4.1转基因产品的安全性同步练习（含解析）2023——2024学年高生物人教版（2019）选择性必修必修3生物技术与工程
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| 名称 | 4.1转基因产品的安全性同步练习（含解析）2023——2024学年高生物人教版（2019）选择性必修必修3生物技术与工程 |  | |
| 格式 | docx | ||
| 文件大小 | 966.7KB | ||
| 资源类型 | 教案 | ||
| 版本资源 | 人教版（2019） | ||
| 科目 | 生物学 | ||
| 更新时间 | 2024-05-18 14:43:01 | ||
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文档简介
4.1 转基因产品的安全性 同步练习
学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
一、单选题
1．下列关于转基因产品与环境安全的叙述，正确的是（ ）
A．转基因生物可能会成为新的过敏原，引发新的过敏反应
B．种植抗虫棉等农作物可减少农药的使用，对环境没有任何影响
C．转基因产品可提高农作物的产量，应在贫穷区域大力栽种
D．转基因食品可能会带来安全性问题，不建议推广转基因技术
2．近日某医学中心科学家们完成了世界首例将猪的心脏移植到人体的跨物种器官移植手术并获成功，该技术起始时需要对猪的相关基因进行编辑处理。这项成果无疑给器官移植技术带来了更宽广的发展空间，也给生命科学带来了更多的希望与思考。下列关于该过程的推测正确的是（ ）
A．转基因猪的心脏引起的免疫排斥作用相对较强
B．对于器官衰竭患者来说，该成果给予了他们更多的希望与机会
C．任何物种的器官经基因编辑后都能移植到人体且不引起排斥反应
D．该成功标志着对人体基因进行大规模编辑以确保异种器官移植成功的时代来临
3．为了制定出控制转基因大豆向野生大豆基因漂移的安全管理措施，以下不能作为评估风险程度依据的是（ ）
A．转基因大豆与野生大豆的地理分布
B．转基因大豆与野生物种间的亲缘关系
C．野生大豆所含主要蛋白质种类及含量
D．传粉昆虫的种类、数量及生活习性
4．下列关于转基因生物与安全性的叙述，正确的是（ ）
A．转基因培育的植物，理论上目的基因只存在于特定的组织中
B．我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度
C．通过转基因技术生产药物只是转基因微生物方面的应用
D．如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不会存在安全性问题
5．有人认为“转基因生物和转基因食品不安全，要严格控制”，以下各项中支持此观点的是（ ）
A．通过转基因技术减少啤酒酵母双乙酰的生成，可以改良啤酒的风味和口感
B．转基因食品与非转基因食品一样，都是由脂肪、蛋白质和碳水化合物等物质组成的
C．帝王蝶的幼虫在吃了某种转基因玉米的花粉沾染过的牛奶草叶子后，近一半的个体死亡，幸存的也不能正常发育
D．对转入了苏云金杆菌基因的西红柿进行毒性分析表明，这种转基因西红柿对人体健康没有影响
6．人们对转基因生物安全性的关注，随着转基因成果的不断涌现而与日俱增。下列相关叙述错误的是（ ）
A．目的基因的筛选与获取是培育转基因生物的核心工作
B．转基因产品需要经过安全评估，符合标准才能上市
C．无论是转基因食品还是转基因作物，都需要关注其安全性
D．我国在对待转基因技术的研究上要坚持自主创新，在推广上要慎重对待
7．科学家将外源抗虫基因（Bt抗虫蛋白基因）转入某茄科植物细胞中，并整合到该植物的线粒体DNA上，获得了具有抗虫性状的转基因植物。下列叙述，错误的是（ ）
A．Bt抗虫蛋白在线粒体中的成功合成与密码子的通用性有关
B．叶肉细胞内有多个线粒体，这有利于增加该转基因植物的抗虫性
C．将该转基因植物与同种非转基因植物进行正、反交，所得子代均有抗虫性
D．该技术能有效避免或减少外源基因通过花粉向其他植物的转移
8．为评估外源基因Vgb在菊花中的稳定性，研究人员在种植转基因菊花的第2年，随机选取转基因菊花株系提取DNA，并设计特异性引物进行扩增，凝胶电泳结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）
注：CK表示阳性对照，1为空白对照，2～10为转基因株系。
A．若点样孔在a端，则靠近a端的片段比靠近b端的片段小
B．设置空白对照可排除无关变量对实验结果的影响
C．结果表明2年内Vgb基因在菊花细胞中不稳定
D．DNA分子在凝胶中的迁移速率与凝胶浓度无关
9．草莓在生长过程中易感染病毒，通过无性繁殖易传播给后代。草莓体内病毒的逐年积累，是导致产量降低、品质变差的原因。下图是育种工作者选育高品质草莓的流程图。有关说法错误的是（ ）
A．方法一、二均利用了植物细胞具有全能性的特点
B．方法二中的草莓细胞可取自A过程中产生的细胞
C．两种方法均需进行个体生物学水平的病毒接种实验鉴定
D．相比方法一，方法二更可能引起安全性问题
10．转基因食品已大量进入我们的日常生活，如转基因西红柿、转基因草莓等，涉及的问题甚至关系到国家之间的贸易竞争，如图为“霸占中国市场的转基因大豆油”的部分图示。下列关于转基因大豆的叙述，正确的是（ ）
A．培育过程中可能用到抗病、抗虫等抗性基因
B．目的基因的受体细胞可以是大豆受精卵，也可以是体细胞
C．转基因大豆的种植过程中减少了农药等的使用量，生产成本更低
D．固氮菌的固氮基因也是必需的目的基因之一
11．为有效防范由各类生物因子、生物技术误用滥用等引起的生物性危害，生物安全已纳入国家安全体系。以下选项中会给我国带来生物安全风险的是（ ）
A．将新冠患者的血浆采集后注射到危重患者体内
B．试管婴儿通过基因筛查技术阻断遗传疾病的遗传
C．规范管理下，利用工程菌获得大量的抗生素
D．克隆技术可应用到器官移植但不能进行人体克隆
12．下列有关转基因产品的说法，正确的是（ ）
A．用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒
B．若转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题
C．抗虫基因只要成功地插入植物细胞的染色体上就都能正常表达
D．基因工程在农业生产上的应用主要是培育抗虫、抗病、抗除草剂和耐储藏的作物
13．美国科学家在研究生长在墨西哥某地的野生玉米后发现，这种玉米含有包括苏云金芽孢杆菌抗虫毒蛋白基因在内的转基因作物的基因，下列有关叙述中正确的是（ ）
A．转基因作物的基因可传播到野生植物中
B．转基因作物不可能对天然植物的遗传多样性构成威胁
C．为防止基因污染，应当禁止转基因作物的研究
D．自然杂交与转基因过程没有任何区别
14．某地转基因木瓜市场占有量达九成，其中不少转基因木瓜为非法品种，在没有获得国家农业部授予的安全证书或审批进口的前提下就流向了市场。下列关于转基因技术及其安全性的说法正确的是（ ）
A．转基因食品生产的都是自然界中存在的物质，安全检测是不必要的
B．将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物可防止转基因花粉的传播
C．将药用蛋白基因与特异性启动子重组后注射到哺乳动物的乳腺可制备乳腺生物反应器
D．我国政府坚持不赞成、不允许、不支持、不接受任何形式的转基因生物实验
15．海南作为中国唯一的热带岛屿省份，其种业发展在气候、资源、科技等方面均有明显优势。在海南，从常见的杂交水稻、高产玉米，到转基因抗虫棉花、耐热菊花，诸多优质新品种在这里被评议审定、种植推广。下列有关叙述错误的是（ ）
A．转基因产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市
B．我国对转基因技术的方针是研究上要大胆、推广上要慎重、管理上要严格
C．我国制定的有关法规最大程度保证了转基因技术和已上市转基因产品的安全性
D．对植物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域
16．水稻为雌雄同花植物，花很小，人工授粉困难。正常水稻种子呈白色，科研团队在某水稻品种的一条2号染色体上插入一个籽粒蓝色素生成基因D构建水稻品种P，然后将雄性不育基因M导入水稻品种P，培育出通过种子颜色即可判断是否为雄性不育种子的品种Q（基因的位置关系如图）。由于图中D和M两个非等位基因在同一条染色体上距离较近，因此会紧密连锁在一起不发生基因重组。下列说法不正确的是（ ）
A．品种Q自花传粉，得到的子代中蓝粒雄性不育的个体占1/2
B．品种Q可防止基因D通过花粉扩散到近缘作物
C．若基因M插入基因D所在染色体的同源染色体上，则其与正常水稻杂交有可能得到蓝粒雄性不育的种子
D．若基因M插入3号染色体上，则其为母本与正常水稻杂交得到的子代出现蓝粒雄性不育种子的概率为1/4
二、多选题
17．基因工程自20世纪70年代兴起后，得到了飞速的发展，展示出广阔的前景。下列说法正确的是（ ）
A．用转基因动物作为器官移植的供体时，通过导入调节因子来抑制抗原的合成
B．将含药用蛋白基因的基因表达载体导入乳腺细胞，可构建乳腺生物反应器
C．将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，可以防止转基因花粉的传播
D．转基因抗虫棉种植时，害虫因不会产生抗性从而达到彻底消灭害虫的目的
18．实验人员将一段外源DNA片段（包含约850个基因）与丝状支原体（一种原核生物）的DNA进行重组后，植入大肠杆菌，制造出一种“新的生命”。该生物能够正常生长、繁殖。下列有关该技术应用的叙述中，错误的是（ ）
A．转基因技术可以制造某些微生物，用于生产药品、制造染料、降解有毒物质等
B．由于存在生殖隔离，因此人造生命进入自然界一般不会破坏生物多样性
C．转基因技术还可用来增加啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
D．通过转基因技术将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，可以防止转基因花粉的传播
19．蚊虫分布范围广，生物量大，其中的雌蚊会叮咬人类，可传播多种传染病。研究者利用CRISPR/Cas9基因编辑系统（可以实现对双链DNA的精确切割）和同源重组修复技术修改了蚊虫受精卵的某个基因，使拥有该基因的受精卵发育成雄蚊，且该基因可遗传给子代，使群体中雄蚊比例升高。下列有关说法错误的是（ ）
A．CRISPR/Cas9基因编辑系统与DNA连接酶的功能相似
B．转基因灭蚊技术通过提高蚊虫的死亡率来达到灭蚊的目的
C．转基因灭蚊技术有效果显著、可持续等特点
D．该技术有可能造成目的基因扩散到自然界其他生物中，导致基因污染
20．基因工程广泛应用于生产实践，取得了巨大的经济效益和生态效益，硕果累累的转基因成果在带给人们喜悦的同时，也促使人们关注转基因生物的安全性问题。下列有关转基因作物安全性的叙述正确的是（ ）
A．转入抗性基因的植物可能会成为“入侵物种”，影响生态系统的稳定性
B．抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染
C．大面积种植抗虫棉，有可能会使棉铃虫群体中相关抗性基因频率增大
D．若目的基因来自于自然界，则培育出的转基因植物不存在安全性问题
三、非选择题
21．水稻是我国重要的粮食作物，然而盐碱地日益吞噬着有限的耕作面积，因此对水稻耐盐碱品系进行改良具有重大意义。研究表明，OsMYB56基因的表达产物可参与植物的耐盐碱调节，科研人员从玉米细胞中克隆目的基因，构建OsMYB56基因表达载体，并对水稻进行遗传转化。部分限制酶识别序列及用于扩增目的基因的一对引物序列如下。
限制酶 EcoRI BamHI HindⅢ SacI
识别序列和切割位点 G↓AATTC G↓GATCC A↓AGCTT GAGCT↓C
上游引物P1：5'-GGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG-3'
下游引物P2：5'-GAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA-3'
(1)科研人员在基因数据库中查找到OsMYB56基因的碱基序列，并据此设计一对引物来扩增目的基因。由图可知，设计引物时，在引物的5'端分别添加了 两种限制酶的识别序列。
(2)PCR扩增目的基因的原理是 。PCR过程需要用到 酶，若设置的复性温度过高会导致 。
(3)将目的基因导入植物细胞，常用农杆菌转化法。构建基因表达载体时，需要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的 序列中。为确定耐盐碱转基因水稻是否培育成功，可利用 检测OsMYB56基因是否导入成功。玉米中的相关基因在水稻细胞内能够表达的理论基础是 。
(4)有人认为转基因生物有可能成为“入侵的外来物种”，威胁生态系统中其他生物的生存，他的依据是 。
22．棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫，为减少农药的使用量，我国科学家利用基因工程培育出一些能抵抗虫害的植物新品种。Cry1A基因的表达产物对棉铃虫等鳞翅目昆虫有较强的毒性，GNA基因的表达产物对蚜虫等刺吸式口器的昆虫有较强的毒性。科研人员将Cry1A基因与GNA基因连接在一起，构建了双抗虫基因的重组表达载体，并转入烟草细胞，获得了具有双抗性的转基因烟草，其部分过程如图1所示，请分析并回答以下问题：
注：图中PstⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ表示限制酶，不同限制酶切出的黏性末端均不同；Klenow能将黏性末端转变为平末端。
(1)过程③将Cry 1A基因与GNA基因相连，可选用 （填“E·coli DNA连接酶”或“DNA连接酶”）。
(2)过程④应该选用 （填图中限制酶）切割植物表达载体，以便与目的基因相连，形成重组表达载体。
(3)将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用 处理农杆菌，使其成为 细胞。
(4)让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌：将培养农杆菌的培养基倒平板后均分为A、B两组，在A组培养基中涂布一定量的链霉素，在B组培养基中涂布等量的卡那霉素和链霉素。往A组培养基中接种适量农杆菌，待长出菌落后，用影印法接种到B组培养基上，实验结果如图2，其中 （填图中对应的数字）菌落对应的农杆菌可能是符合要求的，即含有 的农杆菌。
(5)欲从个体生物学水平鉴定这些转基因烟草是否具有双抗虫特性以及抗性的程度，请你简述该鉴定方法 。
(6)利用转基因技术可以培育出具有优良性状的生物，生产出人类所需要的产品。但转基因技术的安全性问题也一直备受关注。当面对日常生活中与转基因技术有关的话题时，我们需要理性地表明观点和参与讨论。下列属于理性看待转基因技术的是 （填序号）。
①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，必须禁止转基因技术的应用
②要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题
③要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响
④要看到经济、文化和伦理道德观念等的差异使人们对转基因技术有不同的看法
23．角蛋白酶能降解角蛋白，在饲料工业中具有广阔的应用前景。某实验小组将角蛋白酶基因（KerA）导人大肠杆菌中，获得了能高效表达角蛋白酶的工程菌，下图为含KerA基因的外源DNA和质粒，EcoRI、BamHI、SalI、XhoI均为限制酶，其切割位点如图所示。Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列相关问题：
(1)据图可知，构建重组质粒时选用的工具酶包括 和DNA连接酶，这些工具酶作用的化学键 （填“相同”或“不同”）。
(2)利用PCR技术扩增KerA基因时，需根据其两端序列设计引物。若KerA两端部分序列为一5'AATGGA……ATTCTC-3'，则需要设计的一对引物序列是 。
(3)将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。可在添加有 的培养基中进行初步筛选，能在该培养基上生长的是 。
(4)转基因技术除了在微生物领域取得广泛的成果，在动植物领域也取得了巨大的成果。下列有关转基因技术的叙述，正确的是 。
①我国对农业转基因生物实行了标识制度
②只要有证据表明转基因产品有害，就应该禁止转基因技术的应用
③转基因技术本身是中性的，应理性看待该技术
④转基因植物的基因来自自然界，不会产生安全性问题
24．研究者将杨树中的重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，如图1所示。培育转基因杨树，以提高对重金属污染土壤的生物修复能力。
回答下列问题：
(1)图2是高效启动子、HMA3基因的DNA和载体的限制性内切核酸酶酶谱。为了成功构建重组表达载体，确保目的基因正确插入载体，最好选用 、 酶切割HMA3基因的DNA和载体。
(2)将杨树叶片与重组农杆菌共培养以进行遗传转化，农杆菌可将外源基因递送到植物细胞基因组中的机理为 。考虑转基因技术的安全性，选用 （填“不育”或“可育”）株系作为实验材料，选此株系的原因为 。
(3)为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合为____（填标号）。
A．①+③ B．①+④ C．③+② D．③+④
25．影响小鼠内耳形态的基因A突变会导致遗传性耳聋，研究人员尝试进行基因治疗。
(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统由sgRNA及Cas9蛋白组成。图1所示，sgRNA与目标DNA结合，引导Cas9蛋白切割靶序列的双链DNA，导致 键断裂。
(2)同源重组是指在DNA断裂的情况下，含有同源区段的DNA之间发生的重组。科研人员尝试利用同源重组原理对耳聋小鼠进行基因治疗。
①利用 技术扩增野生型小鼠的基因A，再用图2中的限制酶 切割基因A与腺病毒载体形成黏性末端，最后利用 酶进行拼接，构建腺病毒表达载体。科研人员尝试利用该载体与耳聋小鼠的DNA进行同源重组，效果不佳。
②在上述基础上，科研人员又将sgRNA基因、Cas9基因接入了腺病毒表达载体（见图3），同时引入sgRNA的识别序列，目的是 。图3所示的腺病毒表达载体还需要哪些必要的结构或基因 （多选）。
A．启动子和终止子
B．RNA聚合酶基因
C．标记基因
D．起始密码子和终止密码子
E．反密码子
F．复制原点
(3)将腺病毒表达载体注入耳聋小鼠的单侧耳组织细胞。为评估该治疗方案的效果，研究人员使用同一只小鼠的非注射耳作为对照，而不是另一只没有注射腺病毒表达载体的小鼠，好处是可以排除 对实验结果的影响。
(4)进一步研究结果表明该方案可以有效纠正小鼠的突变基因，从而治疗小鼠的遗传性耳聋。人体内基因A突变也会导致遗传性耳聋，欲将该方案用于临床治疗，从安全性角度还应关注 。
试卷第1页，共3页
试卷第1页，共3页
参考答案：
1．A
【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响），抗虫棉的种植，减少了农药的使用，有利于保护农田的土壤环境。
【详解】A、转基因生物被定向改造，因而可能会成为新的过敏原，引发新的过敏反应，属于转基因生物被质疑的原因之一，A正确；
B、种植抗虫棉等农作物可减少农药的使用，但可能出现基因污染，对环境造成一定的影响，B错误；
C、转基因产品可提高农作物的产量，但其有一定的安全性问题，应在实验区栽种并进行管理，C错误；
D、转基因食品可能会带来安全性问题，转基因作为一项技术本身是中性的，应理性看待，D错误。
故选A。
2．B
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
【详解】A、该技术起始时需要对猪的相关基因进行编辑处理，转基因猪的心脏引起的免疫排斥作用相对较弱，A错误；
B、对于器官衰竭患者来说，跨物种器官移植手术给予了他们更多的希望与机会，B正确；
C、其他物种的器官经基因编辑后都能移植到人体且也可能会引起排斥反应，C错误；
D、跨物种器官移植手术并获成功，是对供体生物进行的基因编辑，而不是对人体基因进行大规模编辑，D错误。
故选B。
3．C
【分析】转基因生物的安全性问题：
（1）有关食物安全问题的担忧：①担心出现滞后效应；②担心出现新的过敏源；③担心营养成分改变；④担心会侵犯宗教信仰者或素食者的权益；
（2）有关生物安全问题的担忧：转基因植物可能会对生物多样性构成潜在的风险和威胁。他们的理由：①转基因植物扩散到种植区外变成野生种或杂草；②转基因植物竞争能力强，可能成为“入侵的外来物种”；③转基因植物的外源基因与细菌或病毒杂交，重组出有害的病原体；④可能使杂草成为有抗除草剂基因的“超级杂草”；
（3）有关环境安全问题的担忧：①转基因植物打破自然物种的原有界限，可能破坏生态系统稳定性；②重组微生物产生的中间产物可能造成二次污染；③重组DNA与微生物杂交是否会产生有害病原微生物；④转基因植物花粉中的有毒蛋白可能通过食物链进入生物。
【详解】A、转基因大豆与野生大豆的地理分布的远近与转基因大豆和野生大豆的基因交流有关，A正确；
B、转基因作物与近缘野生种间发生基因交流，进而发生基因漂移，使一些近缘物种表现出转基因的性状，B正确；
C、野生大豆的蛋白质含量只与野生大豆的营养物质有关，C错误；
D、传粉昆虫的种类和数量与野生大豆和转基因大豆之间的传粉和基因交流有关，D正确。
故选C。
4．B
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。转基因食品、产品上都要标注原料来自转基因生物，如“转基因××”“转基因××加工品（制成品）”“加工原料为转基因××”“本产品为转基因××加工制成”．对于转基因食物潜在隐患要进行开展风险评估、预警跟踪等措施多环节、严谨的安全性评价，保障了现代生物技术的安全性。
【详解】A、转基因培育的植物，理论上目的基因存在于所有细胞中，A错误；
B、为了加强对转基因食品和转基因农产品的标识管理，保护消费者的知情权，我国实行了标识制度，B正确；
C、通过转基因技术生产药物不只是转基因微生物方面的应用，还有转基因动植物方面，C错误；
D、转基因植物的外源基因即使来源于自然界，也不能完全排除存在安全性问题的可能性。尽管外源基因来源于自然界，但在将其导入植物体后，可能会破坏植物原有的基因结构，从而引发不可预知的生态和遗传效应。此外，外源基因也有可能通过花粉传播等方式扩散到其他植物中，导致基因污染和生态失衡，D错误。
故选B。
5．C
【分析】植物基因工程成果：抗虫转基因植物-减轻农药对环境的污染、抗病转基因植物、抗逆转基因植物、利用转基因改良植物的品质；动物基因工程成果：提高动物生长速度、改善畜产品的品质、用转基因动物生产药物、用转基因动物作器官移植的供体、基因工程药品的生产。
【详解】A、通过转基因技术减少啤酒酵母双乙酰的生成，可以改良啤酒的风味和口感，说明转基因技术能提高食品安全性，A错误；
B、转基因食品与非转基因食品一样，都是由脂肪、蛋白质和碳水化合物等物质组成的，一定程度上可说明转基因食品是安全的，B错误；
C、帝王蝶的幼虫在吃了某种转基因玉米的花粉沾染过的牛奶草叶子后，近一半的个体死亡，幸存的也不能正常发育，说明了转基因食品存在不安全因素，C正确；
D、对转入了苏云金杆菌基因的西红柿进行毒性分析表明，这种转基因西红柿对人体健康没有影响，说明转基因食品安全，D错误。
故选C。
6．A
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
【详解】A、基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，A错误；
B、转基因作为一项技术本身是中性的，由该技术研发出来的产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市，B正确；
C、无论是转基因食品还是转基因作物，在多领域都取得实际应用成果，但也许关注它们的安全性，例如是否会产生基因污染，对人体是否有害等，C正确；
D、我国对转基因技术的方针是一贯的、 明确的，就是研究上要大胆，坚持自主创新；推广上要慎重,做到确保安全;管理上要严 格，坚持依法监管，D正确。
故选A。
7．C
【分析】1、目的基因在受体细胞中表达的原理：基因是控制生物性状的基本单位；遗传信息的传递都遵循中心法则；生物界共用一套遗传密码。
2、外源基因通过转基因作物或家养动物扩散到其他栽培作物或自然野生物种并成为后者基因的一部分，在环境生物学中我们称为基因污染。
3、防止基因污染的措施：抗除草剂基因导入玉米受体细胞的质基因组中；抗除草剂基因导入雄性不育系中；将玉米α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物；转基因作物种植时隔离种植。
【详解】A、相同的遗传信息在不同的生物体内表达出相同的蛋白质利用了密码子的通用性的原理，A正确；
B、叶肉细胞中有多个线粒体，则线粒体转化获得的抗虫基因数量多,其表达量远高于核转化的水平，有利于增加外源抗虫蛋白的含量，增加抗虫性，B正确；
C、外源抗虫基因转入线粒体，只能通过母本卵细胞遗传给后代，若转基因作物作为父本则不可遗传，C错误；
D、植物受精卵的质基因几乎全来自卵细胞，转将外源基因转入线粒体中，可以防止外源基因通过花粉向其他植物扩散，D正确。
故选C。
8．B
【分析】据题意可知，1为空白对照，2～10 为转基因株系，图中2～10 含有Vgb基因。
【详解】A、若点样孔在a端，则靠近a端的片段大，A错误；
B、为了排除实验操作等无关变量对结果的影响，需要设置空白对照，B正确；
C、根据题图可推测，2年内Vgb基因在菊花细胞中较稳定，C错误；
D、DNA分子在凝胶中的迁移速率与凝胶浓度有关，D错误。
故选B。
9．C
【分析】1、植物组织培养的过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化形成愈伤组织；愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育形成植株，该过程受基因选择性表达的调控。
2、题图分析：
方法一：采用植物组织培养的方法培育脱毒苗，草莓到甲过程属于脱分化形成愈伤组织过程，而A属于再分化诱导形成胚状体或形成芽、根最终形成完整植株；
方法二：通过基因工程手段获得的抗病毒草莓，B过程表示将病毒基因导入到受体细胞，C表示植物组织培养过程。
【详解】A、方法一是把已分化的植物组织或细胞培养成个体，方法二是把目的基因受体细胞培养成个体，两种方法均利用了植物细胞具有全能性的特点，A正确；
B、据图可知，方法二的B过程表示将病毒基因导入到受体细胞，方法一中A属于再分化诱导形成胚状体或形成芽、根，最终形成完整的无病毒苗过程。已分化的细胞在离体条件下可培育成个体，目的基因的受体细胞可以是已分化的细胞，因此，方法二中的草莓细胞可取自A过程中产生的细胞，B正确；
C、方法二为用基因工程选育高品质的抗病毒的草莓，其选育方法的效果需要通过病毒接种实验；方法一培育的是脱毒苗而非抗病毒苗，不需要接种病毒，C错误；
D、与方法一相比，方法二多了对离体的草莓细胞基因改造的过程，方法二的草莓细胞中导入了病毒的基因，相比方法一，更容易引起安全问题，D正确。
故选C。
10．D
【分析】基因工程的原理是基因重组，基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣抗原﹣抗体杂交技术;个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、转基因培育大豆过程中可能用到抗病、抗虫等抗性基因，A正确；
B、为育成转基因大豆，受体细胞可以是大豆受精卵，也可以是体细胞，B正确；
C、转基因大豆的种植过程中减少了农药等的使用量，既保护了环境又降低了生产成本，C正确；
D、固氮菌与大豆共生，不需要将固氮基因导入大豆细胞中，D错误。
故选D。
11．A
【分析】1、转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
2、试管婴儿技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。
【详解】A、新冠患者的血浆中可能含有病毒，采集后是不可以直接输入到任何人身体里的，输入到危重患者身体里存在安全隐患，与题意相符，A正确；
B、试管婴儿可以通过基因筛选技术来阻断遗传疾病的遗传，因此经过一定的技术手段可以避免安全风险，与题意不符，B错误；
C、规范管理下，利用生物技术改造的工程菌获得大量的抗生素已经投入生产，一般不会带来生物安全风险，与题意不符，C错误；
D、克隆技术可以克隆器官，但是不可以进行人体克隆，这样可以避免影响伦理道德，与题意不符，D错误。
故选A。
12．D
【分析】外源基因虽然来源于自然界，但可能随转基因植物扩散到其他近缘物种，导致基因污染；基因的表达需要经过转录、翻译等过程，任一环节出现问题均可能使基因不能正常表达。
【详解】A、用基因工程培育出的抗虫植物（如抗虫棉）只能抗虫，不能抗病毒，A错误；
B、即使转基因植物的外源基因来源于自然界，也可能存在安全性问题，B错误；
C、抗虫基因即使成功地插入植物细胞的染色体上，也不一定能正常表达，C错误；
D、基因工程在农业生产上的应用主要是培育抗虫、抗病、抗除草剂和耐储藏的作物，进而使作物品种和产品更加符合人类的需要，D正确。
故选D。
13．A
【分析】根据题意可知，转基因作物的基因传播到野生植物中，会对植物遗传多样性构成威胁。自然杂交是通过受粉的方式实现基因重组，与转基因技术中通过重组质粒实现基因重组是有区别的。
【详解】A、转基因作物可通过花粉散落到它的近亲野生植物中，从而污染生物基因库，A正确；
B、转基因植物可能会与野生植物杂交，造成基因污染，因而可能会对天然植物的遗传多样性构成威胁，B错误；
C、虽然转基因生物存在危害，但我们应理性地看待转基因生物的研究，C错误；
D、自然杂交是同种生物个体之间的基因交流，而转基因是将外源基因导入受体细胞的过程，即不同生物之间基因的交流，D错误。
故选A。
14．B
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
【详解】A、转基因食物产品通常导入了外来基因，由于基因间的互作机制等原因，安全检测是必需的，A错误；
B、α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物得以表达可产生α-淀粉酶，该α 淀粉酶可降解花粉粒中的淀粉，造成植物转基因花粉不育，有效避免了转基因作物通过花粉将转基因传播给其它作物品种，B正确；
C、将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起构建基因表达载体导入动物受精卵中可制备乳腺生物反应器，而不是导入乳腺中，C错误；
D、我国政府禁止生殖性克隆人，坚持四不原则（不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验），不反对治疗性克隆人，并不是不接受任何形式的转基因生物实验，D错误。
故选B。
15．D
【分析】转基因技术是一把双刃剑， 最重要的是要科学合理的利用这项技术，通过技术提高了很多农产品的收益、解决了饥饿问题和对遗传病的治疗带来新的希望；对微生物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域。
【详解】A、转基因作为一项技术本身是中性的，由这项技术研发出来的产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市，A正确；
B、针对转基因技术的应用，各个国家都制定了符合本国利益的法规和政策。我国对转基因技术的方针是一贯的、明确的，就是研究上要大胆，坚持自主创新;推广上要慎重，做到确保安全;管理上要严格，坚持依法监管，B正确；
C、国家有关部门制定实施了《农业转基因生物安全评价管理办法》《农业转基因生物进口安全管理办法》，这些法规的制定既维护了消费者对转基因产品的知情权和选择权，又最大程度地保证了转基因技术和已经上市的转基因产品的安全性，C正确；
D、对微生物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域，D错误。
故选D。
16．A
【分析】基因分离定律和自由组合定律的实质：进行有性生殖的生物在进行减数分裂产生配子的过程中，位于同源染色体上的等位基因随同源染色体分离而分离，分别进入不同的配子中，随配子独立遗传给后代，同时位于非同源染色体上的非等位基因进行自由组合。
【详解】A、据题意可知，水稻品种Q雄性不育，因此不能自花传粉，A错误；
B、品种Q雄性不育，可防止基因D通过花粉扩散到近缘作物，B正确；
C、若基因M插入基因D所在染色体的同源染色体上，如果发生交叉互换，则其与正常水稻杂交可能会得到蓝粒雄性不育两性状不分离的种子，即基因D和M在一条染色体上，C正确；
D、用O代表同源染色体相同位置上没有的等位基因，若基因M插入3号染色体上，其基因型可表示为：DOMO，则其产生的雌配子有DM、DO、OM、OO4种。正常水稻无D、M基因，基因型可表示为OOOO，正常水稻为父本，产生雄配子有OO，子代出现蓝粒雄性不育种子DOMO的概率为1/4，D正确。
故选A。
17．AC
【分析】防止基因污染方法：将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，可以防止转基因花粉的传播
【详解】A、用转基因动物作为器官移植的供体时，通过导入调节因子来抑制抗原的合成，从而避免免疫排斥，A正确；
B、将含药用蛋白基因的基因表达载体导入受精卵，可构建乳腺生物反应器，B错误；
C、将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，可以防止转基因花粉的传播，C正确；
D、转基因抗虫棉种植时，害虫会产生抗性，D错误。
故选AC。
18．BC
【分析】根据题中“将一段外源DNA片段(包含约850个基因)与丝状支原体(一种原核生物)的DNA进行重组后，植入大肠杆菌”，属于基因工程，原理是基因重组。
【详解】A、通过导入不同的目的基因，可用于生产药品、制造染料、降解有毒物质，A正确；
B、“新的生命”是一个新的物种，由于其没有天敌，进入自然界后，会破坏生物的多样性，B错误；
C、转基因技术还可用来减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期，C错误；
D、在转基因研究工作中，科学家会采取很多方法防止基因污染，例如，我国科学家将来自玉米的-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，由于淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，因而可以防止转基因花粉的传播，D正确。
故选BC。
19．AB
【分析】由题意可知，CRISPR/Cas9基因编辑系统（可以实现对双链DNA的精确切割），其与限制性内切核酸酶功能相似。
【详解】A、CRISPR/Cas9基因编辑系统与限制性内切核酸酶的功能相似，都可对DNA进行切割，A错误；
B、转基因灭蚊技术通过提高蚊虫群体中雄蚊比例，从而降低蚊虫群体出生率，B错误；
C、由题意可知，转基因蚊的基因可遗传给子代，使群体中雄蚊比例升高，具有效果显著、可持续等特点，C正确；
D、转基因雄蚊可能与近缘物种杂交，导致目的基因扩散到自然界其他生物中，导致基因污染，D正确。
故选AB。
20．ABC
【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变等）、生物安全（对生物多样性的影响等）、环境安全（对生态系统稳定性的影响等）。
【详解】A、转入抗性基因的植物具有某些特殊性质，它们在某地区的竞争能力较强，可能成为“入侵物种”，威胁生态系统中其他生物的存在，从而影响生态系统的稳定性，A正确；
B、转基因作物的抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，该近缘物种再通过授粉会造成基因进一步扩散和污染，B正确；
C、大面积种植转基因抗虫棉（含抗性基因），有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增大，C正确；
D、即使目的基因来自自然界，培育出的转基因植物仍然可能会有潜在的安全性问题，D错误。
故选ABC。
21．(1)BamHI和SacI
(2) DNA的半保留复制 热稳定DNA聚合 引物不能结合到DNA模板上，进而不能扩增出目的DNA片段
(3) T-DNA DNA分子杂交技术 所有生物共用一套遗传密码子
(4)科学家赋予转基因生物某些特殊性状，增强了它们在该地区生存条件下的竞争力（合理即可）
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测和个体水平上的鉴定。
【详解】（1）由上游引物、下游引物可知，引物的5'端分别添加了BamHI、SacI的识别序列。
（2）PCR是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。PCR过程需要用到热稳定DNA聚合酶。PCR每次循环可以分为变性、复性、延伸三个步骤，复性的目的是适当降低温度，让引物通过碱基互补配对方式，结合到模板DNA上，若设置的复性温度过高会导致引物不能结合到模板上，进而扩增不出目的DNA片段。
（3）农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞中，并且整合到该细胞的染色体DNA上，所以构建重组Ti质粒时，需要将目的基因插入T-DNA中。为确定耐盐碱转基因水稻是否培育成功，可利用DNA分子杂交技术检测OMYB56基因是否导入成功。目的基因在受体细胞内能够表达的理论基础是所有生物共用一套遗传密码子，保证了同一种基因在不同受体细胞中均可翻译出相应的蛋白质。
（4）由于科学家赋予了转基因生物某些特殊性状，增强了它们在该地区生存条件下的竞争力，故它们有可能威胁生态系统中其他生物的生存。
22．(1)T4 DNA连接酶
(2)EcoRⅠ和Hind Ⅲ
(3) Ca2+ 感受态
(4) 1、4 重组表达载体
(5)采摘转基因烟草的叶片，饲喂棉铃虫和蚜虫，统计棉铃虫和蚜虫的存活率（或死亡率）。
(6)②③④
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）分析题意，过程①和②分别用不同的限制酶切割Cry 1A基因与GNA基因，形成的黏性末端是不同的，故两个基因无法直接相连，经Klenow处理后，两个基因片段一端的黏性末端变为平末端，E．coli DNA连接酶只能连接黏性末端，T4 DNA连接酶可以连接黏性末端，也可以连接平末端，故过程③将Cry 1A基因与GNA基因相连，应选用T4 DNA连接酶。
（2）通过过程③得到的双抗虫基因（Cry 1A基因+GNA基因）两侧分别是EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ切出的黏性末端，故过程④应该选用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ切割植物表达载体，形成和目的基因相同的黏性末端，以便让植物表达载体与目的基因相连，形成重组表达载体。
（3）将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用Ca2+处理农杆菌，使其成为感受态细胞，以利于重组表达载体进入农杆菌。
（4）让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌，获得含有重组表达载体的农杆菌。由于Hind Ⅲ的切割位点在抗卡那霉素基因内部，故含有重组表达载体的农杆菌可以在含有链霉素的培养基上生长，不能在含有卡那霉素的培养基上生长，据此分析可知，A组中1、4对应的菌株为含有重组表达载体的农杆菌，即符合要求的菌株。
（5）个体生物学水平的鉴定主要是抗虫、抗病的接种实验，欲从个体生物学水平鉴定这些转基因烟草是否具有双抗虫特性以及抗性的程度，可采摘转基因烟草的叶片，饲喂棉铃虫和蚜虫，统计棉铃虫和蚜虫的存活率（或死亡率）。
（6）①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，应严格进行筛查和把控，而飞因噎废食禁止转基因技术的应用，①错误；
②③转基因技术是一把双刃剑，最重要的是要科学合理的利用这项技术，要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题，要理性的看待转基因技术，要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响，②③正确；
④由于不同的人在经济、文化和伦理道德观念等方面存在差异，所以不同的人对转基因技术会有不同的看法，④正确。
故选②③④。
23．(1) BamHI、XhoI 相同
(2)引物I5'-AATGGA-3'，引物Ⅱ5'-GAGAAT-3'
(3) 四环素 含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌
(4)①③
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）据图可知，SalI会破坏KerA基因，因此获取KerA基因时不能用限制酶SalI进行切割；为了防止目的基因和载体切割后自身环化、不定向连接，应该选用两种限制酶进行切割，可以选择限制酶BamHI和XhoI或限制酶EcoRI和XhoI，若选择限制酶EcoRI和XhoI会破坏质粒上的两个标记基因，因此不能选用该组限制酶；限制酶和DNA连接酶作用的化学键相同，都是磷酸二酯键。
（2）使用PCR技术扩增目的基因时需要一对特异性的引物，引物能与目的基因两端的核苷酸序列碱基互补配对，子链延伸时是从引物的5'端向3'端延伸，若KerA两端部分序列为-5'AATGGA……ATTCTC-3'，利用PCR技术扩增KerA基因，根据其两端序列，则需要设计的一对引物序列是引物I5'-AATGGA-3'，引物Ⅱ5'-GAGAAT-3'。
（3）将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。由于选用的限制酶是BamHI、XhoI，所以含有该重组质粒的细菌在添加四环素的培养基中能生长，而含空载体（普通质粒）的细菌也含有四环素抗性基因，二者都可在添加有四环素的培养基中生长。
（4）①我国对农业转基因生物实行了标识制度，为保障转基因生物安全提供了重要的技术支撑，①正确；
②我们应持有的正确做法是趋利避害，不能因噎废食，②错误；
③转基因作为一项技术，本身是中性的，面对转基因技术的利弊，我们不能人云亦云，应理性看待该技术，③正确；
④转基因植物的基因来自自然界，但由于插入的位置是随机的等原因，也可能产生安全性问题，④错误。
故选①③。
24．(1) XbaI HindⅢ
(2) 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上 不育 避免目的基因在自然界中的扩散
(3)B
【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）为确保目的基因与载体正向连接，最好选用两种限制酶切割，因此不宜选用EcoRI；观察目的DNA片段，不能用BamHI，会切断高效启动子或HMA3基因；观察载体，不能用SalI，不在T-DNA上，也不在启动子和终止子之间。综合分析，选用的两种限制酶为XbaI和HindIII。
（2）农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。考虑转基因技术的安全性，选用不育株系作为实验材料，可避免目的基因在自然界中的扩散。
（3）重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，若要检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，而不是内源HMA3基因，需要检测是否含有高效启动子序列和HMA3基因序列，应选择的引物组合是①+④，故选 B。
25．(1)磷酸二酯键
(2) PCR SpeI和Sal DNA连接酶 通过CRISPR/Cas9基因编辑系统切割腺病毒表达载体DNA和耳聋模型鼠染色体DNA，使DNA发生断裂，启动同源重组 ACF
(3)小鼠的个体差异
(4)该技术对其他功能基因是否存在非特异性编辑
【分析】1、实现基因工程的操作至少需要三种“分子工具”，即准确切割DNA分子的 “分子手术刀”——限制酶、将DNA片段再连接起来的“分子缝合针”——DNA连接酶和将体外重组好的DNA分子导入受体细胞的“分子运输车”——载体。
2、基因工程技术的基本步骤： 目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）DNA分子的单体间通过磷酸二酯键相连接，Cas9蛋白切割靶序列的双链DNA，导致靶序列磷酸二酯键断裂。
（2）①PCR为体外扩增DNA分子的一项技术，若要扩增野生型小鼠的基因A，则要用到PCR技术。如图2所示，若要利用同源重组原理对耳聋小鼠进行基因治疗，则构建的基因表达载体中应包含同源区a、b，所用的限制酶要能同时把基因A中的同源区a、b切割下来。因此，所用的限制酶是SpeI和Sal，即能把基因A中的同源区a、b切割下来，也在腺病毒载体上有相应切口。利用限制酶所获取的目的片段和腺病毒载体片段，还要用DNA连接酶进行连接，形成重组的基因表达载体。
②利用图2所示的载体与耳聋小鼠的DNA进行同源重组，效果不佳，有可能是未启动重组。将sgRNA基因、Cas9基因接入了腺病毒表达载体，同时引入sgRNA的识别序列，目的是通过CRISPR/Cas9基因编辑系统切割腺病毒表达载体DNA和耳聋模型鼠染色体DNA，使DNA发生断裂，启动同源重组。一个能正常表达的重组基因表达载体应包含有目的基因、标记基因、启动子和终止子、复制原点，因此图3所示的腺病毒表达载体还需要标记基因、启动子和终止子、复制原点，故选ACF。
（3）实验过程要遵循单一变量原则，研究人员使用同一只小鼠的非注射耳作为对照，而不是另一只没有注射腺病毒表达载体的小鼠，好处是可以排除小鼠的个体差异对实验结果的影响。
（4）欲将该方案用于临床治疗，从安全性角度还应关注该技术对其他功能基因是否存在非特异性编辑。
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学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
一、单选题
1．下列关于转基因产品与环境安全的叙述，正确的是（ ）
A．转基因生物可能会成为新的过敏原，引发新的过敏反应
B．种植抗虫棉等农作物可减少农药的使用，对环境没有任何影响
C．转基因产品可提高农作物的产量，应在贫穷区域大力栽种
D．转基因食品可能会带来安全性问题，不建议推广转基因技术
2．近日某医学中心科学家们完成了世界首例将猪的心脏移植到人体的跨物种器官移植手术并获成功，该技术起始时需要对猪的相关基因进行编辑处理。这项成果无疑给器官移植技术带来了更宽广的发展空间，也给生命科学带来了更多的希望与思考。下列关于该过程的推测正确的是（ ）
A．转基因猪的心脏引起的免疫排斥作用相对较强
B．对于器官衰竭患者来说，该成果给予了他们更多的希望与机会
C．任何物种的器官经基因编辑后都能移植到人体且不引起排斥反应
D．该成功标志着对人体基因进行大规模编辑以确保异种器官移植成功的时代来临
3．为了制定出控制转基因大豆向野生大豆基因漂移的安全管理措施，以下不能作为评估风险程度依据的是（ ）
A．转基因大豆与野生大豆的地理分布
B．转基因大豆与野生物种间的亲缘关系
C．野生大豆所含主要蛋白质种类及含量
D．传粉昆虫的种类、数量及生活习性
4．下列关于转基因生物与安全性的叙述，正确的是（ ）
A．转基因培育的植物，理论上目的基因只存在于特定的组织中
B．我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度
C．通过转基因技术生产药物只是转基因微生物方面的应用
D．如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不会存在安全性问题
5．有人认为“转基因生物和转基因食品不安全，要严格控制”，以下各项中支持此观点的是（ ）
A．通过转基因技术减少啤酒酵母双乙酰的生成，可以改良啤酒的风味和口感
B．转基因食品与非转基因食品一样，都是由脂肪、蛋白质和碳水化合物等物质组成的
C．帝王蝶的幼虫在吃了某种转基因玉米的花粉沾染过的牛奶草叶子后，近一半的个体死亡，幸存的也不能正常发育
D．对转入了苏云金杆菌基因的西红柿进行毒性分析表明，这种转基因西红柿对人体健康没有影响
6．人们对转基因生物安全性的关注，随着转基因成果的不断涌现而与日俱增。下列相关叙述错误的是（ ）
A．目的基因的筛选与获取是培育转基因生物的核心工作
B．转基因产品需要经过安全评估，符合标准才能上市
C．无论是转基因食品还是转基因作物，都需要关注其安全性
D．我国在对待转基因技术的研究上要坚持自主创新，在推广上要慎重对待
7．科学家将外源抗虫基因（Bt抗虫蛋白基因）转入某茄科植物细胞中，并整合到该植物的线粒体DNA上，获得了具有抗虫性状的转基因植物。下列叙述，错误的是（ ）
A．Bt抗虫蛋白在线粒体中的成功合成与密码子的通用性有关
B．叶肉细胞内有多个线粒体，这有利于增加该转基因植物的抗虫性
C．将该转基因植物与同种非转基因植物进行正、反交，所得子代均有抗虫性
D．该技术能有效避免或减少外源基因通过花粉向其他植物的转移
8．为评估外源基因Vgb在菊花中的稳定性，研究人员在种植转基因菊花的第2年，随机选取转基因菊花株系提取DNA，并设计特异性引物进行扩增，凝胶电泳结果如图所示。下列叙述正确的是（ ）
注：CK表示阳性对照，1为空白对照，2～10为转基因株系。
A．若点样孔在a端，则靠近a端的片段比靠近b端的片段小
B．设置空白对照可排除无关变量对实验结果的影响
C．结果表明2年内Vgb基因在菊花细胞中不稳定
D．DNA分子在凝胶中的迁移速率与凝胶浓度无关
9．草莓在生长过程中易感染病毒，通过无性繁殖易传播给后代。草莓体内病毒的逐年积累，是导致产量降低、品质变差的原因。下图是育种工作者选育高品质草莓的流程图。有关说法错误的是（ ）
A．方法一、二均利用了植物细胞具有全能性的特点
B．方法二中的草莓细胞可取自A过程中产生的细胞
C．两种方法均需进行个体生物学水平的病毒接种实验鉴定
D．相比方法一，方法二更可能引起安全性问题
10．转基因食品已大量进入我们的日常生活，如转基因西红柿、转基因草莓等，涉及的问题甚至关系到国家之间的贸易竞争，如图为“霸占中国市场的转基因大豆油”的部分图示。下列关于转基因大豆的叙述，正确的是（ ）
A．培育过程中可能用到抗病、抗虫等抗性基因
B．目的基因的受体细胞可以是大豆受精卵，也可以是体细胞
C．转基因大豆的种植过程中减少了农药等的使用量，生产成本更低
D．固氮菌的固氮基因也是必需的目的基因之一
11．为有效防范由各类生物因子、生物技术误用滥用等引起的生物性危害，生物安全已纳入国家安全体系。以下选项中会给我国带来生物安全风险的是（ ）
A．将新冠患者的血浆采集后注射到危重患者体内
B．试管婴儿通过基因筛查技术阻断遗传疾病的遗传
C．规范管理下，利用工程菌获得大量的抗生素
D．克隆技术可应用到器官移植但不能进行人体克隆
12．下列有关转基因产品的说法，正确的是（ ）
A．用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒
B．若转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题
C．抗虫基因只要成功地插入植物细胞的染色体上就都能正常表达
D．基因工程在农业生产上的应用主要是培育抗虫、抗病、抗除草剂和耐储藏的作物
13．美国科学家在研究生长在墨西哥某地的野生玉米后发现，这种玉米含有包括苏云金芽孢杆菌抗虫毒蛋白基因在内的转基因作物的基因，下列有关叙述中正确的是（ ）
A．转基因作物的基因可传播到野生植物中
B．转基因作物不可能对天然植物的遗传多样性构成威胁
C．为防止基因污染，应当禁止转基因作物的研究
D．自然杂交与转基因过程没有任何区别
14．某地转基因木瓜市场占有量达九成，其中不少转基因木瓜为非法品种，在没有获得国家农业部授予的安全证书或审批进口的前提下就流向了市场。下列关于转基因技术及其安全性的说法正确的是（ ）
A．转基因食品生产的都是自然界中存在的物质，安全检测是不必要的
B．将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物可防止转基因花粉的传播
C．将药用蛋白基因与特异性启动子重组后注射到哺乳动物的乳腺可制备乳腺生物反应器
D．我国政府坚持不赞成、不允许、不支持、不接受任何形式的转基因生物实验
15．海南作为中国唯一的热带岛屿省份，其种业发展在气候、资源、科技等方面均有明显优势。在海南，从常见的杂交水稻、高产玉米，到转基因抗虫棉花、耐热菊花，诸多优质新品种在这里被评议审定、种植推广。下列有关叙述错误的是（ ）
A．转基因产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市
B．我国对转基因技术的方针是研究上要大胆、推广上要慎重、管理上要严格
C．我国制定的有关法规最大程度保证了转基因技术和已上市转基因产品的安全性
D．对植物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域
16．水稻为雌雄同花植物，花很小，人工授粉困难。正常水稻种子呈白色，科研团队在某水稻品种的一条2号染色体上插入一个籽粒蓝色素生成基因D构建水稻品种P，然后将雄性不育基因M导入水稻品种P，培育出通过种子颜色即可判断是否为雄性不育种子的品种Q（基因的位置关系如图）。由于图中D和M两个非等位基因在同一条染色体上距离较近，因此会紧密连锁在一起不发生基因重组。下列说法不正确的是（ ）
A．品种Q自花传粉，得到的子代中蓝粒雄性不育的个体占1/2
B．品种Q可防止基因D通过花粉扩散到近缘作物
C．若基因M插入基因D所在染色体的同源染色体上，则其与正常水稻杂交有可能得到蓝粒雄性不育的种子
D．若基因M插入3号染色体上，则其为母本与正常水稻杂交得到的子代出现蓝粒雄性不育种子的概率为1/4
二、多选题
17．基因工程自20世纪70年代兴起后，得到了飞速的发展，展示出广阔的前景。下列说法正确的是（ ）
A．用转基因动物作为器官移植的供体时，通过导入调节因子来抑制抗原的合成
B．将含药用蛋白基因的基因表达载体导入乳腺细胞，可构建乳腺生物反应器
C．将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，可以防止转基因花粉的传播
D．转基因抗虫棉种植时，害虫因不会产生抗性从而达到彻底消灭害虫的目的
18．实验人员将一段外源DNA片段（包含约850个基因）与丝状支原体（一种原核生物）的DNA进行重组后，植入大肠杆菌，制造出一种“新的生命”。该生物能够正常生长、繁殖。下列有关该技术应用的叙述中，错误的是（ ）
A．转基因技术可以制造某些微生物，用于生产药品、制造染料、降解有毒物质等
B．由于存在生殖隔离，因此人造生命进入自然界一般不会破坏生物多样性
C．转基因技术还可用来增加啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期
D．通过转基因技术将玉米的α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，可以防止转基因花粉的传播
19．蚊虫分布范围广，生物量大，其中的雌蚊会叮咬人类，可传播多种传染病。研究者利用CRISPR/Cas9基因编辑系统（可以实现对双链DNA的精确切割）和同源重组修复技术修改了蚊虫受精卵的某个基因，使拥有该基因的受精卵发育成雄蚊，且该基因可遗传给子代，使群体中雄蚊比例升高。下列有关说法错误的是（ ）
A．CRISPR/Cas9基因编辑系统与DNA连接酶的功能相似
B．转基因灭蚊技术通过提高蚊虫的死亡率来达到灭蚊的目的
C．转基因灭蚊技术有效果显著、可持续等特点
D．该技术有可能造成目的基因扩散到自然界其他生物中，导致基因污染
20．基因工程广泛应用于生产实践，取得了巨大的经济效益和生态效益，硕果累累的转基因成果在带给人们喜悦的同时，也促使人们关注转基因生物的安全性问题。下列有关转基因作物安全性的叙述正确的是（ ）
A．转入抗性基因的植物可能会成为“入侵物种”，影响生态系统的稳定性
B．抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，造成基因污染
C．大面积种植抗虫棉，有可能会使棉铃虫群体中相关抗性基因频率增大
D．若目的基因来自于自然界，则培育出的转基因植物不存在安全性问题
三、非选择题
21．水稻是我国重要的粮食作物，然而盐碱地日益吞噬着有限的耕作面积，因此对水稻耐盐碱品系进行改良具有重大意义。研究表明，OsMYB56基因的表达产物可参与植物的耐盐碱调节，科研人员从玉米细胞中克隆目的基因，构建OsMYB56基因表达载体，并对水稻进行遗传转化。部分限制酶识别序列及用于扩增目的基因的一对引物序列如下。
限制酶 EcoRI BamHI HindⅢ SacI
识别序列和切割位点 G↓AATTC G↓GATCC A↓AGCTT GAGCT↓C
上游引物P1：5'-GGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG-3'
下游引物P2：5'-GAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA-3'
(1)科研人员在基因数据库中查找到OsMYB56基因的碱基序列，并据此设计一对引物来扩增目的基因。由图可知，设计引物时，在引物的5'端分别添加了 两种限制酶的识别序列。
(2)PCR扩增目的基因的原理是 。PCR过程需要用到 酶，若设置的复性温度过高会导致 。
(3)将目的基因导入植物细胞，常用农杆菌转化法。构建基因表达载体时，需要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的 序列中。为确定耐盐碱转基因水稻是否培育成功，可利用 检测OsMYB56基因是否导入成功。玉米中的相关基因在水稻细胞内能够表达的理论基础是 。
(4)有人认为转基因生物有可能成为“入侵的外来物种”，威胁生态系统中其他生物的生存，他的依据是 。
22．棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫，为减少农药的使用量，我国科学家利用基因工程培育出一些能抵抗虫害的植物新品种。Cry1A基因的表达产物对棉铃虫等鳞翅目昆虫有较强的毒性，GNA基因的表达产物对蚜虫等刺吸式口器的昆虫有较强的毒性。科研人员将Cry1A基因与GNA基因连接在一起，构建了双抗虫基因的重组表达载体，并转入烟草细胞，获得了具有双抗性的转基因烟草，其部分过程如图1所示，请分析并回答以下问题：
注：图中PstⅠ、KpnⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ表示限制酶，不同限制酶切出的黏性末端均不同；Klenow能将黏性末端转变为平末端。
(1)过程③将Cry 1A基因与GNA基因相连，可选用 （填“E·coli DNA连接酶”或“DNA连接酶”）。
(2)过程④应该选用 （填图中限制酶）切割植物表达载体，以便与目的基因相连，形成重组表达载体。
(3)将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用 处理农杆菌，使其成为 细胞。
(4)让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌：将培养农杆菌的培养基倒平板后均分为A、B两组，在A组培养基中涂布一定量的链霉素，在B组培养基中涂布等量的卡那霉素和链霉素。往A组培养基中接种适量农杆菌，待长出菌落后，用影印法接种到B组培养基上，实验结果如图2，其中 （填图中对应的数字）菌落对应的农杆菌可能是符合要求的，即含有 的农杆菌。
(5)欲从个体生物学水平鉴定这些转基因烟草是否具有双抗虫特性以及抗性的程度，请你简述该鉴定方法 。
(6)利用转基因技术可以培育出具有优良性状的生物，生产出人类所需要的产品。但转基因技术的安全性问题也一直备受关注。当面对日常生活中与转基因技术有关的话题时，我们需要理性地表明观点和参与讨论。下列属于理性看待转基因技术的是 （填序号）。
①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，必须禁止转基因技术的应用
②要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题
③要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响
④要看到经济、文化和伦理道德观念等的差异使人们对转基因技术有不同的看法
23．角蛋白酶能降解角蛋白，在饲料工业中具有广阔的应用前景。某实验小组将角蛋白酶基因（KerA）导人大肠杆菌中，获得了能高效表达角蛋白酶的工程菌，下图为含KerA基因的外源DNA和质粒，EcoRI、BamHI、SalI、XhoI均为限制酶，其切割位点如图所示。Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列相关问题：
(1)据图可知，构建重组质粒时选用的工具酶包括 和DNA连接酶，这些工具酶作用的化学键 （填“相同”或“不同”）。
(2)利用PCR技术扩增KerA基因时，需根据其两端序列设计引物。若KerA两端部分序列为一5'AATGGA……ATTCTC-3'，则需要设计的一对引物序列是 。
(3)将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。可在添加有 的培养基中进行初步筛选，能在该培养基上生长的是 。
(4)转基因技术除了在微生物领域取得广泛的成果，在动植物领域也取得了巨大的成果。下列有关转基因技术的叙述，正确的是 。
①我国对农业转基因生物实行了标识制度
②只要有证据表明转基因产品有害，就应该禁止转基因技术的应用
③转基因技术本身是中性的，应理性看待该技术
④转基因植物的基因来自自然界，不会产生安全性问题
24．研究者将杨树中的重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，如图1所示。培育转基因杨树，以提高对重金属污染土壤的生物修复能力。
回答下列问题：
(1)图2是高效启动子、HMA3基因的DNA和载体的限制性内切核酸酶酶谱。为了成功构建重组表达载体，确保目的基因正确插入载体，最好选用 、 酶切割HMA3基因的DNA和载体。
(2)将杨树叶片与重组农杆菌共培养以进行遗传转化，农杆菌可将外源基因递送到植物细胞基因组中的机理为 。考虑转基因技术的安全性，选用 （填“不育”或“可育”）株系作为实验材料，选此株系的原因为 。
(3)为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合为____（填标号）。
A．①+③ B．①+④ C．③+② D．③+④
25．影响小鼠内耳形态的基因A突变会导致遗传性耳聋，研究人员尝试进行基因治疗。
(1)CRISPR/Cas9基因编辑系统由sgRNA及Cas9蛋白组成。图1所示，sgRNA与目标DNA结合，引导Cas9蛋白切割靶序列的双链DNA，导致 键断裂。
(2)同源重组是指在DNA断裂的情况下，含有同源区段的DNA之间发生的重组。科研人员尝试利用同源重组原理对耳聋小鼠进行基因治疗。
①利用 技术扩增野生型小鼠的基因A，再用图2中的限制酶 切割基因A与腺病毒载体形成黏性末端，最后利用 酶进行拼接，构建腺病毒表达载体。科研人员尝试利用该载体与耳聋小鼠的DNA进行同源重组，效果不佳。
②在上述基础上，科研人员又将sgRNA基因、Cas9基因接入了腺病毒表达载体（见图3），同时引入sgRNA的识别序列，目的是 。图3所示的腺病毒表达载体还需要哪些必要的结构或基因 （多选）。
A．启动子和终止子
B．RNA聚合酶基因
C．标记基因
D．起始密码子和终止密码子
E．反密码子
F．复制原点
(3)将腺病毒表达载体注入耳聋小鼠的单侧耳组织细胞。为评估该治疗方案的效果，研究人员使用同一只小鼠的非注射耳作为对照，而不是另一只没有注射腺病毒表达载体的小鼠，好处是可以排除 对实验结果的影响。
(4)进一步研究结果表明该方案可以有效纠正小鼠的突变基因，从而治疗小鼠的遗传性耳聋。人体内基因A突变也会导致遗传性耳聋，欲将该方案用于临床治疗，从安全性角度还应关注 。
试卷第1页，共3页
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参考答案：
1．A
【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响），抗虫棉的种植，减少了农药的使用，有利于保护农田的土壤环境。
【详解】A、转基因生物被定向改造，因而可能会成为新的过敏原，引发新的过敏反应，属于转基因生物被质疑的原因之一，A正确；
B、种植抗虫棉等农作物可减少农药的使用，但可能出现基因污染，对环境造成一定的影响，B错误；
C、转基因产品可提高农作物的产量，但其有一定的安全性问题，应在实验区栽种并进行管理，C错误；
D、转基因食品可能会带来安全性问题，转基因作为一项技术本身是中性的，应理性看待，D错误。
故选A。
2．B
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
【详解】A、该技术起始时需要对猪的相关基因进行编辑处理，转基因猪的心脏引起的免疫排斥作用相对较弱，A错误；
B、对于器官衰竭患者来说，跨物种器官移植手术给予了他们更多的希望与机会，B正确；
C、其他物种的器官经基因编辑后都能移植到人体且也可能会引起排斥反应，C错误；
D、跨物种器官移植手术并获成功，是对供体生物进行的基因编辑，而不是对人体基因进行大规模编辑，D错误。
故选B。
3．C
【分析】转基因生物的安全性问题：
（1）有关食物安全问题的担忧：①担心出现滞后效应；②担心出现新的过敏源；③担心营养成分改变；④担心会侵犯宗教信仰者或素食者的权益；
（2）有关生物安全问题的担忧：转基因植物可能会对生物多样性构成潜在的风险和威胁。他们的理由：①转基因植物扩散到种植区外变成野生种或杂草；②转基因植物竞争能力强，可能成为“入侵的外来物种”；③转基因植物的外源基因与细菌或病毒杂交，重组出有害的病原体；④可能使杂草成为有抗除草剂基因的“超级杂草”；
（3）有关环境安全问题的担忧：①转基因植物打破自然物种的原有界限，可能破坏生态系统稳定性；②重组微生物产生的中间产物可能造成二次污染；③重组DNA与微生物杂交是否会产生有害病原微生物；④转基因植物花粉中的有毒蛋白可能通过食物链进入生物。
【详解】A、转基因大豆与野生大豆的地理分布的远近与转基因大豆和野生大豆的基因交流有关，A正确；
B、转基因作物与近缘野生种间发生基因交流，进而发生基因漂移，使一些近缘物种表现出转基因的性状，B正确；
C、野生大豆的蛋白质含量只与野生大豆的营养物质有关，C错误；
D、传粉昆虫的种类和数量与野生大豆和转基因大豆之间的传粉和基因交流有关，D正确。
故选C。
4．B
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。转基因食品、产品上都要标注原料来自转基因生物，如“转基因××”“转基因××加工品（制成品）”“加工原料为转基因××”“本产品为转基因××加工制成”．对于转基因食物潜在隐患要进行开展风险评估、预警跟踪等措施多环节、严谨的安全性评价，保障了现代生物技术的安全性。
【详解】A、转基因培育的植物，理论上目的基因存在于所有细胞中，A错误；
B、为了加强对转基因食品和转基因农产品的标识管理，保护消费者的知情权，我国实行了标识制度，B正确；
C、通过转基因技术生产药物不只是转基因微生物方面的应用，还有转基因动植物方面，C错误；
D、转基因植物的外源基因即使来源于自然界，也不能完全排除存在安全性问题的可能性。尽管外源基因来源于自然界，但在将其导入植物体后，可能会破坏植物原有的基因结构，从而引发不可预知的生态和遗传效应。此外，外源基因也有可能通过花粉传播等方式扩散到其他植物中，导致基因污染和生态失衡，D错误。
故选B。
5．C
【分析】植物基因工程成果：抗虫转基因植物-减轻农药对环境的污染、抗病转基因植物、抗逆转基因植物、利用转基因改良植物的品质；动物基因工程成果：提高动物生长速度、改善畜产品的品质、用转基因动物生产药物、用转基因动物作器官移植的供体、基因工程药品的生产。
【详解】A、通过转基因技术减少啤酒酵母双乙酰的生成，可以改良啤酒的风味和口感，说明转基因技术能提高食品安全性，A错误；
B、转基因食品与非转基因食品一样，都是由脂肪、蛋白质和碳水化合物等物质组成的，一定程度上可说明转基因食品是安全的，B错误；
C、帝王蝶的幼虫在吃了某种转基因玉米的花粉沾染过的牛奶草叶子后，近一半的个体死亡，幸存的也不能正常发育，说明了转基因食品存在不安全因素，C正确；
D、对转入了苏云金杆菌基因的西红柿进行毒性分析表明，这种转基因西红柿对人体健康没有影响，说明转基因食品安全，D错误。
故选C。
6．A
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
【详解】A、基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，A错误；
B、转基因作为一项技术本身是中性的，由该技术研发出来的产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市，B正确；
C、无论是转基因食品还是转基因作物，在多领域都取得实际应用成果，但也许关注它们的安全性，例如是否会产生基因污染，对人体是否有害等，C正确；
D、我国对转基因技术的方针是一贯的、 明确的，就是研究上要大胆，坚持自主创新；推广上要慎重,做到确保安全;管理上要严 格，坚持依法监管，D正确。
故选A。
7．C
【分析】1、目的基因在受体细胞中表达的原理：基因是控制生物性状的基本单位；遗传信息的传递都遵循中心法则；生物界共用一套遗传密码。
2、外源基因通过转基因作物或家养动物扩散到其他栽培作物或自然野生物种并成为后者基因的一部分，在环境生物学中我们称为基因污染。
3、防止基因污染的措施：抗除草剂基因导入玉米受体细胞的质基因组中；抗除草剂基因导入雄性不育系中；将玉米α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物；转基因作物种植时隔离种植。
【详解】A、相同的遗传信息在不同的生物体内表达出相同的蛋白质利用了密码子的通用性的原理，A正确；
B、叶肉细胞中有多个线粒体，则线粒体转化获得的抗虫基因数量多,其表达量远高于核转化的水平，有利于增加外源抗虫蛋白的含量，增加抗虫性，B正确；
C、外源抗虫基因转入线粒体，只能通过母本卵细胞遗传给后代，若转基因作物作为父本则不可遗传，C错误；
D、植物受精卵的质基因几乎全来自卵细胞，转将外源基因转入线粒体中，可以防止外源基因通过花粉向其他植物扩散，D正确。
故选C。
8．B
【分析】据题意可知，1为空白对照，2～10 为转基因株系，图中2～10 含有Vgb基因。
【详解】A、若点样孔在a端，则靠近a端的片段大，A错误；
B、为了排除实验操作等无关变量对结果的影响，需要设置空白对照，B正确；
C、根据题图可推测，2年内Vgb基因在菊花细胞中较稳定，C错误；
D、DNA分子在凝胶中的迁移速率与凝胶浓度有关，D错误。
故选B。
9．C
【分析】1、植物组织培养的过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化形成愈伤组织；愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育形成植株，该过程受基因选择性表达的调控。
2、题图分析：
方法一：采用植物组织培养的方法培育脱毒苗，草莓到甲过程属于脱分化形成愈伤组织过程，而A属于再分化诱导形成胚状体或形成芽、根最终形成完整植株；
方法二：通过基因工程手段获得的抗病毒草莓，B过程表示将病毒基因导入到受体细胞，C表示植物组织培养过程。
【详解】A、方法一是把已分化的植物组织或细胞培养成个体，方法二是把目的基因受体细胞培养成个体，两种方法均利用了植物细胞具有全能性的特点，A正确；
B、据图可知，方法二的B过程表示将病毒基因导入到受体细胞，方法一中A属于再分化诱导形成胚状体或形成芽、根，最终形成完整的无病毒苗过程。已分化的细胞在离体条件下可培育成个体，目的基因的受体细胞可以是已分化的细胞，因此，方法二中的草莓细胞可取自A过程中产生的细胞，B正确；
C、方法二为用基因工程选育高品质的抗病毒的草莓，其选育方法的效果需要通过病毒接种实验；方法一培育的是脱毒苗而非抗病毒苗，不需要接种病毒，C错误；
D、与方法一相比，方法二多了对离体的草莓细胞基因改造的过程，方法二的草莓细胞中导入了病毒的基因，相比方法一，更容易引起安全问题，D正确。
故选C。
10．D
【分析】基因工程的原理是基因重组，基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣抗原﹣抗体杂交技术;个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、转基因培育大豆过程中可能用到抗病、抗虫等抗性基因，A正确；
B、为育成转基因大豆，受体细胞可以是大豆受精卵，也可以是体细胞，B正确；
C、转基因大豆的种植过程中减少了农药等的使用量，既保护了环境又降低了生产成本，C正确；
D、固氮菌与大豆共生，不需要将固氮基因导入大豆细胞中，D错误。
故选D。
11．A
【分析】1、转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
2、试管婴儿技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。
【详解】A、新冠患者的血浆中可能含有病毒，采集后是不可以直接输入到任何人身体里的，输入到危重患者身体里存在安全隐患，与题意相符，A正确；
B、试管婴儿可以通过基因筛选技术来阻断遗传疾病的遗传，因此经过一定的技术手段可以避免安全风险，与题意不符，B错误；
C、规范管理下，利用生物技术改造的工程菌获得大量的抗生素已经投入生产，一般不会带来生物安全风险，与题意不符，C错误；
D、克隆技术可以克隆器官，但是不可以进行人体克隆，这样可以避免影响伦理道德，与题意不符，D错误。
故选A。
12．D
【分析】外源基因虽然来源于自然界，但可能随转基因植物扩散到其他近缘物种，导致基因污染；基因的表达需要经过转录、翻译等过程，任一环节出现问题均可能使基因不能正常表达。
【详解】A、用基因工程培育出的抗虫植物（如抗虫棉）只能抗虫，不能抗病毒，A错误；
B、即使转基因植物的外源基因来源于自然界，也可能存在安全性问题，B错误；
C、抗虫基因即使成功地插入植物细胞的染色体上，也不一定能正常表达，C错误；
D、基因工程在农业生产上的应用主要是培育抗虫、抗病、抗除草剂和耐储藏的作物，进而使作物品种和产品更加符合人类的需要，D正确。
故选D。
13．A
【分析】根据题意可知，转基因作物的基因传播到野生植物中，会对植物遗传多样性构成威胁。自然杂交是通过受粉的方式实现基因重组，与转基因技术中通过重组质粒实现基因重组是有区别的。
【详解】A、转基因作物可通过花粉散落到它的近亲野生植物中，从而污染生物基因库，A正确；
B、转基因植物可能会与野生植物杂交，造成基因污染，因而可能会对天然植物的遗传多样性构成威胁，B错误；
C、虽然转基因生物存在危害，但我们应理性地看待转基因生物的研究，C错误；
D、自然杂交是同种生物个体之间的基因交流，而转基因是将外源基因导入受体细胞的过程，即不同生物之间基因的交流，D错误。
故选A。
14．B
【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。
【详解】A、转基因食物产品通常导入了外来基因，由于基因间的互作机制等原因，安全检测是必需的，A错误；
B、α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物得以表达可产生α-淀粉酶，该α 淀粉酶可降解花粉粒中的淀粉，造成植物转基因花粉不育，有效避免了转基因作物通过花粉将转基因传播给其它作物品种，B正确；
C、将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起构建基因表达载体导入动物受精卵中可制备乳腺生物反应器，而不是导入乳腺中，C错误；
D、我国政府禁止生殖性克隆人，坚持四不原则（不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验），不反对治疗性克隆人，并不是不接受任何形式的转基因生物实验，D错误。
故选B。
15．D
【分析】转基因技术是一把双刃剑， 最重要的是要科学合理的利用这项技术，通过技术提高了很多农产品的收益、解决了饥饿问题和对遗传病的治疗带来新的希望；对微生物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域。
【详解】A、转基因作为一项技术本身是中性的，由这项技术研发出来的产品需要经过一系列的安全性评价，符合相应标准后才能上市，A正确；
B、针对转基因技术的应用，各个国家都制定了符合本国利益的法规和政策。我国对转基因技术的方针是一贯的、明确的，就是研究上要大胆，坚持自主创新;推广上要慎重，做到确保安全;管理上要严格，坚持依法监管，B正确；
C、国家有关部门制定实施了《农业转基因生物安全评价管理办法》《农业转基因生物进口安全管理办法》，这些法规的制定既维护了消费者对转基因产品的知情权和选择权，又最大程度地保证了转基因技术和已经上市的转基因产品的安全性，C正确；
D、对微生物的基因改造是基因工程中研究最广泛和取得实际应用成果最多的领域，D错误。
故选D。
16．A
【分析】基因分离定律和自由组合定律的实质：进行有性生殖的生物在进行减数分裂产生配子的过程中，位于同源染色体上的等位基因随同源染色体分离而分离，分别进入不同的配子中，随配子独立遗传给后代，同时位于非同源染色体上的非等位基因进行自由组合。
【详解】A、据题意可知，水稻品种Q雄性不育，因此不能自花传粉，A错误；
B、品种Q雄性不育，可防止基因D通过花粉扩散到近缘作物，B正确；
C、若基因M插入基因D所在染色体的同源染色体上，如果发生交叉互换，则其与正常水稻杂交可能会得到蓝粒雄性不育两性状不分离的种子，即基因D和M在一条染色体上，C正确；
D、用O代表同源染色体相同位置上没有的等位基因，若基因M插入3号染色体上，其基因型可表示为：DOMO，则其产生的雌配子有DM、DO、OM、OO4种。正常水稻无D、M基因，基因型可表示为OOOO，正常水稻为父本，产生雄配子有OO，子代出现蓝粒雄性不育种子DOMO的概率为1/4，D正确。
故选A。
17．AC
【分析】防止基因污染方法：将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，可以防止转基因花粉的传播
【详解】A、用转基因动物作为器官移植的供体时，通过导入调节因子来抑制抗原的合成，从而避免免疫排斥，A正确；
B、将含药用蛋白基因的基因表达载体导入受精卵，可构建乳腺生物反应器，B错误；
C、将α-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，由于α-淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，可以防止转基因花粉的传播，C正确；
D、转基因抗虫棉种植时，害虫会产生抗性，D错误。
故选AC。
18．BC
【分析】根据题中“将一段外源DNA片段(包含约850个基因)与丝状支原体(一种原核生物)的DNA进行重组后，植入大肠杆菌”，属于基因工程，原理是基因重组。
【详解】A、通过导入不同的目的基因，可用于生产药品、制造染料、降解有毒物质，A正确；
B、“新的生命”是一个新的物种，由于其没有天敌，进入自然界后，会破坏生物的多样性，B错误；
C、转基因技术还可用来减少啤酒酵母双乙酰的生成，缩短啤酒的发酵周期，C错误；
D、在转基因研究工作中，科学家会采取很多方法防止基因污染，例如，我国科学家将来自玉米的-淀粉酶基因与目的基因一起转入植物中，由于淀粉酶基因可以阻断淀粉储藏使花粉失去活性，因而可以防止转基因花粉的传播，D正确。
故选BC。
19．AB
【分析】由题意可知，CRISPR/Cas9基因编辑系统（可以实现对双链DNA的精确切割），其与限制性内切核酸酶功能相似。
【详解】A、CRISPR/Cas9基因编辑系统与限制性内切核酸酶的功能相似，都可对DNA进行切割，A错误；
B、转基因灭蚊技术通过提高蚊虫群体中雄蚊比例，从而降低蚊虫群体出生率，B错误；
C、由题意可知，转基因蚊的基因可遗传给子代，使群体中雄蚊比例升高，具有效果显著、可持续等特点，C正确；
D、转基因雄蚊可能与近缘物种杂交，导致目的基因扩散到自然界其他生物中，导致基因污染，D正确。
故选AB。
20．ABC
【分析】转基因生物的安全性问题包括：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变等）、生物安全（对生物多样性的影响等）、环境安全（对生态系统稳定性的影响等）。
【详解】A、转入抗性基因的植物具有某些特殊性质，它们在某地区的竞争能力较强，可能成为“入侵物种”，威胁生态系统中其他生物的存在，从而影响生态系统的稳定性，A正确；
B、转基因作物的抗性基因可能会随花粉传播到田间近缘野生植物体内，该近缘物种再通过授粉会造成基因进一步扩散和污染，B正确；
C、大面积种植转基因抗虫棉（含抗性基因），有可能会导致棉铃虫群体中相关抗性基因频率增大，C正确；
D、即使目的基因来自自然界，培育出的转基因植物仍然可能会有潜在的安全性问题，D错误。
故选ABC。
21．(1)BamHI和SacI
(2) DNA的半保留复制 热稳定DNA聚合 引物不能结合到DNA模板上，进而不能扩增出目的DNA片段
(3) T-DNA DNA分子杂交技术 所有生物共用一套遗传密码子
(4)科学家赋予转基因生物某些特殊性状，增强了它们在该地区生存条件下的竞争力（合理即可）
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测和个体水平上的鉴定。
【详解】（1）由上游引物、下游引物可知，引物的5'端分别添加了BamHI、SacI的识别序列。
（2）PCR是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。PCR过程需要用到热稳定DNA聚合酶。PCR每次循环可以分为变性、复性、延伸三个步骤，复性的目的是适当降低温度，让引物通过碱基互补配对方式，结合到模板DNA上，若设置的复性温度过高会导致引物不能结合到模板上，进而扩增不出目的DNA片段。
（3）农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞中，并且整合到该细胞的染色体DNA上，所以构建重组Ti质粒时，需要将目的基因插入T-DNA中。为确定耐盐碱转基因水稻是否培育成功，可利用DNA分子杂交技术检测OMYB56基因是否导入成功。目的基因在受体细胞内能够表达的理论基础是所有生物共用一套遗传密码子，保证了同一种基因在不同受体细胞中均可翻译出相应的蛋白质。
（4）由于科学家赋予了转基因生物某些特殊性状，增强了它们在该地区生存条件下的竞争力，故它们有可能威胁生态系统中其他生物的生存。
22．(1)T4 DNA连接酶
(2)EcoRⅠ和Hind Ⅲ
(3) Ca2+ 感受态
(4) 1、4 重组表达载体
(5)采摘转基因烟草的叶片，饲喂棉铃虫和蚜虫，统计棉铃虫和蚜虫的存活率（或死亡率）。
(6)②③④
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）分析题意，过程①和②分别用不同的限制酶切割Cry 1A基因与GNA基因，形成的黏性末端是不同的，故两个基因无法直接相连，经Klenow处理后，两个基因片段一端的黏性末端变为平末端，E．coli DNA连接酶只能连接黏性末端，T4 DNA连接酶可以连接黏性末端，也可以连接平末端，故过程③将Cry 1A基因与GNA基因相连，应选用T4 DNA连接酶。
（2）通过过程③得到的双抗虫基因（Cry 1A基因+GNA基因）两侧分别是EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ切出的黏性末端，故过程④应该选用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ切割植物表达载体，形成和目的基因相同的黏性末端，以便让植物表达载体与目的基因相连，形成重组表达载体。
（3）将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用Ca2+处理农杆菌，使其成为感受态细胞，以利于重组表达载体进入农杆菌。
（4）让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌，获得含有重组表达载体的农杆菌。由于Hind Ⅲ的切割位点在抗卡那霉素基因内部，故含有重组表达载体的农杆菌可以在含有链霉素的培养基上生长，不能在含有卡那霉素的培养基上生长，据此分析可知，A组中1、4对应的菌株为含有重组表达载体的农杆菌，即符合要求的菌株。
（5）个体生物学水平的鉴定主要是抗虫、抗病的接种实验，欲从个体生物学水平鉴定这些转基因烟草是否具有双抗虫特性以及抗性的程度，可采摘转基因烟草的叶片，饲喂棉铃虫和蚜虫，统计棉铃虫和蚜虫的存活率（或死亡率）。
（6）①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，应严格进行筛查和把控，而飞因噎废食禁止转基因技术的应用，①错误；
②③转基因技术是一把双刃剑，最重要的是要科学合理的利用这项技术，要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题，要理性的看待转基因技术，要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响，②③正确；
④由于不同的人在经济、文化和伦理道德观念等方面存在差异，所以不同的人对转基因技术会有不同的看法，④正确。
故选②③④。
23．(1) BamHI、XhoI 相同
(2)引物I5'-AATGGA-3'，引物Ⅱ5'-GAGAAT-3'
(3) 四环素 含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌
(4)①③
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。（4）目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）据图可知，SalI会破坏KerA基因，因此获取KerA基因时不能用限制酶SalI进行切割；为了防止目的基因和载体切割后自身环化、不定向连接，应该选用两种限制酶进行切割，可以选择限制酶BamHI和XhoI或限制酶EcoRI和XhoI，若选择限制酶EcoRI和XhoI会破坏质粒上的两个标记基因，因此不能选用该组限制酶；限制酶和DNA连接酶作用的化学键相同，都是磷酸二酯键。
（2）使用PCR技术扩增目的基因时需要一对特异性的引物，引物能与目的基因两端的核苷酸序列碱基互补配对，子链延伸时是从引物的5'端向3'端延伸，若KerA两端部分序列为-5'AATGGA……ATTCTC-3'，利用PCR技术扩增KerA基因，根据其两端序列，则需要设计的一对引物序列是引物I5'-AATGGA-3'，引物Ⅱ5'-GAGAAT-3'。
（3）将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。由于选用的限制酶是BamHI、XhoI，所以含有该重组质粒的细菌在添加四环素的培养基中能生长，而含空载体（普通质粒）的细菌也含有四环素抗性基因，二者都可在添加有四环素的培养基中生长。
（4）①我国对农业转基因生物实行了标识制度，为保障转基因生物安全提供了重要的技术支撑，①正确；
②我们应持有的正确做法是趋利避害，不能因噎废食，②错误；
③转基因作为一项技术，本身是中性的，面对转基因技术的利弊，我们不能人云亦云，应理性看待该技术，③正确；
④转基因植物的基因来自自然界，但由于插入的位置是随机的等原因，也可能产生安全性问题，④错误。
故选①③。
24．(1) XbaI HindⅢ
(2) 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上 不育 避免目的基因在自然界中的扩散
(3)B
【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）为确保目的基因与载体正向连接，最好选用两种限制酶切割，因此不宜选用EcoRI；观察目的DNA片段，不能用BamHI，会切断高效启动子或HMA3基因；观察载体，不能用SalI，不在T-DNA上，也不在启动子和终止子之间。综合分析，选用的两种限制酶为XbaI和HindIII。
（2）农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞染色体DNA上。考虑转基因技术的安全性，选用不育株系作为实验材料，可避免目的基因在自然界中的扩散。
（3）重金属转运蛋白HMA3基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中，若要检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，而不是内源HMA3基因，需要检测是否含有高效启动子序列和HMA3基因序列，应选择的引物组合是①+④，故选 B。
25．(1)磷酸二酯键
(2) PCR SpeI和Sal DNA连接酶 通过CRISPR/Cas9基因编辑系统切割腺病毒表达载体DNA和耳聋模型鼠染色体DNA，使DNA发生断裂，启动同源重组 ACF
(3)小鼠的个体差异
(4)该技术对其他功能基因是否存在非特异性编辑
【分析】1、实现基因工程的操作至少需要三种“分子工具”，即准确切割DNA分子的 “分子手术刀”——限制酶、将DNA片段再连接起来的“分子缝合针”——DNA连接酶和将体外重组好的DNA分子导入受体细胞的“分子运输车”——载体。
2、基因工程技术的基本步骤： 目的基因的获取；基因表达载体的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。
【详解】（1）DNA分子的单体间通过磷酸二酯键相连接，Cas9蛋白切割靶序列的双链DNA，导致靶序列磷酸二酯键断裂。
（2）①PCR为体外扩增DNA分子的一项技术，若要扩增野生型小鼠的基因A，则要用到PCR技术。如图2所示，若要利用同源重组原理对耳聋小鼠进行基因治疗，则构建的基因表达载体中应包含同源区a、b，所用的限制酶要能同时把基因A中的同源区a、b切割下来。因此，所用的限制酶是SpeI和Sal，即能把基因A中的同源区a、b切割下来，也在腺病毒载体上有相应切口。利用限制酶所获取的目的片段和腺病毒载体片段，还要用DNA连接酶进行连接，形成重组的基因表达载体。
②利用图2所示的载体与耳聋小鼠的DNA进行同源重组，效果不佳，有可能是未启动重组。将sgRNA基因、Cas9基因接入了腺病毒表达载体，同时引入sgRNA的识别序列，目的是通过CRISPR/Cas9基因编辑系统切割腺病毒表达载体DNA和耳聋模型鼠染色体DNA，使DNA发生断裂，启动同源重组。一个能正常表达的重组基因表达载体应包含有目的基因、标记基因、启动子和终止子、复制原点，因此图3所示的腺病毒表达载体还需要标记基因、启动子和终止子、复制原点，故选ACF。
（3）实验过程要遵循单一变量原则，研究人员使用同一只小鼠的非注射耳作为对照，而不是另一只没有注射腺病毒表达载体的小鼠，好处是可以排除小鼠的个体差异对实验结果的影响。
（4）欲将该方案用于临床治疗，从安全性角度还应关注该技术对其他功能基因是否存在非特异性编辑。
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