3.2基因工程的基本操作程序课件(共18张PPT)人教版（2019）选择性必修3 生物技术与工程

(共18张PPT)
人教版 高三年级生物
基因工程
一、基因工程的三种工具：
一、基因工程的三种工具：
二、基因工程的基本操作程序：
1.目的基因的筛选与获取：
①从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选，是较为有效的方法之一。
②人工合成：通过DNA合成仪用化学方法直接合成，前提：基因较小且核苷
酸序列已知。例如反转录法、根据已知核苷酸序列合成DNA。
③从基因文库中直接获取，包括基因组文库和部分基因文库。
④PCR扩增技术。
二、基因工程的基本操作程序：
二、基因工程的基本操作程序：
PCR技术的过程
2.基因表达载体的构建（核心工作）：
二、基因工程的基本操作程序：
① 使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代；
② 使目的基因能表达和发挥作用。
构建目的：
构建过程：
（1）用一定的_________切割质粒，使
其出现一个切口，露出____________。
（2）用___________ 切割目的基因和质粒,产生_________________。
（3）将切下的目的基因片段插入质粒
的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）
限制酶
黏性末端
同一种限制酶
相同的黏性末端
切口
DNA连接酶
取出DNA
←用同种限制酶→
重组DNA
基因产物
基因产物
是RNA聚合酶识别和结合位点，驱动基因转录出mRNA
终止转录
鉴别和筛选含目的基因的受体细胞
能带着插入的目的基因一起复制
a、目的基因
b、启动子
c、终止子
d、标记基因
e、复制原点
基因操作中使用的外源基因
2.基因表达载体的构建（核心工作）：
二、基因工程的基本操作程序：
2.基因表达载体的构建（核心工作）：
二、基因工程的基本操作程序：
思考：选择限制酶时注意什么？
思考1：应选择哪种限制酶切割获取目的基因(图甲)和载体(图乙)，
并将二者组装起来？
A. SmaⅠ
B. PstⅠ
C. EcoRⅠ
2.基因表达载体的构建（核心工作）：
二、基因工程的基本操作程序：
Pst I 和 EcoR I
（1）应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶；
（2）不破坏复制原点、启动子、标记基因等特殊元件；
（3）为避免目的基因和质粒的自身环化和反向连接，可使用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒；
二、基因工程的基本操作程序：
思考2：应选择哪种限制酶切割获取目的基因(图甲)和载体(图乙)，
并将二者组装起来？
2.基因表达载体的构建（核心工作）：
Xba I 和 Hind III
（4）在启动子和终止子之间存在切割位点的限制酶。
如图所示，将甲中的目的基因和载体（见图乙）构建基因表达载体。限制性内切核酸酶的酶切位点如图。
二、基因工程的基本操作程序：
构建基因表达载体应选用__ __和__ __两种限制酶。
EcoRI
Sau3AI
2.基因表达载体的构建（核心工作）：
（5）考虑基因表达的方向。
导入植物细胞
导入动物细胞
导入微生物细胞
农杆菌转化法
基因枪法
花粉管通道法
——显微注射技术
常用受体细胞：受精卵
——感受态细胞法
转化的方法：
3.目的基因导入受体细胞：
二、基因工程的基本操作程序：
3.目的基因导入受体细胞：
二、基因工程的基本操作程序：
4.目的基因的检测和鉴定：
二、基因工程的基本操作程序：
分子
水平
个体水平：进行抗虫、抗性、耐性实验。
外源基因在受体内表达的理论基础：生物界共用一套遗传密码
课堂小结
1.用氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、四环素抗性基因（TetR）作为标记基因构建的质粒如图所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的质粒，构建基因表达载体（重组质粒），并转化到受体菌中。下列叙述错误的是（　　）
A．若用HindⅢ酶切，目的基因转录的产物可能不同
B．若用PvuⅠ酶切，在含Tet（四环素）培养基中的菌落，不一定含有目的基因
C．若用SphⅠ酶切，可通过DNA凝胶电泳技术鉴定重组质粒构建成功与否
D．若用SphⅠ酶切，携带目的基因的受体菌在含Amp（氨苄青霉素）和Tet的培养基中能形成菌落
课堂拓展
谢
谢
观
看