微生物的基本培养技术
学习目标 1.能概述培养基的成分和配制方法2.能区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法3.能概述微生物纯培养的基本操作要求
学习任务
目标一：能概述培养基的成分和配制方法任务1：结合提供的资料，分析不同培养基营养成分的异同资料一：配制培养酵母菌的培养基：称取去皮的马铃著200g，切成小块，加水1000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20 g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g琼脂，用蒸馏水定容至1000 mL。（100 g马铃薯中含有80 g水、2g蛋白质、16 g碳水化合物，还有维生素、无机盐等。）资料二：1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成组分含量提供的主要营养牛肉膏5 g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10 g氮源和维生素等NaCl5 g无机盐H2O定容至1 000 mL水任务2：现有4种微生物：蓝细菌、硝化细菌、根瘤菌、大肠杆菌，请任选一种微生物，设计一份培养该种微生物的培养基成分表。
目标二：能区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法任务：阅读课本P10—11，完成相关表格，比较消毒和灭菌的不同项目条件结果常用方法应用范围消毒灭菌【思考与讨论】在新冠肺炎疫情期间,人们对环境和食品的卫生重视程度空前高。在疫情期间,护士在离开病区时进行自我清洁,普通人对食物、快递的外包装和电梯的墙壁等外表面和空气进行消毒。思考以下问题。（1）对食物、快递的外包装和电梯的墙壁等外表面、空气、培养基、培养皿进行消毒或灭菌的方法分别用什么 （2）以上这些消毒或灭菌的原理是什么 目标三：能概述微生物纯培养的基本操作要求任务：观看倒平板和平板划线操作的视频，进行倒平板和平板划线操作演练 【思考与讨论】1.倒平板时，培养基冷凝后，为什么要将平板倒置？2.接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的分别是什么？3.在做第二次划线以及其后的操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线 为何最后一次划线不能与第一次划线相连 【练一练】微生物接种方法很多,平板划线法是最常用的一种。右图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④。下列操作方法错误的是( )。A.划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基B.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连C.在②~④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌D.正常情况下,①区域的菌落数量最多
总结：
2微生物的基本培养技术
学习目标 1.能概述培养基的成分和配制方法2.能区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法3.能概述微生物纯培养的基本操作要求
学习任务
引入： 创设情境：
目标一：能概述培养基的成分和配制方法任务1：结合提供的资料，分析不同培养基营养成分的异同资料一：配制培养酵母菌的培养基：称取去皮的马铃著200g，切成小块，加水1000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20 g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g琼脂，用蒸馏水定容至1000 mL。（100 g马铃薯中含有80 g水、2g蛋白质、16 g碳水化合物，还有维生素、无机盐等。）资料二：1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成组分含量提供的主要营养牛肉膏5 g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10 g氮源和维生素等NaCl5 g无机盐H2O定容至1 000 mL水【提示】都含有水、碳源、氮源、无机盐和维生素等，其中培养酵母菌的培养基中主要由糖类提供碳源，蛋白质提供氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。【知识总结】培养基需要的成分及其作用和主要来源营养物质功能主要来源碳源能为微生物代谢提供碳元素①构成生物体的细胞物质和一些代谢产物②有机碳既是异养生物的碳源又是能源物质①无机碳源：CO2、NaHCO3等；②有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等氮源能为微生物的代谢提供氮元素合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物①无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水①优良的溶剂②维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐①细胞内的组成成分②生理调节物质③某些化能自养菌的能源④酶的激活剂无机化合物任务2：现有4种微生物：蓝细菌、硝化细菌、根瘤菌、大肠杆菌，请任选一种微生物，设计一份培养该种微生物的培养基成分表。【提示】微生物碳源氮源其他成分蓝细菌CO2NH4+、NO3-等水、无机盐、其他特殊营养物质、提供光能硝化细菌CO2NH3水、无机盐、其他特殊营养物质根瘤菌糖类等有机物N2水、无机盐、其他特殊营养物质大肠杆菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等水、无机盐、其他特殊营养物质【方法指导】不同种类的微生物代谢特点不同,对培养基中营养物质的需求也不同,因此培养不同的微生物,需按其营养特点配制培养基。如:(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐,碳源可来自大气中的CO2,氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物,即碳源必须由有机物提供,氮源也主要由有机物提供,部分异养型微生物也可以利用无机氮源。【知识总结】1.培养基的配制原则(1)目的要明确:配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调:注意各种营养物质的浓度和比例,要根据微生物对营养的需求特点合理调整,自养型微生物的培养基主要以无机营养为主,异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。(3)pH要适宜:细菌为7.0~8.0,放线菌为7.5~8.5,真菌为5.0~6.0,培养不同微生物所需的pH不同。
目标二：能区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法任务：阅读课本P10—11，完成相关表格，比较消毒和灭菌的不同项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理、化学或生物等方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒日常用品巴氏消毒不耐高温的液体化学药剂消毒用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌接种工具干热灭菌玻璃器皿、金属工具湿热灭菌培养基及容器【思考与讨论】在新冠肺炎疫情期间,人们对环境和食品的卫生重视程度空前高。在疫情期间,护士在离开病区时进行自我清洁,普通人对食物、快递的外包装和电梯的墙壁等外表面和空气进行消毒。思考以下问题。（1）对食物、快递的外包装和电梯的墙壁等外表面、空气、培养基、培养皿进行消毒或灭菌的方法分别用什么 【提示】许多食物一般通过加热煮沸消毒,对牛奶等为了保留食物的营养可进行巴氏消毒,对快递的外包装和电梯的墙壁等外表面可通过喷洒化学药剂进行消毒,对空气可通过紫外线进行消毒、培养基是高压蒸汽灭菌，培养皿用干热灭菌。（2）以上这些消毒或灭菌的原理是什么 【提示】 煮沸消毒、巴氏消毒是利用高温导致蛋白质变性,从而导致微生物死亡;化学药剂消毒是利用化学药剂杀死各种微生物;紫外线可以破坏微生物DNA的结构,从而导致微生物死亡。灭菌都是利用高温使微生物的蛋白质变性。目标三：能概述微生物纯培养的基本操作要求任务：观看倒平板和平板划线操作的视频，进行倒平板和平板划线操作演练 【思考与讨论】1.倒平板时，培养基冷凝后，为什么要将平板倒置？【提示】既可以防止培养基表面的水分挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。2.接种操作时每次划线接种前与接种后都要灼烧接种环或接种针，其目的分别是什么？【提示】取菌种前：杀死接种环上原有的微生物。每次划线前：杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞。 接种结束后：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。3.在做第二次划线以及其后的操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线 为何最后一次划线不能与第一次划线相连 【提示】划线后末端含有的细菌数目较少,每次从上一次的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少,最终分散成单个细胞。最后一次划线已经将细菌稀释成单个细胞,如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目,达不到纯化的效果。【归纳总结】平板划线法操作的注意事项(1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌,划线操作结束后仍需灼烧接种环,每次灼烧的目的如下表所示。项目第一次灼烧每次划线之前灼烧划线结束后灼烧目的避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种,使每次划线的菌种来自上次划线的末端杀死接种环上残留的菌种,避免菌种污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环后,要待其冷却才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。(3)划线时最后一区不要与第一区相连。(4)划线时用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破。【练一练】微生物接种方法很多,平板划线法是最常用的一种。右图是平板划线示意图,划线的顺序为①②③④。下列操作方法错误的是( A )。A.划线操作时,将蘸有菌种的接种环插入培养基B.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连C.在②~④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌D.正常情况下,①区域的菌落数量最多
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