1.2.1微生物的基本培养技术 课件--高中生物学人教版（2019）选择性必修3(共23张PPT)

(共23张PPT)
第2节微生物的培养技术及应用
一微生物的基本培养技术
1.什么是培养基 如何配制
2.什么是无菌技术
3.怎样进行酵母菌的纯培养
本节聚焦
从社会中来
在经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体
有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。
由于制作工艺并不复杂一些人会在家里自
制酸奶。自制酸奶虽然方便，但是食用自
制酸奶导致胃肠不适的事例屡见不鲜，主
要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么
怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵
物中呢
首先酸奶制作所用的容器要进行消毒晾干后使用，避免酸奶制作过程中混入 杂菌：其次，准备好菌种，最好是纯的乳酸菌菌种：再有就是接种时要在无 菌条件下操作，所用搅拌器要经过消毒灭菌等。
一、培养基的配制
1.实验室培养微生物的两个关键
①要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件。
②要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来
2.培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质
3.营养构成：培养基一般都含有水、无机盐、碳源(提供碳 元素的物质)和氮源(提供氮元素的物质)等
4.培养基分类
①液体培养基：不含凝固剂、呈液体状态的培养基。
②固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂(如琼脂)制成 的培养基。琼脂固体培养基是实验室中最常用的培养基之一， 微生物在其表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落
拿小本记下来
培养的微生物
需要满足的特殊条件
乳酸杆菌
培养基中添加维生素
霉菌
将培养基调至酸性
细菌
将培养基调至中性或弱碱性
厌氧微生物
需要提供无氧的条件
5.某些微生物生长还需要的特殊条件
二 、无菌技术
芽孢和孢子的区别：
1.概念：防 芽孢是某些细菌(芽孢杆菌属、
域不被污 状) 缺、 ，乳
内形成的一个圆形或椭圆形、含
2.消毒： 水量低、抗逆性强的休眠体；
孢子是脱离亲本后能直接或间接
体表面或内 发育成新个体的生殖细胞，它是
有丝分裂或减数分裂的产物。
体
属
菌
菌
在
酸
时
孢
乏
芽
件
属
在营养条
芽孢杆菌
等
梭
物品及无菌区
方法杀死物
3.灭菌：是指使用
物，包括芽孢和孢子
r 刀云余死物体内外所有的微生
4.无菌技术的操作规程
(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭 菌
(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工 作台并在酒精灯火焰附近进行
(4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物 品相接触
项目 条件 结果 常用方法
应用范围
消毒 较为温和 的物理 、 化学或生 物等方法 仅杀死物体 表面或内部 的一部分微 生物 煮沸消毒法
日常用品
巴氏消毒法
不耐高温的液体
化学药剂消毒法
用酒精擦拭双手、 用氯气消毒水源
灭菌 强烈的理 化方法 杀死物体内 外所有的物 生物(包括 芽孢和孢子) 灼烧灭菌法
接种工具
干热灭菌法
玻璃器皿、金属 用具
湿热灭菌法
培养基及容器
5.消毒和灭菌的比较
干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅
紫外线超净灭菌台
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物
污染外，还有什么作用
还能有效避免操作者自身被微生物感染
2.进行微生物培养时，做好消毒和灭菌工作后接下来还要注 意哪些事项
做好消毒和灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理的材料用具 与周围的物品接触。为了避免周围环境中微生物的污染，接下 来的许多操作都应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行
三、微生物的纯培养
1.培养物和纯培养
(1)在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形
成的含特定种类微生物的群体称为培养物。
(2)由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，
获得纯培养物的过程就是纯培养。
拿小本记下来
2.微生物纯培养技术
(1)原理：
①分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形 成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，即菌落。
②采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在 固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生
物繁殖形成的纯培养物。
拿小本记下来
(2)平板划线法和稀释涂布平板法
①平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线的 操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数 次划线后培养，可以分离到单个菌落。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后 将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面， 进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生 物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的 菌落。
平板划线法
稀释涂布平板法
关键操作 接种环在固体平板培养基表 面连续划线
一系列的梯度稀释
涂布平板法操作
注意事项 每次划线前后均需灼烧接种 环
稀释度要足够高，为确保实
验成功可以增加稀释度的范
围
菌体获取 在具有显著的菌落特征的区 域菌落中挑取菌体
从适宜稀释度的平板上的菌 落中挑取菌体
优点 可以根据菌落的特点获得某 种微生物的单细胞菌落
既可以获得单细胞菌落，又 能对微生物计数
缺点 不能对微生物计数
操作复杂，需要涂布多个平 板
(3)平板划线法和稀释涂布平板法的比较
3.酵母菌的纯培养
(1)制备培养基：配制培养基→灭菌→倒平板。
①若要调节培养基的酸碱性，则需要先调节pH,再灭菌。
②培养基灭菌后要冷却到50℃左右才能倒平板，温度过高 会烫手，过低培养基会凝固。
③倒平板的整个操作要在酒精灯火焰旁进行，以避免杂菌 污染。
④培养基冷凝后必须将培养皿倒置，这样可防止培养皿盖 上的水珠落入培养基，造成污染。
(3)培养酵母菌：将接种后的平板和一个未接种的平板倒 置，放入28℃左右的恒温箱中，培养24～48h。
(4)结果分析与评价：
①未接种的培养基表面若有菌落生长，则说明培养基被污染 或灭菌不彻底。
②在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落。
③培养不同时间，菌落的大小不同，随培养时间延长，菌落 变大，颜色加深。
④若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不 纯，或在实验操作过程中被杂菌污染。
课堂练习
1.下列有关培养基配置原则表述正确的是( C )
A.任何培养基都必须加入碳源、氮源、矿质元素、水
B.碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为 氮元素
C.微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、氧、温度等 条件的影响
D.液体培养基一定需要加入琼脂
2.下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，正确的是( B )
A. 操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B. 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C.将培养基灭菌后必须马上倒平板，以免培养基凝固
D.将倒完平板后，将平板立即倒过来放置，以免冷凝水落入 污染培养基
3.下列关于灭菌和消毒的理解，正确的是( C )
A.灭菌是指杀死环境中的原核生物
B.消毒可以杀死微生物细胞和全部芽孢
C.常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线法和化学药物法
D.常用的灭菌方法有加热法、紫外线法、化学药物法
4.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下 列叙述错误的是( C)
A.实验室可以用紫外线或化学药物进行消毒
B.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防 被微生物感染
C.接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌
D.使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境
5.小明做“微生物的分离与培养”实验时得出如下结论，请
你帮忙判断相关叙述正确的是( D )
A.高压灭菌加热结束时，立即开启锅盖，拿出培养基和工具 待用
B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿 盖上
C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
① ② ③ ④
A. 该分离纯化大肠杆菌的方法属于平板划线法
B. 步骤①中为操作方便，可将培养盖放在桌面上 C. 步骤②在操作时需要在酒精灯火焰旁进行
D. 步骤④中接种环共需6次灼烧处理
6.下图为实验室培养和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下
列说法错误的是( B )