1.1微生物的培养需要适宜条件课件（共27张PPT）2022-2023学年高二下学期生物浙科版选择性必修3

(共27张PPT)
微生物的培养需要适宜条件
微生物
培养基
无菌技术
大肠杆菌菌落
电镜下新冠病毒
高倍光学显微镜下的酵母菌
人们为满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的需求而配置的混合养料。
只培养目标微生物，排除非目标微生物的干扰。
人们对所有形体微小、肉眼不可见的生物的统称。
成分 作用 主要来源
碳源
氮源
无机盐
水
生长因子
一、成分
培养基
主要作能源物质
无机碳(CO2)
或有机碳(糖类)
合成蛋白质等有机物
N2，NH3，铵，硝酸盐
尿素，牛肉膏，蛋白胨
调节渗透压等
NaCl、CaCl2
作为溶剂
调节促生长
维生素，氨基酸，碱基等
不同种类的微生物代谢特点不同，请问不同的微生物对培养基中营养物质的需求是否相同？
思考？
自养型微生物
异养型微生物
碳源可来自大气中的CO2
碳源必须由含碳有机物提供，如蔗糖、葡萄糖等
不能固氮微生物
固氮微生物
如衣藻、硝化细菌等
如根瘤菌等
氮源可来自大气中的N2、硝酸盐、NH3等
氮源必须由含氮有机物提供，如尿素、牛肉膏等
特殊需求：
满足微生物对 ______________________的需求
④培养厌氧微生物时，需要提供_____的条件。
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加_______；
②培养霉菌时，需要将培养基调至_____；
③培养细菌时，需要将培养基调至_____________；
维生素
酸性
中性或弱碱性
无氧
pH、特殊营养物质、氧气
细菌喜荤，霉菌喜素
细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸
分类依据 种类 特点 应用
物理性质
化学成分
用途
二、培养基的分类
液体培养基
固体培养基
不加凝固剂
加凝固剂（琼脂）
工业生产
微生物的分离、鉴定、
活菌计数、保藏
天然培养基
合成培养基
含化学成分不明的天然物质
培养基成分明确或
用一定化学物质配制
选择培养基
鉴别培养基
添加某物质，抑制杂菌生长，
促进所需微生物生长
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品
培养分离出特定微生物
鉴别微生物
工业生产
分类、鉴定
液体培养基和固体培养基
液体培养基
固体培养基
在液体培养基中加入琼脂后制成的琼脂固体培养基，是实验室中最常用的培养基之一
呈液态状态
菌落
微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长形成肉眼可见的菌落
1.蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化纳 0.5g，1g琼脂，加水50mL配制的LB培养基属于何种类型？
思考？
2.尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的些细菌分解成NH3,NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3,NH3可作为细菌生长的氮源。
讨论
1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？
设计一种选择培养基，用尿素作为唯一氮源，可以将分解尿素的细菌分离出来
这种培养基与普通培养基相比，区别只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。
三、无菌技术
1.概念：
_____________的培养微生物的操作技术
3.手段：
主要包括____和____。
（1）对实验操作的____、操作者的________，进行清洁和消毒。
（2）将用于微生物培养的____、________和______等进行灭菌。
防止杂菌污染
消毒
灭菌
空间
衣着和手
器皿
接种用具
培养基
2.目的：
（1）防止培养物被污染
（2）防止感染实验操作者
煮沸消毒
巴氏消毒
100℃煮沸5-6min
70-75℃ 30min / 80℃15min
紫外线消毒
化学药剂消毒
酒精、氯气等消毒剂
紫外线照射30min
化学药剂消毒
消毒
消毒
（1）概念：
指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
（2）常用的消毒方法
①煮沸消毒法：
100℃煮沸5～6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。
②巴氏消毒法：
62～65℃下消毒30min或80～90℃处理30s～1min
适合一些不耐高温的液体，如牛奶。可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且不破坏牛奶的营养成分。
用70%酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。
③化学药剂消毒法:
④紫外线消毒法：
接种室、接种箱或超净工作台在使用前可用紫外线照射30min。可杀死物体表面和空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果。
使用前将实验工具放到超净工作台上，打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。
超净工作台
灭菌
（1）概念：
指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
（2）常用的灭菌方法
①高压蒸汽灭菌：
以水蒸气为介质，在压力100kPa、温度121℃条件下，维持15～30min来灭菌的
工具为高压蒸汽灭菌锅，常用于培养基、无菌水等的灭菌。
②灼烧灭菌：
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层（外焰）灼烧，可以迅速彻底地灭菌。
适用于微生物的接种工具，如涂布器、接种环、接种针或其它金属用具，试管口、瓶口等容易被污染的部位
高压蒸汽灭菌锅
高压蒸汽灭菌锅
操作步骤 操作要领
加水 将内层灭菌桶取出，向外层锅内加水，水面与三角形搁架平齐
装锅 将灭菌物品放在灭菌桶中(不要装得太满)，加盖，对称固定螺栓
加热排气 加热灭菌锅，打开排气阀，等冷空气完全排尽后，关闭排气阀
保温保压 100 kPa、121 ℃下，保温保压15～30 min
出锅 1.关闭电源
2.压力表降至“0”点，（温度下降）打开排气阀，
3.旋开固定螺栓，取出灭菌物品
高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌锅
培养皿
试管
三角瓶
移液枪
枪头
移液管
涂布器
接种环
原理：G6玻璃砂漏斗孔径小,细菌不能滤过
G6玻璃砂漏斗
适用于化合物在较高温度下会分解的物质。如含尿素的培养基。
消毒与灭菌比较
无菌技术 对比项目 消毒 灭菌
技术方法特点
杀菌程度
常见杀菌对象
常用方法
较温和
强烈
物体表面或内部一部分微生物
物体内外所有微生物
（包括芽孢和孢子）
操作空间、操作者衣着
和手
培养器皿、接种用具和培养基
煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒、消毒液消毒
高压蒸汽灭菌、
过滤灭菌
灭菌方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间
灼烧灭菌
高压蒸汽灭菌
G6玻璃砂漏斗
常用灭菌方法的比较
接种环、 接种针或其他金属用具
在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
直至烧红
操作器具、普通培养基等
1kg/cm2,121℃
15min
500g/cm2,90℃以上
30min
尿素、酶等化学物质
选择不同孔径的型号
含葡萄糖培养基等
四、倒平板和制备斜面培养基
倒平板的步骤
既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
搁置斜面
五、接种
①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红
②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞
③试管口通过火焰
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞
⑥将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖
接种是使目标微生物在配制好的培养基上生长的操作
六、配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基
20%马铃薯蔗糖培养基的配方：去皮马铃薯丝（或小块）20g,蔗糖2g，琼脂1.5～2g，水100mL(自然pH)。
1.20%马铃薯浸汁为酵母菌生长提供了哪些成分？
2.蔗糖属于该培养基的什么成分？
3.琼脂的作用？
4.琼脂可以作为酵母菌生长的碳源吗？
水、碳源、氮源、无机盐、生长因子
碳源
作为凝固剂
不能，酵母菌没有分解琼脂的酶
思考
讨论
1.你认为生活中的哪些现象会使人联想到用马铃薯浸汁制备培养基？
2.本实验中，煮沸后的马铃薯浸汁为酵母菌的生长提供了哪些成分？
3.培养基中的琼脂能否成为酵母菌生长的碳源？
在生活中人们可以见到久置的煮熟马铃薯上长出微生物，这意味着马铃薯能为微生物的生长提供它们所需的营养物质。
本实验中，煮熟后的马铃薯浸汁给酵母菌的生长提供了水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等成分。
琼脂不会被酵母菌分泌的酶所分解，所以琼脂不能成为酵母菌生长的碳源。