东阳二中高三生物选修1练习（1）
图片预览
文档简介
东阳二中高三生物选修1练习（1）
1．《大肠杆菌的培养和分离》实验前，所用的三角瓶口或试管口都要先塞上棉塞，理由是________________ _____________,再经高压蒸汽灭菌才能使用。制作合格的棉塞的标准是________________ ___________。在配制培养基时，除考虑无菌外，一般要测___ ____，大肠杆菌要求在________ ___的环境下培养。配制LB固体培养基时，应在_____ _______的培养基中，加入______________。将上述培养基分别加到三角瓶、试管或培养皿中时，应用__________，并注意___________ ___,否则________________________。制作斜面培养基时，其斜面长度应不超过于试管长度的_____________为宜。
2．回答有关“大肠杆菌的培养和分离”的问题：
（1）大肠杆菌的扩大培养需要用LB液体培养基50ml，其配方为：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、氯化钠0.5g、水50ml。培养基中加入一定量的氯化钠，目的是 。
（2）在制备培养基时，有时还需要调节酸碱度，这一步操作应该在灭菌 。（填“前”或“后”）
（3）用划线法在LB固体平面培养基上分离大肠杆菌，当接种完成后，盖好培养皿盖，将培养皿 ，放在37℃恒温箱中培养12～24h，当看到划线末端出现
时，表明细菌已被分离。
（4）如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染？ 。
3．大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：
（1）常用稀释涂布平板法来测定大肠杆菌的数目，该方法先将LB固体培养基冷却到60℃,在_____ ______旁倒在培养皿里，凝固后形成平板；该方法中实际统计的是培养基上的___ __数目。此数据比实际值要____________（高、低），其原因是_____________________ ________实验完成后需要对培养基进行______________处理，然后才能倒掉。
（2）若要分离出纯净的大肠杆菌，还须将用____ ____挑取上述菌落，用___________方法进行分离。
4．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：
（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括 和各种器皿都必须是无菌的。将培养基倒入培养皿制备平板时一般需在 旁进行操作。
（2）在无菌条件下将土壤稀释，取样时尽量只取 。
（3）接种时常用玻璃刮刀在 培养基上采用 法进行分离。然后将接种后的培养皿 于37℃的恒温箱中培养。
（4）若培养基中存在有脲酶的细菌，其菌落周围会出现 ，这是由于尿素被分解产生氨，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力 。
（5）与LB全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中的菌落数 。
A. 多 B. 少 C. 相等 D. 几乎为零
5.从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从 等环境采集，培养厌氧菌的菌样应从 等采集。
（2）富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的微生物培养方法。对噬盐菌富集培养的培养基应是 的选择培养基；对高温淀粉酶的富集培养应选择 的选择培养基，并在 条件下培养。
（3）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生物的 等物质发生 。 灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法。
（4）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
获得图A效果的接
种方法是
，获得图B
效果的接种方法
是 。
6.微生物指的是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，绝大多数微生物是对人类有利的。请回答下列有关微生物的培养和分离的问题：
（1）在培养微生物时，培养基和各种器皿必须是无菌的，一般的灭菌方法是 。
（2）“大肠杆菌的培养和分离”实验中，先用LB 进行扩大培养，再在LB固体平面培养基上进行 分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的材料是 。在培养基上完成接种后，需将培养皿 放置，然后置于恒温箱中培养。
（3）尿素是 （物质）降解的产物，有一些细菌由于含有 酶，便可以通过降解尿素作为其生长的氮源。
（4）在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，对照实验的培养基是 ，实验组与对照组最后要观察并比较 的数目。
7.（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______温度和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
(7)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是 ⑦ 。
A．严格操作、多次重复 B．保证待测样品稀释的浓度比较合适
C．倒平板培养 D．计数所有菌落，取其平均值
(8)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等 ⑧ 对细菌进行初步的鉴定(或分类)。
8.微生物与人类的生活、健康有着密切的联系。请回答下列有关微生物的问题。
（1）无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有 灭菌、干热灭菌和 灭菌。在组织培养过程中通常利用 对外植体进行消毒。
（2）在果醋、泡菜的制作过程中，需要氧气的是 的制作；在制作果醋过程中，榨取的果汁非常浑浊，解决的方法是 。
（3）根据微生物的特点，可以利用相应的培养基进行分离或培养，例如用 培养基筛选能分泌脲酶的细菌；用 培养基培养苹果青霉，以提高果胶酶的产量。
（4）在微生物培养或分离过程，下列操作不恰当的是
A．在超净台中进行接种时应该关闭紫外灯 B．扩大培养时必需保证氧气的供应
C．控制液体培养基中营养物质的浓度 D．空白的平板培养基需进行无菌试验
（5）从土壤中分离能分解尿素的细菌时，通常在尿素培养基中添加酚红，用以指示脲酶的分泌情况，其原理是尿素被脲酶分解产生的 可以使酚红变色。
9.下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程：
请回答：
（1）灭菌常用_____________法，灭菌后，要待____________________时才能打开锅盖。
（2）倒平板和接种前要用__________________擦手。接种和划线前使用______________的方法对接种环灭菌。
（3）划线分离时，接种环在菌液中蘸取__________次。下图甲表示在平板培养基上的第一次和第二次划线，请在乙图中画出第三次划线。
（4）划线后在恒温培养箱中培养时，培养皿须
倒置，目的是_____________________。
（5）实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处
理？ 。
（6）植物组织培养过程中也要十分注意灭菌以及避免被杂菌污染，它的培养基成分中与大肠杆菌最大的区别是必须添加 ，该技术在繁殖名贵经济作物方面运用广泛，该技术具有 的特点。
10．在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数。
（1）右图是利用_ _分离法进行微生物接种。接种时，先将
_ _在明火上烧红后冷却，然后蘸取菌液在 培
养基上进行操作。如果出现 ，则表明细菌已被
分离。
(2)分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaCl、酚红、
琼脂糖、H2O。若用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述
_ _成分，并加入葡萄糖和_ _。配制好以后要用
进行灭菌。
(3)有脲酶的细菌菌落周围会出现 颜色的着色环带。三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为10-6的培养基中，得到以下统计结果：
甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248。
乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233。
丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、212和256，取平均值163。
在三位同学的统计中，只有 同学的统计是正确的。
11.下面是有关大肠杆菌的培养和分离实验，请回答：
（1）培养大肠杆菌时必须进行无菌操作。实验前所需的各种器材如三角烧瓶、培养皿等需要经过 法灭菌；实验操作过程中，实验操作者的双手事先要用
消毒，接种环需要用 法灭菌。
（2）配置培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入 作为营养物质，还需要考虑温度、 PH 、 等条件。
（3）大肠杆菌的培养和分离实验中，在LB液体培养基进行 ，在LB固体培养基上进行 。通常对获得的纯菌种可以依据 的形状、大小等特征进行初步的鉴定。
（4）微生物与人类的生活关系越来越密切，在制作果酒、果醋、泡菜的过程中，分别用到的主要微生物分别是 （ ）
A．酵母菌、乳酸菌、乳酸菌 B．酵母菌、醋酸菌、乳酸菌
C．乳酸菌、醋酸菌、酵母菌 D．酵母菌、乳酸菌、醋酸菌
12. 某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。
（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置
于经过 法灭菌处理的固体培养基
中，28℃振荡培养。
（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，
需将培养液进行 处理。之后，将
菌液涂布接种于以 __为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避
免污染，需将培养皿呈_ 状态放置。此外，为排除其他因素的影响，
提高实验可信度，本步骤需设计 作为空白对照。
（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是___ ，则说明此种菌能够 。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用___ _法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。
（4）人们利用某些微生物制作食品时，需要分析微生物的特点，控制微生物的发酵条件。下列与此有关的各项内容都正确的是 （ ）
13.利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。
（1）实验步骤：
①配制含有玉米淀粉的 （固体、液体）培养基。
②在 上的酒精灯火焰旁，将 接种至已灭菌的平板上。
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行诱变。
④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现 现象的菌落即为高效菌落。
⑤若将已获得的高效菌落保存，需将单菌落用 取出，再用划线法接种在
上，适宜温度培养24h后，置于4℃冰箱中保存。
（2）利用固体培养基可以进行微生物培养和植物组织培养，两者的培养基明显不同的是
A. 需要添加琼脂 B. 需要添加有机物
C. 需要添加激素 D. 需要灭菌处理
（3）下列有关操作不属于无菌操作的是
A. 若培养基中有葡萄糖，则用500g/cm2灭菌30min
B. 在接种微生物或外植体之前用酒精棉球拭擦双手
C. 在酒精灯火焰旁进行倒平板或接种操作
D. 将平板置于恒温培养箱中培养
14. 回答下列有关微生物的问题：
（1）19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，发现葡萄酒变酸，表面观察到菌膜，造成该现象的生物是 。腐乳外部有一层致密的皮，这是 的匍匐菌丝形成的。制作泡菜时，有时坛内会长一层白膜，这是 繁殖形成的。
（2）培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，除此之外，还需要满足微生物生长对pH、 及氧气的需求，例如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素。
（3）微生物的接种方法很多，如平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种和穿刺接种等方法，虽然这些技术的操作方法各不相同，但是其核心都是要 ，保证培养物的纯度。由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的 ，就是菌落。
（4）从土壤中分离出分解尿素的细菌之后，要对其进行进一步的鉴定，要在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 ，如果指示剂变 ，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
（5）灭菌是用 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。对培养皿灭菌常用的方法是 。在进行平板划线时，划线操作结束后， （需要或不需要）灼烧接种环。
15.. 有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。请回答下列问题：
⑴在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。
⑵纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。
常用的操作工具分别是 和 。
⑶为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。
⑷实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、 和 。
无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
16. （1）为获取土壤中的芽胞杆菌，某同学进行了相关实验，操作流程如下。
上图中步骤A为 ，步骤B为 。要判断培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是 。
（2）实验室常用的灭菌方法为 ，如果实验器材不能遇水，则用 。
（3）微生物的分离提纯方法主要有 和 法。
（4）培养微生物的培养基根据用途不同，物理性质有所差异。扩大培养一般用 培养基，分离菌种用 培养基。它们在物理性质上的不同主要原因是 。
（5）某些微生物能利用尿素是因为它们能合成分泌 。其分解尿素的方程式为： 。
17. 尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：
⑴培养基用一般用 灭菌；接种环用 灭菌；实验操作者的双手用 消毒；空气用 灭菌。
⑵如图是利用______ ___法进行微生物分离。
⑶分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4·7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述____ ____成分，并加入___ ___ __物质
①该培养基属于 培养基（多选）。
A．液体 B．固体 C．鉴定 D．选择 E.天然
②使用该培养基的目的是 。
③在培养基中加入 指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。
18. 从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：
（1）图中物质A为 ，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用 法接种到尿素培养基上,对照组配制的培养基为 培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数 (大于、等于或小于)对照组。在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是 。
(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是 灭菌。
A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70%酒精浸泡 D．过滤
（3）下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是 。
A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水
B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素
C．NaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素
D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物
（4）欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩大培养，应使用LB 培养基。
19．下表是三组生物实验培养基。请回答下列问题：
（1）分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基 （a、b、c中选），采用 法分离，该分离法的优点是 。在含有脲酶的细菌菌落周围会出现 。与LB全营养培养基相比，该培养基中出现菌落数 。（填多或少）
（2）下列依次表示培养基转移、接种操作以及划线接种的路径示意图，其中错误的是 。
（3）在制备尿素固体培养基时，需加入琼脂糖而不能用琼脂配制的原因是
，需要用 进行灭菌。在分离以尿素为唯一氮源的细菌时，培养基中加入酚红的目的是 。
A．筛选出能分解尿素的细菌 B．对分离的菌落作进一步鉴定
C．培养基中的酚红可作为细菌的营养 D．若酚红变蓝就能认定该菌能分解尿素
参考答案
1．答案：可以提供优良通气条件，又可以防止杂菌污染 放入三角瓶或试管口中后，周围没有折皱和缝隙，是容易拔出 pH 中性偏碱 LB液体培养基 琼脂 三角漏斗 壁上不能沾有培养基 容易发生污染 1/2
2．答案：Ⅱ．(1)维持一定的渗透压 (2)前 (3)倒置 不连续的单个菌落 (4)分离时用含抗生素(如氨苄青霉素)的培养基
3．答案：Ⅰ（1）酒精灯火焰 菌落 低 培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落 灭菌（2）灭菌过的接种环 平板划线分离法。
4答案： ①培养基 ② 酒精灯 ③ 悬液 ④ 固体平面 ⑤涂布分离
⑥倒置 ⑦红色环带 ⑧越强 ⑨B
5.答案：（1）高盐环境 ； 无氧环境 （2）加盐； 以淀粉为唯一碳源 ； 高温 （3）蛋白质和核酸 ； 变性 ； 高压蒸汽 （4）（稀释）涂布分离法 ； 划线分离法
6..答案：①高压蒸汽灭菌 ②液体培养基 ③划线（或涂布） ④琼脂 ⑤倒置 ⑥蛋白质 ⑦脲（酶）（2分） ⑧LB全营养 ⑨菌落
7答案：（1）酸碱度 生活周期短（2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构（3）比例合适
（4）鉴定(或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌(7) D (8) 菌落特征
8.答案：
9.答案：（1）高压蒸气 灭菌锅内压力与大气压相同
（2）酒精棉球 （酒精灯火焰上）灼烧
（3）1 （见右图）
（4）避免水滴污染培养基
（5）接触过细菌的器皿应作灭菌处理。
（6）植物激素（或生长素和细胞分裂素） 能快速、大量地繁殖
10. (1)划线 接种环 固体 在划线的末端出现不连续的单菌落
(2)NaNO3 尿素（或脲） G6玻璃漏斗
(3)红色 乙
11答案：①高压蒸汽 ②酒精③灼烧④蛋白胨（酵母膏） ⑤渗透压⑥扩大培养⑦划线（涂布）分离⑧菌落⑨ B
12．答案：①高压蒸汽灭菌；②稀释（或系列稀或“梯度稀释”）；③淀粉④倒置；⑤未接种的空白培养基（或“接种等量无菌水的培养基”；⑥）出现透明圈；⑦分泌淀粉酶使淀粉发生水解；；⑧（平板）划线⑨B（2分）
13①固体 ②超净台③野生菌株④浅色范围大⑤接种环 ⑥斜面 ⑦C ⑧D
14. （1）醋酸菌；毛霉；酵母菌
（2）特殊营养物质
（3）防止杂菌的污染；子细胞群体
（4）酚红指示剂；红
（5）强烈的理化因素；干热灭菌；需要
15. ⑴原油 选择 ⑵划线分离法 （ 稀释）涂布分离法 接种环 玻璃刮刀
⑶强 ⑷灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌法 火焰
16（1）①制平板 ②培养 ③ 将灭菌后的培养基培养一段时间后观察是否出现菌落
高压蒸汽灭菌（1分） 干热灭菌（1分） 划线分离法和稀释涂布法（1分）
液体（1分） 固体（1分） 是否含有琼脂（1分）
脲酶
脲酶 （NH2）2C＝O + H2O → 2NH3 +CO2（2分）
17. ⑴高压蒸汽；火焰灼烧；酒精；紫外灯照射和过滤风 ⑵划线分离法
⑶NaNO3 尿素和葡萄糖 ①BD ②筛选出能分解尿素的细菌 ③酚红
18. ①无菌水 ②涂布（分离） ③LB全营养 ④小于 ⑤因为能利用尿素的细菌产生的脲酶，将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色 ⑥D ⑦B ⑧(LB)液体
19. （1）b 稀释涂布分离法 单菌落更易分开 红色环带 少
（2）D
（3） 琼脂中含有一定量的含氮物质 G6玻璃砂漏斗 B
1．《大肠杆菌的培养和分离》实验前，所用的三角瓶口或试管口都要先塞上棉塞，理由是________________ _____________,再经高压蒸汽灭菌才能使用。制作合格的棉塞的标准是________________ ___________。在配制培养基时，除考虑无菌外，一般要测___ ____，大肠杆菌要求在________ ___的环境下培养。配制LB固体培养基时，应在_____ _______的培养基中，加入______________。将上述培养基分别加到三角瓶、试管或培养皿中时，应用__________，并注意___________ ___,否则________________________。制作斜面培养基时，其斜面长度应不超过于试管长度的_____________为宜。
2．回答有关“大肠杆菌的培养和分离”的问题：
（1）大肠杆菌的扩大培养需要用LB液体培养基50ml，其配方为：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、氯化钠0.5g、水50ml。培养基中加入一定量的氯化钠，目的是 。
（2）在制备培养基时，有时还需要调节酸碱度，这一步操作应该在灭菌 。（填“前”或“后”）
（3）用划线法在LB固体平面培养基上分离大肠杆菌，当接种完成后，盖好培养皿盖，将培养皿 ，放在37℃恒温箱中培养12～24h，当看到划线末端出现
时，表明细菌已被分离。
（4）如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染？ 。
3．大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：
（1）常用稀释涂布平板法来测定大肠杆菌的数目，该方法先将LB固体培养基冷却到60℃,在_____ ______旁倒在培养皿里，凝固后形成平板；该方法中实际统计的是培养基上的___ __数目。此数据比实际值要____________（高、低），其原因是_____________________ ________实验完成后需要对培养基进行______________处理，然后才能倒掉。
（2）若要分离出纯净的大肠杆菌，还须将用____ ____挑取上述菌落，用___________方法进行分离。
4．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：
（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括 和各种器皿都必须是无菌的。将培养基倒入培养皿制备平板时一般需在 旁进行操作。
（2）在无菌条件下将土壤稀释，取样时尽量只取 。
（3）接种时常用玻璃刮刀在 培养基上采用 法进行分离。然后将接种后的培养皿 于37℃的恒温箱中培养。
（4）若培养基中存在有脲酶的细菌，其菌落周围会出现 ，这是由于尿素被分解产生氨，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力 。
（5）与LB全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中的菌落数 。
A. 多 B. 少 C. 相等 D. 几乎为零
5.从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从 等环境采集，培养厌氧菌的菌样应从 等采集。
（2）富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的微生物培养方法。对噬盐菌富集培养的培养基应是 的选择培养基；对高温淀粉酶的富集培养应选择 的选择培养基，并在 条件下培养。
（3）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生物的 等物质发生 。 灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法。
（4）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
获得图A效果的接
种方法是
，获得图B
效果的接种方法
是 。
6.微生物指的是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，绝大多数微生物是对人类有利的。请回答下列有关微生物的培养和分离的问题：
（1）在培养微生物时，培养基和各种器皿必须是无菌的，一般的灭菌方法是 。
（2）“大肠杆菌的培养和分离”实验中，先用LB 进行扩大培养，再在LB固体平面培养基上进行 分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的材料是 。在培养基上完成接种后，需将培养皿 放置，然后置于恒温箱中培养。
（3）尿素是 （物质）降解的产物，有一些细菌由于含有 酶，便可以通过降解尿素作为其生长的氮源。
（4）在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，对照实验的培养基是 ，实验组与对照组最后要观察并比较 的数目。
7.（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______温度和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
(7)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，下列对操作过程说法不妥的是 ⑦ 。
A．严格操作、多次重复 B．保证待测样品稀释的浓度比较合适
C．倒平板培养 D．计数所有菌落，取其平均值
(8)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小、硬度和颜色等 ⑧ 对细菌进行初步的鉴定(或分类)。
8.微生物与人类的生活、健康有着密切的联系。请回答下列有关微生物的问题。
（1）无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有 灭菌、干热灭菌和 灭菌。在组织培养过程中通常利用 对外植体进行消毒。
（2）在果醋、泡菜的制作过程中，需要氧气的是 的制作；在制作果醋过程中，榨取的果汁非常浑浊，解决的方法是 。
（3）根据微生物的特点，可以利用相应的培养基进行分离或培养，例如用 培养基筛选能分泌脲酶的细菌；用 培养基培养苹果青霉，以提高果胶酶的产量。
（4）在微生物培养或分离过程，下列操作不恰当的是
A．在超净台中进行接种时应该关闭紫外灯 B．扩大培养时必需保证氧气的供应
C．控制液体培养基中营养物质的浓度 D．空白的平板培养基需进行无菌试验
（5）从土壤中分离能分解尿素的细菌时，通常在尿素培养基中添加酚红，用以指示脲酶的分泌情况，其原理是尿素被脲酶分解产生的 可以使酚红变色。
9.下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程：
请回答：
（1）灭菌常用_____________法，灭菌后，要待____________________时才能打开锅盖。
（2）倒平板和接种前要用__________________擦手。接种和划线前使用______________的方法对接种环灭菌。
（3）划线分离时，接种环在菌液中蘸取__________次。下图甲表示在平板培养基上的第一次和第二次划线，请在乙图中画出第三次划线。
（4）划线后在恒温培养箱中培养时，培养皿须
倒置，目的是_____________________。
（5）实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处
理？ 。
（6）植物组织培养过程中也要十分注意灭菌以及避免被杂菌污染，它的培养基成分中与大肠杆菌最大的区别是必须添加 ，该技术在繁殖名贵经济作物方面运用广泛，该技术具有 的特点。
10．在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数。
（1）右图是利用_ _分离法进行微生物接种。接种时，先将
_ _在明火上烧红后冷却，然后蘸取菌液在 培
养基上进行操作。如果出现 ，则表明细菌已被
分离。
(2)分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaCl、酚红、
琼脂糖、H2O。若用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述
_ _成分，并加入葡萄糖和_ _。配制好以后要用
进行灭菌。
(3)有脲酶的细菌菌落周围会出现 颜色的着色环带。三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为10-6的培养基中，得到以下统计结果：
甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248。
乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233。
丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、212和256，取平均值163。
在三位同学的统计中，只有 同学的统计是正确的。
11.下面是有关大肠杆菌的培养和分离实验，请回答：
（1）培养大肠杆菌时必须进行无菌操作。实验前所需的各种器材如三角烧瓶、培养皿等需要经过 法灭菌；实验操作过程中，实验操作者的双手事先要用
消毒，接种环需要用 法灭菌。
（2）配置培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入 作为营养物质，还需要考虑温度、 PH 、 等条件。
（3）大肠杆菌的培养和分离实验中，在LB液体培养基进行 ，在LB固体培养基上进行 。通常对获得的纯菌种可以依据 的形状、大小等特征进行初步的鉴定。
（4）微生物与人类的生活关系越来越密切，在制作果酒、果醋、泡菜的过程中，分别用到的主要微生物分别是 （ ）
A．酵母菌、乳酸菌、乳酸菌 B．酵母菌、醋酸菌、乳酸菌
C．乳酸菌、醋酸菌、酵母菌 D．酵母菌、乳酸菌、醋酸菌
12. 某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。
（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取1g，置
于经过 法灭菌处理的固体培养基
中，28℃振荡培养。
（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，
需将培养液进行 处理。之后，将
菌液涂布接种于以 __为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避
免污染，需将培养皿呈_ 状态放置。此外，为排除其他因素的影响，
提高实验可信度，本步骤需设计 作为空白对照。
（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是___ ，则说明此种菌能够 。从平板中挑取实验效果明显的目的菌株，采用___ _法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。
（4）人们利用某些微生物制作食品时，需要分析微生物的特点，控制微生物的发酵条件。下列与此有关的各项内容都正确的是 （ ）
13.利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆，具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。
（1）实验步骤：
①配制含有玉米淀粉的 （固体、液体）培养基。
②在 上的酒精灯火焰旁，将 接种至已灭菌的平板上。
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行诱变。
④菌落形成后，加入碘液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现 现象的菌落即为高效菌落。
⑤若将已获得的高效菌落保存，需将单菌落用 取出，再用划线法接种在
上，适宜温度培养24h后，置于4℃冰箱中保存。
（2）利用固体培养基可以进行微生物培养和植物组织培养，两者的培养基明显不同的是
A. 需要添加琼脂 B. 需要添加有机物
C. 需要添加激素 D. 需要灭菌处理
（3）下列有关操作不属于无菌操作的是
A. 若培养基中有葡萄糖，则用500g/cm2灭菌30min
B. 在接种微生物或外植体之前用酒精棉球拭擦双手
C. 在酒精灯火焰旁进行倒平板或接种操作
D. 将平板置于恒温培养箱中培养
14. 回答下列有关微生物的问题：
（1）19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中，发现葡萄酒变酸，表面观察到菌膜，造成该现象的生物是 。腐乳外部有一层致密的皮，这是 的匍匐菌丝形成的。制作泡菜时，有时坛内会长一层白膜，这是 繁殖形成的。
（2）培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，除此之外，还需要满足微生物生长对pH、 及氧气的需求，例如培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素。
（3）微生物的接种方法很多，如平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种和穿刺接种等方法，虽然这些技术的操作方法各不相同，但是其核心都是要 ，保证培养物的纯度。由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的 ，就是菌落。
（4）从土壤中分离出分解尿素的细菌之后，要对其进行进一步的鉴定，要在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 ，如果指示剂变 ，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
（5）灭菌是用 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。对培养皿灭菌常用的方法是 。在进行平板划线时，划线操作结束后， （需要或不需要）灼烧接种环。
15.. 有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。请回答下列问题：
⑴在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。
⑵纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。
常用的操作工具分别是 和 。
⑶为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。
⑷实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、 和 。
无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
16. （1）为获取土壤中的芽胞杆菌，某同学进行了相关实验，操作流程如下。
上图中步骤A为 ，步骤B为 。要判断培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是 。
（2）实验室常用的灭菌方法为 ，如果实验器材不能遇水，则用 。
（3）微生物的分离提纯方法主要有 和 法。
（4）培养微生物的培养基根据用途不同，物理性质有所差异。扩大培养一般用 培养基，分离菌种用 培养基。它们在物理性质上的不同主要原因是 。
（5）某些微生物能利用尿素是因为它们能合成分泌 。其分解尿素的方程式为： 。
17. 尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：
⑴培养基用一般用 灭菌；接种环用 灭菌；实验操作者的双手用 消毒；空气用 灭菌。
⑵如图是利用______ ___法进行微生物分离。
⑶分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4·7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述____ ____成分，并加入___ ___ __物质
①该培养基属于 培养基（多选）。
A．液体 B．固体 C．鉴定 D．选择 E.天然
②使用该培养基的目的是 。
③在培养基中加入 指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。
18. 从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示：
（1）图中物质A为 ，若要统计每克土壤样品中以尿素为氮源的细菌的活菌数目，宜采用 法接种到尿素培养基上,对照组配制的培养基为 培养基，若用同浓度的土壤稀释液接种，实验组培养皿中菌落数 (大于、等于或小于)对照组。在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是 。
(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是 灭菌。
A．高压蒸汽 B．紫外灯照射 C．70%酒精浸泡 D．过滤
（3）下列培养基中，能分离出分解尿素的细菌的是 。
A．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水
B．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、尿素
C．NaCl、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物、尿素
D．葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚红、琼脂糖、水、蛋白胨、酵母提取物
（4）欲将分离得到的以尿素为氮源的细菌进行扩大培养，应使用LB 培养基。
19．下表是三组生物实验培养基。请回答下列问题：
（1）分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基 （a、b、c中选），采用 法分离，该分离法的优点是 。在含有脲酶的细菌菌落周围会出现 。与LB全营养培养基相比，该培养基中出现菌落数 。（填多或少）
（2）下列依次表示培养基转移、接种操作以及划线接种的路径示意图，其中错误的是 。
（3）在制备尿素固体培养基时，需加入琼脂糖而不能用琼脂配制的原因是
，需要用 进行灭菌。在分离以尿素为唯一氮源的细菌时，培养基中加入酚红的目的是 。
A．筛选出能分解尿素的细菌 B．对分离的菌落作进一步鉴定
C．培养基中的酚红可作为细菌的营养 D．若酚红变蓝就能认定该菌能分解尿素
参考答案
1．答案：可以提供优良通气条件，又可以防止杂菌污染 放入三角瓶或试管口中后，周围没有折皱和缝隙，是容易拔出 pH 中性偏碱 LB液体培养基 琼脂 三角漏斗 壁上不能沾有培养基 容易发生污染 1/2
2．答案：Ⅱ．(1)维持一定的渗透压 (2)前 (3)倒置 不连续的单个菌落 (4)分离时用含抗生素(如氨苄青霉素)的培养基
3．答案：Ⅰ（1）酒精灯火焰 菌落 低 培养基中可能有两个或多个细菌紧挨在一起，共同形成一个菌落 灭菌（2）灭菌过的接种环 平板划线分离法。
4答案： ①培养基 ② 酒精灯 ③ 悬液 ④ 固体平面 ⑤涂布分离
⑥倒置 ⑦红色环带 ⑧越强 ⑨B
5.答案：（1）高盐环境 ； 无氧环境 （2）加盐； 以淀粉为唯一碳源 ； 高温 （3）蛋白质和核酸 ； 变性 ； 高压蒸汽 （4）（稀释）涂布分离法 ； 划线分离法
6..答案：①高压蒸汽灭菌 ②液体培养基 ③划线（或涂布） ④琼脂 ⑤倒置 ⑥蛋白质 ⑦脲（酶）（2分） ⑧LB全营养 ⑨菌落
7答案：（1）酸碱度 生活周期短（2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构（3）比例合适
（4）鉴定(或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌(7) D (8) 菌落特征
8.答案：
9.答案：（1）高压蒸气 灭菌锅内压力与大气压相同
（2）酒精棉球 （酒精灯火焰上）灼烧
（3）1 （见右图）
（4）避免水滴污染培养基
（5）接触过细菌的器皿应作灭菌处理。
（6）植物激素（或生长素和细胞分裂素） 能快速、大量地繁殖
10. (1)划线 接种环 固体 在划线的末端出现不连续的单菌落
(2)NaNO3 尿素（或脲） G6玻璃漏斗
(3)红色 乙
11答案：①高压蒸汽 ②酒精③灼烧④蛋白胨（酵母膏） ⑤渗透压⑥扩大培养⑦划线（涂布）分离⑧菌落⑨ B
12．答案：①高压蒸汽灭菌；②稀释（或系列稀或“梯度稀释”）；③淀粉④倒置；⑤未接种的空白培养基（或“接种等量无菌水的培养基”；⑥）出现透明圈；⑦分泌淀粉酶使淀粉发生水解；；⑧（平板）划线⑨B（2分）
13①固体 ②超净台③野生菌株④浅色范围大⑤接种环 ⑥斜面 ⑦C ⑧D
14. （1）醋酸菌；毛霉；酵母菌
（2）特殊营养物质
（3）防止杂菌的污染；子细胞群体
（4）酚红指示剂；红
（5）强烈的理化因素；干热灭菌；需要
15. ⑴原油 选择 ⑵划线分离法 （ 稀释）涂布分离法 接种环 玻璃刮刀
⑶强 ⑷灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌法 火焰
16（1）①制平板 ②培养 ③ 将灭菌后的培养基培养一段时间后观察是否出现菌落
高压蒸汽灭菌（1分） 干热灭菌（1分） 划线分离法和稀释涂布法（1分）
液体（1分） 固体（1分） 是否含有琼脂（1分）
脲酶
脲酶 （NH2）2C＝O + H2O → 2NH3 +CO2（2分）
17. ⑴高压蒸汽；火焰灼烧；酒精；紫外灯照射和过滤风 ⑵划线分离法
⑶NaNO3 尿素和葡萄糖 ①BD ②筛选出能分解尿素的细菌 ③酚红
18. ①无菌水 ②涂布（分离） ③LB全营养 ④小于 ⑤因为能利用尿素的细菌产生的脲酶，将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色 ⑥D ⑦B ⑧(LB)液体
19. （1）b 稀释涂布分离法 单菌落更易分开 红色环带 少
（2）D
（3） 琼脂中含有一定量的含氮物质 G6玻璃砂漏斗 B