
无法计数 141 13 1 0
无法计数 150 11 3 1
9ml
无菌水
加入0.1ml稀释液
例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？
注意：
1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。
2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。
每次稀释都要换一支吸管
（159+141+150）÷3×10×105
=1.5×108个/g
注意事项
用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30~300的平板进行计数。解题时易出现以下误解:
(1)只得到1个菌落数在30~300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。
(2)得到3个或3个以上菌落数在30~300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：
①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30~300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。可见，并不是只要得到3个“菌落数在30~300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30~300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。
分解纤维素的细菌的分离
1.原理
(1)土壤中能分解纤维素的微生物，都能分泌 ，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足自身生命活动的需要。
(2)培养基：以 为唯一碳源的选择培养基。
2.纤维素分解菌的鉴定：刚果红染色法，即通过是否产生 来筛选纤维素分解菌。其原理是：
纤维素分解菌
↓
刚果红
纤维素
→ 红色消失，出现_______
红色复合物
透明圈
纤维素酶
纤维素
透明圈
实验流程
两种微生物筛选方法的比较
项目 土壤中分解尿素的细菌的分离 分解纤维素的微生物的分离
方法 使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养 利用富含纤维素的选择培养基进行培养
原理 土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用 因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖
1.若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物，其正确操作步骤是（ ）
①土壤取样
②称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制备102土壤稀释液③吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布
④依次将土壤稀释液稀释至浓度为103、10-4、10-5、10-6、107的溶液
A.①②③④
B.①③②④
C.①②④③
D. ①④②③
2.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )
A. 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B. 取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上
C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24~48小时
D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
解析：A、首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A正确;
B、然后进行对土壤稀释液进行涂布于各组平板上，B正确;
C、将实验组和对照组平板倒置，37C恒温培养24~48小时，C正确;
D、确定对照组无菌后，选择菌落数在30~300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，D错误.
3.现有一升水样，梯度稀释至103倍。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57个，则每升原水样中大肠杆菌数为( )个。
A. 560
B.5.6x105
C.5.6x107
D.5.6x108
解析：题中梯度稀释的倍数是103，三个菌落的平均数=55+56+57/3=56，则每毫升样品中菌株数56/0.1x103=5.6x105个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6x105x103=5.6x108个。故选:D。
4.有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解，分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如下图所示。请回答问题:
要检测土样中的细菌含量，应采用 法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是 。
然后，将1mL土壤溶液稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为 个。
涂布分离
检测培养基平板灭菌是否合格
3.8×107
解析：涂布分离平板法常常用来进行微生物的分离和计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常常需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成则表明培养基灭菌合格，否则则不合格。根据题意，每升土壤溶液中的活菌数为:(39+38+37)÷3x100÷0.1x1000=3.8x107个。
复习巩固
1.2.2微生物的培养技术及应用
微生物的选择培养和计数
壹、选择培养基
贰、稀释涂布平板
叁、分解尿素的细菌的分离与计数
肆、分解纤维素的细菌的分离
选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基，称为选择培养基。
内容
选择培养基
依据原理：不同的微生物有不同的营养需求或对某种化学物质有不同的敏感性。
a.分离耐高温菌，在高温条件培养。
b.分离对抗生素具有抗性的菌种，加该抗生素(如链霉素或青霉素)进行分离。
c.在培养基中加入质量分数为10%的酚，可以抑制细菌和霉菌的生长。
d.纤维素作为唯一碳源和能源的培养基，分离能分解纤维素的细菌。
e.无氮培养基(培养基完全不含氮元素)，能分离固氮的细菌。
f.只含尿素而不含其他氮元素的培养基，选择分解尿素以获取氮的微生物(能合成脲酶的微生物可以分解尿素)。
选择培养基筛选微生物的方法
在培养基中加入某种化学物质
改变培养基中的营养成分
改变微生物的培养条件
小任务
阅读书本17-19页，以小组进行讨论，回答以下问题：
a.稀释涂布平板法的操作要点（操作过程中要特别注意什么？）
b.实验的原理；
c.实验过程用箭头画流程图；
d.实验注意事项有哪些？
涂布器
稀释涂布平板法
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
稀释涂布平板法
培养基菌落
涂布平板法
平板划线法
采用唯一氮源为尿素的选择培养基来培养。分离出能在此培养基中生长、繁殖的微生物。
实验原理
分解尿素的细菌的分离和计数
（NH2）2C=O + H2O
2NH3 + CO2
脲酶
分解尿素的细菌的分离和计数
采集土壤制备悬液
制备系列稀释液
选择培养
采用选择培养基培养
接种
涂布平板
培养与观察
计数
菌落
选取菌落数为30-300的一组为样本进行统计
分解尿素的细菌的分离和计数
思考
2.此选择培养基的成分如何调整？
1.从哪里取样？
4.如何鉴定该选择培养基上生长的是能分解尿素的微生物？
3.尿素如何除菌？
从有哺乳动物排泄物的地方取得土样
尿素为唯一氮源
把琼脂换成琼脂糖
G6玻璃砂漏斗过滤
培养基中加入酚红指示剂，周围出现红色环带的菌落是能分解尿素的。
复习巩固
分离、计数微生物——稀释涂布平板法
无法计数 159 17 2 0
无法计数 141 13 1 0
无法计数 150 11 3 1
9ml
无菌水
加入0.1ml稀释液
例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？
注意：
1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。
2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。
每次稀释都要换一支吸管
（159+141+150）÷3×10×105
=1.5×108个/g
注意事项
用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30~300的平板进行计数。解题时易出现以下误解:
(1)只得到1个菌落数在30~300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。
(2)得到3个或3个以上菌落数在30~300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：
①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30~300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。可见，并不是只要得到3个“菌落数在30~300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30~300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。
分解纤维素的细菌的分离
1.原理
(1)土壤中能分解纤维素的微生物，都能分泌 ，将纤维素分解成小分子糖类物质以满足自身生命活动的需要。
(2)培养基：以 为唯一碳源的选择培养基。
2.纤维素分解菌的鉴定：刚果红染色法，即通过是否产生 来筛选纤维素分解菌。其原理是：
纤维素分解菌
↓
刚果红
纤维素
→ 红色消失，出现_______
红色复合物
透明圈
纤维素酶
纤维素
透明圈
实验流程
两种微生物筛选方法的比较
项目 土壤中分解尿素的细菌的分离 分解纤维素的微生物的分离
方法 使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养 利用富含纤维素的选择培养基进行培养
原理 土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用 因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖
1.若要通过稀释涂布平板法分离纯化土壤中的微生物，其正确操作步骤是（ ）
①土壤取样
②称取1g土壤加入盛有99mL无菌水的锥形瓶中，制备102土壤稀释液③吸取0.1mL土壤稀释液进行平板涂布
④依次将土壤稀释液稀释至浓度为103、10-4、10-5、10-6、107的溶液
A.①②③④
B.①③②④
C.①②④③
D. ①④②③
2.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )
A. 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B. 取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上
C.将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24~48小时
D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
解析：A、首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A正确;
B、然后进行对土壤稀释液进行涂布于各组平板上，B正确;
C、将实验组和对照组平板倒置，37C恒温培养24~48小时，C正确;
D、确定对照组无菌后，选择菌落数在30~300的进行记数，求起平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，D错误.
3.现有一升水样，梯度稀释至103倍。各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57个，则每升原水样中大肠杆菌数为( )个。
A. 560
B.5.6x105
C.5.6x107
D.5.6x108
解析：题中梯度稀释的倍数是103，三个菌落的平均数=55+56+57/3=56，则每毫升样品中菌株数56/0.1x103=5.6x105个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6x105x103=5.6x108个。故选:D。
4.有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解，分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如下图所示。请回答问题:
要检测土样中的细菌含量，应采用 法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是 。
然后，将1mL土壤溶液稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为 个。
涂布分离
检测培养基平板灭菌是否合格
3.8×107
解析：涂布分离平板法常常用来进行微生物的分离和计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常常需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成则表明培养基灭菌合格，否则则不合格。根据题意，每升土壤溶液中的活菌数为:(39+38+37)÷3x100÷0.1x1000=3.8x107个。