第2章 细胞工程
第2节 动物细胞工程
二、动物细胞融合技术与单抗隆抗体
1.动物细胞融合技术(cell fusion technique)就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。(P48)
2.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。诱导动物细胞融合的常用方法有PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。(P48)
3.细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。(P48)
4.制备单克隆抗体需要的技术手段:动物细胞融合和动物细胞培养。制备单克隆抗体的原理:细胞膜的流动性和细胞增殖。(P49)
5.单克隆抗体制备过程示意图。(P49)
米尔斯坦和科勒制备单克隆抗体过程的示意图
6.第一次筛选的目的是筛选出杂交瘤细胞,方法是用特定的选择性培养基培养。经过筛选后未融合的细胞或者融合后具有同种核型的细胞都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(P49)
7.第二次筛选的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞,方法是专一抗体检验。(P49)
8.抗体——药物偶联物(ADC)通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合,实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。(P50“思考·讨论”)
三、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1.动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中,并使这个重新组合的细胞发育成新胚胎,继而发育成动物个体的技术。(P52)
2.减数分裂Ⅱ中期(MⅡ期)卵母细胞中的“核”其实是纺锤体—染色体复合物。文中所说的“去核”是去除该复合物。(P52“相关信息”)
3.哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。由于动物胚胎细胞分化程度低,表现全能性相对容易,而动物体细胞分化程度高,表现全能性十分困难,因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。(P52)
4.下面以克隆高产奶牛为例,来说明体细胞核移植的大致过程(如图)。(P53)
5.目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法。也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下去核或使其中的DNA变性。(P54“相关信息”)
知识点默写
1.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。诱导动物细胞融合的常用方法有 法、电融合法和 法等。
2.细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使 杂交成为可能。
3.制备单克隆抗体需要的技术手段:动物细胞融合和动物细胞培养。制备单克隆抗体的原理: 和细胞增殖。
4.一种B淋巴细胞只能分泌一种抗体,B淋巴细胞在体外 (填“能”或“不能”)无限增殖;骨髓瘤细胞能 ;B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的 细胞,既能迅速大量增殖,又能产生专一的抗体。
5.单克隆抗体的制备过程:
6.单克隆抗体的优点:_______________________________________________________
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7.制备单克隆抗体过程中,若仅考虑细胞的两两融合,B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经细胞融合后产生的细胞有 3种类型,出现不同种类型是因为 。
8.杂交瘤细胞的特点是________________________________________________
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9.体细胞核移植过程
10.核移植技术中必须先去掉受体卵母细胞的细胞核的原因是________________________________________________________________________
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【知识点默写参考答案】
1.PEG融合 灭活病毒诱导 2.远缘 3.细胞膜的流动性
4.不能 无限增殖 杂交瘤 5.杂交瘤细胞 能产生所需抗体 6.能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性结合,并且可以大量制备 7.B细胞自身融合、骨髓瘤细胞自身融合、杂交瘤细胞 细胞融合是随机的 8.既能迅速大量增殖,又能产生专一的抗体 9.MⅡ 显微操作 电融合 重构胚 重构胚 完成细胞分裂和发育进程 基本相同 10.保证核移植动物的核遗传物质全部来自供体细胞