(共21张PPT)
第2节 动物细胞工程
皮肤的自体移植
灰绿色
小面积烧伤:患者通过切除 + 植皮(自身)后恢复
1)使用他人皮肤如何?
患者自身皮肤的不够用,如何解决?
大面积烧伤?
2)培养自身细胞?
目前,科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养,以获得适合临床上使用的人造皮肤。
从社会中来
1、概念:
从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适当的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
2、目的:
获得细胞或细胞产物; 不能获得完整动物个体。
3、原理:
细胞增殖(有丝分裂)
4、实例:
克隆皮肤
皮肤烧伤
那么,获得这些细胞或细胞产物的培养条件和具体过程又是怎样的?
动物细胞培养
一、动物细胞培养的条件
欲使动物细胞体外培养顺利进行,应营造怎样的环境?
阅读p43-44
思考讨论
糖类、氨基酸、
无机盐、维生素
… …
无菌、无毒的环境
适宜的温度、pH和渗透压
适宜的气体环境
+
合成培养基
血清
人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚,在使用合成培养基时,通常需要加入血清等一些天然成分。
培养动物细胞一般使用液体培养基,也称培养液。
一
一、动物细胞培养的条件
将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制的培养基。
如何维持无菌、无毒的环境?
适宜的温度、pH分别是多少?
适宜的气体环境包括?分别有什么作用?如何保持该气体环境?
对培养液和所有培养用具进行灭菌处理、无菌环境下操作
定期更换培养液,清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
温度:(36.5±0.5)℃; pH:7.2-7.4
95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱;
O2是细胞代谢所必需的,CO2的作用是维持培养液的pH;
培养皿或松盖培养瓶。
一
一、动物细胞培养的条件
思考讨论
细胞贴壁
接触抑制
二、动物细胞培养的过程
任务:阅读教材P44-45并结合动物细胞培养的定义,相关关键词和箭头表达出一般过程。
动物细胞实验室培养体系
抗生素
培养瓶
扁平:较大的贴附面积
瓶塞:透气
材质:无色,无毒,透明度高
CO2培养箱
37 ℃ ,5%CO2 ,95%。
定期消毒(90 ℃ ,14 h)
酚红
培养基
基础营养
血清
一
动物细胞培养过程
用机械法或用胰蛋白酶、
胶原蛋白酶等处理
原代培养
加培养液 制成细胞悬液在培养皿 或培养瓶内
悬浮生长
贴壁生长
(大多数)
④接触抑制
细胞分裂受阻
解决
传代培养
分瓶
培养
取动物组织
分散成单个细胞
②制成细胞悬液,分瓶培养。
①收集细胞
①缺乏营养物质、
②有害代谢废物积累
③细胞密度过大等
分裂、增殖旺盛
细胞充分接触营养物质
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
剪碎
细胞悬浮液
加培养液
单个细胞
胰蛋白酶
动物细胞培养过程
黏附
贴壁
铺展
细胞贴壁(细胞生长、分裂)
培养
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
剪碎
细胞悬浮液
加培养液
单个细胞
胰蛋白酶
动物细胞培养过程
细胞停止生长
密度抑制
分瓶培养
胰蛋白酶
原代培养
细胞贴壁(细胞生长、分裂)
培养
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
剪碎
细胞悬浮液
加培养液
单个细胞
胰蛋白酶
接触抑制
动物细胞培养过程
10 50代左右
癌变
衰老死亡
传代培养
细胞停止生长
分瓶培养
胰蛋白酶
原代培养
细胞贴壁(细胞生长、分裂)
培养
动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
剪碎
细胞悬浮液
加培养液
单个细胞
胰蛋白酶
动物细胞培养过程
观看视频:动物细胞的培养
资料
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
原理
培养基性质
培养基特有成分
培养过程
培养目的
相同点 获得细胞或细胞产物
常用固体培养基
新植株
葡萄糖、动物血清
常用液体培养基
细胞增殖
细胞的全能性
蔗糖、植物激素
1.培养过程中细胞都进行有丝分裂,不涉及减数分裂;
2.均需无菌操作,需要适宜的温度、pH等条件
思考.比较
原代培养、传代培养
脱分化、再分化
动物细胞培养 与 植物组织培养
干细胞培养及其应用
动物和人体内仍然保留着少数具有分裂和分化能力的细胞,叫做干细胞。
早期胚胎
1.种类及存在部位
胚胎干细胞(ES细胞) 成体干细胞
存在 部位 ①
组织特异性
任何一种类型
特性 具有分化为成年动物体内的 ② 的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能 具有③ ,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力
三、干细胞培养及其应用
成体组织或器官,包括骨髓中的造血干细胞、神经系统中的神经干细胞和睾丸中的精原干细胞
免疫排斥
神经组织损伤
(1)造血干细胞移植,可以治疗 及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病。
(2)可以用于治疗人类的某些顽症:如神经干细胞在治疗 和神经系统退行性疾病(如帕金森病、阿尔茨海默病等)方面有重要的应用价值。
(3)诱导多能干细胞(iPS细胞):诱导过程无须破坏胚胎,且iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞,因此移植过程理论上可以避免 反应。
三、干细胞培养及其应用
2、干细胞应用:
白血病
2、干细胞应用:
体外诱导小鼠成纤维细胞
诱导多能干细胞
iPS
临床治疗人类疾病
多种体细胞
定向诱导分化
如:白血病、帕金森病、阿尔茨海默病等
三、干细胞培养及其应用
移植
取成纤维细胞等
iPS细胞
转入相关因子
细胞发生转化
分化
胰岛细胞
神经元
血细胞
肠上皮细胞
心肌细胞
肝细胞
病人
iPS细胞用于治疗人类疾病示意图
无菌、无毒
营养
温度、pH和渗透压
气体环境
制备细胞悬液
原代培养
传代培养
动物细胞培养
动物细胞培养的条件
动物细胞培养的过程
干细胞的培养和应用
干细胞的种类、特点及应用
iPS细胞的培养和应用
课堂小结
1.判断下列有关动物细胞培养的表述是否正确。
(1)培养环境中需要O2,不需要CO2 。( )
(2)细胞要经过脱分化形成愈伤组织。( )
(3)培养液中通常含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清( )
(4)培养瓶中的细胞需定期用胰蛋白酶处理,分瓶后才能继续增殖( )
×
√
×
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练习与应用
2.干细胞有着广泛的应用前景。下列相关叙述错误的是( )
A.干细胞是从胚胎中分离提取的细胞
B.造血干细胞可以分化为各种血细胞
C.不同类型的干细胞,它们的分化潜能是有差别的
D.由iPS细胞产生的特定细胞,可以在新药的测试中发挥重要作用
A