浙科版选修1第一部分实验1_大肠杆菌的分离和培养（共34张PPT）
文档属性
| 名称 | 浙科版选修1第一部分实验1_大肠杆菌的分离和培养（共34张PPT） |  | |
| 格式 | zip | ||
| 文件大小 | 987.4KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 浙科版 | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2014-12-04 08:58:28 | ||
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文档简介
课件34张PPT。实验1 大肠杆菌的分离与培养结构简单，个体微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到。
包括病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物等。一、微生物种类 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.培养基的类型二、细菌的培养基液体培养基：扩增细菌、工业生产
固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种。(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机盐2.培养基内所含的基本物质3.培养基内所需的其他条件(1)pH值
如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性
(2)温度
如：霉菌、细菌培养的最适温度不同
(3)氧气的含量
如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。三、菌落 四、消毒与灭菌1、消毒：
利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生物的过程。2、灭菌：
以化学或物理方法消灭所有微生物，达到完全无菌的过程。（2）干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。（3）高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。思考（一）培养基的配置与灭菌 取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。LB液体培养基——细菌的扩大培养
LB固体培养基——细菌的划线分离封口膜：既通气又不使菌进入五、大肠杆菌的培养和分离实验操作1、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。（二）倒平板3、用左手的拇指和食指将培养皿打开一条的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10-20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。4、等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较大，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（三）大肠杆菌的扩大培养将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12小时。注意事项:
1.火焰旁从斜面上用接种环取菌；
2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌，
冷却后方能取菌；
3.取菌后封口膜和棉塞复原。（四）大肠杆菌的划线分离1、划线分离法3、将试管口通过火焰。不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。注意事项:
1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。
2.划线首尾不能相接。
3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。问题
讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在进行第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。是指将培养的菌液稀释一定的倍数，然后取一定量稀释液加在固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上。2、涂布分离法:划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。
涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。（五）大肠杆菌分离后保存1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成
后置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：甘油冷冻管藏法1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?（1）胆大心细，操作快捷。
（2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。
（3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度。2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?（1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。4.实验完成后，接种过细菌的器皿应如何处理？ 所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤（特别是培养基）；使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。5.如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?转基因用的质粒不是细菌中原有的，而是经过改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相应抗生素的培养基对菌体进行培养。1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?(1)胆大心细，操作快捷。（2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。（3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度1、器具的灭菌
2、培养基的配制
3、培养基的灭菌
4、倒平板
5、微生物接种
6、恒温箱中培养
7、菌种的保存六、微生物实验室培养的基本操作程序
包括病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物等。一、微生物种类 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。1.培养基的类型二、细菌的培养基液体培养基：扩增细菌、工业生产
固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种。(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机盐2.培养基内所含的基本物质3.培养基内所需的其他条件(1)pH值
如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性
(2)温度
如：霉菌、细菌培养的最适温度不同
(3)氧气的含量
如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。三、菌落 四、消毒与灭菌1、消毒：
利用化学或物理方法，杀死大部分致病微生物的过程。2、灭菌：
以化学或物理方法消灭所有微生物，达到完全无菌的过程。（2）干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。（3）高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。思考（一）培养基的配置与灭菌 取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。LB液体培养基——细菌的扩大培养
LB固体培养基——细菌的划线分离封口膜：既通气又不使菌进入五、大肠杆菌的培养和分离实验操作1、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。（二）倒平板3、用左手的拇指和食指将培养皿打开一条的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10-20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。4、等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？问题讨论可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较大，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（三）大肠杆菌的扩大培养将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12小时。注意事项:
1.火焰旁从斜面上用接种环取菌；
2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧灭菌，
冷却后方能取菌；
3.取菌后封口膜和棉塞复原。（四）大肠杆菌的划线分离1、划线分离法3、将试管口通过火焰。不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。注意事项:
1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。
2.划线首尾不能相接。
3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。问题
讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在进行第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。是指将培养的菌液稀释一定的倍数，然后取一定量稀释液加在固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上。2、涂布分离法:划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。
涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。（五）大肠杆菌分离后保存1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成
后置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：甘油冷冻管藏法1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?（1）胆大心细，操作快捷。
（2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。
（3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度。2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?（1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。
（3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。4.实验完成后，接种过细菌的器皿应如何处理？ 所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤（特别是培养基）；使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。5.如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?转基因用的质粒不是细菌中原有的，而是经过改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相应抗生素的培养基对菌体进行培养。1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?(1)胆大心细，操作快捷。（2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。（3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37度；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30度1、器具的灭菌
2、培养基的配制
3、培养基的灭菌
4、倒平板
5、微生物接种
6、恒温箱中培养
7、菌种的保存六、微生物实验室培养的基本操作程序