3.1重组DNA技术的基本工具同步练习（含解析）2023——2024学年高生物人教版（2019）选择性必修必修3生物技术与工程
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| 名称 | 3.1重组DNA技术的基本工具同步练习（含解析）2023——2024学年高生物人教版（2019）选择性必修必修3生物技术与工程 |  | |
| 格式 | docx | ||
| 文件大小 | 1.5MB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2024-05-18 14:40:18 | ||
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文档简介
3.1 重组DNA技术的基本工具 同步练习
学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
一、单选题
1．下图为DNA 分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次为（ ）
A．DNA 连接酶、限制酶、解旋酶
B．限制酶、解旋酶、DNA连接酶
C．限制酶、DNA连接酶、解旋酶
D．解旋酶、限制酶、DNA连接酶
2．CRISPR/dCas9基因抑制系统来源于CRISPR/Cas9，Cas9酶能够切割核酸片段，当其特定的结构区域发生改变后，失去切割功能，称为dCas9，但仍然能由gRNA引导后与DNA结合，如下图所示。对该系统理解错误的是（ ）
A．CRISPR/dCas9是由蛋白质与RNA构成的复合体
B．正常的Cas9酶不能催化磷酸二酯键的断裂
C．gRNA能与DNA上特定的碱基序列互补配对
D．dCas9与靶位点结合可以直接干扰转录的进行
3．已知限制酶BamHI和BglⅡ的识别序列及切割位点分别是-G↓GATCC-、-A↓GATCT-。下列叙述正确的是（ ）
A．限制酶和解旋酶均可催化氢键的断裂
B．所有限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成
C．上述两种限制酶切割产生的末端只能用E．coliDNA连接酶进行“缝合”
D．上述两种限制酶切割产生的末端之间相互连接后，可能不会再被这两种限制酶识别
4．下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A．与家兔血相比，洋葱更适合用于DNA的粗提取与鉴定
B．DNA不溶于酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液
C．向经酒精处理得到的白色丝状物中加入蛋白酶，可提高DNA相对含量
D．研磨材料得到的滤液应在4℃冰箱中静置或离心，取沉淀进行后续操作
5．下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A．用玻璃棒沿一个方向快速搅拌， 卷起丝状物，可提高DNA的粗提取量
B．洋葱研磨液在4℃冰箱中放置几分钟，可降低DNA水解酶的活性
C．采用体积分数为95%的酒精溶液析出DNA的方法可去除部分杂质
D．在溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后呈蓝色
6．关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”（实验Ⅰ）和“DNA的粗提取与鉴定”（实验Ⅱ）的实验操作，下列相关叙述正确的是（ ）
A．实验Ⅰ中，PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理
B．实验Ⅰ中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，加样前应先接通电源
C．实验Ⅱ中，取洋葱研磨液的上清液，加入等体积冷酒精后析出粗提取的DNA
D．实验Ⅱ中，将白色丝状物直接加入二苯胺试剂中并进行沸水浴，用于鉴定DNA
7．同尾酶是一类识别不同核苷酸序列但切割后产生相同黏性末端的限制酶，依靠同尾酶的这种特性，可以根据需要将不同的DNA片段进行灵活重组。下列叙述正确的是（ ）
A．产生限制酶的生物大多没有核膜包被的细胞核
B．限制酶能识别DNA和RNA中特定的核苷酸序列
C．限制酶可为磷酸二酯键水解提供所需活化能
D．同尾酶是一类限制酶，每种限制酶都存在其同尾酶
8．下列有关基因工程操作工具的叙述，正确的是（ ）
A．限制性内切核酸酶将DNA双链切割成两条单链
B．限制性内切核酸酶的基因只存在于微生物中
C．质粒DNA分子上有一个或多个限制酶切割位点
D．将动物基因转入大肠杆菌等宿主细胞内只能以病毒为载体
9．高中生物实验中、下列实验操作能达成所述目标的是（ ）
A．选择生物实验材料时，只要含有丰富的葡萄糖就可直接用于还原性糖的鉴定
B．鉴定DNA时，将丝状物溶于2mol/LNaCl溶液，再加入二苯胺试剂即呈蓝色
C．使用显微镜观察洋葱根尖细胞有丝分裂时，视野中处于分裂中期的细胞最多
D．观察植物细胞吸水和失水时，可以使用蔗糖溶液处理紫色洋葱鳞片叶外表皮
10．同尾限制酶简称同尾酶，指一类限制性核酸内切酶，它们的来源不同，能够对DNA切割产生相同的黏性末端，而其识别序列的特异性不同。下表中，属于同尾酶的组合是（ ）
限制酶名称 识别序列和切割位点 限制酶名称 识别序列和切割位点
BamH I G↓ GATCC Kpn I GGTAC↓ C
EcoR I G↓ AATTC Sau3A I ↓GATC
Hind II GTY↓RAC Sma I CCCT↓GGG
（注：Y=C或T；R=A或G ）
A．BamH I和Sau3A I B．EcoR I和Kpn I C．Sau3A I和Sma I D．Hind II和Sma I
11．“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程如下图。下列选项是某同学的总结，其中叙述错误的是（ ）
A．①过程为裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质
B．②过程为分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等
C．③过程为沉淀：反复多次可以完全去除蛋白质杂质
D．④过程为鉴定：在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色
12．下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是（ ）
A．DNA溶于酒精，某些蛋白质不溶于酒精
B．用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
C．DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
D．用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量不同
13．以下生物学实验的部分操作过程，正确的是（ ）
选项 实验名称 实验操作
A． 制作米酒 向蒸熟后冷却的糯米中加入酵母菌， 并将容器封住
B． 培养硝化细菌 在培养基中加入碳源、水和无机盐（包括铵盐）
C． DNA 的粗提取与鉴定 将丝状物放入2mol/LNaCl溶液再加二苯胺试剂，沸水浴中加热，冷却后观察溶液颜色变化
D． 酵母菌的纯培养 在酒精灯火焰旁倒平板，完成后立即将培养皿倒置
A．A B．B C．C D．D
14．真核细胞转座子有逆转录转座子和 DNA 转座子之分，可在染色体内部和染色体间转移。该过程依托转座酶将转座子两端特定序列进行切割，再将其插入到DNA分子的特定位点中，具体机制如下图①和②所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．转座酶和限制性内切核酸酶均可破坏磷酸二酯键
B．转座引起的变异类型有基因突变、基因重组和染色体变异
C．DNA转座子只改变其在染色体上的位置，总数保持不变
D．逆转录转座子通常存在于外显子等不易于转录的区域
15．如表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点（箭头表示相关酶的切割位点）。如图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ）
限制酶 AluⅠ BamHⅠ SmaⅠ Sau3AⅠ
识别序列 切割位点 AG↓CT TC↑GA G↓GATCC CCTAG↑G CCC↓GGG GGG↑CCC ↓GATC CTAG↑
A．②④⑤对应的识别序列均能被Sau3A I识别并切割
B．Sau3AⅠ和BamHⅠ切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C．BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键
D．T4DNA连接酶即能连接①③，也能连接②⑤，但后者连接效率低
16．下面是几种不同限制性内切核酸酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述错误的是（ ）
A．以上DNA片段由4种限制酶切割后产生
B．②片段是在识别序列为的限制酶作用下形成的
C．①和④两个片段在T4DNA连接酶的作用下不能连接形成重组DNA分子
D．限制酶、DNA连接酶和DNA聚合酶作用的部位都是磷酸二酯键
二、多选题
17．“DNA粗提取与鉴定”实验的相关叙述中，错误的是（ ）
A．实验材料可以使用猪肝
B．研磨后的研磨液经过离心后，去除上清液，保留沉淀物备用
C．可利用预冷的体积分数为95%的酒精初步分离DNA与蛋白质
D．鉴定时向试管中加入二苯胺试剂后静置5min，呈现蓝色
18．某实验小组探究了“DNA的粗提取与鉴定”实验中不同去杂质方法对实验结果的影响，结果如下表所示。下列相关叙述正确的是（ ）
去杂质方法 沉淀质量（g） DNA浓度（ng/μL） OD260/OD280 二苯胺鉴定
离心 0.068 81.5 1.53 蓝色
4℃冰箱静置 0.1028 336.4 1.41
注：纯DNA的OD260/OD280=1.8；当存在蛋白质污染时，OD260/OD280的值明显降低。
A．实验操作前需打开超净工作台上的紫外灯
B．与猪血相比，洋葱更适合用于DNA的粗提取
C．用离心法去除杂质有利于获得更高纯度的DNA
D．鉴定DNA时将二苯胺试剂加入待测样液即可出现蓝色
19．研究人员通过实验探究不同储藏条件对棉花叶片DNA纯度及提取率（提取率越高，获得的DNA越多）的影响，结果如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．DNA能溶于酒精，故可用酒精处理棉花叶片提取DNA
B．通过粗提取获得的DNA中可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质
C．用二苯胺进行鉴定时，相同体积下可通过比较试管蓝色深浅判断DNA含量
D．进行DNA粗提取实验前最佳的处理方式为将棉花叶片冷鲜处理3天
20．某细菌DNA分子上有4个Sau3AⅠ的酶切位点，经Sau3AⅠ处理后会形成4个大小不同的DNA片段。若是用BamHⅠ处理，则只会形成2个大小不同的DNA片段。Sau3AⅠ和BamHⅠ的识别序列及切割位点如表所示。下列叙述不正确的是（ ）
限制酶名称 识别序列及切割位点
BamHI G↓GATCC
Sau3AI ↓GATC
A．BamHⅠ切割后产生的是黏性末端，Sau3AⅠ切割后产生的是平末端
B．Sau3AI和BamHI切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C．上述两种限制酶切割出的末端只能用E.coli DNA连接酶进行“缝合”
D．若用两种酶共同处理，会形成4个大小不同的DNA片段
三、非选择题
21．为构建肝特异性CD36基因敲除小鼠模型。研究人员利用Cre-1oxP系统开展实验。Cre可识别DNA分子中特定的loxP序列，并将两个loxP序列之间的DNA序列剪除，切口连接形成的环化产物被降解，从而达到敲除特定基因的目的，如图所示。
(1)一个1oxP序列的内部被Cre重组酶切割后会增加 个游离的磷酸基团。
(2)当两个loxP序列位于同一个DNA分子上且方向相同时，Cre重组酶能将两个切割位点之间的核苷酸序列切除并形成环状而失活，剩余序列会连接起来。据此可知，Cre重组酶在此过程中的作用类似于 酶。当两个LoxP序列方向相反时，Cre重组酶使两个IoxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于 。
(3)如图显示两类工具鼠，其中A鼠成对的CD36基因两侧分别引入一个同向loxP序列（基因型表示为L+L-，野生型为L-L-），B鼠中含一个外源导入的Cre编码序列（基因型表示为C+C+，野生型为C-C-），Alb表示肝脏组织特异性启动子。利用A、B两类工具鼠作为亲本，选用合适的杂交策略，即可获得肝特异性CD36基因敲除目标小鼠。
①启动子的作用是：
②目标小鼠的基因型应为 。
A．L+L+C+C- B．L+L+C-C-
C．L-L-C+C+ D．L+L-C+C-
③选择合适的杂交策略，目标小鼠最早可出现在子 代。
(4)取鼠尾细胞通过琼脂糖凝胶电泳鉴定子代1~8号小鼠的基因型，结果如图3。已知A鼠、B鼠的基因型检测结果分别与图中子代6号、1号小鼠相同，则图中代表目标小鼠的是 号。
(5)对目标小鼠不同组织细胞基因检测，请将预期结果填在下面的表格中。（+表示存在，-表示缺失）
细胞类型 Cre编码序列 CD36基因
肝脏细胞
肾脏细胞
22．研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：
(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的 负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越 （填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于无菌、无毒的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是 。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射 ，获得的卵母细胞应在体外培养到 期。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是无性繁殖。胚胎移植前，需对供、受体犬进行 处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到 阶段才能进行胚胎移植。
23．限制酶、DNA连接酶和载体是基因工程所需的三种基本工具，下图是几种限制酶的切割位点，回答以下问题：
(1)经PstⅠ切割后产生的末端类型是 。
(2)限制酶SmaI和EcoRV切割形成的末端，可通过 连接酶相互连接，DNA连接酶和限制酶作用的部位都是 ，该作用部位位于下图中的 。若想将环状DNA分子的一段切割下来，需要破坏 个该化学键。
(3)限制酶 （填“能”或“不能”）切割原核细胞自身的DNA，试推测其理由是 ，不同生物的DNA分子能拼接起来的原因是 （写出两点）。
(4)质粒携带目的基因进入受体细胞后能进行自我复制，是因为其具有 ，此外质粒上具有标记基因的目的是 。
24．微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员现采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药—敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。请据此回答以下问题：
(1)已知驯化培养基成分为蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是 。依照物理性质划分，驯化培养基属于 培养基，其中蛋白胨可提供 ，氯化钠和磷酸二氢钾两种无机盐，在培养基中具有 的作用（至少答两点）。
(2)用于筛选的样品应来自 的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为 ，该方法不需要梯度稀释也能获得单菌落，原因是 。
(3)将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的培养基C，培养24小时后，通过测定培养基中 ，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了4个平板培养基D，统计菌落数分别为250、247、312、253，测得培养基C中活菌数为1.25×107个/mL，则涂布的菌液Y为 mL。
(4)为获得纯培养物的高耐受基因X，实验小组应用纯培养物提取了DNA，检测DNA所用的原理是 。获得PCR产物后，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定，影响DNA分子迁移速率的主要因素有 （答出两点即可）。
25．我国为确保粮食安全，在粮食生产与储存方面做了大量科研。科研人员通过测序确认水稻突变型lox3基因与野生型相比，只在编码区第1497位核苷酸发生“G→A”的替换，如图所示，导致脂肪氧化酶缺失。脂肪氧化酶是催化稻谷本身脂质降解的关键酶，脂肪氧化酶缺失可延缓稻谷的陈化变质。已知UAG、UAA、UGA为终止密码子。请回答下列问题：
(1)据图分析，野生型与突变型lox3基因转录得到的mRNA长度关系是：野生型的mRNA （填“长于”、“短于”或“等于”）突变型的mRNA；在多肽合成过程中，tRNA“搬运”氨基酸到核糖体上，氨基酸结合部位在tRNA的 端。从基因表达的角度分析，突变型的脂肪氧化酶缺失，原因是 。
(2)科研人员利用电泳技术，可以精准鉴定出突变型植株。具体方法如下：利用某种限制性内切酶处理野生型lox3基因，经电泳，可以得到2条电泳带；使用同种限制性内切酶处理突变型lox3基因，经电泳，可以得到1条电泳带；结果如下图。
注：WT代表纯合野生型；MT代表纯合突变型
①与传统自交鉴定出纯合突变型相比，上述方法的优势有 。（写出2个方面）。
②将WT和MT杂交，得到F1。请在图中画出同种限制性内切酶处理F1的lox3基因后经电泳出现的结果 （在答题卡相应区域将对应位置的条带涂黑）。
③若将上述的F1进行自交，则后代的表型及比例为 。
(3)耐储特性优良的水稻品种可以满足稻米消费需求，可见脂肪氧化酶缺失突变体对生产生活的重要性，运用所学知识，列举2种获得脂肪氧化酶缺失突变体的方法 。
试卷第1页，共3页
试卷第1页，共3页
参考答案：
1．D
【分析】解旋酶：能使DNA分子两条链之间的氢键断裂，使DNA双链打开。
限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
DNA连接酶：连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键。
【详解】①处为氢键，是解旋酶的作用部位；②处为磷酸二酯键，是限制酶的作用部位；③处为两个DNA片段的缺口，是DNA连接酶的作用部位，催化磷酸二酯键的形成，即D正确。
故选D。
2．B
【分析】由题干和题图可知，Cas9蛋白为限制酶，在gRNA引导下能特异性切割靶向基因；dCas9蛋白无切割功能，是由Cas9基因突变后表达形成的蛋白质，但可与靶向基因的启动子区域结合使靶向基因失去功能。
【详解】A、由题可知，CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，A正确；
B、Cas9蛋白为限制酶，能够切割核酸片段，能催化磷酸二酯键的断裂，B错误；
C、由题意可知，gRNA识别受体细胞中的靶向基因序列，gRNA为RNA分子，通过碱基互补配对识别靶向基因DNA分子，C正确；
D、由图可知，dCas9蛋白可与靶基因的启动子结合，阻止其转录过程，D正确。
故选B。
3．D
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。
【详解】A、限制酶破坏的是磷酸二酯键，解旋酶破坏的是氢键，A错误；
B、不同限制酶识别序列有差异，限制酶的识别序列可能由4个、6个、8个或其他数目的核苷酸组成，B错误；
C、上述两种限制酶切割出的末端为粘性末端，能用E.coliDNA连接酶和T4 DNA连接酶进行“缝合”，C错误；
D、上述两种限制酶切割出的末端之间相互连接后形成的序列为 ，不会再被两种限制酶识别，D正确。
故选D。
4．D
【分析】DNA的粗提取和鉴定的原理：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA和蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2的NaCl溶液中。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
【详解】A、家兔为哺乳动物，成熟红细胞不含细胞核和细胞器，而洋葱中DNA含量较高，因此与家兔血相比，洋葱更适合用于DNA的粗提取与鉴定，A正确；
B、DNA不容易酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，DNA可溶于2mol/L的NaCl溶液，B正确；
C、经酒精处理得到的白色丝状物中含有一定的蛋白质杂质，可加入蛋白酶，去除蛋白质杂质，提高DNA的相对含量，C正确；
D、为防止DNA断裂，应将研磨液在4℃冰箱中静置或离心，但要取滤液进行后续操作，D错误。
故选D。
5．A
【分析】DNA粗提取的原理：①DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，从而初步分离DNA和蛋白质。②DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，从而溶解DNA。③在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色，从而鉴定DNA。
【详解】A、用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌（快速搅拌会破坏DNA分子的完整性），能让DNA充分溶解于NaCl溶液中，可提高DNA的粗提取量，A错误；
B、洋葱研磨液在4℃冰箱中放置几分钟，可降低DNA水解酶的活性，防止DNA降解，B正确；
C、DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离，进行DNA的粗提取，C正确；
D、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会呈现蓝色，故在溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后呈蓝色，D正确。
故选A。
6．C
【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、实验Ⅰ中，PCR实验所需的枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理，移液器不需要进行高压蒸汽灭菌处理，A错误；
B、实验Ⅰ中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，应先加样后接通电源，B错误；
C、实验Ⅱ中，取洋葱研磨液的上清液，由于DNA不溶于酒精溶液，加入等体积冷酒精后析出粗提取的DNA，C正确；
D、实验Ⅱ中，将丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液后加入二苯胺试剂，在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，用于鉴定DNA，D错误。
故选C。
7．A
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。限制酶切割产生的末端有黏性末端和平末端两种。
【详解】A、限制酶主要从原核生物中分离纯化得到，原核生物没有核膜包被的细胞核，A正确；
B、限制酶识别DNA分子的特定核苷酸序列，B错误；
C、限制酶起催化作用，作用机理为降低化学反应所需活化能，但不提供能量，C错误；
D、DNA分子经限制酶切割后可形成黏性末端和平末端，产生平末端的限制酶不存在同尾酶，D错误。
故选A。
8．C
【分析】1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体、动植物病毒。
2、作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因）③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
【详解】A、限制性核酸内切酶将一个DNA双链片段切割成两个DNA分子片段，而不是切割成两条单链，A错误；
B、限制性核酸内切酶主要来源于微生物，故限制性核酸内切酶的基因主要存在于微生物体内，B错误；
C、质粒是一种常用的运载体，必须具备的条件之一是：具有一个或多个限制酶的切割位点，以便与外源基因连接，C正确；
D、常用的运载体有质粒、噬菌体、动植物病毒，可用质粒和噬菌体的衍生物作为载体，将动物基因转入大肠杆菌等宿主细胞内，D错误。
故选C。
9．D
【分析】1、二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂，在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下逐渐变成蓝色。
2、观察植物细胞吸水和失水时，需要选择有颜色的成熟的植物细胞，紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞符合条件。
【详解】A、选择生物实验材料时，并不是只要含有丰富的葡萄糖就可直接用于还原性糖的鉴定，还应选择无色或白色的材料，A错误；
B、二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂，在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下逐渐变成蓝色，B错误；
C、细胞周期中间期远大于分裂期，因此使用显微镜观察洋葱根尖细胞有丝分裂时，视野中处于分裂间期的细胞最多，C错误；
D、紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞是成熟的植物细胞，且液泡含有颜色，观察植物细胞吸水和失水时，可用较高浓度的蔗糖溶液处理紫色洋葱鳞片叶外表，使其失水而发生质壁分离，D正确。
故选D。
10．A
【分析】根据题意可知，切割出相同的黏性末端的限制酶称为同尾酶。
【详解】A、BamH I和Sau3A I限制酶切割后形成的黏性末端分别是、，属于同尾酶，A正确；
B、EcoR I和Kpn I限制酶切割后形成的黏性末端分别是、，不属于同尾酶，B错误；
C、Sma I限制酶切割后形成的末端是平末端，Sau3A I限制酶切割后形成的是黏性末端，不属于同尾酶，C错误；
D、Hind II和Sma I限制酶切割后形成的末端均是平末端，且末端序列不同，不属于同尾酶，D错误。
故选A。
11．C
【分析】DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。例如，DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。
【详解】A、①过程为裂解过程，称取样品放入研钵中，倒 入研磨液，充分研磨，使细胞破裂释放出DNA等物质，A正确；
B、②过程为分离过程，在漏斗中垫上纱布，将研磨液过滤到烧杯中，在 4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液，可去除混合物中的多糖、蛋白质等，B正确；
C、③过程为沉淀，在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液，静置 2 3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌， 卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。反复多次可以提高DNA的纯度，但无法完全去除蛋白质杂质，C错误；
D、④过程为鉴定，在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂，D正确。
故选C。
12．A
【分析】DNA粗提取选材的标准：DNA含量高，并且材料易得。由于哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和细胞器，因此不采用哺乳动物的血液。DNA粗提取和鉴定的原理：
1、DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCI溶液中溶解度不同（DNA在0.14mol/L的氯化钠中溶解度最低）；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。
2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同。
3、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，A错误；
B、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，即用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热，B正确；
C、DNA分子从细胞中被释放出来且除去蛋白后是非常容易断裂的，如果太过剧烈的搅拌，DNA链可能会被破环，因此轻柔搅拌的目的是为了获得较完整的DNA分子，C正确；
D、兔属于哺乳动物，其红细胞没有细胞核及各种细胞器，提取不到DNA，因此用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量不同，D正确。
故选A。
13．C
【分析】酵母菌纯培养的过程分为以下几步：①制备培养基；②灭菌：将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，将培养皿放入干热灭菌箱内灭菌；③倒平板；④接种和分离酵母菌；⑤培养酵母菌。
【详解】A、 制作米酒时，先将糯米蒸熟后倒入清洁的容器中，待糯米冷却至温热时，加入酒曲并搅拌均匀，最后把容器密封好，A错误；
B、硝化细菌属于自养生物，能够氧化无机氮化物所放出的能量，将二氧化碳和水合成为葡萄糖，所以在培养基中加入碳源、水和无机盐（不包括铵盐，铵盐中含有氮元素），B错误；
C、DNA粗提取后，对DNA进行鉴定的操作是：将含有DNA的丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，搅拌使其充分溶解后，加入4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min，冷却后观察溶液颜色蓝色，从而鉴定DNA的存在，C正确；
D、酵母菌纯培养的过程分为以下几步：①制备培养基；②灭菌：将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，将培养皿放入干热灭菌箱内灭菌；③倒平板；④接种和分离酵母菌；⑤培养酵母菌，应在酒精灯火焰旁倒平板，待平板泠却凝固后将培养皿倒置，D错误。
故选C。
14．D
【分析】可遗传的变异有三种来源：基因突变、染色体变异和基因重组。（1）基因突变是基因结构的改变，包括碱基对的增添、缺失或替换。（2）基因重组的方式有同源染色体上非姐妹单体之间的交叉互换和非同源染色体上非等位基因之间的自由组合，另外，外源基因的导入也会引起基因重组。（3）染色体变异是指染色体结构和数目的改变。
【详解】A、转座酶将转座子两端特定序列进行切割，破坏的是磷酸二酯键，限制性内切核酸酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，因此转座酶和限制性内切核酸酶均可破坏磷酸二酯键，A正确；
B、转座子在DNA分子内部转移，可造成基因突变，在真核细胞染色体内部转移，可造成基因重组，在染色体间转移造成染色体变异，B正确；
C、由图可知，逆转录转座子不仅改变其在染色体上的位置，总数还会增多，DNA转座子只改变其在染色体上的位置，总数保持不变，C正确；
D、编码区分为能编码蛋白质的外显子和不能编码蛋白质的内含子，逆转录转座子通常存在于外显子等易于转录的区域，D错误。
故选D。
15．A
【分析】限制性内切核酸酶，简称限制酶：
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来；
（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；
（3）结果：形成黏性末端或平末端。
【详解】A、②④⑤对应的识别序列都存在GATC，都能被Sau3AⅠ识别并切割，A正确；
B、BamHⅠ切割G↓GATCC，Sau3AⅠ切割↓GATC，故二者切割后产生的黏性末端是相同的，因此二者切割后产生的黏性末端能够相连，连接后仍然存在GATC的序列，能被Sau3AⅠ切割，但是BamHⅠ不一定能切割，B错误；
C、BamHⅠ与AluⅠ切割的均是磷酸二酯键，C错误；
D、T4DNA连接酶既可以连接黏性末端也可以连接平末端，而图中①、③属于平末端，②⑤是黏性末端，T4DNA连接酶连接平末端时效率较低，D错误。
故选A。
16．B
【分析】分析题图：图示为几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段，其中①④具有相同的黏性末端；②经过限制酶切割后形成的是黏性末端；③经过限制酶切割后形成的是平末端。
【详解】A、碱基序列具有方向性，图中①④的黏性末端虽然相同，但不能互补配对，限制酶的识别序列一般是带有黏性末端的一条链上由5’→3’端读，图中四种类型的限制酶的识别序列各不相同，故是由4种限制酶切割后产生的，A正确；
B、②片段是在酶切位点为 的限制酶作用下形成的，B错误；
C、黏性末端的碱基序列具有方向性，①和④两个片段在T4DNA连接酶的作用下不能连接形成重组DNA分子，C正确；
D、限制酶可破坏磷酸二酯键，DNA连接酶和DNA聚合酶可催化形成磷酸二酯键，D正确。
故选B。
17．BD
【分析】DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液；在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
【详解】A、肝细胞含有细胞核和众多的细胞器，可以使用猪肝作为实验材料，A正确；
B、研磨后的研磨液经过离心后，可以使用纱布对研磨液进行过滤，并获取上清液，上清液中含有DNA，B错误；
C、DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的蛋白质等其他物质可以溶解于酒精，本实验使用了预冷的体积分数为95%的酒精，目的是析出提取含杂质较少的DNA，C正确；
D、DNA鉴定时向试管中加入二苯胺试剂后，应将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后可观察到蓝色，D错误。
故选BD。
18．ABC
【分析】DNA的粗提取与鉴定的实验原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA溶解或析出，从而达到分离的目的；②DNA不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离；③在沸水浴的条件下DNA遇二苯胺会呈现蓝色。
【详解】A、实验操作前需打开超净工作台上的紫外灯形成一个较稳定的无菌环境，A正确；
B、猪属于哺乳动物，其成熟红细胞没有细胞核及各种细胞器，提取不到DNA，而洋葱细胞内含有细胞核与各种细胞器，DNA含量较多，可以用来提取DNA，B正确；
C、离心能够加速细胞膜、细胞器、一些较大杂质的沉淀，离心法可以获得更高纯度的DNA，C正确；
D、在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色，D错误。
故选ABC。
19．AD
【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、DNA不溶于酒精，A错误；
B、通过粗提取获得的DNA中可能仍然含有某些不溶于酒精，易溶于2mol/L NaCl溶液的核蛋白、多糖等杂质，B正确；
C、用二苯胺进行鉴定时，相同体积下可通过比较试管蓝色深浅判断DNA含量，蓝色越深说明DNA纯度越高，C正确；
D、分析图可知，棉花叶片的不同处理方式对其DNA的纯度和提取率都有影响，在冷冻3天的处理下，提取率和纯度均较高，D错误。
故选AD。
20．ABC
【分析】限制酶主要从原核生物中分离纯化出来。特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种。
【详解】A、BamHⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点在中轴线两侧，切割后产生的都是黏性末端，A错误；
B、Sau3AI和BamHI切割产生的黏性末端相同，都是-GATC，切割后片段能够相连，连接后的片段仍含有GATC序列，可被 Sau3AI切割，B错误；
C、E.coli DNA连接酶可以连接黏性末端，而T4DNA连接酶可连接黏性末端和平末端，故上述两种限制酶切割出的末端可用E.coli DNA连接酶，也可用T4DNA连接酶进行“缝合”，C错误；
D、分析题意，细菌DNA分子上有4个Sau3AⅠ的酶切位点，经Sau3AⅠ处理后会形成4个大小不同的DNA片段，若是用BamHⅠ处理，则只会形成2个大小不同的DNA片段，而BamHI的识别序列包含Sau3AI识别序列，即若用两种酶共同处理，相当于用Sau3AⅠ处理，会形成4个大小不同的DNA片段，D正确。
故选ABC。
21．(1)2/二/两
(2) 限制酶和DNA连接酶 染色体结构变异（或倒位）
(3) RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录 A 二
(4)8
(5) ＋ － ＋ ＋
【分析】基因工程的基本步骤：（1）获取目的基因（从基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因）；（2）基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心）；（3）将目的基因导入受体细胞（植物、动物、微生物）；（4）目的基因的检测与鉴定（DNA分子杂交技术，分子杂交技术、抗原抗体杂交）。
【详解】（1）由题可知，Cre可识别DNA分子中特定的loxP序列，并将两个loxP序列之间的DNA序列剪除，所以被Cre重组酶切割后会增加2个游离的磷酸基团。
（2）结合图示可知，Cre能将双链DNA在特定部位切割开，切口连接形成环化产物，因此其类似于基因工程中的限制酶和DNA连接酶，当两个LoxP序列方向相反时，Cre重组酶使两个IoxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于染色体结构变异（或倒位）。
（3）①启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录。
②A、基因型为L+L+C +C -的目标鼠，其中含有的CD36基因无法表达，相当于获得了肝特异性CD36基因敲除目标小鼠，A正确；
B、基因型为L+L+C-C-的目标鼠中不含有肝组织特异性，不符合要求，B错误；
C、基因型为L-L-C+C+的目标鼠中CD36基因会表达，不符合要求，C错误；
D、基因型为L+L-C+C-的目标鼠中CD36基因会表达，不符合要求，D错误。
故选A。
③图中A鼠的基因型可表示为L+L+C -C -，B鼠的基因可表示为L-L-C+C-，二者杂交获得的子一代的基因型可表示为，L+L-C+C-和L+L-C-C-，而后让子一代中基因型为L+L-C+C-的小鼠与A鼠进行杂交即可获得基因型为L+L+C+C-的目标鼠，即最早可出现在子二代。
（4）已知A鼠的基因型为L+L+C-C-，对应6号，B鼠的基因型为L-L-C+C-，对应1号小鼠，而目标鼠的基因型为L+L+C+C-，则经过比对可以发现图3中代表目标小鼠的是8号。
（5）目标小鼠的肝脏细胞中CD36蛋白的表达量明显减少，而肾脏细胞中的表达量正常，肝脏细胞中有Cre编码序列，且有相应的在肝脏细胞中表达的特定的启动子，进而表达出Cre，肝脏细胞存在但不能表达出Cre，有相应的CD36基因，因此①②③④分别填＋-＋＋。
22．(1) sgRNA 低
(2)95%空气加5%CO2的混合气体
(3) 促性腺激素 MII中
(4) 同期发情 桑葚胚或囊胚
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理(选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理)；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存(对胚胎进行质量检查,此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段)；④对胚胎进行移植;⑤移植后的检查。
【详解】（1）CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体。其中的sgRNA负责识别并结合特定DNA序列，引导蛋白对目的基因进行编辑。sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越低，因为其通过碱基互补配对与待编辑序列结合。
（2）取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系，该过程用到了动物细胞培养技术，在细胞在培养过程中，首先应保证其处于无菌、无毒的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是95%空气加5%CO2的混合气体。
（3）为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射促性腺激素，其可促进卵巢产生更多的卵母细胞，获得的卵母细胞应在体外培养到MII中期。在对卵母细胞去核时，可采用的方法有显微操作法、梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等。
（4）克隆本质上是一种无性繁殖，该过程最后一道工序是胚胎移植，胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。为实现这一工序，为了保证胚胎移植的成功率，需用相应激素对受体母犬进行同期发情处理，使供体和受体的生理状态相同。重构胚通常需要发育到桑葚胚或囊胚阶段才能进行胚胎移植，因为此时的胚胎容易操作，且处于游离状态。
23．(1)黏性末端
(2) T4DNA连接酶 磷酸二酯键 ② 4
(3) 不能 自身的DNA分子进行了甲基化修饰，也可能是自身DNA中不存在体内限制酶的识别序列 不同生物的DNA分子结构和化学组成相同
(4) 复制原点 用于筛选成功导入目的基因的受体细胞。
【分析】基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
【详解】（1）结合图示可知，经PstⅠ切割后产生的末端类型为黏性末端。黏性末端可用E．coliDNA连接酶连接。
（2）限制酶SmaI和EcoRV切割形成的末端为平末端，可通过T4DNA连接酶连接酶相互连接，只是连接效率低而已，DNA连接酶和限制酶作用的部位都是磷酸二酯键，前者将DNA片段之间的磷酸二酯键连接起来，后者将特定部位的磷酸二酯键分割开，磷酸二酯键位于下图中的②。若想将环状DNA分子的一段切割下来，需要破坏4个该化学键。
（3）限制酶不能切割原核细胞自身的DNA，其原因可能是自身的DNA分子进行了甲基化修饰，也可能是自身DNA中不存在体内限制酶的识别序列，不同生物的DNA分子之所以能拼接起来，其原因是不同生物的DNA分子结构（双螺旋结构）和化学组成相同，同时这也是基因工程的理论基础。
（4）质粒携带目的基因进入受体细胞后能进行自我复制，是因为其具有复制原点，此外用于运载目的基因的质粒上还需要具有标记基因，其目的是用于筛选成功导入目的基因的受体细胞。
24．(1) 敌敌畏 液体 碳源、氮源（和维生素） 调节渗透压、充当（酸碱）缓冲物质/调节酸碱度
(2) （常年）施用敌敌畏 平板划线法 划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌体数目逐渐被稀释（减少），最后可能形成单个菌落
(3) 敌敌畏的剩余量 0.2
(4) 在一定温度下（沸水浴冷却后），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色 DNA分子的大小和构象、凝胶浓度
【分析】培养基从功能上可划分为选择培养基和鉴别培养基，从物理性质上可划分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基，从成分上可划分为天然培养基和合成培养基。
【详解】（1）微生物驯化是指在培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，得到对此种物质耐受或者能降解此种物质的微生物的过程，该实验目的是筛选抗敌敌畏的微生物，故驯化时，培养液逐步加入的物质X是敌敌畏，这样操作的目的是筛选出高效分解敌敌畏的微生物；由图可知，该驯化培养基中并未加入凝固剂如琼脂等，故依照物理性质划分，驯化培养基属于液体培养基；蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质；氯化钠和磷酸二氢钾除提供无机盐外，在培养基中还分别具有调节渗透压、充当酸碱缓冲物质的作用。
（2）由提供信息可知，该实验的目的是从土壤中筛选能能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，故用于筛选的样品应来自常年施用敌敌畏的土壤，这样能够增加获得目的菌的概率；结合题图可知，将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为平板划线法；该方法中，划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，故该方法不需要梯度稀释也能获得单菌落。
（3）单位时间内剩余的敌敌畏越少，说明筛选出的微生物分解敌敌畏的能力越强，故通过测定培养瓶中敌敌畏的剩余量，可筛选出分解敌敌畏能力较强的微生物；微生物计数时应选择菌落数目在30-300之间的进行计数，统计菌落数分别为250、247、312、253，则菌落的平均数（250＋247＋253）/3=250个，图中稀释倍数是104，由公式可知250/Y×104=1.25×107个/mL可知，涂布菌液Y=0.2ml。
（4）在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。DNA分子有线性的、环状的，因此获得PCR产物后，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定，影响DNA分子迁移速率的主要因素有DNA分子的大小和构象、凝胶浓度。
25．(1) 等于 3' 突变型lox基因转录得到的mRNA中，终止密码子提前出现，使肽链合成提前终止，从而导致脂肪氧化酶缺失
(2) 检测速度快、不受环境影响、不需大面积土地，在实验室可操作（合理即可） 野生型：突变型=3：1或突变型：野生型=3：1
(3)敲除lox基因、诱导lox基因突变
【分析】基因突变是DNA分子中碱基对的增添、缺失或替换而引起的基因结构的改变；碱基对的增添、缺失或替换如果发生在基因的非编码区，则控制合成的蛋白质的氨基酸序列不会发生改变，如果发生在编码区，则可能因此基因控制合成的蛋白质的氨基酸序列改变，碱基对替换往往只有一个密码子发生改变，翻译形成的蛋白质中的一个氨基酸发生变化，若基因突变后密码子变为终止密码子，则会导致翻译提前终止，碱基对增添或缺失往往会引起从突变点之后的多个密码子发生变化，基因控制合成的蛋白质的多个氨基酸发生改变。
【详解】（1）野生型lox3基因因为碱基对替换突变为了突变型lox3基因，基因中碱基对数量未改变，转录出的mRNA长度不变；tRNA的3'端为羟基端，是氨基酸结合部位；mRNA上第1497为核苷酸刚好提供第499个密码子的最后一个含氮碱基，由图分析，编码第499位密码子的TGG突变为TGA，经转录后密码子变为终止密码子UGA，导致翻译时肽链合成提前终止，从而导致脂肪氧化酶缺失。
（2）①传统自交鉴定基因型的原理为基因分离定律，杂合子自交会出现性状分离，此过程需野外种植，观察统计子代表型，植株生长、表型均受环境影响，时间上，需要下一代生长至表型出相关性状，因此，酶切法与电泳技术相结合鉴定基因型具有检测速度快、不受环境影响、不需大面积土地，在实验室可操作等优势；
②WT为纯和野生型，MT为纯和突变型，杂交后F1为杂合子，既有野生型基因，又有突变型基因，则经酶切后电泳，既有WT的条带，也有MT的条带。如下图：
③F1为杂合子自交，后代显性性状：隐性性状=3：1，因野生型与突变型显隐关系未知，则野生型：突变型=3：1或突变型：野生型=3：1两种可能。
（3）根据题意，需要细胞中脂肪氧化酶缺失，则要么无控制合成脂肪氧化酶的基因，可用基因敲除技术，要么诱导野生型lox3基因突变，使其无法指导合成具有正常生理活性的脂肪氧化酶。
答案第1页，共2页
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学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
一、单选题
1．下图为DNA 分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次为（ ）
A．DNA 连接酶、限制酶、解旋酶
B．限制酶、解旋酶、DNA连接酶
C．限制酶、DNA连接酶、解旋酶
D．解旋酶、限制酶、DNA连接酶
2．CRISPR/dCas9基因抑制系统来源于CRISPR/Cas9，Cas9酶能够切割核酸片段，当其特定的结构区域发生改变后，失去切割功能，称为dCas9，但仍然能由gRNA引导后与DNA结合，如下图所示。对该系统理解错误的是（ ）
A．CRISPR/dCas9是由蛋白质与RNA构成的复合体
B．正常的Cas9酶不能催化磷酸二酯键的断裂
C．gRNA能与DNA上特定的碱基序列互补配对
D．dCas9与靶位点结合可以直接干扰转录的进行
3．已知限制酶BamHI和BglⅡ的识别序列及切割位点分别是-G↓GATCC-、-A↓GATCT-。下列叙述正确的是（ ）
A．限制酶和解旋酶均可催化氢键的断裂
B．所有限制酶的识别序列均由6个核苷酸组成
C．上述两种限制酶切割产生的末端只能用E．coliDNA连接酶进行“缝合”
D．上述两种限制酶切割产生的末端之间相互连接后，可能不会再被这两种限制酶识别
4．下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A．与家兔血相比，洋葱更适合用于DNA的粗提取与鉴定
B．DNA不溶于酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液
C．向经酒精处理得到的白色丝状物中加入蛋白酶，可提高DNA相对含量
D．研磨材料得到的滤液应在4℃冰箱中静置或离心，取沉淀进行后续操作
5．下列有关“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是（ ）
A．用玻璃棒沿一个方向快速搅拌， 卷起丝状物，可提高DNA的粗提取量
B．洋葱研磨液在4℃冰箱中放置几分钟，可降低DNA水解酶的活性
C．采用体积分数为95%的酒精溶液析出DNA的方法可去除部分杂质
D．在溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后呈蓝色
6．关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”（实验Ⅰ）和“DNA的粗提取与鉴定”（实验Ⅱ）的实验操作，下列相关叙述正确的是（ ）
A．实验Ⅰ中，PCR实验所需的移液器、枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理
B．实验Ⅰ中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，加样前应先接通电源
C．实验Ⅱ中，取洋葱研磨液的上清液，加入等体积冷酒精后析出粗提取的DNA
D．实验Ⅱ中，将白色丝状物直接加入二苯胺试剂中并进行沸水浴，用于鉴定DNA
7．同尾酶是一类识别不同核苷酸序列但切割后产生相同黏性末端的限制酶，依靠同尾酶的这种特性，可以根据需要将不同的DNA片段进行灵活重组。下列叙述正确的是（ ）
A．产生限制酶的生物大多没有核膜包被的细胞核
B．限制酶能识别DNA和RNA中特定的核苷酸序列
C．限制酶可为磷酸二酯键水解提供所需活化能
D．同尾酶是一类限制酶，每种限制酶都存在其同尾酶
8．下列有关基因工程操作工具的叙述，正确的是（ ）
A．限制性内切核酸酶将DNA双链切割成两条单链
B．限制性内切核酸酶的基因只存在于微生物中
C．质粒DNA分子上有一个或多个限制酶切割位点
D．将动物基因转入大肠杆菌等宿主细胞内只能以病毒为载体
9．高中生物实验中、下列实验操作能达成所述目标的是（ ）
A．选择生物实验材料时，只要含有丰富的葡萄糖就可直接用于还原性糖的鉴定
B．鉴定DNA时，将丝状物溶于2mol/LNaCl溶液，再加入二苯胺试剂即呈蓝色
C．使用显微镜观察洋葱根尖细胞有丝分裂时，视野中处于分裂中期的细胞最多
D．观察植物细胞吸水和失水时，可以使用蔗糖溶液处理紫色洋葱鳞片叶外表皮
10．同尾限制酶简称同尾酶，指一类限制性核酸内切酶，它们的来源不同，能够对DNA切割产生相同的黏性末端，而其识别序列的特异性不同。下表中，属于同尾酶的组合是（ ）
限制酶名称 识别序列和切割位点 限制酶名称 识别序列和切割位点
BamH I G↓ GATCC Kpn I GGTAC↓ C
EcoR I G↓ AATTC Sau3A I ↓GATC
Hind II GTY↓RAC Sma I CCCT↓GGG
（注：Y=C或T；R=A或G ）
A．BamH I和Sau3A I B．EcoR I和Kpn I C．Sau3A I和Sma I D．Hind II和Sma I
11．“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程如下图。下列选项是某同学的总结，其中叙述错误的是（ ）
A．①过程为裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质
B．②过程为分离：可去除混合物中的多糖、蛋白质等
C．③过程为沉淀：反复多次可以完全去除蛋白质杂质
D．④过程为鉴定：在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色
12．下列关于DNA粗提取与鉴定的叙述，错误的是（ ）
A．DNA溶于酒精，某些蛋白质不溶于酒精
B．用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热
C．DNA析出过程中，搅拌操作要轻柔以防DNA断裂
D．用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量不同
13．以下生物学实验的部分操作过程，正确的是（ ）
选项 实验名称 实验操作
A． 制作米酒 向蒸熟后冷却的糯米中加入酵母菌， 并将容器封住
B． 培养硝化细菌 在培养基中加入碳源、水和无机盐（包括铵盐）
C． DNA 的粗提取与鉴定 将丝状物放入2mol/LNaCl溶液再加二苯胺试剂，沸水浴中加热，冷却后观察溶液颜色变化
D． 酵母菌的纯培养 在酒精灯火焰旁倒平板，完成后立即将培养皿倒置
A．A B．B C．C D．D
14．真核细胞转座子有逆转录转座子和 DNA 转座子之分，可在染色体内部和染色体间转移。该过程依托转座酶将转座子两端特定序列进行切割，再将其插入到DNA分子的特定位点中，具体机制如下图①和②所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．转座酶和限制性内切核酸酶均可破坏磷酸二酯键
B．转座引起的变异类型有基因突变、基因重组和染色体变异
C．DNA转座子只改变其在染色体上的位置，总数保持不变
D．逆转录转座子通常存在于外显子等不易于转录的区域
15．如表列举了几种限制酶的识别序列及其切割位点（箭头表示相关酶的切割位点）。如图是酶切后产生的几种末端。下列说法正确的是（ ）
限制酶 AluⅠ BamHⅠ SmaⅠ Sau3AⅠ
识别序列 切割位点 AG↓CT TC↑GA G↓GATCC CCTAG↑G CCC↓GGG GGG↑CCC ↓GATC CTAG↑
A．②④⑤对应的识别序列均能被Sau3A I识别并切割
B．Sau3AⅠ和BamHⅠ切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C．BamHⅠ切割的是氢键，AluⅠ切割的是磷酸二酯键
D．T4DNA连接酶即能连接①③，也能连接②⑤，但后者连接效率低
16．下面是几种不同限制性内切核酸酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述错误的是（ ）
A．以上DNA片段由4种限制酶切割后产生
B．②片段是在识别序列为的限制酶作用下形成的
C．①和④两个片段在T4DNA连接酶的作用下不能连接形成重组DNA分子
D．限制酶、DNA连接酶和DNA聚合酶作用的部位都是磷酸二酯键
二、多选题
17．“DNA粗提取与鉴定”实验的相关叙述中，错误的是（ ）
A．实验材料可以使用猪肝
B．研磨后的研磨液经过离心后，去除上清液，保留沉淀物备用
C．可利用预冷的体积分数为95%的酒精初步分离DNA与蛋白质
D．鉴定时向试管中加入二苯胺试剂后静置5min，呈现蓝色
18．某实验小组探究了“DNA的粗提取与鉴定”实验中不同去杂质方法对实验结果的影响，结果如下表所示。下列相关叙述正确的是（ ）
去杂质方法 沉淀质量（g） DNA浓度（ng/μL） OD260/OD280 二苯胺鉴定
离心 0.068 81.5 1.53 蓝色
4℃冰箱静置 0.1028 336.4 1.41
注：纯DNA的OD260/OD280=1.8；当存在蛋白质污染时，OD260/OD280的值明显降低。
A．实验操作前需打开超净工作台上的紫外灯
B．与猪血相比，洋葱更适合用于DNA的粗提取
C．用离心法去除杂质有利于获得更高纯度的DNA
D．鉴定DNA时将二苯胺试剂加入待测样液即可出现蓝色
19．研究人员通过实验探究不同储藏条件对棉花叶片DNA纯度及提取率（提取率越高，获得的DNA越多）的影响，结果如图所示。下列相关叙述错误的是（ ）
A．DNA能溶于酒精，故可用酒精处理棉花叶片提取DNA
B．通过粗提取获得的DNA中可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质
C．用二苯胺进行鉴定时，相同体积下可通过比较试管蓝色深浅判断DNA含量
D．进行DNA粗提取实验前最佳的处理方式为将棉花叶片冷鲜处理3天
20．某细菌DNA分子上有4个Sau3AⅠ的酶切位点，经Sau3AⅠ处理后会形成4个大小不同的DNA片段。若是用BamHⅠ处理，则只会形成2个大小不同的DNA片段。Sau3AⅠ和BamHⅠ的识别序列及切割位点如表所示。下列叙述不正确的是（ ）
限制酶名称 识别序列及切割位点
BamHI G↓GATCC
Sau3AI ↓GATC
A．BamHⅠ切割后产生的是黏性末端，Sau3AⅠ切割后产生的是平末端
B．Sau3AI和BamHI切割产生的片段能够相连，但连接后的片段两者都不能再切割
C．上述两种限制酶切割出的末端只能用E.coli DNA连接酶进行“缝合”
D．若用两种酶共同处理，会形成4个大小不同的DNA片段
三、非选择题
21．为构建肝特异性CD36基因敲除小鼠模型。研究人员利用Cre-1oxP系统开展实验。Cre可识别DNA分子中特定的loxP序列，并将两个loxP序列之间的DNA序列剪除，切口连接形成的环化产物被降解，从而达到敲除特定基因的目的，如图所示。
(1)一个1oxP序列的内部被Cre重组酶切割后会增加 个游离的磷酸基团。
(2)当两个loxP序列位于同一个DNA分子上且方向相同时，Cre重组酶能将两个切割位点之间的核苷酸序列切除并形成环状而失活，剩余序列会连接起来。据此可知，Cre重组酶在此过程中的作用类似于 酶。当两个LoxP序列方向相反时，Cre重组酶使两个IoxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于 。
(3)如图显示两类工具鼠，其中A鼠成对的CD36基因两侧分别引入一个同向loxP序列（基因型表示为L+L-，野生型为L-L-），B鼠中含一个外源导入的Cre编码序列（基因型表示为C+C+，野生型为C-C-），Alb表示肝脏组织特异性启动子。利用A、B两类工具鼠作为亲本，选用合适的杂交策略，即可获得肝特异性CD36基因敲除目标小鼠。
①启动子的作用是：
②目标小鼠的基因型应为 。
A．L+L+C+C- B．L+L+C-C-
C．L-L-C+C+ D．L+L-C+C-
③选择合适的杂交策略，目标小鼠最早可出现在子 代。
(4)取鼠尾细胞通过琼脂糖凝胶电泳鉴定子代1~8号小鼠的基因型，结果如图3。已知A鼠、B鼠的基因型检测结果分别与图中子代6号、1号小鼠相同，则图中代表目标小鼠的是 号。
(5)对目标小鼠不同组织细胞基因检测，请将预期结果填在下面的表格中。（+表示存在，-表示缺失）
细胞类型 Cre编码序列 CD36基因
肝脏细胞
肾脏细胞
22．研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：
(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的 负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越 （填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于无菌、无毒的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是 。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射 ，获得的卵母细胞应在体外培养到 期。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是无性繁殖。胚胎移植前，需对供、受体犬进行 处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到 阶段才能进行胚胎移植。
23．限制酶、DNA连接酶和载体是基因工程所需的三种基本工具，下图是几种限制酶的切割位点，回答以下问题：
(1)经PstⅠ切割后产生的末端类型是 。
(2)限制酶SmaI和EcoRV切割形成的末端，可通过 连接酶相互连接，DNA连接酶和限制酶作用的部位都是 ，该作用部位位于下图中的 。若想将环状DNA分子的一段切割下来，需要破坏 个该化学键。
(3)限制酶 （填“能”或“不能”）切割原核细胞自身的DNA，试推测其理由是 ，不同生物的DNA分子能拼接起来的原因是 （写出两点）。
(4)质粒携带目的基因进入受体细胞后能进行自我复制，是因为其具有 ，此外质粒上具有标记基因的目的是 。
24．微生物驯化是指在微生物培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，从而得到对此物质高耐受或能降解该物质的微生物。科研人员现采用微生物驯化结合传统接种的方法筛选能高效降解有机磷农药—敌敌畏的微生物，并设计了如下实验流程。请据此回答以下问题：
(1)已知驯化培养基成分为蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、磷酸二氢钾、水等，驯化时逐步加入的物质X是 。依照物理性质划分，驯化培养基属于 培养基，其中蛋白胨可提供 ，氯化钠和磷酸二氢钾两种无机盐，在培养基中具有 的作用（至少答两点）。
(2)用于筛选的样品应来自 的土壤。将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为 ，该方法不需要梯度稀释也能获得单菌落，原因是 。
(3)将培养基B中分离得到的单菌落分别接种于以敌敌畏为唯一碳源的培养基C，培养24小时后，通过测定培养基中 ，可筛选分解敌敌畏能力较强的微生物。为统计培养基C中的微生物数量，在如图所示的稀释度下涂布了4个平板培养基D，统计菌落数分别为250、247、312、253，测得培养基C中活菌数为1.25×107个/mL，则涂布的菌液Y为 mL。
(4)为获得纯培养物的高耐受基因X，实验小组应用纯培养物提取了DNA，检测DNA所用的原理是 。获得PCR产物后，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定，影响DNA分子迁移速率的主要因素有 （答出两点即可）。
25．我国为确保粮食安全，在粮食生产与储存方面做了大量科研。科研人员通过测序确认水稻突变型lox3基因与野生型相比，只在编码区第1497位核苷酸发生“G→A”的替换，如图所示，导致脂肪氧化酶缺失。脂肪氧化酶是催化稻谷本身脂质降解的关键酶，脂肪氧化酶缺失可延缓稻谷的陈化变质。已知UAG、UAA、UGA为终止密码子。请回答下列问题：
(1)据图分析，野生型与突变型lox3基因转录得到的mRNA长度关系是：野生型的mRNA （填“长于”、“短于”或“等于”）突变型的mRNA；在多肽合成过程中，tRNA“搬运”氨基酸到核糖体上，氨基酸结合部位在tRNA的 端。从基因表达的角度分析，突变型的脂肪氧化酶缺失，原因是 。
(2)科研人员利用电泳技术，可以精准鉴定出突变型植株。具体方法如下：利用某种限制性内切酶处理野生型lox3基因，经电泳，可以得到2条电泳带；使用同种限制性内切酶处理突变型lox3基因，经电泳，可以得到1条电泳带；结果如下图。
注：WT代表纯合野生型；MT代表纯合突变型
①与传统自交鉴定出纯合突变型相比，上述方法的优势有 。（写出2个方面）。
②将WT和MT杂交，得到F1。请在图中画出同种限制性内切酶处理F1的lox3基因后经电泳出现的结果 （在答题卡相应区域将对应位置的条带涂黑）。
③若将上述的F1进行自交，则后代的表型及比例为 。
(3)耐储特性优良的水稻品种可以满足稻米消费需求，可见脂肪氧化酶缺失突变体对生产生活的重要性，运用所学知识，列举2种获得脂肪氧化酶缺失突变体的方法 。
试卷第1页，共3页
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参考答案：
1．D
【分析】解旋酶：能使DNA分子两条链之间的氢键断裂，使DNA双链打开。
限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
DNA连接酶：连接的是两个DNA片段之间的磷酸二酯键。
【详解】①处为氢键，是解旋酶的作用部位；②处为磷酸二酯键，是限制酶的作用部位；③处为两个DNA片段的缺口，是DNA连接酶的作用部位，催化磷酸二酯键的形成，即D正确。
故选D。
2．B
【分析】由题干和题图可知，Cas9蛋白为限制酶，在gRNA引导下能特异性切割靶向基因；dCas9蛋白无切割功能，是由Cas9基因突变后表达形成的蛋白质，但可与靶向基因的启动子区域结合使靶向基因失去功能。
【详解】A、由题可知，CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，A正确；
B、Cas9蛋白为限制酶，能够切割核酸片段，能催化磷酸二酯键的断裂，B错误；
C、由题意可知，gRNA识别受体细胞中的靶向基因序列，gRNA为RNA分子，通过碱基互补配对识别靶向基因DNA分子，C正确；
D、由图可知，dCas9蛋白可与靶基因的启动子结合，阻止其转录过程，D正确。
故选B。
3．D
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端。
【详解】A、限制酶破坏的是磷酸二酯键，解旋酶破坏的是氢键，A错误；
B、不同限制酶识别序列有差异，限制酶的识别序列可能由4个、6个、8个或其他数目的核苷酸组成，B错误；
C、上述两种限制酶切割出的末端为粘性末端，能用E.coliDNA连接酶和T4 DNA连接酶进行“缝合”，C错误；
D、上述两种限制酶切割出的末端之间相互连接后形成的序列为 ，不会再被两种限制酶识别，D正确。
故选D。
4．D
【分析】DNA的粗提取和鉴定的原理：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA和蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2的NaCl溶液中。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
【详解】A、家兔为哺乳动物，成熟红细胞不含细胞核和细胞器，而洋葱中DNA含量较高，因此与家兔血相比，洋葱更适合用于DNA的粗提取与鉴定，A正确；
B、DNA不容易酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，DNA可溶于2mol/L的NaCl溶液，B正确；
C、经酒精处理得到的白色丝状物中含有一定的蛋白质杂质，可加入蛋白酶，去除蛋白质杂质，提高DNA的相对含量，C正确；
D、为防止DNA断裂，应将研磨液在4℃冰箱中静置或离心，但要取滤液进行后续操作，D错误。
故选D。
5．A
【分析】DNA粗提取的原理：①DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精，从而初步分离DNA和蛋白质。②DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液，从而溶解DNA。③在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色，从而鉴定DNA。
【详解】A、用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌（快速搅拌会破坏DNA分子的完整性），能让DNA充分溶解于NaCl溶液中，可提高DNA的粗提取量，A错误；
B、洋葱研磨液在4℃冰箱中放置几分钟，可降低DNA水解酶的活性，防止DNA降解，B正确；
C、DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理可将DNA与蛋白质进一步分离，进行DNA的粗提取，C正确；
D、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会呈现蓝色，故在溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂，沸水浴后呈蓝色，D正确。
故选A。
6．C
【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、实验Ⅰ中，PCR实验所需的枪头、蒸馏水等必须进行高压灭菌处理，移液器不需要进行高压蒸汽灭菌处理，A错误；
B、实验Ⅰ中，将扩增得到的PCR产物进行凝胶电泳，应先加样后接通电源，B错误；
C、实验Ⅱ中，取洋葱研磨液的上清液，由于DNA不溶于酒精溶液，加入等体积冷酒精后析出粗提取的DNA，C正确；
D、实验Ⅱ中，将丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液后加入二苯胺试剂，在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，用于鉴定DNA，D错误。
故选C。
7．A
【分析】限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。限制酶切割产生的末端有黏性末端和平末端两种。
【详解】A、限制酶主要从原核生物中分离纯化得到，原核生物没有核膜包被的细胞核，A正确；
B、限制酶识别DNA分子的特定核苷酸序列，B错误；
C、限制酶起催化作用，作用机理为降低化学反应所需活化能，但不提供能量，C错误；
D、DNA分子经限制酶切割后可形成黏性末端和平末端，产生平末端的限制酶不存在同尾酶，D错误。
故选A。
8．C
【分析】1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体、动植物病毒。
2、作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因）③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
【详解】A、限制性核酸内切酶将一个DNA双链片段切割成两个DNA分子片段，而不是切割成两条单链，A错误；
B、限制性核酸内切酶主要来源于微生物，故限制性核酸内切酶的基因主要存在于微生物体内，B错误；
C、质粒是一种常用的运载体，必须具备的条件之一是：具有一个或多个限制酶的切割位点，以便与外源基因连接，C正确；
D、常用的运载体有质粒、噬菌体、动植物病毒，可用质粒和噬菌体的衍生物作为载体，将动物基因转入大肠杆菌等宿主细胞内，D错误。
故选C。
9．D
【分析】1、二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂，在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下逐渐变成蓝色。
2、观察植物细胞吸水和失水时，需要选择有颜色的成熟的植物细胞，紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞符合条件。
【详解】A、选择生物实验材料时，并不是只要含有丰富的葡萄糖就可直接用于还原性糖的鉴定，还应选择无色或白色的材料，A错误；
B、二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂，在DNA溶液中加入二苯胺试剂，混匀后在沸水浴条件下逐渐变成蓝色，B错误；
C、细胞周期中间期远大于分裂期，因此使用显微镜观察洋葱根尖细胞有丝分裂时，视野中处于分裂间期的细胞最多，C错误；
D、紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞是成熟的植物细胞，且液泡含有颜色，观察植物细胞吸水和失水时，可用较高浓度的蔗糖溶液处理紫色洋葱鳞片叶外表，使其失水而发生质壁分离，D正确。
故选D。
10．A
【分析】根据题意可知，切割出相同的黏性末端的限制酶称为同尾酶。
【详解】A、BamH I和Sau3A I限制酶切割后形成的黏性末端分别是、，属于同尾酶，A正确；
B、EcoR I和Kpn I限制酶切割后形成的黏性末端分别是、，不属于同尾酶，B错误；
C、Sma I限制酶切割后形成的末端是平末端，Sau3A I限制酶切割后形成的是黏性末端，不属于同尾酶，C错误；
D、Hind II和Sma I限制酶切割后形成的末端均是平末端，且末端序列不同，不属于同尾酶，D错误。
故选A。
11．C
【分析】DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。例如，DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。
【详解】A、①过程为裂解过程，称取样品放入研钵中，倒 入研磨液，充分研磨，使细胞破裂释放出DNA等物质，A正确；
B、②过程为分离过程，在漏斗中垫上纱布，将研磨液过滤到烧杯中，在 4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液，可去除混合物中的多糖、蛋白质等，B正确；
C、③过程为沉淀，在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液，静置 2 3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌， 卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。反复多次可以提高DNA的纯度，但无法完全去除蛋白质杂质，C错误；
D、④过程为鉴定，在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂，D正确。
故选C。
12．A
【分析】DNA粗提取选材的标准：DNA含量高，并且材料易得。由于哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和细胞器，因此不采用哺乳动物的血液。DNA粗提取和鉴定的原理：
1、DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCI溶液中溶解度不同（DNA在0.14mol/L的氯化钠中溶解度最低）；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。
2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同。
3、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精，A错误；
B、在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，即用二苯胺试剂鉴定DNA需要进行水浴加热，B正确；
C、DNA分子从细胞中被释放出来且除去蛋白后是非常容易断裂的，如果太过剧烈的搅拌，DNA链可能会被破环，因此轻柔搅拌的目的是为了获得较完整的DNA分子，C正确；
D、兔属于哺乳动物，其红细胞没有细胞核及各种细胞器，提取不到DNA，因此用同样方法从等体积兔血和鸡血中提取的DNA量不同，D正确。
故选A。
13．C
【分析】酵母菌纯培养的过程分为以下几步：①制备培养基；②灭菌：将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，将培养皿放入干热灭菌箱内灭菌；③倒平板；④接种和分离酵母菌；⑤培养酵母菌。
【详解】A、 制作米酒时，先将糯米蒸熟后倒入清洁的容器中，待糯米冷却至温热时，加入酒曲并搅拌均匀，最后把容器密封好，A错误；
B、硝化细菌属于自养生物，能够氧化无机氮化物所放出的能量，将二氧化碳和水合成为葡萄糖，所以在培养基中加入碳源、水和无机盐（不包括铵盐，铵盐中含有氮元素），B错误；
C、DNA粗提取后，对DNA进行鉴定的操作是：将含有DNA的丝状物溶解在2mol/L的NaCl溶液中，搅拌使其充分溶解后，加入4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min，冷却后观察溶液颜色蓝色，从而鉴定DNA的存在，C正确；
D、酵母菌纯培养的过程分为以下几步：①制备培养基；②灭菌：将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，将培养皿放入干热灭菌箱内灭菌；③倒平板；④接种和分离酵母菌；⑤培养酵母菌，应在酒精灯火焰旁倒平板，待平板泠却凝固后将培养皿倒置，D错误。
故选C。
14．D
【分析】可遗传的变异有三种来源：基因突变、染色体变异和基因重组。（1）基因突变是基因结构的改变，包括碱基对的增添、缺失或替换。（2）基因重组的方式有同源染色体上非姐妹单体之间的交叉互换和非同源染色体上非等位基因之间的自由组合，另外，外源基因的导入也会引起基因重组。（3）染色体变异是指染色体结构和数目的改变。
【详解】A、转座酶将转座子两端特定序列进行切割，破坏的是磷酸二酯键，限制性内切核酸酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，因此转座酶和限制性内切核酸酶均可破坏磷酸二酯键，A正确；
B、转座子在DNA分子内部转移，可造成基因突变，在真核细胞染色体内部转移，可造成基因重组，在染色体间转移造成染色体变异，B正确；
C、由图可知，逆转录转座子不仅改变其在染色体上的位置，总数还会增多，DNA转座子只改变其在染色体上的位置，总数保持不变，C正确；
D、编码区分为能编码蛋白质的外显子和不能编码蛋白质的内含子，逆转录转座子通常存在于外显子等易于转录的区域，D错误。
故选D。
15．A
【分析】限制性内切核酸酶，简称限制酶：
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来；
（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂；
（3）结果：形成黏性末端或平末端。
【详解】A、②④⑤对应的识别序列都存在GATC，都能被Sau3AⅠ识别并切割，A正确；
B、BamHⅠ切割G↓GATCC，Sau3AⅠ切割↓GATC，故二者切割后产生的黏性末端是相同的，因此二者切割后产生的黏性末端能够相连，连接后仍然存在GATC的序列，能被Sau3AⅠ切割，但是BamHⅠ不一定能切割，B错误；
C、BamHⅠ与AluⅠ切割的均是磷酸二酯键，C错误；
D、T4DNA连接酶既可以连接黏性末端也可以连接平末端，而图中①、③属于平末端，②⑤是黏性末端，T4DNA连接酶连接平末端时效率较低，D错误。
故选A。
16．B
【分析】分析题图：图示为几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段，其中①④具有相同的黏性末端；②经过限制酶切割后形成的是黏性末端；③经过限制酶切割后形成的是平末端。
【详解】A、碱基序列具有方向性，图中①④的黏性末端虽然相同，但不能互补配对，限制酶的识别序列一般是带有黏性末端的一条链上由5’→3’端读，图中四种类型的限制酶的识别序列各不相同，故是由4种限制酶切割后产生的，A正确；
B、②片段是在酶切位点为 的限制酶作用下形成的，B错误；
C、黏性末端的碱基序列具有方向性，①和④两个片段在T4DNA连接酶的作用下不能连接形成重组DNA分子，C正确；
D、限制酶可破坏磷酸二酯键，DNA连接酶和DNA聚合酶可催化形成磷酸二酯键，D正确。
故选B。
17．BD
【分析】DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液；在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
【详解】A、肝细胞含有细胞核和众多的细胞器，可以使用猪肝作为实验材料，A正确；
B、研磨后的研磨液经过离心后，可以使用纱布对研磨液进行过滤，并获取上清液，上清液中含有DNA，B错误；
C、DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的蛋白质等其他物质可以溶解于酒精，本实验使用了预冷的体积分数为95%的酒精，目的是析出提取含杂质较少的DNA，C正确；
D、DNA鉴定时向试管中加入二苯胺试剂后，应将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后可观察到蓝色，D错误。
故选BD。
18．ABC
【分析】DNA的粗提取与鉴定的实验原理是：①DNA的溶解性，DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，利用这一特点可以选择适当浓度的盐溶液可以将DNA溶解或析出，从而达到分离的目的；②DNA不溶于酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离；③在沸水浴的条件下DNA遇二苯胺会呈现蓝色。
【详解】A、实验操作前需打开超净工作台上的紫外灯形成一个较稳定的无菌环境，A正确；
B、猪属于哺乳动物，其成熟红细胞没有细胞核及各种细胞器，提取不到DNA，而洋葱细胞内含有细胞核与各种细胞器，DNA含量较多，可以用来提取DNA，B正确；
C、离心能够加速细胞膜、细胞器、一些较大杂质的沉淀，离心法可以获得更高纯度的DNA，C正确；
D、在沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色，D错误。
故选ABC。
19．AD
【分析】DNA粗提取和鉴定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。（2）DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
【详解】A、DNA不溶于酒精，A错误；
B、通过粗提取获得的DNA中可能仍然含有某些不溶于酒精，易溶于2mol/L NaCl溶液的核蛋白、多糖等杂质，B正确；
C、用二苯胺进行鉴定时，相同体积下可通过比较试管蓝色深浅判断DNA含量，蓝色越深说明DNA纯度越高，C正确；
D、分析图可知，棉花叶片的不同处理方式对其DNA的纯度和提取率都有影响，在冷冻3天的处理下，提取率和纯度均较高，D错误。
故选AD。
20．ABC
【分析】限制酶主要从原核生物中分离纯化出来。特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种。
【详解】A、BamHⅠ和Sau3AⅠ的酶切位点在中轴线两侧，切割后产生的都是黏性末端，A错误；
B、Sau3AI和BamHI切割产生的黏性末端相同，都是-GATC，切割后片段能够相连，连接后的片段仍含有GATC序列，可被 Sau3AI切割，B错误；
C、E.coli DNA连接酶可以连接黏性末端，而T4DNA连接酶可连接黏性末端和平末端，故上述两种限制酶切割出的末端可用E.coli DNA连接酶，也可用T4DNA连接酶进行“缝合”，C错误；
D、分析题意，细菌DNA分子上有4个Sau3AⅠ的酶切位点，经Sau3AⅠ处理后会形成4个大小不同的DNA片段，若是用BamHⅠ处理，则只会形成2个大小不同的DNA片段，而BamHI的识别序列包含Sau3AI识别序列，即若用两种酶共同处理，相当于用Sau3AⅠ处理，会形成4个大小不同的DNA片段，D正确。
故选ABC。
21．(1)2/二/两
(2) 限制酶和DNA连接酶 染色体结构变异（或倒位）
(3) RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录 A 二
(4)8
(5) ＋ － ＋ ＋
【分析】基因工程的基本步骤：（1）获取目的基因（从基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因）；（2）基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心）；（3）将目的基因导入受体细胞（植物、动物、微生物）；（4）目的基因的检测与鉴定（DNA分子杂交技术，分子杂交技术、抗原抗体杂交）。
【详解】（1）由题可知，Cre可识别DNA分子中特定的loxP序列，并将两个loxP序列之间的DNA序列剪除，所以被Cre重组酶切割后会增加2个游离的磷酸基团。
（2）结合图示可知，Cre能将双链DNA在特定部位切割开，切口连接形成环化产物，因此其类似于基因工程中的限制酶和DNA连接酶，当两个LoxP序列方向相反时，Cre重组酶使两个IoxP间的序列颠倒，由此产生的变异本质上属于染色体结构变异（或倒位）。
（3）①启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录。
②A、基因型为L+L+C +C -的目标鼠，其中含有的CD36基因无法表达，相当于获得了肝特异性CD36基因敲除目标小鼠，A正确；
B、基因型为L+L+C-C-的目标鼠中不含有肝组织特异性，不符合要求，B错误；
C、基因型为L-L-C+C+的目标鼠中CD36基因会表达，不符合要求，C错误；
D、基因型为L+L-C+C-的目标鼠中CD36基因会表达，不符合要求，D错误。
故选A。
③图中A鼠的基因型可表示为L+L+C -C -，B鼠的基因可表示为L-L-C+C-，二者杂交获得的子一代的基因型可表示为，L+L-C+C-和L+L-C-C-，而后让子一代中基因型为L+L-C+C-的小鼠与A鼠进行杂交即可获得基因型为L+L+C+C-的目标鼠，即最早可出现在子二代。
（4）已知A鼠的基因型为L+L+C-C-，对应6号，B鼠的基因型为L-L-C+C-，对应1号小鼠，而目标鼠的基因型为L+L+C+C-，则经过比对可以发现图3中代表目标小鼠的是8号。
（5）目标小鼠的肝脏细胞中CD36蛋白的表达量明显减少，而肾脏细胞中的表达量正常，肝脏细胞中有Cre编码序列，且有相应的在肝脏细胞中表达的特定的启动子，进而表达出Cre，肝脏细胞存在但不能表达出Cre，有相应的CD36基因，因此①②③④分别填＋-＋＋。
22．(1) sgRNA 低
(2)95%空气加5%CO2的混合气体
(3) 促性腺激素 MII中
(4) 同期发情 桑葚胚或囊胚
【分析】胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理(选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理)；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存(对胚胎进行质量检查,此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段)；④对胚胎进行移植;⑤移植后的检查。
【详解】（1）CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体。其中的sgRNA负责识别并结合特定DNA序列，引导蛋白对目的基因进行编辑。sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越低，因为其通过碱基互补配对与待编辑序列结合。
（2）取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系，该过程用到了动物细胞培养技术，在细胞在培养过程中，首先应保证其处于无菌、无毒的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是95%空气加5%CO2的混合气体。
（3）为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射促性腺激素，其可促进卵巢产生更多的卵母细胞，获得的卵母细胞应在体外培养到MII中期。在对卵母细胞去核时，可采用的方法有显微操作法、梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等。
（4）克隆本质上是一种无性繁殖，该过程最后一道工序是胚胎移植，胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。为实现这一工序，为了保证胚胎移植的成功率，需用相应激素对受体母犬进行同期发情处理，使供体和受体的生理状态相同。重构胚通常需要发育到桑葚胚或囊胚阶段才能进行胚胎移植，因为此时的胚胎容易操作，且处于游离状态。
23．(1)黏性末端
(2) T4DNA连接酶 磷酸二酯键 ② 4
(3) 不能 自身的DNA分子进行了甲基化修饰，也可能是自身DNA中不存在体内限制酶的识别序列 不同生物的DNA分子结构和化学组成相同
(4) 复制原点 用于筛选成功导入目的基因的受体细胞。
【分析】基因工程的工具：
（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。
（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。
【详解】（1）结合图示可知，经PstⅠ切割后产生的末端类型为黏性末端。黏性末端可用E．coliDNA连接酶连接。
（2）限制酶SmaI和EcoRV切割形成的末端为平末端，可通过T4DNA连接酶连接酶相互连接，只是连接效率低而已，DNA连接酶和限制酶作用的部位都是磷酸二酯键，前者将DNA片段之间的磷酸二酯键连接起来，后者将特定部位的磷酸二酯键分割开，磷酸二酯键位于下图中的②。若想将环状DNA分子的一段切割下来，需要破坏4个该化学键。
（3）限制酶不能切割原核细胞自身的DNA，其原因可能是自身的DNA分子进行了甲基化修饰，也可能是自身DNA中不存在体内限制酶的识别序列，不同生物的DNA分子之所以能拼接起来，其原因是不同生物的DNA分子结构（双螺旋结构）和化学组成相同，同时这也是基因工程的理论基础。
（4）质粒携带目的基因进入受体细胞后能进行自我复制，是因为其具有复制原点，此外用于运载目的基因的质粒上还需要具有标记基因，其目的是用于筛选成功导入目的基因的受体细胞。
24．(1) 敌敌畏 液体 碳源、氮源（和维生素） 调节渗透压、充当（酸碱）缓冲物质/调节酸碱度
(2) （常年）施用敌敌畏 平板划线法 划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌体数目逐渐被稀释（减少），最后可能形成单个菌落
(3) 敌敌畏的剩余量 0.2
(4) 在一定温度下（沸水浴冷却后），DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色 DNA分子的大小和构象、凝胶浓度
【分析】培养基从功能上可划分为选择培养基和鉴别培养基，从物理性质上可划分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基，从成分上可划分为天然培养基和合成培养基。
【详解】（1）微生物驯化是指在培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，得到对此种物质耐受或者能降解此种物质的微生物的过程，该实验目的是筛选抗敌敌畏的微生物，故驯化时，培养液逐步加入的物质X是敌敌畏，这样操作的目的是筛选出高效分解敌敌畏的微生物；由图可知，该驯化培养基中并未加入凝固剂如琼脂等，故依照物理性质划分，驯化培养基属于液体培养基；蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质；氯化钠和磷酸二氢钾除提供无机盐外，在培养基中还分别具有调节渗透压、充当酸碱缓冲物质的作用。
（2）由提供信息可知，该实验的目的是从土壤中筛选能能高效降解有机磷农药——敌敌畏的微生物，故用于筛选的样品应来自常年施用敌敌畏的土壤，这样能够增加获得目的菌的概率；结合题图可知，将驯化后的微生物接种于培养基B的方法为平板划线法；该方法中，划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着划线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落，故该方法不需要梯度稀释也能获得单菌落。
（3）单位时间内剩余的敌敌畏越少，说明筛选出的微生物分解敌敌畏的能力越强，故通过测定培养瓶中敌敌畏的剩余量，可筛选出分解敌敌畏能力较强的微生物；微生物计数时应选择菌落数目在30-300之间的进行计数，统计菌落数分别为250、247、312、253，则菌落的平均数（250＋247＋253）/3=250个，图中稀释倍数是104，由公式可知250/Y×104=1.25×107个/mL可知，涂布菌液Y=0.2ml。
（4）在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。DNA分子有线性的、环状的，因此获得PCR产物后，用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行鉴定，影响DNA分子迁移速率的主要因素有DNA分子的大小和构象、凝胶浓度。
25．(1) 等于 3' 突变型lox基因转录得到的mRNA中，终止密码子提前出现，使肽链合成提前终止，从而导致脂肪氧化酶缺失
(2) 检测速度快、不受环境影响、不需大面积土地，在实验室可操作（合理即可） 野生型：突变型=3：1或突变型：野生型=3：1
(3)敲除lox基因、诱导lox基因突变
【分析】基因突变是DNA分子中碱基对的增添、缺失或替换而引起的基因结构的改变；碱基对的增添、缺失或替换如果发生在基因的非编码区，则控制合成的蛋白质的氨基酸序列不会发生改变，如果发生在编码区，则可能因此基因控制合成的蛋白质的氨基酸序列改变，碱基对替换往往只有一个密码子发生改变，翻译形成的蛋白质中的一个氨基酸发生变化，若基因突变后密码子变为终止密码子，则会导致翻译提前终止，碱基对增添或缺失往往会引起从突变点之后的多个密码子发生变化，基因控制合成的蛋白质的多个氨基酸发生改变。
【详解】（1）野生型lox3基因因为碱基对替换突变为了突变型lox3基因，基因中碱基对数量未改变，转录出的mRNA长度不变；tRNA的3'端为羟基端，是氨基酸结合部位；mRNA上第1497为核苷酸刚好提供第499个密码子的最后一个含氮碱基，由图分析，编码第499位密码子的TGG突变为TGA，经转录后密码子变为终止密码子UGA，导致翻译时肽链合成提前终止，从而导致脂肪氧化酶缺失。
（2）①传统自交鉴定基因型的原理为基因分离定律，杂合子自交会出现性状分离，此过程需野外种植，观察统计子代表型，植株生长、表型均受环境影响，时间上，需要下一代生长至表型出相关性状，因此，酶切法与电泳技术相结合鉴定基因型具有检测速度快、不受环境影响、不需大面积土地，在实验室可操作等优势；
②WT为纯和野生型，MT为纯和突变型，杂交后F1为杂合子，既有野生型基因，又有突变型基因，则经酶切后电泳，既有WT的条带，也有MT的条带。如下图：
③F1为杂合子自交，后代显性性状：隐性性状=3：1，因野生型与突变型显隐关系未知，则野生型：突变型=3：1或突变型：野生型=3：1两种可能。
（3）根据题意，需要细胞中脂肪氧化酶缺失，则要么无控制合成脂肪氧化酶的基因，可用基因敲除技术，要么诱导野生型lox3基因突变，使其无法指导合成具有正常生理活性的脂肪氧化酶。
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