3.2基因工程的基本操作程序第1课时课件(共26张PPT)2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3
文档属性
| 名称 | 3.2基因工程的基本操作程序第1课时课件(共26张PPT)2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3 |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 6.7MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2023-04-03 19:19:11 | ||
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文档简介
(共26张PPT)
第3章 第2节
基因工程的基本操作程序
1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。
你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？
转基因抗虫棉（使棉铃虫死亡，左）与非转基因抗虫棉（右）
从社会中来
我国是棉花的生产和消费大国。棉花在种植过程中，常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最为常见。棉铃虫可以使棉花产量减少三分之一，严重时，甚至能使一片棉田绝收。
1.目的基因的筛选与获取
4.目的基因的检测与鉴定
2.基因表达
载体的构建
3.将目的基因导入受体细胞
基因工程的
基本操作程序
基因工程的基本操作程序
1．目的基因
概念：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。
根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要指编码蛋白质的基因。
如：与生物抗逆性相关的基因
与生物药物相关的基因
与毒物降解相关的基因
与工业用酶相关的基因等
第一步
目的基因的筛选与获取
当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。
Bt抗虫蛋白的抗虫原理：
思考：Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？
Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。
苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌半孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破环鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。
培育转基因抗虫棉的简要过程：
提取
苏云金芽孢杆菌
杀虫基因
与载体DNA拼接
导入
普通棉花细胞
棉花植株(有抗虫性状)
Bt抗虫蛋白
杀虫基因
Bt抗虫蛋白基因简称Bt基因
2．筛选合适的目的基因
（1）较为有效的方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。
（2）利用序列数据库（如GenBank)和序列比对工具（如BLAST）进行筛选
第一步
目的基因的筛选与获取
3．目的基因获取的方法
第一步
目的基因的筛选与获取
（2）从基因文库中获取
（1）从生物组织中直接获取
（3）化学方法直接人工合成
（4）利用PCR技术获取和扩增目的基因
文库类型 基因组文库 cDNA文库
文库大小
基因多少
某种生物的全部基因
某种生物的部分基因
大
小
利用PCR获取和扩增目的基因
（1）概念：PCR是________________的缩写，它是一项根据________________的原理，在体外提供______________的各种组分与反应条件，对_____________________进行大量复制的技术。
聚合酶链式反应
DNA半保留复制
参与DNA复制
目的基因的核苷酸序列
第一步
目的基因的筛选与获取
表3-1 DNA复制所需的基本条件
参与的组分 在DNA复制中的作用
解旋酶(体外用高温代替） 打开DNA双链
DNA母链 提供DNA复制的模板
4种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料
DNA聚合酶 催化合成DNA子链
引物 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸
（2）PCR反应的组分和条件：
DNA模板
4种脱氧核苷酸
耐高温的DNA聚合酶
2种引物
缓冲溶液（含Mg+）
不需要解旋酶（高温）
3’
5’
引物
3’
5’
引物
引物是一小段能与________的一段碱基序列________的___________。
用于PCR的引物有 种，长度通常为20~30个核苷酸。
DNA母链
互补配对
短单链核酸
2
利用PCR获取和扩增目的基因
第一步
目的基因的筛选与获取
3’
5’
3’
5’
前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列设计引物
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
①变性
当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链
②复性
当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
③延伸
当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
引物
DNA模板
耐高温的DNA聚合酶
4种脱氧核苷酸
（3）PCR反应的过程
PCR扩增仪
第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物；
第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮的产物；
第二轮循环的产物
第三轮的产物
完成以后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物
（3）PCR反应的过程
(1)根据不同的需要，目的基因是不同的，但都是能编码蛋白质的基因( )
(2)PCR除需要耐高温的DNA聚合酶、解旋酶、4种脱氧核苷酸和DNA模板之外，还需要引物等基本条件。( )
(3)PCR的每一个循环都包括变性→复性→延伸三个步骤，延伸后的产物又可以作为下一个循环的模板。( )
×
×
√
【基础过关】
【当堂训练】
关于PCR技术的说法不正确的是( )
A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温的酶
B. 变性过程中双链DNA的解开不需要解旋酶
C.复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则
D.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和四种核糖核苷酸
D
用PCR可以扩增mRNA吗？
mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。
1.逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子。
2.核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA。
3.以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子，即cDNA。
下图表示形成cDNA并进行PCR扩增的过程。据图分析，下列叙述正确的是( )
D
A.①过程所需的原料是核糖核苷酸
B.②过程所需的酶必须耐高温
C.③过程需要解旋酶破坏氢键
D.④过程的引物对之间不能互补配对
一、实验原理
1.利用PCR在体外进行DNA片段扩增的原理
①PCR利用了DNA的______原理，通过_________来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够_____________的仪器，一次PCR一般要经历___次循环；
热变性
调节温度
自动调控温度
30
②PCR扩增DNA片段还利用了DNA半保留复制的原理；
DNA片段的扩增及电泳鉴定
2.DNA片段电泳鉴定的原理
①DNA分子具有_____________，在一定的___下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在_____的作用下，这些________会向着________________的电极移动，这个过程就是_____。
可解离的基团
pH
电场
带电分子
电泳
与它所带电荷相反
②PCR的产物一般通过_______________来鉴定
琼脂糖凝胶电泳
④凝胶中的DNA分子通过_____，可以在波长为______的______下被检测出来。
染色
300nm
紫外灯
③在凝胶中DNA分子的迁移速率与___________、______________和_____等有关。
凝胶的浓度
DNA分子的大小
构象
DNA片段的扩增及电泳鉴定
二、材料用具
PCR仪（自动控温，实现DNA的扩增）
微量离心管（实际上是进行PCR反应的场所）
微量移液器（用于向微量离心管转移PCR配方中的液体）
一次性吸液枪头（微量移液器吸取一种试剂更换一次枪头）
电泳装置（包括电泳仪、电泳槽等）
DNA片段的扩增及电泳鉴定
10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+） 5μL
20mmol/L的4种脱氧核苷酸的等量混合液（实为dNTP） 1μL
20μmol/L的引物Ⅰ 2.5μL
20μmol/L的引物Ⅱ 2.5μL
H2O 28～33μL
1-5U/μL的Taq DNA聚合酶（即耐高温的DNA聚合酶） 1～2U
模板DNA （用量为1pg-1μg） 5～10μL
总体积 50μL
PCR反应体系的配方
4种脱氧核苷酸等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水。电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等
DNA片段的扩增及电泳鉴定
使DNA充分变性，以利于引物更好地和模板结合。
三、方法步骤
(一）DNA片段的扩增
1、移液：
用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分
2、离心：
待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使反应液集中在离心管的底部（提高反应速率）
3、反应：
参照下表的参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。
循环程序 变性 复性 延伸
预变性 94℃,5min / /
30次 94℃,30s 55℃,30s 72℃,1min
最后一次 94℃,1min 55℃,30s 72℃,1min
预变性：
DNA片段的扩增及电泳鉴定
（二）DNA片段的电泳鉴定
1、配制琼脂糖溶液
根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比0.8%-1.2%的琼脂糖溶液。在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。
2、制备凝胶
①将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。
③将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。
②待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
3、加样
将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液（内含指示剂）混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。
4、电泳
接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5V/cm。待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳。
5、观察记录
取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
四、结果分析与评价
1.你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？
2.你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因。
可以在紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，该片段大小约为750bp。
如果扩增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。如果扩增结果不止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易形成二聚体；退火温度过低；DNA聚合酶的质量不好等。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
【典例】下列关于PCR的说法，错误的是( )
A.PCR是体外复制DNA的技术
B.PCR过程中只需要一个模板DNA、两种引物分子、大量脱氧核苷酸原料
C.TaqDNA聚合酶要具有耐高温的特点
D.PCR利用了DNA的热变性原理
B
【变式训练】用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液(Marker)，10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是( )
A.PCR产物的分子大小在250至500 bp之间
B.3号样品为不含目的基因的载体DNA
C.9号样品对应植株不是所需的转基因植株
D.10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰
B
第3章 第2节
基因工程的基本操作程序
1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。
你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么吗？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？
转基因抗虫棉（使棉铃虫死亡，左）与非转基因抗虫棉（右）
从社会中来
我国是棉花的生产和消费大国。棉花在种植过程中，常常会受到一些害虫的侵袭，其中以棉铃虫最为常见。棉铃虫可以使棉花产量减少三分之一，严重时，甚至能使一片棉田绝收。
1.目的基因的筛选与获取
4.目的基因的检测与鉴定
2.基因表达
载体的构建
3.将目的基因导入受体细胞
基因工程的
基本操作程序
基因工程的基本操作程序
1．目的基因
概念：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。
根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要指编码蛋白质的基因。
如：与生物抗逆性相关的基因
与生物药物相关的基因
与毒物降解相关的基因
与工业用酶相关的基因等
第一步
目的基因的筛选与获取
当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。
Bt抗虫蛋白的抗虫原理：
思考：Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？
Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。
苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌半孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破环鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。
培育转基因抗虫棉的简要过程：
提取
苏云金芽孢杆菌
杀虫基因
与载体DNA拼接
导入
普通棉花细胞
棉花植株(有抗虫性状)
Bt抗虫蛋白
杀虫基因
Bt抗虫蛋白基因简称Bt基因
2．筛选合适的目的基因
（1）较为有效的方法：从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选。
（2）利用序列数据库（如GenBank)和序列比对工具（如BLAST）进行筛选
第一步
目的基因的筛选与获取
3．目的基因获取的方法
第一步
目的基因的筛选与获取
（2）从基因文库中获取
（1）从生物组织中直接获取
（3）化学方法直接人工合成
（4）利用PCR技术获取和扩增目的基因
文库类型 基因组文库 cDNA文库
文库大小
基因多少
某种生物的全部基因
某种生物的部分基因
大
小
利用PCR获取和扩增目的基因
（1）概念：PCR是________________的缩写，它是一项根据________________的原理，在体外提供______________的各种组分与反应条件，对_____________________进行大量复制的技术。
聚合酶链式反应
DNA半保留复制
参与DNA复制
目的基因的核苷酸序列
第一步
目的基因的筛选与获取
表3-1 DNA复制所需的基本条件
参与的组分 在DNA复制中的作用
解旋酶(体外用高温代替） 打开DNA双链
DNA母链 提供DNA复制的模板
4种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料
DNA聚合酶 催化合成DNA子链
引物 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸
（2）PCR反应的组分和条件：
DNA模板
4种脱氧核苷酸
耐高温的DNA聚合酶
2种引物
缓冲溶液（含Mg+）
不需要解旋酶（高温）
3’
5’
引物
3’
5’
引物
引物是一小段能与________的一段碱基序列________的___________。
用于PCR的引物有 种，长度通常为20~30个核苷酸。
DNA母链
互补配对
短单链核酸
2
利用PCR获取和扩增目的基因
第一步
目的基因的筛选与获取
3’
5’
3’
5’
前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列设计引物
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
①变性
当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链
②复性
当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
③延伸
当温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
5’
引物
DNA模板
耐高温的DNA聚合酶
4种脱氧核苷酸
（3）PCR反应的过程
PCR扩增仪
第一轮循环的产物作为第二轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物；
第二轮循环的产物作为第三轮反应的模板，经过变性、复性和延伸三步产生第三轮的产物；
第二轮循环的产物
第三轮的产物
完成以后，常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物
（3）PCR反应的过程
(1)根据不同的需要，目的基因是不同的，但都是能编码蛋白质的基因( )
(2)PCR除需要耐高温的DNA聚合酶、解旋酶、4种脱氧核苷酸和DNA模板之外，还需要引物等基本条件。( )
(3)PCR的每一个循环都包括变性→复性→延伸三个步骤，延伸后的产物又可以作为下一个循环的模板。( )
×
×
√
【基础过关】
【当堂训练】
关于PCR技术的说法不正确的是( )
A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温的酶
B. 变性过程中双链DNA的解开不需要解旋酶
C.复性过程中引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则
D.延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和四种核糖核苷酸
D
用PCR可以扩增mRNA吗？
mRNA不可以直接扩增，需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。
1.逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子。
2.核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA。
3.以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子，即cDNA。
下图表示形成cDNA并进行PCR扩增的过程。据图分析，下列叙述正确的是( )
D
A.①过程所需的原料是核糖核苷酸
B.②过程所需的酶必须耐高温
C.③过程需要解旋酶破坏氢键
D.④过程的引物对之间不能互补配对
一、实验原理
1.利用PCR在体外进行DNA片段扩增的原理
①PCR利用了DNA的______原理，通过_________来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够_____________的仪器，一次PCR一般要经历___次循环；
热变性
调节温度
自动调控温度
30
②PCR扩增DNA片段还利用了DNA半保留复制的原理；
DNA片段的扩增及电泳鉴定
2.DNA片段电泳鉴定的原理
①DNA分子具有_____________，在一定的___下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在_____的作用下，这些________会向着________________的电极移动，这个过程就是_____。
可解离的基团
pH
电场
带电分子
电泳
与它所带电荷相反
②PCR的产物一般通过_______________来鉴定
琼脂糖凝胶电泳
④凝胶中的DNA分子通过_____，可以在波长为______的______下被检测出来。
染色
300nm
紫外灯
③在凝胶中DNA分子的迁移速率与___________、______________和_____等有关。
凝胶的浓度
DNA分子的大小
构象
DNA片段的扩增及电泳鉴定
二、材料用具
PCR仪（自动控温，实现DNA的扩增）
微量离心管（实际上是进行PCR反应的场所）
微量移液器（用于向微量离心管转移PCR配方中的液体）
一次性吸液枪头（微量移液器吸取一种试剂更换一次枪头）
电泳装置（包括电泳仪、电泳槽等）
DNA片段的扩增及电泳鉴定
10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+） 5μL
20mmol/L的4种脱氧核苷酸的等量混合液（实为dNTP） 1μL
20μmol/L的引物Ⅰ 2.5μL
20μmol/L的引物Ⅱ 2.5μL
H2O 28～33μL
1-5U/μL的Taq DNA聚合酶（即耐高温的DNA聚合酶） 1～2U
模板DNA （用量为1pg-1μg） 5～10μL
总体积 50μL
PCR反应体系的配方
4种脱氧核苷酸等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水。电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等
DNA片段的扩增及电泳鉴定
使DNA充分变性，以利于引物更好地和模板结合。
三、方法步骤
(一）DNA片段的扩增
1、移液：
用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分
2、离心：
待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子，将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使反应液集中在离心管的底部（提高反应速率）
3、反应：
参照下表的参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。
循环程序 变性 复性 延伸
预变性 94℃,5min / /
30次 94℃,30s 55℃,30s 72℃,1min
最后一次 94℃,1min 55℃,30s 72℃,1min
预变性：
DNA片段的扩增及电泳鉴定
（二）DNA片段的电泳鉴定
1、配制琼脂糖溶液
根据待分离DNA片段的大小，用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比0.8%-1.2%的琼脂糖溶液。在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖熔化。稍冷却后，加入适量的核酸染料混匀。
2、制备凝胶
①将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。
③将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。
②待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
3、加样
将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液（内含指示剂）混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。
4、电泳
接通电源，根据电泳槽阳极至阴极之间的距离来设定电压，一般为1～5V/cm。待指示剂前沿迁移接近凝胶边缘时，停止电泳。
5、观察记录
取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
四、结果分析与评价
1.你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？
2.你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因。
可以在紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，该片段大小约为750bp。
如果扩增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。如果扩增结果不止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易形成二聚体；退火温度过低；DNA聚合酶的质量不好等。
DNA片段的扩增及电泳鉴定
【典例】下列关于PCR的说法，错误的是( )
A.PCR是体外复制DNA的技术
B.PCR过程中只需要一个模板DNA、两种引物分子、大量脱氧核苷酸原料
C.TaqDNA聚合酶要具有耐高温的特点
D.PCR利用了DNA的热变性原理
B
【变式训练】用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液(Marker)，10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是( )
A.PCR产物的分子大小在250至500 bp之间
B.3号样品为不含目的基因的载体DNA
C.9号样品对应植株不是所需的转基因植株
D.10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰
B