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第3章 基因工程
第4节 蛋白质工程
基因工程
目录 /CONTENTS
01
02
蛋白质工程崛起的缘由
蛋白质工程的原理
03
蛋白质工程的应用
概念:P93
以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过改造或合成基因,来改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质,以满足人类生产和生活的需求
操作对象:
结果:
与基因工程的关系:
理论和技术:
改造或合成基因
改造现有蛋白质,或制造一种新的蛋白质
在基因工程基础上延伸出来的第二代基因工程
分子生物学、晶体学和计算机技术
蛋白质工程
情景视频
01蛋白质工程崛起的缘由1.基因工程的实质及缺陷基因工程是将一种生物的基因转移到另一种生物体内,使后者可以产生它原本不能产生的蛋白质,进而表现出新性状。基因工程原则上只能生产自然界中已经存在的蛋白质。2. 蛋白质工程崛起的缘由天然蛋白质的缺陷:天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的,它们的结构和功能符合特定物种生存的需要,却不一定完全符合人类生产和生活的需要。01蛋白质工程崛起的缘由产量提高赖氨酸含量低合成时需:天冬氨酸激酶;二氢吡啶二羧酸合成酶。浓度影响酶活性实例异亮氨酸苏氨酸(352位)异亮氨酸天冬酰胺(104位)1、目标:根据人们对蛋白质功能的特定需求,对蛋白质的结构进行设计改造,由于基因决定蛋白质,因此,对蛋白质的结构进行设计改造,最终通过改造或合成基因来完成。蛋白质工程的基本原理2、天然蛋白质合成过程:按照中心法则思考:为什么蛋白质工程改造基因而不是直接改造蛋白质?①蛋白质的高级结构十分复杂,直接改造难度大;②蛋白质是由基因编码的,改造了基因可以间接改造蛋白质;③基因可以遗传,蛋白质无法遗传;02蛋白质的结构三级结构一级结构四级结构二级结构蛋白质工程的基本原理02从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→获得所需要的蛋白质预期功能生物功能设计蛋白质(三维结构)推测改造或合成转录翻译折叠行使目的基因mRNA多肽链思考:与中心法则的关系?思考·讨论
某多肽链的一段氨基酸序列是:
丙氨酸
色氨酸
赖氨酸
谷氨酸
苯丙氨酸
1.怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸虚列?请把相应的碱基序列写出来。
丙氨酸 :GCU、GCC、GCA、GCG
色氨酸:UGG
赖氨酸: AAA 、AAG
甲硫氨酸:AUG
苯丙氨酸:UUU 、UUC
丙氨酸 :CGA、CGG、CGT、CGC
色氨酸: ACC
赖氨酸:TTT 、TTC
甲硫氨酸:TAC
苯丙氨酸:TTT 、TTG
找到DNA上相对应的脱氧核苷酸序列(基因)
推出mRNA上的核糖核苷酸序列
思考·讨论
丙氨酸
色氨酸
赖氨酸
谷氨酸
苯丙氨酸
2.确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因?
确定目的基因的碱基序列后,可以根据人类的需要改造它,通过人工合成的方法获取。
拓展延伸
根据改造蛋白质的部位的多少,对蛋白质的改造可分为三类:
(1)大改:
设计并制造出自然界中不存在的全新蛋白质
(2)中改:
在蛋白质分子中替换某一个肽段或某一个特定的结构域。
(3)小改:
改造蛋白质分子中的几个氨基酸残基
思考:如何辨别一个操作是基因工程还是蛋白质工程?
是否合成新的基因
蛋白质工程
是否对原有基因进行改造
是
否
是
否
蛋白质工程
基因工程
看蛋白质
看基因
是否为天然蛋白质
是
否
蛋白质工程
基因工程
蛋白质工程与基因工程的比较
项目 蛋白质工程 基因工程
区别 起点
过程
实质
结果
应用及现状
联系 预期蛋白质功能
目的基因
预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→推测脱氧核苷酸序列→合成DNA→表达出蛋白质
获取目的基因→构建基因表达载体→导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定
通过改造相应的基因达到对蛋白质进行改造的目的
基因重组
可以创造出自然界不存在的蛋白质
生产自然界已存在的蛋白质
①主要集中在对现有蛋白质进行改造,②对创造新的蛋白质还有许多技术难题未突破,因为蛋白质高级结构非常复杂,人们对此知之甚少
①已被广泛应用,如转基因植物、动物、药品生产等已商业化
①蛋白质工程获得目的基因后,需要通过基因工程获得预期蛋白质
②蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程
蛋白质工程的应用03(1)研发速效胰岛素类似物天然蛋白质易形成二聚体或六聚体预期功能降低胰岛素的聚合作用设计结构改变B链第20~29位氨基酸组成改造新胰岛素基因B28位脯氨酸替换为天冬氨酸或将它与B29位的赖氨酸交换位置推测序列转录mRNA翻译多肽链行使功能速效胰岛素类似物预期结构折叠等阻碍胰岛素从注射部位进入血液,延缓了降血糖作用定点突变1.医药工业方面蛋白质工程的应用03(2)延长干扰素体外保存时间天然干扰素不易保存改造新干扰素基因预期功能延长保存时间设计结构氨基酸替换一个半胱氨酸变成丝氨酸推测序列预期结构转录mRNA折叠翻译多肽链行使功能在-70℃下可以保存半年定点突变1.医药工业方面β-干扰素氨基酸序列蛋白质工程的应用03(3)提高蛋白质的热稳定性第3位上的异亮氨酸半胱氨酸与第97位的半胱氨酸形成-s-s-定点突变1.医药工业方面蛋白质工程的应用03(4)降低人对小鼠单克隆抗体的免疫反应基因融合1.医药工业方面通过改造基因,将小鼠抗体上结合抗原的区域(即可变区)“嫁接”到人的抗体(即恒定区)上,经过这样改造的抗体诱发免疫反应的强度就会减低很多。蛋白质工程的应用03蛋白质工程被广泛用于改进酶的性能或开发新的工业用酶。如枯草杆菌蛋白酶具有水解蛋白质的作用,常被用于洗涤剂工业、丝绸工业等。迄今为止,利用蛋白质工程获得的该酶的突变体已有上百种,从中可能筛选出一些符合工业化生产需求的突变体,从而提高这种酶的使用价值。2.其他工业方面蛋白质工程的应用033.农业方面改造某些参与调控光合作用的酶,以提高植物光合作用的速率,增加粮食的产量。利用蛋白质工程的思路设计优良微生物农药,通过改造微生物蛋白质的结构,使它防治病虫害的效果增强。