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第三章基因工程
第1节
重组DNA 技术的基本工具
基因工程
基因工程:指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA
重组和转基因等技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符 合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在
DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫作DNA重组技术。
基因工程的别名
DNA重组技术
实质
基因重组
操作环境
生物体外
操作对象
基因
操作水平
DNA分子水平
基本过程
剪切→拼接→导入→表达
结果
定向改造生物的遗传性状
普通动植物
发光基因
萤火虫
基因工程的基础理论
a、DNA是遗传物质的证明
b、DNA双螺旋结构和中心法则的建立
c、遗传密码的破译
相关技术的发展
a 、基因表达载体和工具酶相继发现
b、DNA合成和测序技术的发明
c、DNA体外重组得以实现,重组DNA表达实验获得成功
基因能够拼接的基础
a、基本组成单位相同
b、空间结构相同
c 、碱基互补配对方式相同
外源基因能够在受体细胞内表达的基础
a、生物界共用同一套遗传密码
b、相同的遗传信息在不同的生物体内可表达出相同的蛋白质
转基因 非转基因
“分子手术刀”—限制酶
“分子缝合针”—DNA 连接酶
“分子运输车”—载体
重 组DNA
技术所需
工具
“分子手术刀”一限制酶
“分子手术刀”----限制性内切核酸酶
(1)简称 限制酶
(2)来源 主要来源于原核生物
(3)种类 数千种
(4)特点 能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,
使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开
(5)作用部位 磷酸二酯键
(6)结果 产生黏性末端或平末端
EcoR I 限 制 酶
① 识别的序列是— GAATTC — —CTTAAG —
② 切割位点为G A之间
8XXI
G A ATT C
CTT AA G
(黏性末端) (黏性末端)
限制酶切割DNA分子示意图
EcoR I
Sma l 限 制 酶
① 识别的序列是— CCCGGG — —GGGCCC —
② 切割位点是C G之间
EcoRI
HindllI
BamHI
Taql
G
不同酶的识别序列
一般不同
酶的专一性
几种常见的限制酶的识别序列及切割位点
推断限制酶切割一次可断开几个磷酸二
酯键 产生多少游离的磷酸基团 产生 几个黏性末端 消耗几分子水
断开2个磷酸二酯键
产生2个游离的磷酸基团
产生2个或0个黏性末端
消耗2分子水
BamH I
写出下列限制酶切割形成的黏性末端,不同限制酶切割产生的
黏性末端是否一定不同
BamHI:_CCTAG,EcoRI: 二 CTIAA,
HindⅢ二 ATCGA,BgI Ⅱ:二 TCTAG。
把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割,会怎样呢
会形成相同的黏性末端
EcoRI EcoRI
以下黏性末端是由_ 三 种限制酶作用产生的
ATTC AATT TTA
为什么限制酶不切割原核生物本身的DNA分子
含某种限制酶的细菌的DNA分子不具备这种限制酶的识别序 列,或者甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基 上,使限制酶不能将其切开
推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么
限制酶是原核生物的一种防御工具,用来切割侵入细 胞的外源DNA,以保证自身安全。
获取目的基因
..ATGAGAATTCATG目的ATGGAATTCCG.. .…TACTCTTAAGTAC基 因TACCTTAAGGC. …
AATTCCG..
AATTCATG 目的ATGG GGC.
GTAC基因TACCTTAA
..ATGAG
...TACTCTTAA
CT TCATGAATTCCGTACCCGGGCCTAA
GAAGTACTTAAGGCATGGGCCCGGATT
目的基因
获取目的基因
EcoRI 限制酶 酶切位点
CTTCATG AATTCCGTACCC
GAAGTACTTAA GGCATGGG
黏性末端 平末端
GGGCCTAA
CCCGGATT
Sma I限 制 酶 酶切位点
下图中,选择哪种限制酶来获得抗病基因(目的基因)
Ps I S nal PstI
SmaI EcoRI
图甲
选择限制酶切割目的基因的基本原则是:能切下目的基因且 不破坏目的基因
抗病基因
课后作业:
1、记背相关知识点
2、课时练大本
3、课时练小本