第2章 细胞工程
第2节 动物细胞工程
一、动物细胞培养
1.动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。(P43)
2.一般来说,动物细胞培养需要满足以下条件。(P43)
3.在体外培养细胞时,必须保证环境是无菌、无毒的,即需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。培养液还需要定期更换,以便清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。(P44)
4.动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。在进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。(P44)
5.动物细胞培养时细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上,这种现象称为细胞贴壁。悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。贴壁细胞在生长增殖时,除受上述因素的影响外,还会发生接触抑制现象,即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞通常会停止分裂增殖。(P44)
6.人们通常将分瓶之前的细胞培养,即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养,将分瓶后的细胞培养称为传代培养。在进行传代培养时,悬浮培养的细胞直接用离心法收集;贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理,使之分散成单个细胞,然后再用离心法收集。之后,将收集的细胞制成细胞悬液,分瓶培养(如图)。(P45)
动物细胞培养过程示意图
7.在一定条件下,干细胞可以分化成其他类型的细胞。干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中,包括胚胎干细胞和成体干细胞等。(P46)
8.2006年,科学家通过体外诱导小鼠成纤维细胞,获得了类似胚胎干细胞的一种细胞,将它称为诱导多能干细胞(简称iPS细胞),并用iPS细胞治疗了小鼠的镰状细胞贫血。(P46)
9.科学家已尝试采用多种方法来制备iPS细胞,包括借助载体将特定基因导入细胞中,直接将特定蛋白导入细胞中或者用小分子化合物等来诱导形成iPS细胞。iPS细胞最初是由成纤维细胞转化而来的,后来发现已分化的T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞。(P46“相关信息”)
iPS细胞用于治疗人类疾病示意图
知识点默写
1.细胞工程:指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过 水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。
2.植物组织培养:是指将 的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术。
3.全能性:细胞经分裂和分化后,仍然具有产生 或分化成其他 的潜能。
4.脱分化:在一定的 和营养条件的诱导下,使已经分化的细胞失去其特有的结构和功能,转变成未分化的细胞的过程。
5.动物组织经处理后的初次培养称为 培养,将分瓶后的细胞培养称为 培养。
6.在生物的生长发育过程中,并不是所有的细胞都表现出全能性,这是因为在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会 。
7.在进行体细胞杂交之前,必须先利用 酶和 酶去除细胞壁,获得原生质体。
8.人工诱导原生质体融合的方法基本可以分为两大类——物理法和化学法。物理法包括 、 等;化学法包括 融合法、高Ca2+—高pH融合法等,融合后得到的杂种细胞再经过诱导可形成愈伤组织,并可进一步发育成完整的杂种植株。
9.在体外培养细胞时,必须保证环境是 的,即需要对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。培养液还需要定期更换,以便清除 ,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
10.动物细胞培养所需气体主要有O2和CO2。O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是 。在进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,并将它们置于含有 的混合气体的CO2培养箱中进行培养。
【知识点默写参考答案】
1.细胞器、细胞或组织 2.离体 3.完整生物 各种细胞 4.激素 5.原代 传代 6.选择性地表达 7.纤维素 果胶 8.电融合法 离心法 聚乙二醇(PEG) 9.无菌、无毒 代谢物 10.维持培养液的pH 95%空气和5%CO2