(共35张PPT)
l动物细胞培养 动物细胞工程的基础
l动物细胞融合
l动物细胞核移植等
第2章 细胞工程
第2节 动物细胞培养
动物细胞工程常用的技术:
一 动物细胞培养
在治疗大面积烧伤时,通常采用的方法是 取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对 这样的病人来说,自体健康皮肤非常有限, 使用他人皮肤来源又不足,而且会产生免疫 排斥反应。 那么,怎样才能获得大量的自体 健康皮肤?能不能用自体皮肤的单个细胞培 养出可供移植的皮肤?
可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在 体外进行培养、扩增;
目前,科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养, 以获得适合临床上使用的人造皮肤;
通过细胞培养构建的人造皮肤
从社会中来
1.概念
从动物体中_ _ 相关的组___织_,将它_分__散成单个__细__胞
_,然后 _ _ _ _ ___下,让这些细 长_____ 殖 _____的技术;
2.原理: __________________
动物细胞工程的基础
3.地位: __________________
动物细胞培养
细胞增殖(有丝分裂)
糖类、氨基酸、无机 盐、维生素等
一、动物细胞培养的条件
其他条件
适宜的温度、 pH和渗透压
动物细 胞培养 的条件
适宜的气体环境
无菌、无毒的环境
营养条件
血清中不仅含有蛋白质、氨基酸、 葡萄糖、激素等多种营养物质,还 有激素及多种未知的促细胞生长因 子、促贴附因子及其他活性物质,
能促进细胞的生长、增殖和贴附。
合成培养基
将细胞所需的 营养__物__质(糖类、氨基酸、无机盐、维生素等)按其
__种__类_和_ _ _严格配制而成的培养基,称为___________
②未知成分
原因: _ 血清中含有尚未全部__研__究___清__楚__的___细__胞__所___需__的__营___养__物__质______
(2)培养基的物理性质
培养动物细胞一般使用液___体__培__养__基,也称为_培__养__液_
一、动物细胞培养的条件
使用合成培养基时,通常需加入血___清_等一些天然成分
1.营养
(1)成分
①已知成分
不包括淀粉、 蔗糖等
2.无菌、无毒的环境
①对__培_ _ 和_所__有__培__养用___具__进行_灭__菌__处理;
如何防止培养过程中的微生物污染?
在细胞培养液中添加一定量的抗生素
②在_无__菌__环境___下进行操作;
③还需要 定期更换__培养液_。
目的: 以便清除代谢物,防止细 胞代谢物积累对细胞自身造成危害
一、动物细胞培养的条件
思考
?
3.温度、 pH和渗透压
①适宜的温度
哺乳动物细胞培养的温度多以 36._5__ 5__℃___为宜;
②适宜的pH
多数动物细胞生存的适宜pH为_7.__2-7.4_
③适宜的渗透压
维持适宜渗透压的目的_维__持__细__胞__正__常__的__形__态__和__功_能
一、动物细胞培养的条件
4.气体环境
(1)组成
动物细胞培养所需气体主要有__O 和C___O_2
(2)不同气体的作用
①O2: O2是细胞代谢所必需__的
②CO2:__CO2___的__主__要__作__用__维__持__培__养__液__的pH
(3)培养容器
通常采用_培__养__皿__或 松盖__培__养__瓶__
(4)培养仪器
含有 95%空气___和_5_%_CO2_的混合气体的_CO2___培__养__箱__
一、动物细胞培养的条件
二、动物细胞培养的过程
转入培养液进行原代培养
进行传代培养
制成细胞悬液
取动物组织
放入CO2培养 箱中培养
放入CO2培养
箱中培养
转入培养液进 行原代培养
细胞贴壁 接触抑制
分瓶
制成细
胞悬液
取动物组织
传代培养
重要名词解释
①原代培养
通常将 分瓶之前的细胞培养,即动物组织经处___理__后的_初__次__培__养_称为
原代培养;
②传代培养 将分___瓶__后_的细胞培养称为传代培养; ③细胞贴壁大_多__数___体外培养的细胞需要贴__附__于__某__些__基__质__表面___才能生 长增殖,这类细胞往往贴附在培养瓶的 _ 上,这种现象称为细胞贴壁;
二、动物细胞培养的过程
重要名词解释
④接触抑制
二、动物细胞培养的过程
打破接触抑制的方法: 将贴
满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶
等处理,然后分瓶继续培养,
当_贴_ __细胞生长到_表__面__相__互__接_触_时,细胞通常会停__止__分__裂__增__殖_
让细胞继续增殖。
接触抑制
_;
1.取动物组织 (1)取材: 一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。
(2)取材原因: 细胞分化程度低,增殖能力强,容易培养
用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白
2.制成细胞悬液 质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时,
(1)将组织分散成单个细胞 pH为7.2~7.4,胃蛋白酶在此环境中没有活性,所
①方法: 机械法 以用胃蛋白酶不行。
用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
②原因:
Ⅰ.从动物体取出的成块组织中, 细胞与细胞靠在一起, 彼 此限制了生长和增殖;
Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触,更易进行物质交换。
(2)用培养液将细胞制成细胞悬液。
二、动物细胞培养的过程
胃蛋白晦就会失去活性。多数动物细胞培养的适宜
3.原代培养
(1)操作方法: 将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内,置于适宜环境 中培养。
(2)体外培养的动物细胞类型
①悬浮生长类:能够悬浮在培养液中生长增殖。
会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质 缺乏等因素而分裂受阻。
②贴壁生长类:需要贴附于某些基质表面才能生长增殖(细胞贴 壁),大多数细胞属于此类。
除受密度、有害代谢物、 营养物质影响外, 还会发生接触抑 制现象。
二、动物细胞培养的过程
4.分瓶、 进行传代培养
(1)需分瓶进行传代培养的原因:
悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和 培养液中营养物质等因素而分裂受阻,贴壁细胞在生长增殖 时,除受上述因素影响外,还会发生接触抑制现象
(2)方法:
①收集细胞
a.悬浮生长类: 直接用离心法收集
b.贴壁生长类: 重新用胰蛋白酶等处理,使之分散成单个细 胞,然后再用离心法收集
②将收集的细胞制成细胞悬液,分瓶培养
二、动物细胞培养的过程
取动物组织
制成细胞悬液
机械法或胰蛋白酶、胶
原蛋白酶处理将组织分
散成单个细胞
转入培养液进 行原代培养
分瓶
大多数需要贴附于某些 基质表面才能生长增殖
重新用胰蛋白酶等处理, 使之分散成单个细胞, 然后再用离心法收集
一类细胞能够悬浮在 培养液中生长增殖
用培养液将细胞制成细胞悬液
动物细胞培养的过程归纳:
直接用离 心法收集
动物胚胎、幼龄动物
进行传代培养
思考 1.为什么要对取出的动物组织进行处理,
?
Ⅰ.从动物体取出的成块组织中, 细胞与细胞靠在一起, 彼此限制了生长和增殖;
Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触,更易进行物质交换。
2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时间的作用也 会消 化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,因此必须控制好胰 蛋白酶的消化时间。
使细胞分散?
在沉淀中得到细胞,同时去掉上清液中的胰蛋白酶
5.动物细胞培养技术有没有体现动物细胞的全能性
?
未体现;动物细胞培养只是细胞增殖的过程
4.离心的作用?
思考
?
思考
?
6.“细胞增殖到互相接触的时候, 糖蛋白识别
了这种信息,就会使细胞停止继续繁殖,出现接触抑
制的现象”试结合上述解释,举例说明哪种细胞无接 触抑制现象,并阐述原因
癌细胞; 癌细胞的细胞膜上糖蛋白等物质减少
1.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较,分化程度低的细胞与
分化程度高的细胞比较,哪些细胞更易于培养?为什么?
细胞的增殖能力与供体的年龄有关,幼龄动物的细胞增殖能 力强,有丝分裂旺盛,老龄动物的细胞则相反。所以,一般来 说,幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样,分化 程度越低的细胞,增殖能力越强,所以更容易培养。
2.动物细胞培养和植物组织培养有什么相同和不同之处?
有关动物细胞培养的问题
植物组织培养
动物细胞培养
原理 植物细胞的全能性
细胞增殖
培养前处理 离体
用机械法或胰蛋白酶、胶原 蛋白酶将组织细胞分散开
取材 离体植物器官、组织、细胞
动物胚胎或幼龄动物的组 织、器官
培养基的物理性 质 固体
液体(又称培养液)
培养基的成分 有机营养成分 无机营养成分 植物激素
糖类、氨基酸、无机盐、维
生素等营养物质及一些天然 成分如血清
特有成分 植物激素
血清
动物细胞培养和植物组织培养的比较
植物组织培养
动物细胞培养
特殊环境条件 再分化需光
气体环境
结果 一般获得新的植株
获得大量细胞
是否体现细胞 的全能性 是
否
过程 外植体 愈伤组织 再分化 根、芽 幼苗 移栽成活 完整植株
取动物组织
制成细胞悬液
转入培养液进行原代培 分瓶养
进行传代培养
20相23/4/1同8 点 ①培养过程中细胞都进行有丝分裂,不涉及减数分裂; ②均需无菌操作,需要适宜的温度、 pH等条件。
动物细胞培养和植物组织培养的比较
脱分化
1.分布
干细胞存在于_ _ _ _ _骨髓 和_脐__带__血__等多种组织和器官中;
2.分类
干细胞包括 胚胎_干__细__胞_____和成___体__干__细__胞_等
(1)胚胎干细胞 (简称ES细胞)
①分布: 存在于 早期胚胎中
形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能
③应用实例
ES细胞在体外分化成心肌细胞、神经元细胞和造血干细胞等
三、干细胞培养及其应用
具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步
②特点
(2)成体干细胞
①分布: 存在于_成 _ _ _ _ _ _ __中
②常见类别: 包括骨___髓__中的_造血_干__细__胞___、 _经__系__统__中的_神__经__干__细__胞、 睾_丸___中的 _ _ _ _等;
③特点
一般认为,成体干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞
或组织,不具有发育成完整个体的能力
④发现最早、研究最多的、应用最成熟的实例
造血干细胞,主要存在于成体的骨髓、外周血和脐带血中
三、干细胞培养及其应用
三、干细胞培养及其应用
类型
应用
造血干细胞
治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、
免疫系统功能障碍等疾病
神经干细胞
治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病(如帕金森病、 阿尔茨海默病等)
诱导多能干细胞 (iPS细胞)
可治疗小鼠的镰状细胞贫血症,在治疗阿尔兹海默病、心 血管疾病等领域的研究也取得了新进展
3.干细胞的应用
有着_自__我__更_新_能力及 分化潜能的干细胞,与组__织__ _ _官的__发__育、___再__生__和修复 等密切相关;
_
、
三、干细胞培养及其应用
4.干细胞应用面临的问题存在_导__致__肿__瘤__发__生__的__风_险
干细胞可以治疗某些顽症的原理是什么?
干细胞可以被诱导分化形成新的组织细胞,
经移植可使坏死或退化部位得以修复并恢复正常功能
但是,胚胎干细胞存在局限性: 胚胎干细胞必须从 胚胎中获取 ,涉及伦理问题,因而限制了它在医学上 的应用。
4.诱导iPS细胞及其应用
(1)诱导多能干细胞概念
通过体外诱导成纤维细胞,获得类似胚胎干细胞的 一种细胞,称为诱导多能干细胞,简称iPS细胞。
(2)制备iPS细胞的方法
①借助载体将特定基因导入细胞中诱导形成iPS细胞
②直接将特定蛋白导入受体细胞中诱导形成iPS细胞
③用小分子化合物来诱导形成iPS细胞诱导形成iPS细胞
三、干细胞培养及其应用
4.诱导iPS细胞及其应用
(3) iPS细胞的来源
成纤维细胞以及已分化的T细胞、 B细胞
(4) iPS细胞的优点
①诱导过程无需破坏胚胎 ②iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞,将它移 植回病人体内后,理论上可以避免免疫排斥反应;
*因此,普遍认为iPS细胞的应用前景优于胚胎干细胞
三、干细胞培养及其应用
可治疗小鼠的镰状细胞贫血症, 在治疗阿尔兹海默病、心血管疾 病等领域的研究也取得了新进展
取成纤维细胞
转入相关因子
三、干细胞培养及其应用
诱导iPS细胞定向分化为多 种组织细胞
移植回病人体内
4.诱导iPS细胞及其应用
细胞转化为iPS细胞
(5)应用
动物细胞培养
制成细胞悬液
培养条件
原代培养
传代培养
干细胞
分布
分类
应用
温度、 pH和渗透压
无菌、无毒的环境
地位
原理
过
程
概
述
取材
气体环境
营养条件
一、概念检测
1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。
(1)培养环境中需要O2 ,不需要CO2 。 ( × )
(2)细胞要经过脱分化形成愈伤组织。 ( )
(4)培养瓶中的细胞需定期用胰蛋白酶处理,分瓶后才能继续增殖。 ( × )
(3)培养液中通常含有糖类、氨基酸、无 盐、维生素和动物血清。 ( √ )
机
×
一、概念检测
2.干细胞有着广泛的应用前景。下列相关叙述错误的是 ( A )
A.干细胞是从胚胎中分离提取的细胞
B、造血干细胞可以分化为各种血细胞
C.不同类型的干细胞,它们的分化潜能是有差别的
D. 由iPS细胞产生的特定细胞,可以在新药的测试中发挥重要作用
现在关于iPS细胞的研究正在不断深人。请你从以下两个方面来查阅资
料进行思考。
(1)由于诱导产生iPS细胞、促使其分化都需要时间,因此用某人特异的 iPS细胞进行医疗只限于时间比较充裕的情形。从实际事故、疾病发生的不 可预测性方面考虑,如果要将这些细胞用于紧急情况,应该提前采取什么 措施
建立iPS细胞库(HLA多态性丰富的iPS细胞库),
可以为需要的人找到HLA匹配度较高的iPS细胞
二、拓展应用
(2)如果诱导iPS细胞定向分化为生殖细胞的技术发展成熟,该技术可能
会有哪些应用 又可能带来哪些问题
可以用来治疗不孕症;可以用来进行濒危物种的克隆;
可以对获得的生殖细胞进行转基因操作,再经过受精、胚胎发育等
过程来获得转基因动物;
可能会带来一系列的伦理问题,例如用同一个人的iPS细胞分别诱导 形成精子和卵子,两者受精可能培育出“单亲”婴儿,有的人还可能有 目的地选择iPS细胞,从而”设计”婴儿
二、拓展应用