1.2.2 微生物的选择培养和计数课件（共62张PPT）

(共62张PPT)
1.2 微生物的培养技术及应用
微生物的选择培养和计数
新教材 人教版 选择性必修三
【教学过程】
Teaching Process
1.概念图
3.教学总结、综合
2.课堂教
学内容
4.课堂练习巩固
典型习题
规律总结
微生物的计数
探究 实践
微生物的选择培养
从社会中来
提供合适的营养和环境条件
确保其它微生物无法混入
培养基
无菌技术
科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶
聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。
1973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。
美国黄石公园
那么，如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？
筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
（1）自然界中微生物的筛选
筛选原则：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
耐寒微生物
耐热微生物
石油分解菌
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
（2）实验室中微生物的筛选
人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度、和pH），同时抑制或阻止其他微生物的生长。
①选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
加入青霉素的培养基
不加氮源的无氮培养基
不加含碳有机物的无碳培养基
分离自养型微生物
分离固氮菌
分离酵母菌、霉菌等真菌
分离金黄色葡萄球菌
分离能消除石油污染的微生物
加高浓度食盐
石油是唯一碳源
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
影印法转移加氨苄青霉素的培养基中培养
具有氨苄青霉素抗性的菌落
完全培养基培养
没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰
②怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌
（2）实验室中微生物的筛选
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。
讨论：
1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？
设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来
③选择培养基配方的设计
（2）实验室中微生物的筛选
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
1：
尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。
讨论：
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？
这种培养基与普通培养基相比，只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。
③选择培养基配方的设计
（2）实验室中微生物的筛选
1：
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基一
培养基二
③选择培养基配方的设计
（2）实验室中微生物的筛选
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
2：
讨论：
1.从物理性质看两种培养基属于哪类？依据是什么？培养基的主要用途是什么？
都属于固体培养基。依据是添加了凝固剂琼脂，且比例为1.5%-2%。培养基的主要用途是分离、鉴定、计数。
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基一
培养基二
③选择培养基配方的设计
（2）实验室中微生物的筛选
2：
讨论：
2.从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？
培养基二属于选择培养基；其可获得能分解尿素的微生物。
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基一
培养基二
③选择培养基配方的设计
（2）实验室中微生物的筛选
2：
讨论：
3.两种培养基中共有哪些成分？哪些作为碳源、氮源？
共有成分：
碳源、氮源、无机盐、水
培养基一的碳源为_______，氮源为_______；
培养基二的碳源为_______，氮源为_______；
牛肉膏
蛋白胨
葡萄糖
尿素
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
项目 选择培养基 鉴别培养基
原理
用途
举例
图示
3：选择培养基和鉴别培养基的比较
（2）实验室中微生物的筛选
一.微生物的选择培养和技术
1.选择培养基
3：选择培养基和鉴别培养基的比较
项目 选择培养基 鉴别培养基
原理 加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质 加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应
用途 培养、分离出目标微生物 鉴别目标微生物
举例 培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌 可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈黑色)
图示
一.微生物的选择培养和技术
尿素分解菌
大肠杆菌
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
（1）选择培养基的作用
分离并计数某种微生物的数量（例如，能分解尿素的细菌）。
稀释涂布平板法：必须要对土样充分稀释后，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。
（2）微生物选择培养获取纯培养物的方法
对土样充分稀释后，将菌液涂布到制备好的选择培养基上，即稀释涂布平板法。
1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？
分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物
计数：测定分解尿素的细菌的数量
稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
注意：稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。包括系列稀释（梯度稀释）和涂布平板两个步骤
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
方法：稀释涂布平板法
①梯度 稀释
方法：稀释涂布平板法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
铲取土样，将样品装入纸袋中
将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。
1mL
1ⅹ10
90mL无菌水
1ⅹ107
1ⅹ106
1ⅹ103
1ⅹ102
1ⅹ104
1mL
1mL
1mL
1mL
9mL无菌水
1mL
1ⅹ105
取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。
取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌
A
B
B
取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。
将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。
将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。
用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
注意：各梯度分别涂布3个平板（重复实验）1个不涂布作空白对照。
注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。
②涂布平板
方法：稀释涂布平板法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
1ⅹ107
C
D
E
F
恒温培养箱
稀释103倍
稀释104倍
稀释105倍
空白对照
细菌一般稀释倍104、105、106
待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。
③菌落培养
方法：稀释涂布平板法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
一.微生物的选择培养和技术
3.微生物的数量测定
微生物的数量测定
稀释涂布平板法
显微镜直接计数法
间接计数法
直接计数法
比浊法
④数量测定
方法：稀释涂布平板法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
间接计数法
原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
A
④数量测定
方法：稀释涂布平板法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
间接计数法
选择30-300个菌落的平板进行计数；
每个稀释度至少取3个平板取其平均值；
统计的菌落往往比活菌的实际数目低；
统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；
恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
计数原则:
当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落
B
分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。
恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
④数量测定
方法：稀释涂布平板法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
间接计数法
C
如何从平板上的菌落数推测出每克（每ml）样品中的菌落数？
统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌 落数的平均值，然后按公式进行计算。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，
M代表稀释倍数。
例1.两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释 倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1.甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。
2.乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）
乙：其中一个平板计数结果与其他两个相差太大，操作过程可能出现了错误。
一.微生物的选择培养和技术
例2.某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的细菌数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）。（ ）
A. 2.34×108 B. 2.34×109
C. 234 D. 23.4
B
每克样品中含菌数 = × 稀释倍数
某一稀释度下平板上平均菌落数 n
涂布平板时所取稀释液的体积 V
（每毫升原液含菌数）
一.微生物的选择培养和技术
方法1：比浊法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
也是一种直接计数法，能快速地测定菌悬液中细胞数量。由于菌悬液中的单细胞微生物的细菌浓度与光密度成正比，与透光度成反比，因此可以借助分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，进而将未知细胞的菌悬液的光密度与已知细胞数的相比，就可以换算出未知菌悬液所含的细胞数。
原理
酵母菌是属于真核生物，可以用血细胞计数板对其进行种群数量的计数。血细胞计数板只适用于真核细胞的计数。要对细菌（原核细胞）进行计数则需要细菌计数板。
血细胞计数板和细菌计数板有没有却别？
显微镜直接计数法（计数板计数法）
血细胞计数板和细菌计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
原理
它们的区别就是计数室的高度不同，细菌计数板计数室的高度是0.02 mm2。
故细菌计数板计数细菌的计算是：
细菌细胞个数/mL=
每个小方格平均细胞数×400
2×10-5
×稀释倍数
0.02mm3=0.02×10-3cm3=2×10-5mL
血细胞计数板和细菌计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
显微镜直接计数法（计数板计数法）
原理
计数板计数法、比浊法 都无法区分死菌和活菌
(1)血细胞计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
计数池
计数池
计数室
1mm
0.1mm
每块计数板由H形凹槽分为两个同样的计数池。
每个计数池分为9个大方格，其中间的一大方格又称为计数室，微生物的计数就在此大方格中进行。
每个计数室面积1mm2，液体高度0.1mm，所含液体体积为0.1mm3。
(1)血细胞计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
计数室
16个中方格
25个中方格
25个小方格
16个小方格
16×25
一个计数室有
小方格：400，每个小方格的面积：1/4000mm2。
25×16
每个计数室（大方格）共4000个小方格，总体积为0.1mm3。
(1)血细胞计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
每个计数室（大方格）共400个小方格，总体积为0.1mm3。
16个中方格
25个中方格
16个小方格
25个小方格
(1)血细胞计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
对样方的计数原则是：
如何统计结果
思考：
(1)血细胞计数板
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
方格内+相邻两边及顶角（取多个方格求平均值）
16个中方格
25个中方格
16个小方格
25个小方格
酵母菌细胞个数/mL=
每个中方格平均细胞数×16
10-4
×稀释倍数
25
酵母菌细胞个数/mL=
每个小方格平均细胞数×400
10-4
×稀释倍数
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
(1)血细胞计数板
(2)抽样检测法
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
缺点：
①不能区分②不适于对运动细菌的计数。
③个体小的细菌在显微镜下难以观察。
①将盖玻片放在计数室上；
②吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行深入，多余的滤液用滤纸吸去；
③静置片刻，待酵母菌全部沉降到计数室底部，将血细胞计数板置于载物台上夹稳；
④观察并计数一个小方格内的酵母菌数量，估算试管中酵母菌的总量。
（方格内及相邻两边）
（取几个方格，然后求均值）
(2)抽样检测法
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
①从试管中析出培养液进行计数之前，为什么要将试管轻轻震荡几次？
事酵母菌分布均匀，以保证估算的准确性，减少误差。
不需要另设对照组，本实验的对照类型是自身对照。
②实验需要设置对照吗？为什么？
(3)思考讨论
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
③一般情况下，计数所得种群数量，比实际值大还是小？为什么？
会比实际要大。因为在计数所得的数据包含了死菌和活菌。
如何克服以上难题？
区分死菌和活菌。可采用台盼蓝对酵母菌进行染色。能被染成蓝色的则为死菌，不能被染色的则是活菌。在此条件下，计数酵母菌时，只需计数不被染色的酵母菌。
(2)抽样检测法
方法2：显微镜直接计数法
一.微生物的选择培养和技术
2.微生物的选择培养
直接计数法
二.探究 实践
1.提出问题
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？
每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？
利用以尿素作为唯一碳源的选择培养基，可以分离。
自变量：________________________
因变量：__________________________
无关变量：______________________________
尿素
能分解尿素细菌的生长情况
培养时间、培养基的pH、温度等
2.做出假设
3.实验设计
实验思路
预测实验
土壤
取样
制备
培养基
样品稀释
与取样涂布
微生物的
培养与观察
（1）实验目的
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。
（2）实验原理
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分离尿素的细菌。
CO(NH2)2+H2O
脲酶
2NH3+CO2
常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
①提供无机盐；
②调节pH。
①培养基的制备
制备选择培养基（尿素为唯一氮源）
制备牛肉膏蛋白胨培养基
对照作用
思考1：为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？
注意事项：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。
②土壤取样
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
A 取样地点要求：酸碱度接近中性的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长。
B 取样过程：铲去表层土（一般3cm左右）。细菌绝大部分分布在距地表3～8cm的土壤层。
测细菌数：一般用104、105、106稀释液。
测放线菌：一般用103、104、105稀释液。
测真菌数：一般用102、103、104稀释液。
③样品的稀释与涂布平板
不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
B
A
C
在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？
选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养；
例如可以将1×103-1×107倍稀释的稀释液分别涂布平板上培养，以保证能从中选择出菌落数为30-300的平板进行计算。
思考2:
③样品的稀释与涂布平板
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
组别 具体组别 具体操作 作用
实验组 实验组1 涂布接种的选择培养基 三次重复排除偶然因素对实验结果的影响，用以分离并计数能分解尿素的细菌。
实验组2 涂布接种的选择培养基 实验组3 涂布接种的选择培养基 实验组4 涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 实验组4与实验组1 、2、3组对比用以验证选择培养基是否具有选择作用。
对照组 对照组1 不涂布接种的选择培养基 对照组1与实验组1 、2、3组对比用以验证选择培养基中是否含有杂菌。
对照组2 不涂布接种的牛肉膏蛋白胨培养基 对照组2与实验组4 对比用以验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌。
实验结果 实验组1、2、3分离得到尿素分解菌的单菌落； 第4组得到多种菌落； 第5、6组正常情况下无菌落。 注意：本实验实验组和对照组设计如下：
③样品的稀释与涂布平板
（3）实验步骤
二.探究 实践
每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。
③样品的稀释与涂布平板
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
③样品的稀释与涂布平板
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
注意事项：本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。
观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
一般来说，在相同的培养条件
下，同种微生物表现出稳定的菌落
特征，如形状、大小和颜色等。
④微生物的培养与观察
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
A
B
C
每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。
对土壤中分解尿素的细菌分离和计数
⑤结果分析与评价
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
A
说出下列各组培养基目的
3组接种得选择培养基：
1组接种的牛肉膏蛋白胨培养基：
判断选择培养基是否具有选择作用。
每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。
验证选择培养基中是否含有杂菌。
⑤结果分析与评价
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
A
说出下列各组培养基目的
不接种的选择培养基：
不接种的牛肉膏蛋白胨培养基：
验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌。
说出以下现象对应的结果分析。
现象 分析
未涂布培养基上无菌落生长
未涂布培养基上有菌落生长
牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数木
培养基未被杂菌污染
培养基被杂菌污染
选择培养基具有选择作用
⑤结果分析与评价
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
B
结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
提示：如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。
⑤结果分析与评价
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
C
提示：如果得到了两个或多个菌落数为30～300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。
⑤结果分析与评价
（3）实验步骤
二.探究 实践
4.进行
实验
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
你是否获得了某一稀释度下菌落数为30~300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？
D
你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大,可能是什么原因引起的？
提示：如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。
E
本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。
二.探究 实践
5.进一
步探究
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
（1）原理
细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。
本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。
二.探究 实践
5.进一
步探究
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红：
①液体培养基可以直接看液体的变色情况；
②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。
（2）方法
二.探究 实践
5.进一
步探究
探究 实践：土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
CO(NH2)2+H2O
脲酶
CO2+2NH3
pH升高，酚红指示剂变红
脲酶阴性
脲酶阳性
（3）土壤中分解尿素的细菌的鉴定
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。
是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红-美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。
到生活中去
测定饮水中大肠杆菌数量的方法：
一、概念检测
1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌。判断下列相关表述是否正确。
（1）这种培养基是一种选择培养基。（ ）
（2）利用这种石油降解菌可以降解石油。修复土壤。（ ）
（3）相对于未被污染的土壤,从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌。（ ）
√
√
√
练习与应用（P20）
一、概念检测
2.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数,原因是( )
A. 菌落中的细菌数目是固定的
B. 平板上的一个菌落就是一个细菌
C. 通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同
D. 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D
练习与应用（P20）
二、拓展应用
1.反刍动物，如牛和羊具有特殊的器官一瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。
提示：反刍动物的瘤胃中有大量的微生物，其中就有分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基，还应该参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
练习与应用（P20）
二、拓展应用
2.地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中 40% ~ 60% 能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用精杆等生产酒精，用纤维索酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加
入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合
物；而当纤维索被纤维素分解菌分解后，复
合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌
为中心的透明圈(如下图所示)。请回答下列
问题。
练习与应用（P20）
二、拓展应用
（1）现在要从土壤中分离纤堆素分解菌,请你给出详细的实验方案。
（2）你打算到什么环境中去寻找纤维素分解菌？为什么？
（3）有同学说,可以把滤纸埋在土壤中,经过一段时间后,再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。
（1）可以参考本节“探究·实践”中的设计思路进行设计。
练习与应用（P20）
（2）纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中，采集土样时，可以选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土等。
（3）这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境,腐烂的滤纸上很可能有纤维素分解菌。