生物人教版（2019）选择性必修3 1.2微生物的培养技术及应用（共52张ppt2个视频）

(共52张PPT)
第一章 发酵工程
1.2微生物的培养技术及应用
固体培养基
盛有液体培养基
1.2微生物的培养技术及应用
第一课时 微生物的基本培养技术
培养基的配制
无菌技术
01
02
微生物的纯培养
03
学习目标：
1.概述培养基的营养构成。
2.概述无菌技术的原理、常用设备和方法。
3.通过进行酵母菌的纯培养，说明微生物纯培养的基本操作要求，初步掌握无菌操作、倒平板和平板划线的基本技能。
问题探讨
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
酸奶
①制作工具和原料灭菌
②接种单一的菌种
③控制发酵条件
④避免杂菌进入
这需要应用无菌技术和微生物的培养技术
_____________，______________________ _是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。
防止杂菌污染
获得纯净的微生物培养物
微生物的基本培养技术
确保其它微生物无法混入
——无菌技术
提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件
——培养基
将需要的微生物分离出来
——纯培养
难以用肉眼观察到的微生物该如何培养呢？
01 培养基的配制
微生物
1.微生物的概念：
_____________________________的统称。
难以用肉眼观察的微小生物
原核生物 细菌：蓝细菌、大肠杆菌、乳
酸菌等；放线菌：链霉菌等
原生生物 (如草履虫、衣藻等)
真菌 (如酵母菌、霉菌等)
病毒
病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒
真核生物
草履虫
本章提及的微生物主要指用于发酵的细菌和真菌。
01 培养基的配制
1.培养基概念：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.作用：
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
3.培养基的类型:
(1)按物理性质：液体培养基、固体培养基。
(2)按化学组成：天然培养基、合成培养基。
(3)按目的用途：选择培养基、鉴别培养基。
微生物的分离、鉴定、活菌计数
固体培养基
液体培养基
扩大培养、工业生产
有无 凝固剂琼脂
半固体培养基
观察微生物的运动、分类鉴定
划分标准 培养基种类 特点 用途
物理性质
化学成分
用途
不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
工业生产
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
培养基成分明确
分类、鉴定
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
鉴别不同种类微生物
选择培养基
液体培养基
半固体培养基
固体培养基
天然培养基
合成培养基
鉴别培养基
观察微生物的运动、
分类鉴定
混合样品
选择培养基上部分菌种才能生长
普通培养基上所有菌种都能生长
选择培养基
鉴别培养基
目的菌
目的菌周围出现特殊现象
非目的菌
非目的菌周围无明显现象
培养基中加氨苄青霉素
具有抗氨苄青霉素能力的菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌
培养基+氨苄青霉素
培养基
没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰
怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌
单个微生物在培养基表面或内部形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
4.菌落:
01 培养基的配制
菌落
一个菌落就是一个种群
菌落是鉴定菌种的重要依据
念珠菌
霉菌
酵母菌
放线菌
强调：不同种类微生物的菌落特征各有特点,但彼此之间存在一定的相似性;同种微生物的菌落特征受培养时间、营养物质的含量与种类等影响也会有所差异。
01 培养基的配制
5.培养基的营养构成:
（1）基本成分
碳源、氮源、无机盐、水等营养物质
组分 含量 提供的主要营养物质
牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10g 氮源和维生素等
NaCl 5g 无机盐
H2O 定容至1000mL 水
1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养结构
称取去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g琼脂，用蒸馏水定容至1000mL。
酵母菌纯培养培养基的配方
1.按物理性质划分上述两种培养基的种类：
2.上述两种培养基的营养构成。
培养酵母菌的培养基是固体培养基，而牛肉膏蛋白胨培养基是液体培养基。
都含有水、碳源、氮源、无机盐和维生素等，其中培养酵母菌的培养基中主要由糖类提供碳源，蛋白质提供氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。
成分 含义 来源 功能
碳源 提供碳元素的物质 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-等含碳无机物 ①构成细胞物质和一些代谢产物；
②有机碳既是碳源又是能源
有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、牛肉膏和蛋白胨等 氮源 提供氮元素的物质 无机氮源：N2、NH3，氨盐、硝酸盐等 将无机氮合成含氮的代谢产物
有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等 合成蛋白质、核酸和含氮的代谢废物
水 生物体内含量最多的化合物 外界摄入(培养基、代谢产物) ①良好的溶剂，参与化学反应；
②维持生物大分子结构的稳定
无机盐 提供除碳、氮以外的元素，包括大量元素和微量元素 无机化合物 ①提供无机营养；
②调节培养基的pH；
③维持渗透压
牛肉膏、蛋白胨来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质
自养微生物
异养微生物
微生物 碳源 氮源 能源
蓝细菌 CO2 光能
硝化细菌 NH3 NH3的氧化
根瘤菌 N2 有机物
大肠杆菌 糖类、蛋白质等有机物 蛋白质等 有机物
自养
微生物
异养
微生物
CO2
糖类等有机物
下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？
编号 ① ② ③ ④ ⑤
成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O
含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL
此培养基可用来培养自养型微生物。
圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供有机碳源，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。
为什么培养基需要氮源？
旁栏思考
01 培养基的配制
氮源是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
培养微生物时，培养基中是否必须添加碳源和氮源？并说明理由。
例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。
不一定
根据碳/氮源的种类判断微生物同化作用是自养还是异养
a.异养型微生物的碳源为：
b.自养型微生物的碳源为：
含碳有机物
含碳无机物
微生物的代谢类型
同化类型
异化类型
自养型
异养型
厌氧型
需氧型
兼性厌氧型
是指生物体把从外界环境中获取的营养物质转变成自身的组成物质或能量储存的过程。即生物体利用能量将小分子合成为大分子的一系列代谢途径，是生物新陈代谢当中的一个重要过程。
是指机体将来自环境的或细胞自己储存的有机营养物的分子（如糖类、脂类、蛋白质等），通过一步步反应降解成较小的、简单的终产物（如二氧化碳、乳酸、乙醇等）的过程。。
01 培养基的配制
主要指生长因子（微生物生长所必须的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物）
5.培养基的营养构成:
（2）特殊需求
满足微生物对 、 、 的需求。
特殊营养物质
pH
O2
①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加 ；
维生素
②培养霉菌时，需要将培养基调至 ；
酸性
中性或弱碱性
④培养厌氧微生物时，需要提供 的条件。
无氧
③培养细菌时，需要将培养基调至 ；
种类：维生素、氨基酸、碱基、嘌呤、嘧啶、胺类等
来源：酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等
(1)目的要明确：不同微生物需求不同，根据微生物的种类、培养目的进行配制。
(2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。
(3)pH要适宜：不同微生物适宜生长的pH范围不同，可在培养基中添加缓冲剂维持pH稳定。　　　
6.培养基的配制原则
01 培养基的配制
02 无菌技术
消毒
灭菌
①.消毒：是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
②.灭菌：是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
操作的空间、操作者的衣着和手
用于培养微生物的器皿、接种用具和培养基
芽孢是某些细菌在营养条件缺乏时，在菌体内形成的含水量低、抗逆性强的休眠体；
孢子是脱离亲本后能直接或间接发育成新个体的生殖细胞。
-----与消毒最本质区别
1.概念：
____________ _的培养微生物的操作技术。
防止杂菌污染
还能有效避免操作者被微生物感染。
2.内容：
主要方法 应用范围
巴氏消毒法 ℃消毒30 min或 ℃处理15 s或 ℃处理10～15 s 、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体
煮沸消毒法 100 ℃煮沸 min 家庭餐具等生活用品
紫外线消毒 30 W紫外灯照射 min(损伤细菌的DNA)
化学药物消毒 擦拭实验者双手
水源
牛奶
63～65
72～76
5～6
30
体积分数为70%～75%的酒精
氯气
接种室、接种箱或超净工作台
80～85
02 无菌技术
消毒
02 无菌技术
灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽灭菌锅内100kPa、121 ℃下维持15-30min.
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性
优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。
基本保持培养基的营养成分不被破坏。
对象：培养基等。
注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
高压蒸汽灭菌锅
02 无菌技术
灭菌
干热灭菌
干热灭菌箱
干热灭菌箱内160-170 ℃下加热2-3h.
原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等
对象：适用于耐高温，需保持干燥的物品。
玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器)
金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌
02 无菌技术
灭菌
灼烧灭菌
接种环灼烧灭菌
效果：最彻底
原理：使微生物燃烧
对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位。
酒精灯火焰灼烧（充分燃烧层）
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
日常生活用品
100 ℃煮沸5～6 min
巴氏消毒法
不耐高温的液体
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
化学药剂
生物活体、水源等
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线
紫外线照射30 min
灼烧灭菌
接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h
湿热灭菌
培养基、培养皿等,生产和实验室常用
高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min
接种室、接种箱，超净工作台
小结：消毒与灭菌
消毒和灭菌的主要方面
对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒
将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
消毒和灭菌工作之后
避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
为避免周围微生物污染，实验操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰旁进行。
02 无菌技术
1.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是什么？
在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。
2.为什么体积分数为70%～75%的酒精杀菌效果最好？
若酒精浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；若酒精浓度过低，杀菌能力减弱。
以下物品所采用的灭菌或消毒方法依次是
培养基 实验室
培养皿 牛奶
接种环
实验操作者的双手
高压蒸汽灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
化学消毒（酒精）
紫外线消毒
巴氏消毒法
3.下列有关实验的操作中,错误的是( )
①加热消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢；
②接种操作要在酒精灯火焰附近进行；
③对于不耐高温的液体,如牛奶,用巴氏消毒法消毒；
④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄都进行灭菌；
⑤培养基可采用高压蒸汽灭菌；
⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌；
⑦接种环应采用火焰灼烧的方式灭菌
A.①③ B.②④ C.⑤⑦ D.④⑥
答案：D解析：煮沸5~6min可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢,①正确;酒精灯火焰附近存在一个无菌区,为了实现无菌操作,接种操作要在酒精灯火焰附近进行,②正确;对于牛奶这种不耐高温的液体可用巴氏消毒法消毒,③正确;家庭制作葡萄酒利用的是附着于葡萄皮表面的野生型酵母菌,所以葡萄不进行灭菌,以免杀死酵母菌,④错误;培养基通常用高压蒸汽灭菌的方法进行灭菌,⑤正确;指示剂和染料混有微生物,故需灭菌,⑥错误;接种环应采用火焰灼烧的方式灭菌,即用灼烧灭菌法进行灭菌,⑦正确。故选D。
D
D
教材P10〔相关信息〕
生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能够寄生于多种细菌体内，使细菌裂解，因此可以用它们来净化污水、污泥。
4.(2023·山西阳泉高二期中)无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。下列说法正确的是
A.在100 ℃条件下煮沸5～6 min属于灭菌方法
B.对接种室、涂布器、操作者的衣着和双手只需要进行消毒处理
C.培养基可借助高压蒸汽灭菌锅或干热灭菌箱进行灭菌
D.利用某些寄生于细菌体内的微生物裂解细菌来净化污水属于生物消毒法
传统发酵通常直接利用原材料中天然酵母菌
工业生产通常使用人工选育的高活性酿酒酵母
如何获得纯种酵母菌？
03 微生物的纯培养
03 微生物的纯培养
纯培养物
培养物
纯培养
在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体
获得纯培养物的过程
由单一个体繁殖所获得的微生物群体
配制培养基
灭菌
接种
分离
培养
概念
纯培养的步骤：
03 微生物的纯培养
实验：
——酵母菌的纯培养
平板划线法、稀释涂布平板法
(1)原理：
微生物群
分散或稀释
单个细胞
单个菌落
繁殖
(2)获得单菌落的方法：
单个微生物在培养基表面或内部形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤：
—①制备培养基
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤：
—②灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞
包上牛皮纸，并用皮筋勒紧
压力100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15 ~ 30min
取5 ~ 8套培养皿
培养皿叠成一束
用几层牛皮纸包紧
放入干热灭菌箱内，160 ~ 170℃灭菌2h
—①制备培养基
—②灭菌
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤：
—③倒平板
注意
待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
防止瓶口微生物污染培养基
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以避免培养基中的水分过快挥发。
温度过高容易烫伤，低于50℃琼脂会凝固。
避免杂菌污染。
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤：
—④接种和分离酵母菌
平板划线法
①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红
⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。
⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞
②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞
③试管口通过火焰
④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。
划3个平板（重复实验）；1个不划线（空白对照）
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
平板划线法注意事项
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤：
第1区划线
接种环灭菌
第2区划线
接种环灭菌
第3区划线
接种环灭菌
接种环灭菌
1
2
3
4
5
分区划线法（最常用）
1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；
2.划线首尾不能相接；
3.每次划线前灼烧接种环进行灭菌；
4.划线操作结束后，仍需灼烧接种环。
连续划线法
划线5次，接种环灭菌6次
3.在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
4.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
5.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
6.为什么不能将最后一次的划线与第一次的划线相连？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
将聚集的菌体逐步稀释，以便获得单个菌落。
1.为什么再操作的第一步要灼烧接种环？
2.为什么从第二次划线开始，每次划线之前都要灼烧接种环？
杀死接种环上可能存在的微生物
避免残留的菌种污染环境和操作者
如果最后一次划线和第一次划线相连，则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。
取菌种前
杀死上次划线接种环上残留的菌种，使下一次划线时菌种来源于末端
平板划线法常考问答
划线前
接种结束后
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤：
—⑤培养酵母菌
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养24~48h。
设置未接种平板组的意义是什么？
对照；通过观察未接种平板是否有菌落存在以确定培养基是否被污染或灭菌是否彻底。
03 微生物的纯培养
(4)结果分析与评价：
未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染或灭菌不彻底；若无，则说明培养基未被污染且已彻底灭菌，培养基可以使用
你是如何记录实验结果的？
提示（可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等）
在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？
（2）在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？这些菌落的颜色、形状和大小是否一致？如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗？
在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点， 则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。
有一段时间，水果“酵素”风靡各地。水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水,密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。
评估论点的可信程度
思维训练
水果“酵素”是什么？
其制作原理是什么？
其中可能含有哪些成分？
其是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？
其中的所有成分都有益于人体健康吗？
“酵素”就是“酶”的另一种说法。
其制作是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。
其中可能有糖类(包括一些简单的糖和膳食纤维等)、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分。
不存在它独有的、特殊的营养物质。
其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。
1. 微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。
（1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。（ ）
（2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。 （ ）
（3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。（ ）
×
√
×
2.日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？
干制——降低食品的水分含量；
腌制——通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；
低温储存——通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。
课后练习题
1.某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
（1）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有________________。
（2）“将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步操作？
（3）从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
培养皿和培养基
接种
洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。
可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。
课后练习题
2. 某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为 210 r/min， 230 r/min和250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。
（1）摇床转速不同，意味着培养条件有什么不同？
培养液中02含量不同。
（2）从图中数据你可以得出什么结论 其原因是什么
培养液中02含量越高，酵母菌种群密度越大。
这时候已经达到了环境容纳量。
（3）为什么培养8h后，其中2个锥形瓶中酵母菌的种群密度基本达到稳定
课后练习题
3.(2023·海南三沙高二期末)下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是
A.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染
B.倒置平板可防止培养皿皿盖上的冷凝水落入培养基
C.倒平板时将培养皿的皿盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿
D.检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒
　温培养箱中培养
√
倒平板时用食指和拇指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基倒入培养皿，立即盖上皿盖，C错误。
课后练习题
b、a、e、f、c、g、d
4.下列接种过程，正确的顺序是 。
课后练习题
5.下列关于制备固体培养基时倒平板的叙述中，正确的是( )
A.倒好的培养基和培养皿要进行灭菌处理
B.应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C.为防止微生物落入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作
D.倒好培养基的培养皿，要立即将平板倒过来放置
√
答案：C解析：本题考查培养基的制备过程。培养基和培养皿都应该在倒平板之前进行高压蒸汽灭菌，A错误；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；倒好培养基的培养皿，等培养基冷却凝固后，再将平板倒过来放置，D错误。
课后练习题
微生物的基本培养技术
无菌技术
煮沸消毒法
纯培养
培养基
固体培养基
接种分离
平板划线法
稀释涂布平板法
种类
液体培养基
营养
水、碳源、氮源、无机盐
消毒
巴氏消毒法
灭菌
湿热灭菌
干热灭菌
灼烧灭菌
化学消毒法
紫外线消毒法
课后练习题
类型 适用范围 操作方法
消 毒
灭 菌
核心归纳
较为温和理化方法，杀死部分微生物
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
煮沸消毒法
日常生活
100 ℃煮沸5～6 min
巴氏消毒法
不耐高温的液体
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
化学药剂
生物活体、水源等
用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线
紫外线照射30 min
灼烧灭菌
接种环、接种针、涂布器、试管口、瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
干热灭菌
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h
湿热灭菌
培养基、无菌水
高压蒸汽灭菌锅内,
100 kPa,温度121 ℃
接种室、接种箱，超净工作台
核心归纳
1. 培养基的种类：按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。
2. 培养基的基本化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源等。培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。在培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加维生素；在培养霉菌时，一般需要将培养基调至酸性；在培养细菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性；在培养厌氧微生物时，需要提供无氧的条件。
3.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。
4.培养基灭菌常采用湿热灭菌法，培养皿灭菌常采用干热灭菌法，接种环和涂布器灭菌常采用灼烧灭菌法。
核心归纳
5.微生物的纯培养是获得纯培养物的过程
6.微生物的纯培养过程包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养。
7.一个菌落就是一个种群。
8.平板划线操作的第一步是灼烧接种环，目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。